Abstract

Introdução

Neste estudo, 27 polimorfismos genéticos que foram previamente relatado para ser associado com resultados clínicos em pacientes com câncer colorretal foram investigadas em relação à sobrevida global (SG) e sobrevida livre de doença (DFS) em pacientes com câncer colorretal de Newfoundland.

Métodos

A descoberta e validação coortes formada por 532 e 252 pacientes, respectivamente. Genótipos de 27 polimorfismos foram obtidos primeiro na coorte de descoberta e sobrevivência foram realizadas análises assumindo o modelo genético co-dominante. Polimorfismos associados com a evolução das doenças na coorte descoberta foram então investigado na coorte de validação.

Resultados

Quando ajustado para sexo, idade, estágio do tumor eo estado instabilidade de microssatélites (MSI), quatro polimorfismos foram preditores independentes de oS na coorte descoberta

MTHFR

Glu429Ala (HR: CI 1,72, 95%: 1,04-2,84, p = 0,036),

ERCC5

His46His (HR: 1,78, 95% CI : 1,15-2,76, p = 0,01),

SERPINE1 –

675indelG (HR: CI 0,52, 95%: ,32-,84, p = 0,008), e a deleção homozigótica do

gene GSTM1

(HR: 1,4, IC 95%: 1,03-1,92, p = 0,033). Na coorte de validação, o

MTHFR

polimorfismo Glu429Ala foi associado com menor OS (HR: CI 1,71, 95%: 1,18-2,49, p = 0,005), embora com um genótipo diferente do que a coorte de descoberta (genótipo CC na coorte de descoberta e genótipo AC na coorte de validação). Quando estratificados com base em tratamento com 5-fluorouracilo (5-FU) regimes baseados, este polimorfismo estava associado com OS reduzida apenas em pacientes que não foram tratados com 5-FU. Na análise DFS, quando ajustada para outras variáveis, o genótipo TT do

ERCC5

His46His polimorfismo foi associado com menor DFS em ambas as coortes (descoberta coorte: HR: 1,54, 95% CI: 1,04-2,29, p = 0,032 e replicação de coorte: HR: 1,81, 95% CI: 1,11-2,94, p = 0,018)

Conclusões

neste estudo, as associações do

MTHFR

. polimorfismo Glu429Ala com oS e

ERCC5

His46His polimorfismo com DFS foram identificados em duas coortes de pacientes com cancro colo-rectal. Nossos resultados também sugerem que o

MTHFR

polimorfismo Glu429Ala pode ser um marcador de prognóstico adverso em pacientes não tratados com 5-FU

Citation:. Negandhi AA, Hyde A, Dicks E, Pollett W, Younghusband BH, P Parfrey et al. (2013)

MTHFR

Glu429Ala e

ERCC5

His46His polimorfismos estão associados com o prognóstico em pacientes com câncer colorretal: Análise de duas coortes independentes de Newfoundland. PLoS ONE 8 (4): e61469. doi: 10.1371 /journal.pone.0061469

editor: Xiao-Ping Miao, MOE chave do Laboratório de Ambiente e Saúde, Escola de Saúde Pública, Tongji Medical College, Huazhong Universidade de Ciência e Tecnologia, China

Recebido: 25 de outubro de 2012; Aceito: 08 de março de 2013; Publicação: 23 de abril de 2013

Direitos de autor: © 2013 Negandhi et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este estudo é financiado por doações da Universidade Memorial; o Prêmio Cox 2010 pela Faculdade de Medicina da Universidade Memorial; do Instituto Canadense de Pesquisa em Saúde (CIHR) fundo para a Equipa de Investigação de Saúde Colorectal Cancer Interdisciplinar da Universidade de Toronto e da Universidade Memorial, o National Cancer Institute of Canada (concede 18223 e 18226) e do Fundo de Inovação Atlântico para a Equipe Interdisciplinar de Investigação em Human Genetics. AAN foi apoiado pelo CIHR Interdisciplinar de Investigação em Saúde da equipa Fellowship. AH foi apoiado pelo Walter e Jessie Boyd Charles Scriver MD /PhD Studentship Award (Canadian Institute of Health Research Institute de Genética e da Fundação Canadense Gene Cure). As fontes de financiamento não teve nenhuma participação no desenho do estudo; na recolha, análise ou interpretação dos dados; na elaboração do relatório; ou na decisão de enviar o artigo para publicação

Conflito de interesses:. O autor correspondente é um editor acadêmico para PLOS ONE. Outros autores declararam que não existem interesses conflitantes.

