Abstract

Neste estudo, caracteriza o metaboloma do ovário humano e identificou alternâncias metabólicas que coincidem com câncer primário epitelial de ovário (EOC) e tumores metastáticos resultantes de câncer ovariano primário (MOC) usando três analítica plataformas: espectrometria de massa de cromatografia em fase gasosa (GC /MS) e espectrometria de massa em tandem com cromatograf ia líquida (LC /MS /MS), utilizando sistemas de tampão e configurações do instrumento para catalogar iões positivos ou negativos. O metaboloma de ovário humano verificou-se conter 364 compostos bioquímicos e quando da transformação do ovário causou alterações na utilização da energia, que altera metabolitos associados com a glicólise e β-oxidação de ácidos gordos, tais como carnitina (1,79 vezes em EOC,

p

0,001; 1,88 vezes no MOC,

p Art 0,001), acetilcarnitina (1,75 vezes na EOC,

p Art 0,001; 2,39 vezes no MOC,

p

0,001), e butyrylcarnitine (3,62 vezes,

p Art 0,0094 na EOC; 7,88 vezes,

p Art 0,001 em MOC). Também houve mudanças significativas no catabolismo fenilalanina marcados por aumentos na fenilpiruvato (4,21 vezes;

p

= 0,0098) e phenyllactate (195,45 vezes;

p Art 0,0023) em EOC. cancro do ovário, também exibida uma resposta ao estresse oxidativo reforçada, tal como indicado pelo aumento no 2-aminobutirato de EOC (1,46 vezes,

P

= 0,0316) e em MOC (2,25 vezes,

P

0,001 ) e várias isoformas de tocoferóis. Também identificaram novos metabolitos no ovário, especificamente N-acetylasparate e N-acetil-aspartil-glutamato, cujo papel na fisiologia do ovário tem ainda a ser determinado. Estes dados melhorar a nossa compreensão da bioquímica diversificada do ovário humano e demonstrar alterações metabólicas após a transformação. Além disso, os metabolitos com alterações significativas entre os grupos fornecer informações sobre conseqüências bioquímicas de transformação e são candidatos a biomarcadores de oncogênese ovário. estudos de validação são necessários para determinar se estes compostos têm utilidade clínica no diagnóstico ou tratamento clínico de pacientes com câncer ovariano

Citation:. Fong MEU, McDunn J, Kakar SS (2011) Identificação de metabólitos no ovário normal e sua transformação em primários e metastáticos cancro do ovário. PLoS ONE 6 (5): e19963. doi: 10.1371 /journal.pone.0019963

editor: S. K. Batra, University of Nebraska Medical Center, Estados Unidos da América

Recebido: 01 de março de 2011; Aceito em 15 de abril de 2011; Publicado em: 19 de maio de 2011

Direitos de autor: © 2011 Fong et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Os fundos usado para executar este trabalho foram apoiados por uma NIH /NCI Grant pesquisa CA124630 a SSK. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito. Metabolon foi pago para o serviço peformed em metabólitos de perfil de acordo com contrato assinado

Conflito de interesses:. JM é um funcionário da Metabolon, Inc. e foi responsável pela análise preliminar dos dados e edição final do manuscrito. No entanto, como parte da Universidade do contrato de Louisville com Metabolon, Inc., ele não tem qualquer benefício financeiro ou de retenção de invenção ou de propriedade direitos, patenteável ou não. Isso não afeta a adesão a PLoS ONE políticas sobre a partilha de dados e material.

Introdução

O câncer de ovário é a neoplasia maligna mais letal do sistema reprodutor feminino e 5

