Abstract

O objectivo

do nosso estudo foi examinar as concentrações de soro inibina A e Inibina B em pacientes com câncer de ovário em relação às características clínicas e sobrevida de 5 anos.

material e Métodos

Foram incluídos 90 pacientes epiteliais do cancro do ovário em nosso estudo, com idades entre 45-81 anos, que se submeteram à cirurgia cytoreductive ideal. Em todos os pacientes, as concentrações séricas inibina A e inibina B foram medidos usando uma de duas etapas enzima do tipo sanduíche imunoensaio antes da cirurgia.

Resultados

No grupo de pacientes com câncer de ovário concentração sérica mediana de inibina A foi de 3,87 pg /mL (0,96-10,09) e inibina B foi de 13,9 pg /mL (5,1-45,0). medianas das concentrações de inibina A e B em relação ao FIGO palco e histológica subtipo não diferiram significativamente. Os níveis de inibina A foram significativamente maiores em pacientes com menor classificação (G1 e G2), em comparação com aqueles com maior G3 grau (p = 0,001). Não houve diferenças nas concentrações de B de inibina em relação à classificação. A análise de Kaplan-Meier demonstrou nenhuma diferença na taxa de sobrevivência em relação aos níveis de inibina A, enquanto houve um comprometimento gradual de 5 anos de sobrevida com maior nível de inibina B. No grupo de pacientes com níveis de inibina B superior a 20 pg /ml a taxa de sobrevivência foi menor (p = 0,00625, teste log-rank).

Conclusão

1. inibina A níveis séricos mais elevados foram encontrados em pacientes com carcinoma do ovário altamente diferenciada em comparação com o grupo de doentes com um cancro fracamente diferenciado, que pode confirmar a influência de inibina A em processos de proliferação celular. 2. Uma importância significativa de inibina B foi demonstrada na predição de morte dentro de menos de um período de cinco anos. A probabilidade de sobrevida em pacientes apresentando altos níveis de inibina B foi menor com significância estatística. Isso pode indicar a necessidade de mais estudos sobre como bloquear a via de ativação Inibina B na terapia carcinoma do ovário

Citation:. Walentowicz P, Krintus M, Sadlecki P, Grabiec M, Mankowska-Cyl A, Sokup A , et ai. (2014) níveis séricos de inibina A e Inibina B em epitelial de ovário pacientes com câncer. PLoS ONE 9 (3): e90575. doi: 10.1371 /journal.pone.0090575

editor: Surinder K. Batra, University of Nebraska Medical Center, Estados Unidos da América

Recebido: 08 de novembro de 2013; Aceito: 01 de fevereiro de 2014; Publicação: 05 de março de 2014

Direitos de autor: © 2014 Walentowicz et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Os autores não têm apoio ou financiamento para relatar

Conflito de interesses:. os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

cancro do ovário

epitelial é a quinta maior causa de morte. em mulheres na Europa e nos Estados Unidos [1]. Embora a compreensão do câncer de ovário tem melhorado muito, a etiologia e o curso da doença permanecem desconhecidas [2]. As condições que permitem que as células cancerosas para iniciar metástases para locais distantes representam um problema clínico importante, mas ainda pouco compreendido. Além disso, apesar de novos marcadores foram introduzidos na prática clínica, mais de 70% dos pacientes apresentam com doença avançada (fase III ou IV), e as taxas de sobrevivência a longo prazo são baixos (cerca de 30% apenas) [3], [4 ], [5].

Inibinas foram originalmente isolado a partir de fluidos gonadais com base nas suas respectivas capacidades para inibir a secreção de hormona estimulante do folículo (FSH) pela pituitária. Subsequentemente, estas proteínas foram identificadas como membros de uma família de factores de crescimento, a superfamília de crescimento transformante factor beta (TGF-p), com múltiplas funções como reguladores locais de biologia gonadal [6], [7]. Inibina A e inibina B pertencem a um pequeno sub-grupo da superfamília de TGF-β que actuam como antagonistas e são homólogos estruturais de activinas, compreendendo a activina β-subunidade e um α-subunidade única. Heterodimerização dá origem a inibina A (α /pA) e B (α /βB) [8], [9]. Na sua estrutura, o dímero maduro inibina A é semelhante à Activina A [10].