Introdução

O câncer colorretal tem uma alta incidência nos países desenvolvidos [1]. Em 2004, esta doença foi a 4

th principal causa de morte por câncer com mais de 600.000 mortes no mundo [2]. No Canadá, é um importante problema de saúde com uma estimativa de 22.200 novos casos e 8.900 mortes esperado em 2011 [3]. Existem variações inter-provinciais significativas nas taxas de incidência e mortalidade, e na província de Newfoundland e Labrador (NL) tem as maiores taxas de incidência e mortalidade padronizadas por idade para o câncer colorretal entre as províncias canadenses [3]. Ambos os fatores genéticos e ambientais desempenham um papel na susceptibilidade ao cancro colo-rectal. Embora a maioria dos pacientes com cancro colo-rectal são os casos esporádicos, cerca de 5% dos cancros colorrectais são causados ​​por mutações de alta-penetrante herdadas [4]. Trinta e cinco por cento do risco de desenvolver câncer colorretal esporádico também é atribuída aos fatores herdados [5].

importantes resultados do cancro colo-rectal incluem recorrência, metástase e morte. Atualmente, o critério de prognóstico mais valiosa em pacientes com câncer colorretal é o TNM (tumor-nódulo-metástase) estadiamento definido pela American Joint Committee on [6] Câncer. Geralmente, o prognóstico do paciente piora com a fase crescente.

Um número de parâmetros clínicos e moleculares também têm sido investigados pela sua utilidade prognóstico no câncer colorretal. Por exemplo, Popat et al [7] relatou em sua meta-análise que os pacientes com microsatélites instabilidade de altura tumores (MSI-H) têm um prognóstico mais favorável quando comparado com pacientes com microsatélites instabilidade de baixa (MSI-L) ou microssatélites estável (MSS) tumores. Várias outras características clinicopatológicas e moleculares também têm sido relatados para ser associado com prognóstico, tais como o grau do tumor alta [8], histologia mucinosa [9], invasão linfovascular [10], cromossómico instabilidade [11], e a presença do

BRAF1

Val600Glu mutação somática em tumores [12], embora os relatos contraditórios também foram publicados [13] – [15]. Os resultados inconsistentes sobre a associação entre o estado de risco familiar e sobrevivência de pacientes com câncer colorretal também foram relatados [16], [17]. Além disso, fatores demográficos, como gênero e etnia podem ser modificadores de prognóstico [6]. Estes factores apenas parcialmente explicar as variações nos resultados dos pacientes com câncer e é possível que fatores genéticos (como polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs), inserção /deleção (InDel) polimorfismos e mutações somáticas) podem influenciar o prognóstico. Sua investigação, portanto, pode ajudar a compreender as razões para a variabilidade resultado inter-paciente e os mecanismos biológicos subjacentes.

Vários estudos previamente relatados associações significativas entre as variações genéticas e os resultados em pacientes com câncer colorretal. No presente estudo, foram investigados 27 tais polimorfismos (Tabela 1) como potenciais fatores prognósticos em uma coorte paciente com câncer colorretal (coorte descoberta, n = 532) e, posteriormente testado a validade das associações positivas em um câncer colorretal coorte adicional do paciente (validação coorte, n = 252).

Materiais e Métodos

Ética Declaração

Este estudo inclui dois grupos de pacientes. Para ambos os grupos, a recolha dos dados clínicos dos pacientes e biospecimens foi aprovado para fins de investigação pelos Conselhos Regionais de Saúde e Comitê Humano Investigation (HIC) da Memorial University of Newfoundland. Na coorte de descoberta, consentimento informado por escrito foi obtido dos pacientes recrutados ou seus procuradores. O Comitê de Investigação Humana da Memorial University of Newfoundland dispensou a necessidade de consentimento informado por escrito dos participantes da coorte de replicação. Aprovação ética para este projecto específico também foi obtido a partir do Comitê de Investigação Humana da Memorial University of Newfoundland.

coortes de pacientes

a) A coorte descoberta.

