Abstract

Fundo

BRAF

mutações têm sido bem descrito no cancro do pulmão de células não pequenas (NSCLC) por vários anos, mas as características clínicas de pacientes abrigando

BRAF

mutações ainda não são bem descritas. Foi realizada uma meta-análise para identificar características clínicas comuns em pacientes com NSCLC que transportam

BRAF

mutações.

Métodos

Foram identificados estudos clínicos que examinaram a associação entre o

BRAF

mutações e características de NSCLC dentro PubMed, Embase e banco de dados ISI Science Citation Index até outubro de 2013. O tamanho do efeito das características clínicas foi estimada pelo odds ratio (OR) com intervalo de confiança de 95% (CI) para cada estudo, utilizando-se um modelo de efeitos fixos ou de efeitos aleatórios.

resultados

foram incluídos dez estudos com um total de 5599 doentes com NSCLC. Houve um (170/5599)

BRAF

taxa de mutação de 3%.

BRAF

mutações em NSCLC foram significativamente associados com adenocarcinomas (ADCs) (em comparação com os não-ADCs, OR = 4,96, IC 95% = 2,29-10,75). Não houve diferenças significativas no sexo, tabagismo e estágio em pacientes com e sem

BRAF

mutações. O

BRAF

mutação V600E foi mais frequente em mulheres do que não

BRAF

mutações V600E (OR = 0,27, 95% CI = 0,12-0,59), e foi estreitamente relacionadas com nunca fumantes (OR = 0,14, IC 95% = 0,05-0,42).

conclusões

Estas conclusões têm implicações importantes para a predição dos sub-tipos NSCLC combinada com mais precisão com outros alterações genéticas

Citation:. Chen D, Zhang LQ, Huang JF, Liu K, Chuai ZR, Yang Z, et al. (2014)

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Mutações em Doentes com Non-Small Cell Lung Cancer: uma revisão sistemática e meta-análise. PLoS ONE 9 (6): e101354. doi: 10.1371 /journal.pone.0101354

editor: John Souglakos, University Hospital Geral de Heraklion e Laboratório de Tumor Cell Biology, Faculdade de Medicina da Universidade de Creta, Grécia |

Recebidas: December 9, de 2013; Aceito: 06 de junho de 2014; Publicação: 30 de junho de 2014

Direitos de autor: © 2014 Chen et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este trabalho foi apoiado em parte por doações do Programa de Pesquisa e Desenvolvimento de alta Tecnologia Nacional da China (National Programa 863, No. 2011AA02A121 e 2013AA020204) da Fundação preferencial de ciência e Tecnologia Actividades para estudantes no estrangeiro de Chongqing (No. YuLiuZhu201201), o Projeto patrocinado pela Fundação de Pesquisa Científica para ultramarinos de estudiosos chineses do Ministério da Educação do Estado. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

o cancro do pulmão é a principal causa de morte por câncer, resultando anualmente em mais de um milhão de mortes em todo o mundo [1]. Aproximadamente 85% dos pacientes com câncer de pulmão têm um diagnóstico histológico de câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC), ea taxa de sobrevida global em 5 anos é de cerca de 17% [2], [3]. decisões de tratamento para pacientes com cancro do pulmão têm sido historicamente baseado na histologia do tumor. Uma estratégia de tratamento promissora centrou-se na subdivisão das NSCLC em subconjuntos moleculares clinicamente relevantes. O esquema de classificação foi baseada nos chamados mutações específicas do controlador, incluindo mutações ativadoras do receptor do factor de crescimento epidérmico (EGFR),

KRAS

,

BRAF

,

HER2

,

PIK3CA

, e outros em frequências superiores a 1% [4], [5]. Além disso, Seidel et al. previram com sucesso cada um dos sub-tipos NSCLC usando uma combinação de imunohistoquímica e marcadores genômicos [6]

BRAF

, um dos três membros da família RAF quinase:.

a-RAF

,

BRAF

,

C-RAF

, pertence ao grupo de cinases de serina-treonina e desempenha papel vital no MAP quinase (MAPK) vias [7 ], [8]. Mutações no

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foi encontrado em diferentes tipos de cancros, predominantemente de melanoma, o cancro colo-rectal metastático e câncer de tireóide papilar. A frequência de mutação foi de cerca de 50%, 9% e 45%, respectivamente, [9] – [11].