Inibinas bloquear as acções de activina na pituitária [11]. Compartilhando a subunidade β, inibina pode ligar tipo activina receptores II, com uma afinidade mais baixa [12]. Um proteoglicano ligado à membrana, o betaglicano, actua como um co-receptor de inibina e, além disso, o betaglicano tem sido caracterizado como um receptor de acessório para ligandos TGF-β relacionados, TGF-β1, -β2 -β3 e [13]. Na presença de betaglicano, inibina forma um complexo de elevada afinidade com o receptor de activina de tipo II [13]. Essa interação inibe o acesso de activina com seu tipo de receptores II e bloqueia a intracelulares cascata [14] de sinalização.

O fato de que Inibinas expressão é restrita às células da granulosa do ovário em mulheres, levou a estabelecer níveis de inibina como um soro útil marcador de tumor de células da granulosa (TCG).

Além disso, como inibina a e B pertencem a factores de crescimento transformadores família e seus representantes desempenham um importante papel na carcinogênese do câncer de ovário, pode-se supor que eles também poderiam desempenhar um papel na carcinogénese do ovário. Foi demonstrado que algumas regiões de genes que codificam Inibinas tendem a ser prejudicada em carcinomas ovarianos, no entanto, uma relação entre esses danos e processos de carcinogênese em pacientes câncer epitelial de ovário não foi elucidado [15]. Um dos mecanismos sugeridos que participam na carcinogénese do carcinoma do ovário é as perturbações da via activina resultaram da expressão diminuída de beta-glicanos. À semelhança de outras neoplasias, cancro do ovário é caracterizada pela perda de expressão β-glicano, no entanto, o papel da via de activina, e as interacções entre as activinas, inibinas e outros componentes da família TGF-β, ainda permanecem incertos [15].

Considerando esses fatos, o objetivo deste estudo foi examinar a inibina a e concentração inibina B no soro de pacientes com câncer epitelial de ovário em relação às características clínico-patológicas, tais como um subtipo patológica do tumor, estágio FIGO, classificação, status de menopausa e sobrevida global em 5 anos.

pacientes

Foram incluídos 90 pacientes epiteliais do cancro do ovário com idades entre 47-81 anos (média 59,6 +/- 10,3 anos) tratados no Departamento de Ginecologia e Obstetrícia, Ludwik Rydygier Collegium Medicum em Bydgoszcz no período de 2005-2006. Todas as mulheres estavam na pós-menopausa.

Só as mulheres que se submeteram à cirurgia cytoreductive óptima foram considerados para uma análise mais aprofundada, todos com canceroso residual centra-se menor do que 1 cm de diâmetro. Todos os pacientes foram operados pelo oncologista ginecológica experiente. O protocolo cirúrgico padrão incluído tumorectomia, a histerectomia com salpingoovariectomy bilateral, linfadenectomia pélvica, omentectomia e apendicectomia. Federação Internacional de Ginecologia e Obstetrícia sistema de estadiamento do câncer de ovário (FIGO) foi utilizado para avaliar o estágio clínico da doença. estágios iniciais foram confirmados em 26 pacientes (FIGO I em 16 mulheres, II em 10) e doença avançada em 64 pacientes (FIGO III-56, IV-8). Todos os casos de câncer de ovário foram com confirmação histológica, dos quais 68 (75%) serosa, 7 (8%) e 15 mucinoso (17%) endometrioid. O exame histológico foi realizado no Departamento de Patologia, Hospital Universitário, em Bydgoszcz, e graduação histológica foi determinada (G1 em 13, G2 e G3 em 28 em 49 pacientes).

Após a cirurgia cytoreductive ideal, todas as mulheres foram submetidas a 6 cursos de quimioterapia baseada em paclitaxel e carboplatina. As características basais dos participantes do estudo são apresentados na Tabela 1.

O Comité de Bioética na Ludwik Rydygier Collegium Medicum, Universidade Nicolaus Copernicus, em Torun foram revistos e aprovados neste estudo. Todos os participantes têm fornecido por escrito, o consentimento informado.

Métodos

As amostras de sangue foram coletadas (10 ml) após a admissão ao hospital, no dia antes da cirurgia. Após a centrifugação em condições de soro padrão foi obtida, aliquotado e armazenado a -70 ° C até serem ensaiadas.

