Abstract

Fundo

hepatoma-regulada cedo (HURP) é um componente do chromatin- via dependente para a montagem do fuso. Nós examinamos o valor preditivo de prognóstico de HURP no carcinoma hepatocelular humano (HCC).

Métodos

expressão HURP foi avaliada por imunocitoquímica de células de hepatoma agulha aspirada finos em 97 pacientes com CHC com o Barcelona Clinic Liver Cancer (BCLC) estágio A. Posteriormente, estes pacientes foram submetidos à hepatectomia parcial (n = 18) ou ablação por radiofrequência (n = 79) e foram acompanhados por 2 a 35 meses. Os parâmetros clínico foram submetidos à análise de sobrevivência.

Resultados

expressão HURP em células do CHC aspirados foi detectado em pacientes 19,6%. análise de sobrevivência de Kaplan-Meier mostraram que a expressão HURP positivo (

P

= 0,023), classificação citológica ≥3 (

P

= 0,008), AFP ≥35 ng /mL (

P

= 0,039), bilirrubina ≥1.3 mg /dL (

P

= 0,010), AST ≥50 U /L (

P

= 0,003) e ALT ≥35 U /L (

P

= 0,005) foram associados com uma sobrevida livre de doença mais curto. A multivariada stepwise Cox modelo de riscos proporcionais revelou que a expressão HURP positivo (HR, 2.334; 95% CI, 1,165-4,679,

P

= 0,017), AST ≥50 U /L (HR, 3,697; 95% CI , 1,868-7,319,

p Art 0,001), grau citológico ≥3 (HR, 4.249; 95% CI, 2,061-8,759,

P Art 0,001) e número de tumor 1 (HR, 2.633; 95% CI, 1,212-5,722,

P

= 0,014) foram preditores independentes de sobrevida livre de doença. Ao combinar os 4 preditores independentes, pacientes com diferentes graus de risco (RS) mostraram sobrevida livre de doença distinguíveis (RS≤1 vs RS = 2,

P

= 0,001; rs = 2 vs. RS = 3, P 0,001). Em contraste, os pacientes não podem ser separados em subgrupos de prognóstico distinguíveis usando sistema de estadiamento AJCC /UICC TNM.

Conclusão

pacientes com CHC com estágio BCLC A podem ser separados em três grupos de prognóstico-distinguíveis pela uso de um escore de risco que se baseia expressão HURP em células aspirados HCC, ALT, grau citológico e número tumor

Citação:. Chang ML, Lin SM, Yeh CT (2011) escores de risco HURP Assisted-expressão Identificar prognóstico diferenciáveis ​​subgrupos em cancro do fígado em fase inicial. PLoS ONE 6 (10): e26323. doi: 10.1371 /journal.pone.0026323

editor: Bernard W. Futscher, da Universidade do Arizona, Estados Unidos da América

Recebido: 22 de julho de 2011; Aceito: 23 de setembro de 2011; Publicado: 17 de outubro 2011 |

Direitos de autor: © 2011 Chang et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este projecto foi apoiado pela concessão de Chang Gung Medical Research Program (CMRP-370693). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