th causa de câncer morte em mulheres. Estima-se que 21,880 mulheres serão diagnosticados e 13.850 morrem desta doença este ano. A taxa de sobrevivência de cinco anos na Fase I é 93,5%, mas cai para 27,6% no estágio IV, onde a maioria dos casos são diagnosticados devido à falta de sintomas nas fases anteriores [1]. estratégias de detecção atuais incluem ultra-som e de sangue CA-125 níveis transvaginal. No entanto, ambos os métodos de detecção têm deficiências. Com ultra-som, o câncer poderia ser confundido com cistos funcionais em mulheres na pré-menopausa, devido à natureza dinâmica da superfície do ovário [2]. CA-125 tem uma elevada taxa de falsos positivos [2] que podem surgir a partir de uma variedade de condições, incluindo a endometriose, miomas, cistos ováricos hemorrágico, doença inflamatória pélvica aguda, menstruação, gravidez primeiro trimestre, e vários outros tipos de cancro [3]. Além disso, o CA-125 é muitas vezes não detectável no cancro da fase inicial do ovário [4]. Métodos alternativos estão a ser desenvolvidos para pacientes que tenham níveis de CA-125 normais, mas são suspeitos de ter doença recorrente com base em sintomas clínicos [5]. Estes métodos incluem outros biomarcadores potenciais, o mais promissor sendo proteína epydidimus humano 4 (HE4), [6], [7], [8], [9], [10], apesar de as taxas de detecção de 50-60% em ovário fase inicial Câncer. Um estudo detalhado da comparação da sensibilidade de biomarcadores de cancro do ovário para discriminar entre massas benignas e malignas tem sido descrita [11], bem como o papel de marcadores moleculares de prognóstico e terapia de avaliação em [12]. É importante que sugeriu biomarcadores ter valor preditivo, como indicado pela sensibilidade de 75% ou superior, bem como especificidade de 99,6% para ser capaz de detectar o cancro da fase inicial, quando ele é o mais tratáveis ​​[4].

Uma abordagem para identificar biomarcadores da doença é a utilização de ferramentas analíticas rico em informação, tais como métodos biológicos ômicas escala para caracterizar a composição do tecido alvo na saúde e na doença. Neste caso, é importante compreender as alterações bioquímicas que são conhecidos por ocorrer durante a transformação neoplásica. A primeira alteração do metabolismo da energia em células de cancro foi descrita por Otto Warburg, que mostrou as células cancerosas preferência por glicólise que resulta na geração de lactato para a produção de ATP, sobre o processo mais eficiente de fosforilação oxidativa pela mitocôndria [13]. Isto exige que as células cancerosas para aumentar a sua absorção de glucose através da expressão de várias isoformas de transportadores de glucose (GLUT 1 a 9) [14] e para aumentar o seu catabolismo da glicose, para compensar a perda de produção de energia, um facto que pode ser explorada no detecção clínica de neoplasia por tomografia de emissão positivo (PET) imagiologia [15].

os mecanismos moleculares envolvidos na glicólise hiperativo foram analisados ​​e alguns dos principais factores identificados, incluindo Akt, fator nuclear-kB (NF-kB kB), a hipoxia-inducible factor-1 (HIF1), e p53 [14], [16], [17], [18], [19], [20]. Os produtos destes genes estão envolvidos na activação celular, importação de nutrientes, e protecção contra a apoptose. Estes genes são conhecidos por interagir em teias hierárquicos complexos. Por exemplo, HIF-1 podem ser modulados por outros oncogenes, tais como Akt [14], K-Ras [21], e Her-2 [22] para aumentar a expressão de várias enzimas glicolíticas. Outros mecanismos moleculares incluem a regulação da transcrição por Myc para aumentar a expressão de transportadores e enzimas glicolíticas em particular, GLUT, hexoquinase 2, e lactato-desidrogenase [14], [23] -bem como pelo fosfoinositol-3-quinase (PI3K) /Akt /target da rapamicina em mamíferos (mTOR) via [24], [25], que é comumente hiperactiva em carcinomas [26]. Além disso, o metabolismo do tumor expressa diferencialmente glycoltyic isoenzimas, tais como a piruvato-cinase (PKM2), que pode deslocar entre um dímero e um tetrâmero a adaptar-se aos requisitos de energia de células [27], [28]. No entanto, PKM2 também pode ser contornado pela acumulação de fosfoenolpiruvato (PEP), resultando na fosforilação dependente de PEP e activação de fosfoglicerato mutase que produz piruvato directamente a partir de 3-fosfoglicerato [29]. Vander Heiden

et ai.