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mutações foram encontradas em 1-3% dos CPNPC [4].

As mutações nos genes acima estão intimamente relacionados com as características demográficas ou clínico-patológicas específicas, incluindo tabagismo, sexo, clínica palco, eo tipo histológico [12], [13]. Esta informação pode ser útil para a selecção de pacientes para o tratamento com inibidores de genes específicos. Enquanto

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mutações em NSCLC foram descritos por vários anos, a real prevalência e características clínicas de pacientes com NSCLC que abrigam

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mutações não estão bem definidos, devido ao número relativamente baixo de paciente casos investigados [14] – [16]

Foi realizada uma meta-análise de um grande número de tumores pulmonares com

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mutações de estudos publicados, a fim de avaliar quantitativamente a associação entre

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mutação e as características demográficas ou clínico-patológicas.

Materiais e Métodos

Pesquisa de publicação

Foi realizada uma pesquisa sistemática da literatura no PubMed, EMBASE, eo bases de dados Science Citation Index. Os seguintes termos de pesquisa foram usados ​​para identificar publicações relevantes: “

BRAF

“, “

B-RAF

“, “cancro do pulmão de células não pequenas”, “carcinoma de células não-pequenas do pulmão de células” , “carcinoma de células não-pequenas células”, “NSCLC”, “cancro do pulmão de células escamosas”, “carcinoma do pulmão de células escamosas”, “cancro do pulmão de células grandes”, “carcinoma de pulmão de células grandes”, “adenocarcinoma pulmonar”. A pesquisa bibliográfica foi limitada a estudos em humanos. Sem limitações foram colocados sobre a língua da publicação ou tipo de estudo. Todos os estudos elegíveis foram recuperados, e as suas bibliografias foram verificadas para outras publicações relevantes. eram mão artigos e bibliografias de outros estudos relevantes revisão identificou procurou encontrar estudos adicionais elegíveis.

Os critérios de inclusão

Estudos elegíveis para inclusão nesta meta-análise (1) foram publicados como um texto completo em inglês. (2) o número de pacientes com

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mutações foi mais do que 1; (3) os artigos estavam envolvidos com a associação entre o

BRAF Comprar e características demográficas ou clínico-patológicas de NSCLC. Quando o mesmo autor ou grupo relatou resultados da mesma população de pacientes em mais de um artigo, o relatório mais recente ou o mais informativo foi incluído.

Os dados de extração

A informação foi cuidadosamente extraído de estudos elegíveis. Os seguintes dados foram coletados de cada estudo: primeiro nome do autor, ano de publicação, número de pacientes incluídos, o número de pacientes com

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mutações, o número de pacientes com

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V600E mutações, métodos de rastreio, características demográficas e clínico-patológicas dos pacientes. extração de dados foi realizada de forma independente por dois dos autores e discrepâncias foram resolvidas por consenso, incluindo um terceiro autor. Todos os procedimentos conformes com as orientações para a meta-análise de estudos observacionais em epidemiologia [17].