Usando uma abordagem bioinformática integrativa para analisar etiquetas de seqüências expressas no fígado humano, um novo ciclo celular gene regulada chamado hepatoma-regulada de proteínas (HURP) foi identificado há 10 anos [1]. HURP, expressa abundantemente no carcinoma humano hepatocelular (HCC, isto é. De hepatoma), é um substrato para a fosfoproteína mitótico Aurora-A [2]. A Aurora-A é uma serina /treonina quinase regulada por ciclo celular mostra que os níveis máximos de expressão durante a fase G2 /M [3], [4]. O facto de que os níveis de HURP flutuar durante o ciclo celular e atinge um pico em G2 /M sugere que desempenha um papel na regulação do ciclo celular [5]. Estudos adicionais indicaram que HURP é um componente da via dependente da cromatina para o porta-veios. Tem um papel crucial na montagem dos microtúbulos induzida por cromatina, estabiliza e inclui K-fibras, e é essencial para a produção de novo de microtúbulos a partir de cromossomas [6]. Além disso, a sua actividade é necessária para a captura adequada kinetochore, congression cromossomo eficiente e progressão mitótico oportuna. Os defeitos nestes processos pode desencadear a iniciação inadequado anafase e instabilidade genómica [7], [8]. Além da regulação da transcrição, abundância intracelular de HURP também é regulada por Cdk1 /ciclina B ao nível pós-traducional [9], [10]. No entanto, pode haver algumas vias redundantes compensadores para a função de HURP no ciclo celular como HURP (- /-) desenvolvem-se normalmente e ratinhos são indistinguíveis dos seus companheiros de ninhada do tipo selvagem. O único fenótipo documentado para HURP (- /-) é murganhos que murganhos fêmeas são incapazes de formar sítios de implantação devido a uma incapacidade de sofrer a reacção decidual [11]

Apesar de os dados experimentais indicando uma ligação entre a célula. desregulação do ciclo e HURP aberrance, foi estabelecida nenhuma evidência convincente até agora sugerindo um papel oncogênico directa de HURP no HCC. No entanto, evidências implicando um potencial oncogénico de HURP foram esporadicamente relatados. expressão HURP positivo foi associada com o surgimento e recorrência de carcinoma de células transicionais [12], [13]; Análise da expressão de genes revelaram que HURP representado um marcador prognóstico capaz de distinguir entre tumores malignos e benignos adrenocorticais [14], [15]; e em linhas celulares 293T (American Type Culture Collection (ATCC), Manassas, VA, EUA), a sobre-expressão de HURP em células diferenciadas aumento do crescimento celular e apoptose bloqueada que é normalmente induzida por privação de soro [16]. Por outro lado, o gene HURP é capaz de aumentar a quimiossensibilidade de análogos desoxicitosina em células NIH3T3 [17], e a proteína virai HBx activa a expressão de HURP para prevenir a apoptose durante a progressão do cancro e estabelecimento de quimiorresistência em células Hep3B [18] .

HCC é responsável por 90% das neoplasias de fígado primário, representa o quinto câncer mais comum no mundo, e é a terceira principal causa de morte relacionada ao câncer em todo o mundo [19], [20]. A encenação preciso da doença pode ajudar os médicos a compreender o prognóstico e fazer a escolha certa de modalidades terapêuticas para beneficiar pacientes. Atualmente, existem vários sistemas de pontuação prognósticos que foram estabelecidas usando diferentes variáveis ​​clínico-patológicas [21]. No entanto, mesmo entre pacientes no mesmo estágio de HCC e categorizados pelo mesmo sistema de pontuação, o prognóstico pós-terapêutica ainda é muito variada. Isto é provavelmente devido ao facto de o HCC é uma doença multi-etiológica com mecanismos patogénicos subjacentes complexos causadas por uma variedade de factores de risco. Presumivelmente, a inclusão de bons marcadores moleculares em um sistema de previsão de prognóstico pode resolver estas insuficiências e melhorar os métodos de preparação actuais [22]. Devido à disponibilidade de ultra-som, bem como outros métodos de imagem sofisticado, um número crescente de HCC são detectados numa fase precoce. Além disso, para minimizar a invasão dos procedimentos, diagnóstico patológico é gradualmente substituída por citologia através de aspiração com agulha fina. Além disso, a ressecção cirúrgica está a ser substituída, em grande parte por ablação por radiofrequência (RF) por causa da eficácia terapêutica comparáveis ​​entre os dois tratamentos. características citológicas de células de carcinoma hepatocelular, incluindo classificação diferenciação e imunocoloração de antígenos específicos, são facilmente obtidos a partir de aspiração com agulha fina. Esses parâmetros não está incluído em qualquer um dos sistemas de pontuação, mas eles podem fornecer informações importantes para a previsão do prognóstico eficaz. Embora HURP foi extraído a partir do primeiro banco de dados de HCC humana up-regulada genes, o seu papel na HCC humana