[29] a hipótese de que este desacopla produção piruvato de geração de ATP, mantendo uma razão ATP /AMP que não inibem a glicólise, e proporciona uma significativa quantidade de piruvato como um precursor anabólico. A maior parte da investigação sobre o metabolismo de células de tumor tem-se centrado na utilização de glucose. Quando a glicose é limitada, os tumores sólidos são forçados a catabolizar substratos alternativos, tais como os ácidos gordos, e aminoácidos como fonte de energia alternativa.

No entanto, a oncogénese pode resultar em um painel diverso de alterações metabólicas que poderiam ser tecido específico ou genérico através cancros humanos. Portanto, uma análise metabólica abrangente de tumores sólidos poderia revelar metabólitos valiosos tanto para o diagnóstico precoce do câncer, bem como para monitorar a progressão da doença e /ou recorrência de informar manejo clínico de pacientes com câncer. Estes biomarcadores poderia concebivelmente ser usado como parâmetros de substituição em ensaios clínicos e poderia sugerir novos alvos metabólicos para a gestão de cancro, bem como estabelecer objectivos complementares para o tratamento de quimioterapia. Metabolómica é uma ferramenta analítica sistemática utilizado para a identificação de metabolitos bioquímicos de processos celulares, um termo que inclui vários tipos de análises que variam de ressonância magnética nuclear (RMN), espectrometria de massa (MS), estudos baseados em traçadores, e footprinting metabólica [30 ]. Embora cada um desses métodos tem vantagens únicas, MS estabeleceu-se como o alto rendimento e uma abordagem industrial estável para avaliar tanto a composição de diversos tipos de amostras, bem como alterações para que a composição seguintes perturbação. Embora metabolômica tem sido em torno de décadas, mais recentemente, tem atraído a atenção como uma ferramenta de translação para a identificação e tratamento do câncer no contexto clínico, bem como para o desenvolvimento alvo da droga [31].

Em uma anterior estudo, Denkert

et al.

[32] utilizada cromatografia gasosa MS /tempo de voo (GC-MS /TOF) para comparar os tumores borderline de ovário para carcinomas ovarianos. Eles identificaram 114 de 291 (39,1%) compostos e constatou um aumento em ácidos proteinogenic aminoácidos, purinas, pyrimides, e precursores de membrana lipídica em carcinomas ovarianos contra tumores borderline e interpretou estes dados como significando que carcinomas têm taxas mais elevadas de proliferação celular. Em adição à análise metabólica do tumor, amostras de urina de pacientes de cancro do ovário, também foram estudados. Woo

et al.

[33] realizaram um estudo metabolômica à base para encontrar biomarcadores urinários para câncer de ovário e de mama utilizando GC /MS. Foram identificados dois biomarcadores conhecidos para o câncer de mama e 3 novos biomarcadores para o câncer de ovário: 1-metiladenosina, 3-metiluridina, e 4-androsteno-3,17-diona. Os biomarcadores de câncer de ovário foram relacionadas a dano oxidativo ao DNA e metilação de DNA. Da mesma forma, Slupsky

et al.

[34] amostras de urina coletadas de pacientes com câncer de mama precoce e em estágio final ou câncer de ovário, assim como de mulheres saudáveis, para se obter um perfil metabólico usando RMN. A concentração de metabolitos específicos diminuída em pacientes com cancro, resultando em um perfil único. Foram observadas alterações em intermediários do ciclo do ácido tricarboxilico (TCA), assim como moléculas, relativamente ao metabolismo de energia e aminoácidos.

Antes deste estudo, no entanto, o metaboloma do ovário normal não foi estudado, nem as mudanças que ocorrem com a transformação neoplásica ea progressão da doença metastática. No presente estudo, pela primeira vez, reporta o perfil metabólico do ovário humano normal e compará-lo com o perfil metabólico de câncer epitelial de ovário primário (EOC) e tumores metastáticos resultantes da EOC inicial (MOC) usando GC /MS e LC /MS /MS.

resultados

Identificação de metabólitos, análise estatística e, via de análise

Em amostras de nossos três grupos (normal, EOC, e MOC), 364 moléculas foram identificadas (Tabela S1) quando em comparação com a biblioteca metabolon contendo 1.700 moléculas. A identificação foi baseada no tempo de retenção, de carga (

m /z

), aductos preferidos, e padrão de fragmentação da molécula. A biblioteca completa permitiu a identificação rápida com uma alta fidelidade. Estes compostos incluída uma grande variedade de classes, que varia a partir de aminoácidos e péptidos simples de hidratos de carbono, lípidos, nucleótidos, cofactores e vitaminas, e xenobióticos (Fig. 1).

n = número de metabolitos em cada classe.