As concentrações séricas de inibina A e inibina B foram medidos usando um de dois locais em duas fases do tipo sanduíche imunoensaio enzimaticamente amplificado ( inibina A /B ELISA; Diagnostic Systems Laboratories, Inc., Webster, Texas, EUA). A imprecisão do ensaio para a inibina A foi de 6,2% a 23 pg /mL e 3,0% de 781 pg /mL. As menores concentrações de inibina A, numa amostra que pode ser detectado era de 1 pg /mL (limite de detecção inferior). Como valor de referência para as mulheres com mais de 45 anos, aceites inibina A concentração de 1-3,88 pg /mL.

intra e inter-ensaio coeficientes de variação, com controlos de soro para inibina B foram de aproximadamente 3,5% -5,6% e 6,2% -7,6%, respectivamente. O limite inferior de detecção foi de 6 pg /mL. Ensaio gama medido para inibina B foi 10-531 pg /mL.

O teste de Kolmogorov-Smirnov foi utilizado para avaliar a normalidade da distribuição dos parâmetros investigados. Os dados foram expressos como média ± desvio padrão e mediana com os percentis 25 a 75th. Comparação entre os grupos foi realizada por meio do teste de Mann-Whitney e o teste de Kruskal-Wallis para não-Gaussian variáveis ​​distribuídas com o post hoc testes de Dunn. valor de P 0,05 foi considerado estatisticamente significativo

taxa de sobrevivência global foi examinado para significância usando teste log-rank e as curvas de Kaplan-Meier

uni e multivariada regressões de Cox foram realizadas… Para a análise, foi aplicada uma selecção para a frente com um valor P inferior a 0,05 para a entrada. Os efeitos das variáveis ​​foram expressas como taxas de risco por 1 a mudança SD para permitir uma melhor comparabilidade entre os tamanhos do efeito das diferentes variáveis ​​testadas.

Todas as análises estatísticas foram realizadas utilizando Statistica 10.0 for Windows (StatSoft, Tulsa , OK, EUA).

resultados

no grupo de pacientes com câncer de ovário concentração sérica mediana de inibina a foi de 3,87 pg /mL (0,96-10,09) e inibina B foi de 13,9 pg /mL (5,1-45,0).

medianas das concentrações de soro de inibina a e B em relação ao estágio FIGO não diferiram significativamente. No entanto, houve uma tendência de significância estatística para inibina A (Tabela 2).

soro Median inibina A níveis foram significativamente maiores em pacientes com menor classificação (G1), bem como em pacientes com G2 em comparação com aqueles com grau superior G3 (p = 0,001). Considerando-se as concentrações de inibina B sérica em relação à classificação, não houve diferenças observadas (Tabela 3).

Não foram encontradas diferenças significativas entre as concentrações de inibina A e B e subtipo histopatológico do tumor (Tabela 4) .

Foram avaliadas as curvas ROC para avaliar precisão de diagnóstico de variáveis ​​investigadas para a predição de morte dentro de cinco anos (Tabela 5, Fig. 1). O nível mais elevado de discriminação foi encontrada para inibina B (área sob a curva [AUC] = 0,705), no entanto, este não foi significativamente diferente da precisão do diagnóstico de outras duas variáveis: idade (AUC = 0,629) e inibina A (AUC = 0,640)

Além disso, a associação entre inibina a, inibina B e taxa de sobrevivência também foi realizada de acordo com a análise de regressão de Cox univariada e multivariada (incluindo variáveis, tais como:. idade, tipo histológico (serosa), alto grau (G2 + G3), avançado estágio FIGO (Tabela 6, 7). Grade e estágio FIGO avançado foram fatores prognósticos estatisticamente importantes na análise univariada para a sobrevida global (Tabela 6). na análise multivariada, somente avançado estágio FIGO foi estatisticamente importante (Tabela 7).

Além disso, a Kaplan-Meier foram realizadas análises. Não houve diferenças na taxa de sobrevivência em relação aos níveis de inibina a (Figura 2). a Kaplan análises -Meier demonstrou um comprometimento gradual de câncer de sobrevivência de 5 anos com o aumento do nível de inibina B. O teste Log-rank mostrou diferenças significativas entre concentração de Inibina B e sobrevivência; no grupo de doentes com níveis de inibina B superior a 20 pg /ml a taxa de sobrevivência foi menor (p = 0,00625, teste log-rank) (Figura 3).