in vivo

permaneceu uma incógnita. Para resolver isso, nós estabelecemos um método de coloração imuno-histoquímica para detectar a expressão HURP em células do CHC aspirados de pacientes. As características clínico-patológicas, classificação citológica e expressão HURP em células de carcinoma hepatocelular foram todos levados em conta para calcular os preditores prognósticos nesses pacientes HCC.

Materiais e Métodos

Os pacientes

Este foi um único centro, estudo prognóstico prospectivo que foi realizado após aprovação pelo Comitê de Ética em Chang Gung Medical center. consentimento informado por escrito foi obtido de todos os participantes antes da inclusão. De novembro de 2007 a dezembro de 2009, 97 pacientes consecutivos (62 machos e 35 fêmeas), que foram diagnosticadas ter HCC por citologia aspirativa e pelo menos dois exames de imagem (tomografia computadorizada dinâmicas dinâmico e angiografia), foram incluídos no estudo. Estes pacientes cumpriram os critérios para o tratamento RFA [23] ou teve HCCs localizadas e foram adequados para a remoção cirúrgica de tumores. bioquímicas de sangue para os seguintes parâmetros foram ensaiadas: aminotransaminase aspartato (AST, 34 U /L), aminotransaminase alanina (ALT, 36 U /L), bilirrubina total (Bil, 1,3 mg /dL), alfa- fetoproteína (AFP, 15 ng /mL), albumina (3,5-5,5 g /dL), tempo de protrombina (10-13 segundos), creatinina (F: 0,44-1,03, H: 0,64-1,27 mg /dL). Hepatite B antigénios de superfície de vírus (HBsAg) foram ensaiados por um kit de radioimunoensaio disponível comercialmente (Ausria-II, o HBsAg-RIA; Abbott Laboratories, North Chicago, IL). Anticorpos contra o vírus da hepatite C (HCV Ab) foram analisadas usando uma terceira geração de ensaio imunoenzimático (Ax SYM HCV III, Abbott Laboratories, North Chicago, IL):

Além disso, também foram registrados os seguintes dados clinicopatológicos:. Género , idade, presença de cirrose hepática, uso de álcool, grau citológico de Edmondson, número de tumores, maior o tamanho do tumor, presença de ascite após a terapia, data da terapia (RFA ou cirurgia), data de recorrência do tumor, e data da última follow-up ou morte relacionada com o HCC. No nosso centro médico, os pacientes com trombose da veia porta principal foram excluídos da terapia cirúrgica ou ablação.

aspiração fígado para diagnosticar HCC

Sob a orientação ultra-sonográfico, um 21- ou 22-gauge trans-hepática percutânea colangiografia agulha foi usada para citologia aspirativa. As manchas secas ao ar foram imediatamente corada com o método de Riu [24]. A classificação de HCC foi feito pela classificação de Edmondson e Steiner [25]. Se a amostra foi insuficiente ou difícil para o diagnóstico citológico, uma biópsia do fígado imediato para exame patológico foi realizado [26].