Os dados é um somatório de indivíduos pertencentes a um grupo. Usando one-way ANOVA com pós-teste de Tukey para identificar metabólitos diferencialmente abundantes nas três classes de tecidos analisados, 95 bioquímicos foram estatisticamente significativas e, além disso, tinha um

p

≤0.05 em pelo menos uma das comparações de pares (EOC vs. normal; MOC vs. normal; MOC vs. EOC). As identidades destes metabolitos são dadas na Tabela S2. Utilização dos perfis de abundância destes metabolitos, supervisionado Análise de Componentes Principais (PCA) foi realizada, obtendo-se uma boa separação dos três grupos (Fig. S1).

Usando Ingenuity Pathway Analysis (IPA), que identificou o top 15 canónicos vias envolvidas na EOC (Tabela S3) e MOC (Tabela S4). Em quase todos os casos, estes estavam relacionados com o metabolismo do ácido amino e biossíntese. Também digno de nota, o metabolismo pirimidina, metabolismo das purinas, e glycoxylate e as vias do metabolismo descarboxilar apareceu apenas no caso de MOC.

Perfil metabólico do ovário normal e perda de função em cima transformação

A primeira componentes principais separou as amostras não transformadas ovarianos dos tecidos transformados (ambos EOC e MOC), enquanto o segundo componente principal identificado um outro conjunto de alterações bioquímicas que correspondiam com metástases (Figura S1). Avaliação das cargas trama classificada ainda mais os compostos em perda /ganho de função com transformação ou metástase. Quatro metabolitos eram em grande abundância no ovário antes da transformação neoplásica: acetato de 1-metilimidazole (-2,06 dobra,

P

0,001 em EOC; -2,18 dobra,

P

0,001 em MOC), taurina (-1,75 vezes,

p Art 0,001 em EOC, -1,97 vezes,

p Art 0,001 em MOC), sulfato de fenol (-2,22 vezes,

p

= 0,0535 na EOC; -3.0 vezes,

p

= 0,0217 na MOC), e 6-fosfogluconato (-1,64 vezes,

p

= 0,0538 na EOC, -1,92 fold,

p

= 0,0264; Fig 2).. Estes compostos bioquímicos têm uma queda significativa na abundância sobre transformação. Dois destes metabolitos (methylimidazoleacetate e 6-fosfogluconato) ter sido previamente associado com a função normal do ovário e a queda da sua abundância pode ser considerada uma perda de função associada a transformação.

1-methylimidazoleacetate e taurina analisados por LC /MS por pulverização iónica positiva; sulfato de fenol e 6-fosfogluconato analisados ​​por LC /MS por pulverização iónica negativa. Box lenda: + caixa dentro representa o valor médio, bar dentro da caixa representa o valor médio, bar superior representa máximo de distribuição, inferior barra representa mínima de distribuição, círculo representa os pontos de dados extremos

Methylimidazoleacetate é o principal. metabolito da histamina. Este produto final do catabolismo histamina é formado por N-metilação no anel de imidazole para metilhistamina por metiltransferase de histamina e uma subsequente desaminação oxidativa da cadeia lateral por oxidase de tipo B da monoamina. A partir de estudos sabe-se que, tanto quanto 70-80% da histamina metabolizado no organismo é excretada na urina na forma de methylimidazoleacetate [35]. Assim, methylimidazoleacetate urinária sendo o maior e específica metabólito histamina é um marcador desembaraçadas de quaisquer alterações no metabolismo da histamina no corpo. produção ovárica ocorre histamina pelos mastócitos residentes de tecido e tem sido demonstrado para coordenar com a ovulação [36].