Métodos estatísticos

Nós utilizados RevMan (versão 5) para calcular as odds ratio de resumo ( RUP) com intervalo de confiança de 95% (IC), usando um modelo de efeitos aleatórios ou fixos para todas as análises. Nós avaliamos a heterogeneidade dos estudos usando o teste do qui-quadrado de heterogeneidade e do I

2 medida de inconsistência. heterogeneidade significativa foi definida como um valor 0,10 ou como um I

2 medida 50% [18]. Se RUP foram encontrados para ter homogeneidade fina (I

2≤50%), foi utilizado um modelo de efeitos fixos para análise secundária. Se não (I

2 50%), foi utilizado um modelo de efeitos aleatórios. A análise de sensibilidade foi realizada para examinar a influência de cada estudo sobre o pool ou omitindo em série um estudo individual e junção das demais estudos. viés de publicação possível foi avaliada por avaliação visual de um gráfico de funil. Análises de subgrupo foram realizadas por etnia e número de

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mutações.

Resultados

Seleção Estudo

Um total de 1480 resumos e títulos foram obtidos por meio eletrônico pesquisas. 349 registros foram excluídos por causa de duplicatas. Os restantes 1131 foram rastreados pelos títulos e resumos e 1088 estudos foram excluídos. 43 documentos de texto completo foram considerados relevantes e foram examinados em detalhe. 33 desses artigos de texto completo foram excluídos (Figura 1). Dez estudos preencheram os critérios de inclusão e foram incluídos na meta-análise

Características de Estudos

Houve 5599 pacientes nas identificados 10 estudos [5], [14] -. [ ,,,0],16], [19] – [24]. Só 170 (3,0%) destes pacientes tinha

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mutações nos tumores NSCLC (Tabela 1). O primeiro estudo foi em novembro de 2008 por Pratilas et al. [19], enquanto o mais recente trabalho foi em agosto de 2013 por Cardarella et al. [5]. O tamanho da amostra variou 96-1046, com apenas um estudo mais de 1000 pacientes [16]. A incidência de

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mutações em estudos individuais variou de 0,9% a 8,9%. Os pacientes em quatro estudos eram asiáticos, cinco estudos eram não-asiáticos, e um estudo consistiu de uma população mista de 4 países. Cinco estudos selecionados para

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mutações utilizando reação em cadeia da polimerase (PCR) e sequenciamento direto. Três estudos detectaram a

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mutações usando os métodos acima mais a matriz de laser assistida dessorção /ionização tempo de espectrometria de massa de voo (MALDI-TOF MS), análise de polimorfismo de conformação em hélice simples (SSCP), ou análise de fusão de alta resolução (HRMA). Os dois estudos restantes utilizados os métodos individuais MALDI-TOF MS ou HRMA.

BRAF

mutações e características demográficas e clínico-patológicas de NSCLC

Os resultados combinados do associação entre

BRAF

mutações e características demográficas e clínico-patológicas de NSCLC são apresentados na Tabela 2 e Figura 2. Nove estudos apresentaram dados sobre a associação entre o

BRAF

mutações e de gênero.

BRAF

mutações foram detectadas em 83 de 2.224 pacientes do sexo masculino (3,73%) e 79 de 1.972 pacientes do sexo feminino (4,01%). Não houve diferença significativa na frequência da mutação por sexo (OR = 0,79, 95% CI = 0,57-1,10). Os dados sobre a associação entre

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mutações e tabagismo foi apresentado em oito estudos.

BRAF

mutações foram detectadas em 120 de 2557 os fumantes atuais ou anteriores (4,69%) e 38 de 1248 que nunca fumaram (3,04%). Não houve diferença significativa no

BRAF

taxa de mutação em fumantes atuais ou anteriores e nunca fumantes (OR = 0,95, 95% CI = 0.45-2.02). Seis estudos relataram a associação entre o

BRAF

mutação eo tipo histológico.

BRAF

mutações foram detectadas em 98 (4,04%) de 2224 ADC e 6 (0,58%) de 1037 não ADCs. Houve diferenças significativas entre os ADCs e não-ADCs em

BRAF

taxa de mutação (OR = 4,96, 95% CI = 2,29-10,75). Apenas quatro estudos continha informações sobre estágio clínico do NSCLC com

BRAF

mutações.