HURP imunocitoquímica

anticorpos de ratinho anti-HURP foram gentilmente cedido pelo Prof. Chou CK (Universidade Yang-Ming, Taiwan). A especificidade e a sensibilidade destes anticorpos foram caracterizados em publicações anteriores [1], [11], [16], [27]. tecidos HCC HURP-positivas e negativas (de acordo com a análise de transferência de Western) foram utilizadas como controlos para cada lote de coloração. macrófagos normais, os linfócitos e granulócitos nos esfregaços de células foram utilizados como controlos negativos internos. células aspirado HCC foram fixados em metanol puro. expressão de hepatócitos de HURP foi avaliada pelo método da imunoperoxidase avidina-biotina. As lâminas foram incubadas em solução salina tamponada com fosfato (PBS) contendo 3% de peróxido de hidrogénio durante 20 minutos e foram subsequentemente lavadas duas vezes (5 minutos cada) em PBS contendo 0,025% de Triton X-100 (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) . As lâminas foram então incubadas com soro de cavalo normal a 10% durante 30 minutos, seguido por uma incubação com uma diluição 1:500 do anticorpo anti-HURP rato a 37 ° C durante 1 hora. Depois de ter sido lavada com solução salina tamponada com fosfato (PBS; 0.1 M, pH 7,4), as secções foram subsequentemente incubadas com imunoglobulinas anti-murganho de cavalo conjugado com biotina (Jackson Immunoresearch Lab, West Grove, PA.) A uma diluição de 1:400 40 minutos. Depois de ser lavado com PBS, as secções foram tratadas com complexo (kit Vectastain ABC Elite, Vector Labs, CA) avidina-biotina durante 30 minutos e, em seguida, incubadas numa solução de diaminobenzidina (DAB, Vector Labs, CA) durante 1 minuto. contracoloração nuclear foi realizada com hematoxilina.

Tumor Ablação

Os pacientes foram tratados com o sistema de ablação internamente arrefecidos RF (Valleylab ™, Boulder, Colorado, EUA). Todas as ablações RF foram realizadas por três gastroenterologistas com ampla experiência de técnicas ablativos. Os detalhes da ablação do tumor foram descritos anteriormente [28].

A remoção cirúrgica do tumor

Os tumores foram completamente ressecado, com margem de segurança de mais de 1 cm.

Siga -up estudos

para os pacientes que receberam RFA, tomografia computadorizada ou ressonância magnética foi realizada 3 semanas mais tarde para avaliar se a ablação foi completa [28], [29]. Após a ablação completa ou ressecção cirúrgica, o acompanhamento foi realizado por ultra-sonografia, radiografia de tórax, AFP e bioquímica do sangue a cada 1 a 3 meses no primeiro ano e cada 3 a 6 meses depois. achados anormais foram verificadas por tomografia computadorizada ou ressonância magnética. recorrência intra-hepática foi estabelecido através da utilização dos critérios descritos noutro local [30]. Dependendo da localização das lesões, bem como a condição do paciente, a recorrência extra-hepáticas foi confirmado por biópsia, citologia aspirativa, tomografia computorizada ou imagiologia por ressonância magnética [30].

Estatísticas

Doença sobrevida livre de foi medido a partir da data do diagnóstico até a data de recorrência, metástase, a morte ou o último follow-up. O método de Kaplan-Meier foi utilizado para estimar a probabilidade de sobrevivência, eo teste de log-rank foi utilizado para comparar as curvas de sobrevivência entre os grupos. Para determinar os pontos de corte de um fator com dados paramétricos, análise univariada experimental foi realizado para avaliar a associação entre o fator ea sobrevida livre de doença usando uma série de valores crescentes, como os pontos de corte. Este método foi utilizado com sucesso para identificar fatores prognósticos clínicos e virológicos em pacientes com CHC [30]. Os pontos de corte experimentais foram calculados usando a seguinte fórmula: o menor valor + N /15 × (o maior valor – o menor valor) (n = 1 a 14). Como tal, uma série de valores de corte foram gerados para cada um dos factores paramétrico. Os grupos experimentais foram dicotómicos assim separada por um corte de, pelo menos, 1/15 ou, no máximo, de 14/15 a gama de factores. Esta forma de agrupamento era mais prontamente a ser utilizado para fazer recomendações de tratamento no futuro. O ponto de corte que leva ao menor valor de P foi então escolhido para a análise de riscos proporcionais de Cox subsequente. A justificação, bem como a limitação dessa abordagem mínima P-valor em estudos clínicos também tinha sido discutida em uma revisão [31]. modelos de risco proporcional gradual de Cox foram usados ​​para prever preditores independentes associados à sobrevida livre de doença. Os resultados são expressos como índices de taxa de risco (HRs), com intervalo de 95% de confiança (IC). Neste estudo, a correcção de Bonferroni para comparações múltiplas não foi aplicada em função de duas razões. Em primeiro lugar, muitos dos fatores incluídos eram conhecidos fatores prognósticos, mas não selecionados aleatoriamente fatores desconhecidos. Nosso objetivo foi compreender como significativa a expressão HUPR foi em comparação com esses fatores conhecidos. Em segundo lugar, o nosso objetivo final era estabelecer um sistema de combinação de pontuação. Portanto, os fatores de candidatos que foram possivelmente significativa necessários para ser incluído.