Esta coorte consistiu de 532 doentes com cancro colorectal do Registro de Câncer Colorretal Newfoundland (NFCCR). NFCCR foi criada em 1999 e recrutou 736 fase I-IV doentes com cancro colorectal entre 1999 e 2003 [18]. Todos os pacientes foram ≤75 anos de idade e seu diagnóstico foi confirmado pelo exame patológico. As características moleculares e genéticos desta coorte e outros detalhes foram relatados por outros [19], [20]. Para todos os pacientes, os dados clínicos foi compilado (embora haja também estavam em falta valores para algumas variáveis; Tabela 2). Neste estudo, 532 dos 736 doentes com cancro colorectal do NFCCR foram investigadas para os quais o ADN genómico (extraído a partir de sangue) foi também disponíveis. Os dados do paciente sobre as características clínico-patológico, recorrência e metástase, e a data da morte foram recuperados a partir de relatórios clínicos (médica, patologia, radiologia, autópsia e relatórios cirúrgicos, investigações de laboratório, avaliação e progresso notas dos médicos, resumos de descarga de internamento), o Terra Nova Tratamento do câncer e banco de dados Research Foundation, ou um paciente questionários de seguimento. Nesta coorte, 62% dos pacientes foram tratados com 5-FU a quimioterapia com base em ambas as configurações neoadjuvante ou adjuvante ou após diagnóstico de recorrência local e distante, enquanto que os pacientes restantes ou não foram tratados com quimioterapia, ou foram tratados com cisplatina /etoposide (n = 1). Pacientes nesta coorte foram acompanhados até abril de 2010. O tempo médio de follow-up nesta coorte para a sobrevida global ea sobrevida livre de doença foi de 6,4 e 6 anos, respectivamente (Tabela 2).

b) O coorte de validação.

Esta é uma coorte retrospectiva composta de 280 pacientes com câncer colorretal previamente coletados a partir da Península de Avalon da Terra Nova. Para todos os 280 pacientes os dados clínicos foram coletados, no entanto DNA genômico (extraído a partir de tecidos não-tumorais) estava disponível para apenas 252 pacientes. Assim, 252 dos 280 pacientes foram incluídos no presente estudo. Pacientes nesta coorte foram diagnosticados com câncer colorretal primário em um período de dois anos (entre 1997-1998). Os critérios de selecção do paciente são como se segue: a) Os doentes com carcinoma em pólipos foram incluídos apenas se o tumor invadiu na haste, b) doentes com cancro colo-rectal foi a recorrência de um cancro colorrectal mais cedo ou uma metástase a partir de um órgão distante, e aqueles com tumor carcinóide, polipose adenomatosa familiar, carcinoma carcinoma in situ e da mucosa foram excluídos, ec) pacientes foram selecionados independentemente da sua idade do diagnóstico. dados de prognóstico desses pacientes foi coletado a partir dos registros médicos e hospitalares e do Centro de Terra Nova e Labrador for Health Information. Na coorte de validação, 34,9% dos pacientes foram tratados com quimioterapia à base de 5-FU em ambientes quer neoadjuvante ou adjuvante ou após o diagnóstico de recorrências locais ou distantes. Os pacientes restantes ou não foram tratados com quimioterapia ou foram tratados com outros agentes, tais como irinotecano, Tomudex ou oxaliplatina. Pacientes nesta coorte foram acompanhados até julho de 2009. O tempo médio de follow-up para esta coorte foi de 5,4 e 3,3 anos para a sobrevida global ea sobrevida livre de doença, respectivamente (Tabela 2).