taurina não está envolvida na síntese de proteínas e /ou tem limitado a participação em vias bioquímicas fora de formação de N- peroxissomal Os conjugados de lípidos de acilo, tais como os ácidos biliares e ácidos gordos. No entanto, várias funções têm sido demonstrados para taurina, tais como osmoregulação, estabilização da membrana, desintoxicação, antioxidação, modulação do fluxo de iões, e como um neurotransmissor inibitório ou neuromodulador [37], [38], [39], [40], [ ,,,0],41]. Os papéis de taurina no sistema reprodutivo são múltiplas e complexas. A taurina é o aminoácido predominante em secreções, incluindo-genitais seminal, uterino, e fluidos do oviduto [42], [43]. Tem sido demonstrado que o ovário contém o ARNm de um transportador de taurina [44] e que o oviduto de rato contém até 10 umol taurina /g de tecido [45]. A taurina também está presente em concentrações elevadas no rato e no útero humano, e a sua concentração decresce com a gravidez [46], [47]. Apesar de todos estes dados, os papéis de taurina no sistema reprodutor feminino são largamente desconhecidos e não há estudos anteriores sobre a sua localização nestes órgãos. Sulfato

O fenol é um metabolito de microflora intestinal hepática processado, e o 6-fosfogluconato é um intermediário na utilização da glicose dentro da via das pentoses fosfato, potencialmente, significando que a glicose é restringida a partir da entrada para a via das pentoses fosfato no ovário saudável e que após a transformação existe um mecanismo de afinidade mais elevada no lugar por este mecanismo. Esta interpretação faz sentido, uma vez que a via da pentose fosfato produz tanto ribose para a biossíntese de nucleótidos, assim como dois equivalentes molares de NAD (P) H que poderiam atenuar o stress oxidativo e ajuda na reciclagem de glutationa.

Seis compostos diferenciados transformado independente de tecido do ovário se o cancro foi localizada ou metastático (PC1 0; PC2 = 0). Estes compostos incluídas várias aminas quaternárias (betaína, carnitina, e erogthionine), a intermediários do ciclo do TCA malato e fumarato e N-acetilglicina. As concentrações de amina quaternária tecido aumentou são tipicamente devido à demanda de tecido para qualquer colina ou carnitina como os transportadores de aminas quaternárias são seletivos, mas não específica [48]. Ao todo, treze compostos contendo aminas quaternárias foram encontrados a ter maior abundância de tecido num ou em ambos os grupos de cancro do ovário, em comparação com o tecido não transformado do ovário e dois lisolípidos contendo colina tinham reduzido significativamente a abundância no tecido ovariano transformado.

Cancro ter alterado o metabolismo de carboidratos

uma das características marcantes do câncer é um metabolismo da glicose alterada. Em 1929, Otto Warburg proposto pela primeira vez que as células cancerosas utilizada glicose de forma diferente do que as células normais, preferindo glicose para a glicólise anaeroblic em vez de fosforilação oxidativa para a geração de ATP [13], resultando no aumento da produção de lactato e um pH mais baixo do que o tecido normal, o que, transformar os mecanismos de reparo do DNA prejudica [49]. Os nossos resultados mostraram um aumento na concentração de lactato em ambos EOC e MOC com uma mudança de dobra 1,46 (

P

0,001) e 1,37 (

P

= 0,0076), respectivamente, quando comparado ao normal tecido ovariano. Apenas MOC mostraram um aumento de glucose-6-fosfato (2,91 vezes,

P

= 0,0029). Não houve mudanças significativas nos níveis de glucose, piruvato, acetylphosphate, fosfato, pirofosfato, citrato ou entre grupos (Fig. 3). O aumento na concentração de lactato, juntamente com nenhuma mudança significativa nos níveis de citrato, indicam que a glicólise não estava impedido, mas a fosforilação oxidativa em vez. Curiosamente, um outro aspecto do metabolismo Warburg, abundância de fosfato de hexose, só foi elevada nas amostras MOC (dados não mostrados).

glicose, glicose-6-fosfato, frutose-6-fosfato, 3-fosfoglicerato, fosfoenolpiruvato (PEP), piruvato, lactato, citrato e analisados ​​por GC /MS. Box lenda: + caixa dentro representa o valor médio, bar dentro da caixa representa o valor médio, bar superior representa máximo de distribuição, inferior barra representa mínima de distribuição, círculo representa os pontos de dados extremos