A análise estatística foi realizada utilizando o software SPSS (versão 18.0).

Resultados

Os parâmetros clínicos

as características basais dos 97 pacientes estão listadas na tabela 1. Todos eles pertenciam ao Barcelona Clinic Liver Cancer (BCLC) estágio A. HBV e HCV foi responsável pela maioria dos casos. Quase 90% dos pacientes eram cirrótico. A maioria dos doentes tinha a função hepática anormal com os níveis médios de ALT e AST mais elevadas do que os limites normais. No entanto, apenas uma minoria dos pacientes tiveram complicações graves (por exemplo, ascite: 11,3%), enquanto os níveis médios de albumina, bilirrubina e tempo de protrombina estavam dentro dos limites normais. 75,3% dos pacientes tinham HCC solitária e apenas 5,2% dos pacientes tiveram invasão microvascular. O tamanho do tumor variou de 1,3 a 5,0 cm de diâmetro. 81,4% dos pacientes receberam RFA, ao passo que os restantes pacientes tinham tumores removidos cirurgicamente. De acordo com a 6

th edição da AJCC /UICC TNM Classification, havia 69 e 28 pacientes pertencem à Fase I e Fase II, respectivamente.

A expressão de HURP no HCC

Entre os 97 pacientes incluídos, expressão positiva da HURP foi encontrado nas células aspiradas HCC de 19 pacientes (19,6%). Oito casos representativos nos quais as células aspiradas coradas positivamente com anti-HURP são mostrados na Figura 1. Expressão HURP foi detectado em mais de 80% das células aspiradas em 15 pacientes e expressão estava localizada no citoplasma das células de carcinoma hepatocelular (Figura 1, painel inferior). No entanto, nas 4 pacientes restantes, 50% de células de carcinoma hepatocelular foram corados positivamente (Figura 1, painel superior). Em 2 destes 4 pacientes, apenas algumas células do CHC positivos HURP dispersos foram encontrados.

HURP foi com detalhes em cor marrom.

Para entender se a expressão HURP foi associado a qualquer um dos os parâmetros clínico, foi realizada análise de regressão logística. Verificou-se que a expressão HURP não foi significativamente associada com qualquer parâmetro clínico-patológico (P 0,05 para todos os fatores clínico-patológicos).

Associação entre parâmetros clínicos e sobrevida livre de doença

A associação entre parâmetros clínicos e sobrevida livre de doença é mostrada na tabela 2. Entre os parâmetros, expressão HURP positiva, classificação citológica ≥3, AFP ≥35 ng /mL, bilirrubina ≥1.3 mg /dL, AST ≥50 U /L, e ALT ≥35 U /L foram encontrados para ser associado a uma sobrevida livre de doença mais curto (Figura 2).

n, número de pacientes com CHC em risco.

preditores independentes de doença sobrevida livre de no multivariada stepwise Cox de risco proporcional modelo