Discussão

o câncer de ovário ainda permanece um problema substancial do presente ginecologia oncológica associada a um diagnóstico tardio, tem baixa eficácia do tratamento e uma alta mortalidade. Novos métodos de diagnósticos de carcinoma do ovário são introduzidos numa base regular, no entanto, tais acções não melhoram de forma significativa o resultado do tratamento [16]. É de grande importância para procurar novos factores que nos permitem prognosticar os resultados do tratamento e para nos ajudar a selecionar um grupo de pacientes do sexo feminino com o mau prognóstico que necessitam de uma terapia mais agressiva.

Em nosso estudo, avaliaram os níveis séricos de hormonas que pertencem à família TGF-β, designadamente a inibina a e inibina B. Verificou-se que a e B de inibina concentrações não foram significativamente diferentes, dependendo do nível de desenvolvimento clínico (fase FIGO) e o tipo de exame histopatológico. Os níveis de inibina A não se correlacionou com uma taxa de sobrevida em 5 anos. Devido ao nosso conhecimento que são os primeiros a ter avaliado inibina A níveis com relação à taxa de sobrevida de 5 anos em mulheres com carcinoma epitelial de ovário. Existem alguns relatos na literatura sobre a inibina A nível em pacientes afetados por carcinoma epitelial de ovário. Em seu estudo, Roberts et al. plasma sanguíneo demonstraram que as concentrações de inibina de sub-unidade alfa elevado nos pacientes com carcinoma do ovário [17]. Os autores não encontraram qualquer relação entre inibina A e características clínico-patológicos do tumor, o que está em linha com os nossos próprios estudos.

No entanto, temos demonstrado uma correlação positiva entre o aumento dos níveis de inibina A e o nível de histológica diferenciação. No subgrupo de pacientes, nos quais o tumor foi caracterizado por um baixo grau (G1), os níveis mais elevados de inibina A foram observados (8,23 pg /ml para G1 vs 0,96 pg /mL para G3, p = 0,001).

Knight and Glister provou que o equilíbrio entre inibinas e activinas, produzido por células granulosas, é essencial na regulação de vários fatores relacionados com o desenvolvimento folicular, incluindo proliferação celular [18]. Talvez, se um desequilíbrio nesse sistema ocorre, isso afetaria uma proliferação aumentada de células de carcinoma de ovário.

diferenças Com base em nossos resultados do estudo, temos encontrado em níveis inibina A entre as mulheres afetadas pelo carcinoma do ovário, ao passo que não houve diferença dos níveis de inibina B entre eles. Talvez, este fenómeno é – em certa medida – relacionadas com a desordem a proliferação de células de tumor em pacientes com carcinoma do ovário. Consideramos que deve ser confirmado por outros estudos, também incluindo a avaliação dos níveis de activina.

Nossos estudos são trabalhos pioneiros sobre o papel da inibina A no carcinoma epitelial de ovário. Pela primeira vez, nós azarão para confirmar a intencionalidade de inibina A avaliação de rotina nível na predição de características clínico-patológicas em pacientes afetados pelo câncer epitelial de ovário.

Temos também estudou os níveis de inibina B, outra hormona pertencente à família TGF-β. níveis de Inibina B não revelou diferenças estatisticamente significativas dependendo do grau de desenvolvimento clínico, o nível de malignidade histológica e o tipo histológico de câncer. No entanto, usando ROCs (curvas Receiver Operating), encontramos uma correlação entre um nível de inibina B plasma sanguíneo pré-operatório e um tempo de sobrevida em 5 anos. Através da realização de uma análise de tempo de sobrevivência com a ajuda de curvas de Kaplan-Meier, temos observado um tempo significativamente mais curto até a morte no grupo de pacientes com níveis de inibina B acima de 20 pg /mL.