BRAF

mutações foram detectadas em 46 de 1.132 pacientes com estágio I ou II (4,06%) e 71 das 931 em pacientes com estágio III ou IV (7,63%). Não houve diferença significativa no

BRAF

taxa de mutação no estágio I e II e fase III e IV (OR = 1,05, 95% CI = 0,55-2,01).

BRAF

mutação V600E e demográficas e clínico-patológicas características

A associação de

BRAF

mutação V600E e características demográficas e clínico-patológicas foi avaliada (Figura 3). Três estudos avaliando o

BRAF

mutação V600E no NSCLC foram sistematicamente analisados ​​utilizando um modelo de efeitos fixos.

mutações BRAF

V600E foi responsável por 53,6% (60/112) de todos os

BRAF

mutações.

BRAF

mutações V600E foram detectados em 23 de 60 pacientes do sexo masculino (38,3%) e 37 de 52 pacientes do sexo feminino (71,2%). Houve uma diferença significativa na expressão do sexo masculino e feminino desta mutação (OR = 0,27, IC 95% = 0,12-0,59). De 84 antigos ou atuais fumantes, 36 (42,9%) tiveram

mutações BRAF

V600E. 24 de 28 nunca fumaram (85,7%) tiveram esta mutação. A diferença foi significativa entre fumantes atuais ou anteriores e nunca fumantes (OR = 0,14, 95% CI = 0.05-0.42).

BRAF

mutações foram detectadas em 20 de 42 pacientes com estágio I ou II (47,6%) da doença e 40 de 70 em pacientes com estágio III ou IV (57,1%) da doença. Não houve diferença significativa na expressão desta mutação nos dois grupos de estágio (OR = 0,54, IC 95% = 0,23-1,28).

análises de subgrupos de

BRAF

mutações e características demográficas e clínico-patológicas

Quando os estudos combinados incluídos foram estratificados de acordo com a etnia, não houve associação estatisticamente significativa entre

BRAF

mutação e sexo, história de tabagismo ou estágio, de acordo com o efeito global (Tabela S1). No entanto, o OR de histologia foi (IC 95%: 0,79-15,45) 3,49 para os asiáticos, (IC 95%: 0,94-35,25) 5,75 para não-asiáticos e 3,59 (IC 95%: 0,82-15,80) de etnia mista. Não houve associação estatisticamente significativa entre

BRAF

mutação e ADC, que era diferente do efeito geral (OR = 4,96, IC 95% = 2,29-10,75). Da mesma forma, quando os estudos foram agrupados pelo número de

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mutações, a combinadas ou para histologia foi (IC 95%: 0,79-15,45) 3,49 para menos mutações ( 10). Neste subgrupo

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mutações foram mais frequentemente associado com ADCs. (Tabela S1).

Sensibilidade análise e publicação viés

A análise de sensibilidade foi conduzida para determinar se a modificação dos critérios de inclusão desta meta-análise, que os resultados finais. A análise de sensibilidade revelou que nenhum dos estudos afetou significativamente as RUP reunidas e IC (dados não mostrados). Para investigar a presença de viés de publicação, um gráfico de funil de efeitos calculados a partir de estudos individuais que examinaram a associação entre o

BRAF

mutações e características demográficas ou clínico-patológicas foi realizada. Não houve forte indicação de viés de publicação entre os estudos incluídos nesta meta-análise.

Discussão

Estudos de mutações do interesse considerável

gene BRAF

têm gerado porque estes mutações pode estar associada com o aumento da sensibilidade a agentes que visam directamente

BRAF

vias de sinalização a jusante mediados por BRAF

ou [25].