Seleção de Polimorfismos

O banco de dados dbCPCO [21] (https://www.med.mun.ca/cpco/) resume literatura sobre marcadores genéticos estudados por suas associações de prognóstico em pacientes com câncer colorretal. Em agosto de 2010, foi realizada uma pesquisa das entradas neste banco de dados para as medidas de sobrevivência (por exemplo, a sobrevida global). Como um resultado desta pesquisa, identificaram-se 31 polimorfismos. De 31, um polimorfismo (

EGFR

(CA)

n repetição) não foi incluído no estudo devido à falta de um equipamento adequado em nosso laboratório necessário para obter seus genótipos. Além disso, três polimorfismos (

EGF

A61G,

TP53

Arg72Pro e

PTGS2 –

765 L /C) não pôde ser genotipados usando a tecnologia MassArray®. Como resultado, 27 polimorfismos de 24 genes diferentes que eram a) relatado para ser associado com a sobrevivência geral, em pelo menos um estudo (tanto univariada ou multivariada) (Tabela S1 S1 Ficheiro), b), adequado para ser genotipados utilizando a genotipagem técnicas utilizadas neste projecto (por exemplo, polimorfismos de nucleotídeo único, indels, repetições microssatélites, deleções de genes), e c) genotipados com sucesso (ou seja, não deixou de ser genotipados utilizando o método MassArray®) foram investigados no presente estudo (Tabela 1).

métodos de genotipagem

os genótipos para 27 polimorfismos foram obtidas na coorte de descoberta e os genótipos para quatro polimorfismos que foram associados com oS na coorte de descoberta (

MTHFR

Glu429Ala,

ERCC5

His46His,

SERPINE1 –

675indelG, e

GSTM1

deleção do gene) foram obtidas na coorte de validação. Os genótipos foram obtidos utilizando a plataforma Sequenom MassArray®, ensaios de genotipagem de SNP TaqMan ® e electroforese em gel de fragmentos amplificados por PCR. Mais detalhes relativos a experiências de genotipagem pode ser encontrado nos métodos S1 e S2 na Tabela S1 Ficheiro. Cada reacção de genotipagem incluídos amplificações não-modelo como controles negativos. Pelo menos 5,9% dos genótipos foram duplicados com sucesso com uma taxa mínima de 99,7% de concordância. As amostras com genótipos discordantes ou eram genotipados-Re (genótipos obtidos usando a ensaios de genotipagem e eletroforese em gel de TaqMan® SNP de fragmentos amplificados por PCR) ou excluídos da análise (genótipos obtidos usando a técnica Sequenom MassArray®). As taxas mínimas de genotipagem de sucesso foram de 97,4% para a coorte de descoberta e 94,44% para a coorte de validação. No caso de in-house experiências de determinação do genótipo (isto é, ensaios de genotipagem de SNP TaqMan ® e a electroforese em gel de fragmentos amplificados por PCR), de genotipagem reacções para amostras de DNA foram tentadas fracassaram pelo menos duas vezes adicionais, dependendo da disponibilidade de ADN.

Análises estatísticas

a) Hardy Weinberg (HWE) de teste.

teste HWE foi realizada manualmente para polimorfismos utilizando o teste de Pearson Chi-quadrado (Tabela S3 em S1 Arquivo) . Para os

GSTM1 Comprar e

GSTT1

deleções de genes HWE não foi testado como genótipos heterozigotos não podem ser detectados utilizando a metodologia de genotipagem aplicada neste estudo.

b) endpoints sobrevivência.

tempo oS foi o tempo desde o diagnóstico de câncer colorretal até a morte por qualquer causa. tempo DFS foi o tempo desde o diagnóstico de câncer colorretal até a ocorrência de metástases, recidiva ou morte por qualquer causa, o que era antes. Os pacientes que não experimentam o desfecho de interesse foram censurados no momento da última acompanhamento.

c) Variáveis.