Usando a multivariada stepwise Cox modelo de riscos proporcionais, 4 fatores permaneceram como preditores independentes para sobrevida livre de doença: expressão HURP positiva em células do CHC, AST ≥50 U /L, ≥3 grau citológico e número de tumor 1. A sua independência foi também verificada por meio de testes de correlação bivariados. Vale a pena notar que, após o ajuste para outros fatores de confusão, o número de tumores (que não é um parâmetro importante para a sobrevida livre de doença em análise univariada) tornou-se um fator significativo no modelo de riscos proporcionais de Cox. O risco relativo (RR), 95% de intervalo de confiança (IC), e os valores de P dos 4 preditores independentes estão listados na Tabela 3. Por fim, atribuída uma pontuação de risco para cada um dos pacientes por meio do cálculo do número de preditores independentes realizados pela cada paciente. Os escores de risco variaram de 0 a 3, com nenhum paciente levando todos os 4 fatores (figura 3). Porque nenhuma diferença significativa foi encontrada nos sobreviventes livres da doença entre os pacientes com escore de risco = 0 e aqueles com risco pontuação = 1 (Figura 3A,

p

= 0,421), estes dois grupos foram fundidos (Figura 3B) . Os sobreviventes livres da doença foram significativamente diferentes entre os pacientes com escores de risco ≤1, os pacientes com uma pontuação de risco = 2, e os pacientes com uma pontuação de risco = 3 (Figura 3B). Em contraste, não houve diferença (

p

= 0,91) foi observada entre as sobrevivências livre de recidiva da fase I 69 TNM e 28 de fase II, os doentes.

(A) Comparação da doença- sobrevida livre entre os pacientes com diferentes graus de risco variou de 0 a 3. (B) Os pacientes com escore de risco = 0 e aqueles com escore de risco = 1 foram fundidas.

Discussão

de um modo geral, a ressecção hepática foi superior a RFA no HCC elegíveis para a remoção cirúrgica, em particular para tumores 3 cm [32]. Ao tratar pacientes com HCC solitários ≤ 3 cm, RFA tem uma sobrevida livre de recorrência comparável à ressecção cirúrgica ao ser menos invasiva [33]. No entanto, a ressecção hepática é o tratamento de escolha para o HCC em pacientes não cirrótica por causa da função hepática bem preservada no fígado residual. Por outro lado, RFA é seguro e eficaz no tratamento de pacientes de carcinoma hepatocelular com cirrose hepática, e a sua elevada repetibilidade a torna particularmente valiosa no controlo intra-hepáticos recorrências [34]. Em dois ensaios clínicos randomizados prospectivos comparando RFA com ressecção cirúrgica, não foi encontrada diferença significativa na sobrevida global ou sobrevida livre de recorrência. Além disso, menores taxas de complicações foram expectedly em pacientes tratados com RFA [35], [36]. Portanto, a escolha da terapia em HCC fase muito precoce deve depender de adequação do paciente para cirurgia, o estado de desempenho, a gravidade da cirrose do fígado, e a viabilidade de RFA dada a localização do tumor [37]. Em nossa série, os pacientes impróprios para hepatectomia foram submetidos a RFA. Consistente com relatórios anteriores, a sobrevida livre de doença entre estes dois métodos não foi significativamente diferente (tabela 2). Assim, o viés dos diferentes métodos de tratamento devem ser insignificante.

A natureza heterogénea de HCC tem dificultado muito a procura de preditores moleculares prognósticos eficazes. Em um estudo de C casos 39 hepatite relacionados a vírus HCC (24 em fase inicial) e 77 controles pareados, caso-controle não protrombina-des-gama carboxi nem AFP foi capaz de prever de forma ideal o surgimento de HCC [38]. Assim, mesmo para o HCC que tem uma doença de base homogénea, um biomarcador de confiança ainda não foi encontrado. De acordo com a 6