BRAF

mutações foram analisados ​​por meio de estudos de meta-análise em melanoma, cancro colo-rectal e cancro papilar da tiróide [26] – [29]. Mutações no gene

BRAF

estavam intimamente relacionadas às características demográficas ou clínico-patológicas particulares, incluindo tabagismo, sexo, estágio clínico, diferencial e histologia do tumor. O efeito da

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mutações sobre as características clínicas de NSCLC foram relatados por vários anos. Um consenso não foi alcançado devido ao pequeno número de pacientes avaliados. Realizamos este meta-análise para investigar a prevalência e as características dos pacientes com NSCLC com

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mutações em uma grande amostra colectiva de pacientes.

Nós sistematicamente uma revisão da literatura que descreve a relação entre o

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mutações e características demográficas ou clínico-patológicas de 10 estudos envolvendo mais de 5500 pacientes com NSCLC. A taxa de

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mutações foi, em média, cerca de 3% (170/5599), de acordo com dados publicados anteriormente [4], [7], [21]. A taxa de mutação a partir de estudos publicados variou de 0,9% a 8,9% [20], [24]. Ilie et ai. explicou a variação pode ser devido à avaliação exclusiva de

BRAF

mutação em pacientes caucasianos com

EGFR

,

KRAS

,

PI3KCA

,

HER2

ou

ALK

alterações [24]. taxas de mutação de 2% e 3,5% foram relatados por Pratilas et al e Marchetti et al. em série composta de 916 e 1046 pacientes, respectivamente [16], [19]. Estes foram perto da frequência encontrada em nosso estudo.

Um dos objetivos do nosso estudo foi identificar características que ajudam a enriquecer pacientes para análise de mutação tumor. A meta-análise foi realizada para encontrar uma associação entre

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mutação e quatro características clínico-patológicas. Não houve associação significativa com o sexo ea incidência de

BRAF

mutação (OR = 0,79 IC 95% = 0,57-1,10). Uma associação entre a

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mutações e feminino tem sido relatada em pacientes com câncer colorretal [29] – [31]. No entanto, essa associação não foi feita para CPNPC [5], [24], o que corrobora com os nossos resultados. Análises de subgrupos por etnia encontra uma fraca associação com os asiáticos ter uma propensão ligeiramente mais elevada por ter

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mutação, mas isso não foi estatisticamente significativa. A maioria dos estudos também mostraram nenhuma associação de

BRAF

estado de mutação e tabagismo. No entanto, Paik et al relatou que todos os pacientes com um

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mutação eram fumantes ou ex-[21]. No entanto, não vemos essa associação na análise.

Nos últimos anos, os cientistas têm feito grandes progressos em direção mutações específicas compreensão do câncer e orientando-as com drogas apropriadas [6]. Seidel et al. realizaram um grande trabalho com estudos de duas coortes incluindo mais de 6000 doentes com cancro do pulmão, e demonstrou a associação entre o subtipo de tumor de pulmão e suas mutações predominantes, e o benefício de testes genéticos e terapia-alvo nestes doentes [6]. Eles descobriram que a maioria das mutações mostrou especificidade subtipo histológico e forneceu um modelo para o diagnóstico genômico de tumores pulmonares [6]. Portanto, nós também realizou a meta-análise para fundar a associação entre a mutação BRAF e subtipo histológico e estágio clínico do NSCLC.

NSCLC é composta por três tipos histológicos diferentes, carcinoma de células escamosas, carcinoma de grandes células, e ADC. ADC responsável por mais de 50% de todos os casos. Descobrimos que

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mutações como um todo foram mais comuns em ADCs do que em outros histologia (OR = 4,96 IC95% = 2.29-10.75), semelhante a um estudo anterior [16]. Não houve heterogeneidade significativa entre os estudos (I

2 = 0,0%, P = 0,70). Um achado interessante do nosso estudo foi que os resultados agrupados no subgrupo estratificado por etnia e número de mutações foram significativamente diferente do efeito geral de histologia (Tabela S1). Não houve diferença significativa na taxa de

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mutações e ADCs no subgrupo, ao passo que as diferenças foram significativas na população geral do paciente. Isto pode ser explicado pelo número de casos incluídos. Quando o número de pacientes foi pequeno no subgrupo, a associação não foi significativa. Quando investigamos essa associação em um grande número de pacientes, houve maior poder de detectar a associação entre o

BRAF

mutação e ADC. Este é o mais valioso achado deste estudo. estágio clínico é um fator importante na determinação do prognóstico do NSCLC. Não houve associação significativa entre baixa ou alta palco e

BRAF

mutação. estudos maiores são necessários para examinar melhor esta relação.