O outro hidrato de carbono com. um aumento significativo em abundância no tecido ovariano transformada foi fucose (2,75 vezes,

p Art 0,001 em EOC; 1,81 vezes,

p

= 0,0103 na MOC). Esta descoberta pode ser devido a uma perda de função de vias específicas de glicosilação do ovário, uma vez que tem sido demonstrado que o tecido normal do ovário expressa uma via fucosilação proteína específica que resulta na porção de fucose ser directamente acoplado à proteína através de Ser /Thr [50]. Esta via de glicosilação específica do ovário é também único na medida em que a fucose não é o açúcar terminal, mas uma interna de açúcar no oligossacárido ligado a O.

a oxidação de ácidos gordos aumentada em EOC e MOC

como uma alternativa para a fosforilação oxidativa para produção de ATP, EOC e MOC preferem utilizar ácidos gordos, tal como indicado por um aumento em vários ácidos gordos (Fig. 4) envolvido em ácido gordo e carnitina metabolismo, particularmente carnitina (1,79 vezes em EOC,

p Art 0,001; 1,88 vezes no MOC,

p Art 0,001), acetilcarnitina (1,75 vezes na EOC,

p Art 0,001; 2,39 vezes no MOC,

p Art 0,001), butyrylcarnitine (3,62 vezes,

p

= 0,0094 na EOC; 7,88 vezes,

p Art 0,001 em MOC), e propionilcarnitina aumentou 5,7 vezes (

p

= 0,0047) em MOC única (Fig. 5). A carnitina tem sido reconhecida como uma proteína de transporte, que proporciona os ácidos gordos para a mitocôndria para β-oxidação. acetilcarnitina endógeno tem sido utilizado como um indicador de saúde mitocondrial através do equilíbrio de acetil-CoA:CoA, transferindo o grupo acetilo para carnitina para formar acetilcarnitina e, assim, proporcionar grupos acetilo para a síntese de esteróis, ácidos gordos, e os corpos cetónicos [51] .

Carnitina, acetilcarnitina, butrylcarnitine e propionilcarnitina analisados ​​por LC /MS spray de iões positivos. 2-hidroxiglutarato e 3-hidroxibutirato analisada por GC /MS. Box lenda: + caixa dentro representa o valor médio, bar dentro da caixa representa o valor médio, bar superior representa máximo de distribuição, inferior barra representa mínima de distribuição, círculo representa os pontos de dados extremos

O corpo cetona 3. -hidroxibutirato (BHBA) foi regulada positivamente 8,63 vezes (P = 0,0056) em MOC em relação ao normal (Fig. 5). Além disso, a piscina citosólica de acetil-CoA é essencial da lipogénese de novo [52]. O excesso de produção de citoplasmática acetil-CoA em comparação com a capacidade mitocondrial para a sua incorporação no ciclo do TCA é demonstrado pelo aumento da abundância de um painel de ácidos N-acetil amino nos tecidos-incluindo cancerosas N-acetilglutamato, N-acetilglicina, N -acetylthreonine, os aminoácidos N-neuroactivo acetilaspartato (NAA) e N-acetil-aspartylglutamate (NAAG), o produto de degradação de poliamina N-acetylputrescine, e ainda N-acetilglucosamina-6-fosfato.

Curiosamente, nós também descobriu que o descreveu recentemente oncometabolite, 2-hidroxiglutarato tinha aumentado abundância em EOC (3,06 vezes,

p

= 0,0114 na EOC; a Fig. 5). [53]

fenilalanina avançado catabolismo

Fenilalanina catabolismo também resulta na produção de cetonas, nomeadamente fenilpiruvato e 4-hydroxypyruvate. Os principais metabolitos de catabolismo fenilalanina foram significativamente aumentados em comparação EOC ao normal (Fig. 6). Fenilpiruvato aumentou 4,21 vezes (

p

= 0,0098) em EOC única em relação ao normal, mas diminuiu -3,68 vezes (

p

= 0,036) em comparação com MOC EOC. Phenyllactate (PLA) aumentou 195,45 vezes (

p Art 0,0023) em EOC, uma descoberta que é normalmente atribuída à atividade insuficiente de fenilalanina hidroxilase [54]. Fenilacetato aumentou 1,93 vezes (