th edição da AJCC /UICC TNM Classification, 69 e 28 pacientes estágio BCLC A do presente estudo foram classificados como estágio I e II, respectivamente. No entanto, esses pacientes não podem ser separados em subgrupos de prognóstico distinguíveis usando sistema de estadiamento AJCC /UICC TNM. No presente estudo, demonstramos a previsão independente de sobrevida livre de doença em HCC pela expressão HURP em células do CHC aspirados. HURP é considerado um marcador de células estaminais e não é detectável em células totalmente diferenciadas [39]. Semelhante a esta observação, um outro marcador de células estaminais, células epiteliais molécula de adesão celular (EpCAM), verificou-se ser expressa em níveis dominantemente tipo CHC e expressão de EpCAM confluentes multinodulares previu a recorrência de carcinoma hepatocelular [40]. Além disso, a sobre-expressão de Aurora B, uma proteína cromossômica passageiros envolvidos na segregação cromossômica, spindle-checkpoint e citocinese [41], previu independentemente invasão tumoral e mau prognóstico do HCC [42]. A similaridade funcional entre HURP e Aurora B apoia ainda mais o papel preditivo da HURP na sobrevida livre de doença de HCC.

Nos últimos anos, a semeadura de células tumorais ao longo do trato agulha foi encontrado para ser um risco associado ao fígado biópsia [43]. Citologia aspirativa agulha tem provado ser uma alternativa segura e precisa para a biópsia hepática para identificar a grande maioria dos HCC [44]. Portanto, coloração HURP em células do CHC aspirados pode potencialmente se transformar em um método conveniente para a previsão de sobrevida livre de doença de HCC. No entanto, existem algumas limitações associadas com essa técnica. Enquanto HURP é nomeado para seu gene a ser regulada para cima no HCC humana, apenas 19,5% (19/97) do nosso HCC aspirado amostras apresentaram expressão HURP positivo. É possível que nas amostras restantes, os níveis de expressão HURP eram demasiado baixas para detecção imuno-histoquímica. Provavelmente, nestas amostras, a maioria das células de carcinoma hepatocelular foram em nonproliferating estados “fora-de-ciclo ‘. Isto fez com que os tumores que crescem lentamente, o que resultou numa sobrevivência livre de doença. Alternativamente, em vista do pressuposto de que HURP poderia ser um marcador de células estaminais, a baixa prevalência de células HURP-positivos neste estudo pode reflectir o facto de que a maioria dos nossos HCC surgiu da mutação relacionada com a inflamação induzida por insultos virais para hepatócitos (VHB ou HCV em nossa série foi superior a 90%), enquanto HCC que se desenvolvem a partir de

de novo

mutação das células-tronco hepática ingênuos representavam apenas uma minoria dos casos. Neste estudo, demonstramos que a alta de AST, ALT e níveis de bilirrubina se correlacionam com a sobrevida livre de doença mais curto. Isto sugere que o vírus relacionados necroinflamação hepática desempenha um papel importante em HCC recorrência. Neste momento, não é claro se existe um caminho para as células de carcinoma hepatocelular que se desenvolvem a partir de hepatócitos danos relacionados com vírus a evoluir para HCC com a assinatura de cancro de células estaminais. Finalmente, tal como mencionado na introdução, vias redundantes que podem compensar para a função HURP têm sido propostos. Como tal, para HCC que carecem de expressão HURP, caminhos alternativos oncogênicos não relacionados com HURP sobre-expressão são altamente plausível.

Outro aspecto intrigante da presente dados é que quase toda a expressão HURP localizada no citoplasma das células de carcinoma hepatocelular . Importina-α1 mostrou ser um preditor independente de recorrência precoce após HCC ressecção [45]. HURP é um dos factores de montagem do fuso, cuja actividade é regulada por importinas, e a distribuição em estado estacionário de HURP é determinada pelo vaivém contínuo de HURP entre o citoplasma e núcleo através importina [46]. A maioria dos estudos têm-se centrado na HURP seu papel porta-veios no núcleo durante a mitose, enquanto que pouco é conhecido sobre a sua função no citoplasma durante a interfase. Ambos HURP e importina-α1 estão sobre-expressos em HCC com mau prognóstico, o que sugere um papel importante para estas moléculas na oncogênese. O citoplasmática aberrante sobre-expressão de HURP no HCC pode implicar uma função inexplorada na regulação do ciclo celular que exige mais esclarecimentos.