As variáveis ​​categóricas analisadas foram: sexo (masculino versus feminino), histologia do tumor (mucinoso vs não-mucinoso), localização do tumor (rectal vs cólon), fase (fase II, III e IV vs fase I), o grau do tumor (pouco diferenciado /indiferenciado vs bem /moderadamente diferenciado), invasões vasculares e linfáticas (presentes vs ausente) , risco familiar (alto risco /intermediário vs baixo risco), estado instabilidade de microssatélites (MSI-H vs MSI-L /MSS) e

BRAF1

estado de mutação Val600Glu (presente vs tipo selvagem). Para o conjunto de descoberta, o status de risco familiar foi determinado previamente pelos investigadores NFCCR usando o Amsterdam II e revisto critérios Bethesda [18]. estado MSI tumor e

BRAF1

análises de estado Val600Glu foram também previamente realizada por NFCCR [19], [20], [22]. Vasculares e linfáticas invasões foram altamente correlacionados na coorte de descoberta ( 95% dos tumores com invasão vascular também teve invasão linfática). Por favor, note que, em alguns modelos, os intervalos de confiança para a fase IV pacientes estavam arregalados, refletindo o pequeno tamanho da amostra para este grupo de pacientes. Esses resultados, portanto, devem ser interpretados com cautela.

Nós categorizados os genótipos para cada polimorfismo assumindo o modelo genético co-dominante (isto é, homozigotos alelos menores e heterozigotos foram comparados com os principais homozigotos do alelo individualmente). No caso do

MTHFR

polimorfismo Glu429Ala, nós também realizadas análises multivariada sob a modelos genéticos recessivo (CC vs genótipos CA + AA) ea dominante (CC + CA vs genótipos AA). O

PTGS2

polimorfismo c.3618A /G foi excluído da análise estatística, devido à sua baixa freqüência do alelo menor (1,63%). Para o polimorfismo VNTR no

Tyms

gene (rs34743033), 0,93% das amostras na coorte descoberta teve um alelo 4R raro. Estes pacientes foram combinadas com genótipos 3R /3R para análises. A idade foi a única variável contínua em nossa análise.

analisa d) univariada.

Time-to-evento parcelas de sobrevivência foram construídas pelo método de Kaplan-Meier e comparadas pelo log-rank teste.

e) a análise multivariada.

as variáveis ​​utilizadas na construção dos modelos multivariados finais foram selecionados pelo método de eliminação para trás para oS e DFS separadamente utilizando o método de regressão de Cox. variáveis ​​selecionadas foram então re-entrou nos modelos finais. A suposição de proporcionalidade foi verificada através da análise log-menos-registo de (log (-log s (t))) () parcelas. Nós também testamos a interação entre os

genótipos MTHFR

Glu429Ala (modelo genético co-dominante) eo tratamento de 5-FU, utilizando o método de regressão de Cox.

f) analisa estratificada.

uma vez que a enzima MTHFR (assim, o polimorfismo Glu429Ala, modificando a actividade enzimática da MTHFR) desempenha um papel biológico no metabolismo de 5-FU /eficácia (ver discussão), 5-FU estratificação foi feita apenas para este polimorfismo. Desde esse polimorfismo não foi associada a DFS, não foi realizada 5-FU análise de estratificação para DFS.

g) As comparações de coortes.

Para testar se as diferenças entre as características basais da descoberta e as coortes de validação foram significativos, foi realizado o teste do qui-quadrado para as variáveis ​​categóricas. Desde a idade não foi distribuída normalmente em ambos os grupos, o teste não paramétrico de Mann Whitney-U foi usado para comparar as diferenças na distribuição de idade entre estes dois grupos. Análises semelhantes também foram realizados para comparar toda a coorte NFCCR (n = 736) e a coorte descoberta (n = 532) e também todo o segundo grupo (n = 280) e validação coorte incluídos na nossa análise (n = 252).

o PASW Statistics 18 versão de software 18.0.2 (IBM, NY, EUA) foi utilizado para realizar as análises estatísticas. Todos os testes foram de dupla face e do limiar de significância foi estabelecido em p = 0,05. Para evitar resultados falso-negativos, a correção para testes de múltipla não foi realizada na análise descoberta coorte. Enquanto isso também aumenta o número potencial de associações falso-positivos, a análise das associações detectadas na coorte descoberta numa coorte adicional do paciente (isto é, a coorte de replicação) ajudou a eliminar os resultados positivos falsos.