p

= 0,0203) em EOC em comparação com apenas normal, enquanto 4-hidroxifenilpiruvato aumentou 17,82 vezes (

p

= 0,0069) em EOC em relação ao normal. Fenilalanina, tirosina, f enilacetilglutamina, e 4-hidroxifenilacetato não foram significativamente alterados. Fenilalanina e seus principais metabolitos-fenilpiruvato, PLA, e fenilacetato-induzir o estresse oxidativo no hipocampo e cortrex cerebral via geração de espécies reativas de oxigênio, que foi atenuado pela α-tocoferol [55]. O fenilacetato também foi demonstrado ter um efeito inibidor do crescimento em linhas de células de cancro do ovário [56], enquanto que o PLA pode promover o crescimento [57]. Por isso, parece razoável que o câncer de ovário favoreceria a produção de PLA sobre outros metabolitos alternativos, consistente com nossos resultados. Estes metabolitos são gerados por transaminação de fenilalanina e subsequente oxidação do fenilpiruvato.

fenilalanina e tirosina analisadas por LC POS /MS .; fenilpiruvato, phenyllacetate, fenilacetilglutamina, phenylactate, e 4-hidroxifenilpiruvato através de LC /MS por pulverização de iões negativos; 4-hidroxifenilacetato de metilo por meio de GC /MS. Box lenda: + caixa dentro representa o valor médio, bar dentro da caixa representa o valor médio, bar superior representa máximo de distribuição, inferior barra representa mínima de distribuição, círculo representa os pontos de dados extremos

Aumento dos níveis de tocoferóis. em MOC

Existem quatro isoformas principais de tocoferóis: a, β, δ, e γ, com α-tocoferol é a forma mais biologicamente activa, o que representa aproximadamente 90% da vitamina e encontrado em tecidos animais, onde serve como um antioxidante para eliminar os radicais livres e terminar a peroxidação lipídica [58], [59]. Por isso, serve como uma defesa eficaz contra a radiação, que gera radicais livres a partir de água ou biomoléculas [60]. metabolômico análise mostraram uma aumento significativo na δ-, e os níveis de γ-tocoferol a- em MOC. α-tocoferol aumentou 1,160.41 dobra (

P

0,001) em comparação com o normal e 627,67 dobra (

P

= 0,0023) em comparação com EOC. δ-tocoferol aumentou 1,775.51 dobra (

P

0,001) em comparação com o normal e 1,950.08 dobra (

P

0,001) em comparação com EOC. γ-tocoferol aumentou 95,74 dobra (

P

0,001) em comparação com o normal e 83,79 vezes (

P

0,001) em comparação com EOC (Fig. 7). Como tocoferóis são solúveis em gordura, são transportados no sangue embalado em lipoproteínas, principalmente LDL e HDL, após o que são transportadas para o tecido ser submetido a absorção e pelo mesmo mecanismo pelo qual lípidos são apresentadas [58]. A captação pelo ovário normal é regulada por receptores de lipoproteína [59]. Os tocoferóis também têm sido implicadas na supressão da resposta do sistema imunitário através da diminuição das espécies reactivas de oxigénio e /ou alterando metabolitos de ácido araquidónico [61]. Por isso, parece razoável que o câncer metastático poderia acumular-los para suprimir a resposta imunológica e fornecer uma defesa contra a radiação tratamento para o câncer.

tocoferóis analisados ​​através de GC /MS. Box lenda: + caixa dentro representa o valor médio, bar dentro da caixa representa o valor médio, bar superior representa máximo de distribuição, inferior barra representa mínima de distribuição, círculo representa os pontos de dados extremos

oxidativo avançado resposta ao estresse.

Ophthalmate é um análogo da forma reduzida de glutationa (GSH) com o grupo tiol da GSH substituído com um grupo metilo. Ophthalmate pode ser sintetizado a partir de 2-aminobutirato e glutamato pela sintetase da enzima γ-glutamil cisteína (GCS) para formar γ-glutamil-2-aminobutirato de [62], que pode ser catalisada pela glutationa-sintetase (GS) para formar ophthalmate [63] (Fig. 7). Ophthalmate tem sido indicado como um biomarcador de estresse oxidativo níveis tão insuficientes de GSH resulta em síntese ophthalmate através da ativação de GCS. GSH é um dos antioxidantes intracelulares mais abundantes que protege a mitocôndria de radicais de oxigênio endógenos [64] e também mantém enzimas e outros compostos celulares em um estado reduzido [65], tornando-se um dos antioxidantes celulares mais importantes, como o seu leads de depleção à morte celular. GSH também tem sido implicado na resistência à quimioterapia, através da activação de múltiplas drogas transportador 1 resistente (MDR-1) [66], [67].