Entre as diferentes mutações que ocorrem no

gene BRAF

,

BRAF

V600E é o mais comum [32] . Até agora, três estudos investigaram a associação entre o

BRAF

mutação V600E e características demográficas ou clínico-patológicas [5], [16], [24]. O número de mutações V600E e não-V600E detectados foi baixa, não permitindo-nos para realizar um separada analisar em outros estudos. Os três estudos encontraram diferenças significativas nas características clínicas de pacientes com NSCLC com e sem

BRAF

V600E [5], [16], [24]. Dois relatórios encontrado

BRAF

mutações V600E mais frequentes no sexo feminino e nunca fumantes, e não com quaisquer outras características clínico-patológicas [16], [24]. Encontramos também o

BRAF

mutação V600E foi significativamente mais frequente nas mulheres. O

BRAF

mutação V600E também foi significativamente mais frequente em mulheres que nunca fumantes em comparação aos fumantes atuais ou ex-(OR = 0,14 IC 95% = 0.05-0.42). Ilie et al relatou que não

BRAF

mutações V600E foram significativamente associados com tumores em estágio inicial [24]. Fizemos ver uma tendência para a doença mais cedo-estágio, mas que não foi estatisticamente significativa.

A heterogeneidade é um problema em potencial que podem afetar a interpretação de todas as meta-análises. Para investigar as possíveis fontes de heterogeneidade que podem modificar os efeitos do

BRAF

mutações sobre o tabagismo e estágio, foram realizadas análises de subgrupos de acordo com a etnia e número de

BRAF

mutações. Os resultados na fase de fumo e não foram substancialmente alteradas, tal como indicado por análise de sensibilidade e subgrupo. análise de subgrupo por etnia não demonstraram heterogeneidade clínica sobre a associação entre o

BRAF

mutações e sexo, tabagismo ou estágio. Isto indica que a estimativa geral da associação entre o

BRAF

mutações e as características clínicas da NSCLC é legítimo.

O nosso estudo tinha várias limitações que precisam ser levados em conta na interpretação dos resultados. Em primeiro lugar, o número de estudos incluídos foi pequena. Mais estudos são necessários para ampliar e confirmar nossos resultados. Em segundo lugar, nós não recolher dados sobre o tratamento e os resultados clínicos de doentes com

BRAF

mutações que serão feitas em um estudo futuro. Finalmente, nós não descrever a associação entre a mutação BRAF e hábito de fumar, que agrupadas por antigos e atuais fumantes separadamente devido à falta de dados.

Conclusões

Apesar das limitações, a nossa meta-análise teve alguns resultados significativos. Descobrimos que

BRAF

mutações foram mais frequentes em ADCs, e não foram associados com outros tipos histológicos. O BRAF

mutação V600E foi significativamente correlacionada com pacientes com NSCLC sexo feminino e não fumantes. As conclusões aqui obtidos confirmam a associação informou de mutações BRAF com características demográficas ou clínico-patológicas específicas, que podem ser úteis para a previsão dos sub-tipos NSCLC combinados com mais precisão com outras alterações genéticas.

Informações de Apoio

tabela S1. .

Análise de subgrupo da relação entre a mutação e tumorais características BRAF acordo com a etnia e número de mutações

doi: 10.1371 /journal.pone.0101354.s001

(DOCX)

Checklist S1.

PRISMA 2009 Checklist

doi:. 10.1371 /journal.pone.0101354.s002

(DOC)