Resultados

as características descoberta de coorte

as características iniciais da coorte descoberta estão listadas na Tabela 2. a idade média ao diagnóstico foi de 61,4 anos. Um terço (33,3%) dos pacientes tinham morrido e 39% dos pacientes tinham experimentado recorrência, metástase ou morte pela hora do último follow-up. A coorte descoberta tem uma proporção significativamente menor de fase IV pacientes (9,8%), quando comparado com toda a coorte NFCCR (20,9%) (p 0,001). A coorte descoberta também diferiu significativamente da coorte NFCCR em termos de proporção de tumores com vascular (p = 0,007) e invasões linfáticos (p = 0,021), e os pacientes falecidos (p 0,001).

Análise sobrevida global na descoberta de coorte

Dentre 26 polimorfismos investigados, quatro polimorfismos foram significativamente associados com o oS quando ajustado para sexo, idade, estágio e estado MSI (Tabela 3). Resumidamente, para a

MTHFR

polimorfismo Glu429Ala, pacientes homozigotos para o alelo C teve menor sobrevida (HR: 1,72, 95% CI: [1,04-2,84], p = 0,036) em comparação com pacientes homozigotos para o alelo . Para o

ERCC5

His46His polimorfismo, os pacientes com o genótipo TT teve um maior risco de morte (HR: 1,78, 95% CI: [1,15-2,76], p = 0,01) em comparação com os pacientes com o genótipo CC . No caso de o

SERPINE1 – sobrevivência

polimorfismo 675indelG, as pequenas homozigóticos dos alelos (insG /insG) tinha aumentado (HR: 0,52, IC de 95%: [0,32-0,84], p = 0,008) comparado com o pacientes com delG /delG genótipo. Genótipo distribuições destes três polimorfismos foram em EHW (p 0,05; Tabela S3 no ficheiro S1). Além disso, pacientes com pelo menos uma cópia do

gene GSTM1

tiveram um maior risco de morte em comparação com pacientes com nenhuma cópia do gene (HR: 1,40, 95% CI: [1,03-1,92], p = 0,033) (Tabela 3).

livre de doença Análise de Sobrevivência na descoberta Cohort

Dentre 26 polimorfismos,

ERCC5

His46His e

OGG1

Ser326Cys polimorfismos foram associados com DFS mais curtos na coorte de descoberta quando ajustada para outras variáveis ​​(Tabela 4). Especificamente, os pacientes homozigotos para o alelo T do

ERCC5

His46His (HR: 1,54, 95% CI: [1,04-2,29], p = 0,032) e alelo G do

OGG1

Ser326Cys (HR: 1,81, 95% CI: [1,08-3,04], p = 0,025) tiveram pior sobrevida em comparação com os principais homozigotos do alelo

a validação de coorte características

as características basais. da coorte de validação são apresentados na Tabela 2. a idade mediana de diagnóstico era 68,7 anos. Na época do último acompanhamento, 61,5% dos pacientes tinham morrido e 66,3% dos pacientes tinham experimentado recorrência, metástase ou morte. Não houve diferenças estatisticamente significativas entre os 280 pacientes iniciais nesta coorte e os 252 pacientes incluídos no estudo, em termos de características clínicas e moleculares (

dados não mostrados

).

No entanto, há foram encontradas diferenças significativas entre a descoberta e validação coortes em termos de características clínico-patológicas. Primeiro, houve uma maior proporção de fase IV pacientes na coorte de validação (16,3%) em comparação com a coorte de descoberta (9,8%) (p = 0,034). Em segundo lugar, a idade média no diagnóstico na coorte de validação (68,7 anos) foi significativamente maior (p 0,001) em comparação com a coorte do descoberta (61,4 anos). As proporções de doentes em termos de sexo, localização do tumor, grau, sistema operacional e status de DFS, vascular e invasões linfático, eo tratamento com regimes baseados em 5-FU também foram diferentes entre os dois grupos (Tabela 2).