A forma oxidada de glutationa (GSSG), GSH, γ- glutamil-2-aminobutirato de etilo, e ophthalmate pode ser detectado no soro em ratinhos [67] assim todos têm o potencial de biomarcadores. No entanto, até à data 2-aminobutirato e ophthalmate não foram investigados no câncer de ovário. Aqui nós relatamos do primeiro tempo, aumentos significativos de 2-aminobutirato tanto EOC (1,46 vezes,

p

= 0,0316) e MOC (2,25 vezes,

p Art 0,001), sugerindo uma resposta oxidativa melhorada. Ophthalmate aumentou 2,94 vezes no MOC (

p

= 0,0128; Fig. 8). No entanto, não houve mudanças significativas nos níveis de glutationa (reduzida e oxidada Unidos) ou glutamato.

2-hidroxibutirato e 2-aminobutirato analisados ​​através de GC /MS. Caixa de trama de glutamato e ophthalmate analisados ​​por LC /MS por pulverização iónica positiva. Box lenda: + caixa dentro representa o valor médio, bar dentro da caixa representa o valor médio, bar superior representa máximo de distribuição, inferior barra representa mínima de distribuição, círculo representa os pontos de dados extremos

Aumento da produção de NAA. e NAAG

N-acetylasparate (NAA) é um ácido amino livre encontrado no cérebro em concentrações muito elevadas, que funciona como um osmólito em equilíbrio de fluidos para proteger os neurónios contra o stress osmótico [68], [69]. Pensa-se também para servir como uma fonte de etilo para lípidos e a síntese de mielina [70] e contribuir para a produção de glutamato de energia nas mitocôndrias neuronais através de uma série de reacções de [71], [72]. NAA é sintetizado a partir de L-aspartato e acetil-CoA pelo enzima L-aspartato-N-acetil-transferase e hidrolisado pela enzima aspartoacilase II. NAA serve como um precursor para N-ascetyl-aspartil-glutamato (NAAG) usando a enzima sintetase de NAA (Fig. 8). Devido à sua embalagem com o glutamato, o papel fisiológico para NAAG tem sido difícil de identificar, no entanto, ele preenche os critérios de um neurotransmissor, uma vez que é empacotado em vesículas sinápticas e lançado em um

2 + forma dependente de Ca dos terminais nervosos [73]. Tem sido proposto para servir como um transporte para o glutamato para activar o receptor de glutamato mGluR3 que, devido à natureza citotóxica do glutamato [74], [75]. Mais recentemente, tem sido utilizada para diagnosticar desordens cerebrais. Além disso, as concentrações de NAA foram encontrados em um paciente com cistadenoma mucinoso do ovário [76] e no fluido do cisto do ovário de tumores ovarianos serosas [77], embora um papel fisiológico no ovário não foi determinada. Aqui mostramos que NAA e NAAG, dois aminoácidos livres, foram detectados no ovário normal com níveis significativamente aumentados em EOC que mostram uma mudança de dobra 3,50 (

P

= 0,0301) e 2,19 (

p

= 0,0352), respectivamente, com novos aumentos em MOC com uma mudança de dobragem de 85,60 dobra (

P

0,001) e 8,09 (

P

0,001), respectivamente (Fig . 9).

NAA e NAAG analisados ​​através de LC /MS negativo e LC /MS por pulverização iónica positiva, respectivamente. Box lenda: + caixa dentro representa o valor médio, bar dentro da caixa representa o valor médio, bar superior representa máximo de distribuição, inferior barra representa mínima de distribuição, círculo representa os pontos de dados extremos

NAAG é discriminado. por dipeptidase acídica ligada alfa-N-acetilada (NAALADase), uma enzima específica catabólico-NAAG [78].