Além de HURP positividade, AST ≥50 U /L, grau citológico ≥3 e número de tumor 1 também foram encontrados para ser preditores independentes para a sobrevida livre de doença em nossos pacientes HCC. classificação citológica representa a diferenciação das células do CHC eo número tumor pode indicar uma origem do tumor uni ou multi-focal ou, em alternativa, a realização de HCC. Estes factores são todos sugestivo de prognóstico pobre e tem sido documentada por diversos estudos [47], [48]. AST, ALT, bilirrubina e os níveis de AFP, que foram identificados como preditores de prognóstico significativas na análise univariada, traduzir-se quer o grau de inflamação (AST, ALT e bilirrubina) ou a carga tumoral (AFP). AFP também reflectido no grau de inflamação hepática em alguns casos [49]. Na literatura, diversas linhas de evidência indicam que a inflamação hepática é um preditor de prognóstico para o HCC. O nível de PCR pré-operatória foi mostrado estar associado com a agressividade do HCC recorrente no início de um estudo de 124 pacientes que foram submetidos a hepatectomia [50]. Além disso, estudos sobre HCC relacionado com o HCV têm mostrado que HCC quase sempre desenvolve em um anormal do fígado histologicamente e que a mera existência de doença hepática crónica representa um risco potencial para o desenvolvimento de HCC [51]. Na verdade, necroinflamação hepática crônica com a sua consequente geração de espécies reativas de oxigênio podem induzir mutações cromossómicas e transformação, eventualmente maligna de hepatócitos proliferam. Da mesma forma, pouca reserva função hepática, sugerida por hiperbilirrubinemia, foi anotado para ser significativamente associados com a ocorrência HCC em outros estudos [52]. Um estudo que incluiu 150 pacientes com um único HCC menor do que 5 cm de diâmetro tratados por radioterapia partícula encontrada que a classificação Child-Pugh foi um fator de risco independente para recorrência local [53]. Finalmente, em um estudo retrospectivo composto por 413 pacientes cirróticos HCC recebendo RFA e 648 pacientes cirróticos HCC receberam ressecção cirúrgica, AFP soro foi encontrado para ser o único fator preditivo significativo para todas as análises de sobrevivência [54]. Penteando os 4 preditores independentes, que haviam sido directa ou indirectamente associados ao prognóstico do HCC na literatura, as pontuações de risco dos pacientes com HCC separou os pacientes em três grupos distintos, com significativamente diferentes prognósticos pós-terapia. Portanto, em pacientes com estágio BLCL A, escores de risco que incorporam coloração HURP são capazes de fornecer outras distinções entre os diferentes grupos de prognóstico pós-terapêuticos. O pequeno tamanho da amostra do presente estudo, no entanto, limitado o seu valor clínico. Para validar o significado prognóstico da expressão HURP em um maior coorte HCC, um estudo multicêntrico seria extremamente informativo e deve ser realizado no futuro.

Para nosso conhecimento, este é o primeiro estudo sobre a aplicação clínica de expressão HURP na previsão da sobrevida livre de doença de pacientes com CHC. Um novo escore de risco, composto por 4 preditores independentes, incluindo HURP positividade em células do CHC, AST ≥50 U /L, grau citológico ≥3 e número de tumor 1, separados pacientes HCC com estágio BCLC Um em três grupos de prognóstico-distinguíveis. Esses achados podem ser valiosas para avaliar os efeitos das intervenções terapêuticas para pacientes com CHC com estágio BCLC A, que é o estágio mais comum descoberto devido à detecção precoce do HCC via levantamento tumor ordenada. Finalmente, terapia personalizada e acompanhamento para pacientes com HCC fase inicial pode ser perseguido no futuro próximo.