Análise da sobrevivência global nos validação Cohort

a distribuição dos genótipos de quatro polimorfismos testados na coorte de validação não se afastou da HWE. Fora destes quatro polimorfismos, apenas o

MTHFR

polimorfismo Glu429Ala foi associado com menor período de sobrevivência quando ajustada para outras variáveis ​​(Tabela 3). No entanto, em contraste com o conjunto de descoberta, na coorte de validação, os heterozigotos (Glu /Ala) tiveram uma sobrevivência mais curta (HR: 1,71, IC de 95%: [1,18-2,49], p = 0,005), quando comparado com os homozigotos para o glutamato ( Glu /Glu) (Figura 1). Assim, o genótipo associado com pior sobrevivência na coorte de validação (AC) foi diferente do que o genótipo associado na coorte de descoberta (CC). Portanto, nós também realizadas análises multivariadas assumindo os modelos recessivos e dominantes genéticos nestas duas coortes (Tabela 3, Mesas S4-S7 em S1 Arquivo). Como resultado, no conjunto de descoberta, o

MTHFR

polimorfismo Glu429Ala foi associada com OS no modelo genética recessiva (CC vs AC + AA; HR: 1,80, 95% CI: [1,13-2,86], p = 0,014), mas não no modelo genético dominante. Em contraste, no conjunto de validação, este polimorfismo estava associado com OS no modelo genético dominante (CC + AC vs AA; RH: CI 1,56, 95%: [1,12-2,17], p = 0,009), mas não no recessiva modelo genético. Análise desse polimorfismo assumindo o modelo genético aditivo não deu associação significativa com o sistema operacional em qualquer coorte (

dados não mostrados

). Assim, a associação do

MTHFR

polimorfismo Glu429Ala com OS nestas duas coortes é detectado sob diferentes modelos genéticos.

As análises exploratórias para a sobrevida global eo

MTHFR

Glu429Ala polimorfismo

Embora este padrão de associação interessante do

MTHFR

polimorfismo Glu429Ala com o oS em duas coortes também pode ser explicado pelo poder estatístico reduzida para detectar os efeitos de cada grupos de genótipos, nós também realizada exploratório análises adicionais para investigar outras possibilidades. Em primeiro lugar, para testar se a associação de diferentes genótipos pode ser devido a idade relativamente mais elevada mediana na coorte de validação quando em comparação com a coorte de descoberta (ver discussão), foi realizada uma análise multivariada em pacientes a partir do conjunto de validação que foram menos de 75 anos de idade no momento do diagnóstico (n = 149). No entanto, verificou-se que o padrão de associação observada nesta análise (CA vs AA, AR: CI 2,02, 95%: [1,20-3,41], p = 0,008) foi semelhante àquela obtida na coorte de validação, sugerindo a idade no momento do diagnóstico não foi a razão para essa disparidade. Em segundo lugar, uma vez que a eficácia 5-FU pode ser modificado pela atividade da enzima MTHFR (ver discussão), que também testou a associação da

MTHFR

genótipos Glu429Ala com OS em grupos de pacientes estratificados com base em suas características de tratamento (pacientes tratados com 5-FU regimes baseados contra pacientes não tratados com ela). Curiosamente, nesta análise, descobrimos que, quando ajustado para idade, estágio, estado MSI, esse polimorfismo foi significativamente associada com OS nos pacientes não tratados com 5-FU (tanto CC vs AA e AC vs genótipos AA no conjunto de descoberta e AC vs genótipos AA na coorte de validação), mas não nos pacientes tratados com 5-FU regimes baseados (Tabelas 5 e 6). Análise da interacção entre o

MTHFR

Glu429Ala polimorfismo e o status de tratamento de 5-FU, tanto na descoberta e as coortes de validação não revelou uma interação estatisticamente significativa entre essas duas variáveis.

análise Sobrevivência livre de doença na validação Cohort

na análise multivariada de DFS na coorte de validação, a associação do

ERCC5

His46His polimorfismo com DFS foi também detectado como segue: em comparação com os pacientes com o genótipo CC, os pacientes com TT e os genótipos CT teve menor DFS (HR: 1,81, 95% CI: [1,11-2,94], p = 0,018 e HR: CI 1,48, 95%: [1,02-2,17 ], p = 0,041), respectivamente (Tabela 4).

Discussão

o principal resultado do nosso estudo é que as associações do

MTHFR

Glu429Ala polimorfismo com o global a sobrevivência e a

ERCC5

His46His polimorfismo com a sobrevida livre de doença foram detectados em dois grupos distintos de pacientes com câncer colorretal.

dois outros estudos também relataram a

MTHFR

Glu429Ala polimorfismo a ser associada com o OS em doentes com cancro colorectal. Em um estudo realizado em uma coorte espanhola [23], os pacientes portadores do alelo C (AC + CC genótipo) tiveram pior sobrevida do que aqueles com o genótipo AA, quando ajustado para as variáveis ​​clínico-patológicas. Da mesma forma, em outro estudo [24] realizado em pacientes com câncer de cólon metastático, os pacientes do sexo feminino com AC + genótipos CC para o

MTHFR

Glu429Ala tiveram pior OS do que pacientes do sexo feminino com genótipo AA na análise univariada. No entanto, em seis outros estudos, não foi observada associação entre o

MTHFR

Glu429Ala polimorfismo e OS em câncer colorretal em análises univariadas ou multivariadas [25] – [30]

O papel do. enzima MTHFR e seu polimorfismo Glu429Ala no prognóstico do câncer colorretal não é bem conhecida. No entanto, MTHFR foi biologicamente investigados em grande detalhe (isto é, o seu papel no metabolismo do folato e mecanismo de 5-FU de ação). Além disso, o polimorfismo Glu429Ala tem sido mostrado previamente para causar redução moderada na actividade de enzima MTHFR; os homozigotos Ala /Ala têm cerca de 60% da actividade da MTHFR normal e os heterozigóticos têm ~ 80% da actividade da MTHFR normais [31], [32].

no metabolismo do folato, uma das actividades biológicas da enzima MTHFR é converter o 5,10-metilenotetra-hidrofolato (5,10-MTHF) de 5-metiltetrahidrofolato (5-MTHF) [33]. 5,10-MTHF é predominantemente utilizado na síntese de purinas e timidina, os nucleótidos utilizados pelas células em divisão na síntese do DNA. Além disso, 5-MTHF é utilizado na síntese da S-adenosil-metionina (SAM), um mediador chave em um número de reacções de metilação, incluindo a metilação de ADN [33]. Assim, a redução da actividade enzimática devido ao polimorfismo da MTHFR Glu429Ala pode resultar na acumulação de 5,10-MTHF e redução concomitante de 5-MTHF, em certa medida (Figura 2). Acumulação de forma 5,10-MTHF de folato podem fornecer quantidades de nucleótidos aumentada para síntese de DNA para as células tumorais em proliferação rápida de crescimento. Esta teoria é apoiada por relatos recentes que sugerem que uma vez por adenoma colorrectal desenvolveu, a suplementação de folato pode ajudar o seu crescimento e a progressão [34] – [37], presumivelmente por facilitar grandes quantidades de precursores de nucleótidos para o crescimento de tumores [33], [35 ], [36]. Em outro estudo, a suplementação de folato foi encontrado para ser associado com a progressão do cancro colorectal já desenvolvido em ratos [36]. Também no Estudo de Prevenção Polyp Aspirina /ácido fólico [34], [36], a suplementação de folato foi associado com maior risco de adenomas avançados, bem como aumento do número de adenomas em pacientes com adenomas colorretais previamente desenvolvidos. Estes achados sugerem um efeito negativo de altos níveis de folato no prognóstico do câncer colorretal. Portanto, em nossos grupos, a associação do

MTHFR

polimorfismo Glu429Ala com pior prognóstico de pacientes com câncer colorretal pode ser devido à atividade reduzida de MTHFR e acúmulo de ácido fólico, que pode facilitar o crescimento do tumor.

as setas indicam as potenciais consequências do polimorfismo em processos biológicos descritos.

Além disso, devido à função da enzima MTHFR ineficiente (por exemplo, devido ao polimorfismo Glu429Ala), a conversão óptima de 5,10 -MTHF a 5-MTHF pode também ser reduzido, causando redução nos níveis de 5-MTHF. Isto pode levar a uma diminuição da síntese de SAM (Figura 2). SAM é um doador de metilo importante para um grande número de reacções e a sua deficiência pode induzir a hipometilação de DNA.