Devido ao nosso conhecimento que foram os primeiros a ter analisado uma associação entre os níveis B de inibina e tempo de sobrevida dos pacientes. Na literatura disponível, não encontramos relatos sobre o efeito Inibina B em tempo de sobrevivência dos doentes com carcinoma do ovário. Pensamos que o aumento do nível de inibina B pode ser, presumivelmente, devido ao bloqueio na via de transdução de sinal do activina. Alguns autores sugerem que a via de sinal de activina exerce um efeito inibidor sobre o crescimento do tumor, bastante semelhante a acção do TGF-β em células epiteliais normais. O enfraquecimento da actividade de activina pode levar à perda da capacidade inibidora da enzima induzida em crescimento, e inibina B superprodução. Uma expressão de β-glicanos reduzida pode ser um possível mecanismo intermediário envolvido neste processo, no entanto, as interações que participam entre os respectivos agentes de família TGF-β são extraordinariamente complexo [19]. Ambos inibina A e inibina B ligam-se β-glicano apenas no local de ligação localiza-se na região proximal da membrana celular [20], [21]. Foi revelado que os locais de ligação são comuns para inibinas e outros componentes da família TGF-β, ainda que eles próprios são diferentes entre si no que diz respeito a resíduos de aminoácidos específicos característicos para os respectivos factores de [20]. Parece ser provável que a inibina A e inibina B apresentar uma afinidade diferente para β-glicanos [22]. Uma inibina se liga com uma afinidade mais elevada para o receptor β-glicano e tipo II, em contraste com inibina B [23]. No entanto, inibina B é caracterizada por uma maior capacidade para antagonizar a libertação de FSH a partir da glândula pituitária, o que é indicativo de uma possível ligação a inibina de activina de tipo II B do receptor através de um outro caminho [22].

Postulamos que a activina mediada parada do crescimento acompanhado por uma conseqüente elevação das concentrações de inibina pode eventualmente constituir uma etapa importante no processo de carcinogênese do carcinoma de ovário.

inibina a, pertencente à família TGF, tem um impacto sobre NF-kB (Fator Nuclear kappa cadeia leve de intensificador de células B activadas) via de sinal. NF-kB é um complexo proteína de agir como um factor de transcrição. NF-kB activação da via de sinal ocorre em tumores de carcinoma de ovário de origem epitelial [24]. A iniciação deste processo pode ser não só devido a uma mutação, mas também para a presença de indutores de processos inflamatórios no microambiente tumoral. Como resultado da activação do NF-kB via, genes alvo responsável por uma proliferação aumentada, infiltração, metástase e angiogénese se activada [25]. Os processos acima mencionados determinar um fenótipo agressivo do tumor [26], [27].

Os componentes de TGF-β superfamília frequência exercer uma acção sinérgica com a FSH, portanto, é crucial ter em conta o facto de um número de vias de transdução de sinal podem ser activados simultaneamente. Verificou-se que a activina, via receptores de Smad2 /3, activa PI3 Akt, existente em carcinomas ovarianos epiteliais, e afecta a sobre-expressão de genes anti-apoptóticos [28], [29]. interacções complicadas entre inibina, activina, estrogénios e via de sinalização de NF-kB têm sido comprovada [30]. Sabe-se geralmente que os factores da família TGF-p e os estrogénios desempenham um papel fundamental nas funções ovarianas, no entanto o papel do NF-kB ainda permanece obscura [31], [32], [33]. Por outro lado, é provável que a inibina, a activina, estrogénios e NF-kB desempenhar algum papel na patogénese do carcinoma do ovário. Mecanismos subjacentes a este processo de cobrir a insuficiência da proliferação e apoptose. Cada uma das vias de transdução de sinal descritas acima contém factores mútuos. Assim, suas cruzadas interações são possíveis.

Cancro do ovário

epitelial continua a ser uma das doenças mais agressivo, especialmente em mulheres de nível socioeconômico alto que vivem em países industrializados. Ao longo dos últimos anos, juntamente com um intenso desenvolvimento da biologia molecular, numerosos estudos sobre o mecanismo da carcinogénese do ovário foram publicados [34], [35]. Apesar disso, a doença é frequentemente diagnosticado após as células tumorais foram difundidas no interior da cavidade peritoneal, nas últimas fases de desenvolvimento clínico, e a percentagem de pacientes tratados com sucesso permaneceu quase inalterada num nível durante várias décadas. câncer epitelial de ovário é uma doença agressiva para os quais existem poucos biomarcadores e terapias eficazes [36].

Importância da inibina A e Inibina B em câncer epitelial de ovário é relevante. A alteração da via de inibina /activina podem contribuir para o desenvolvimento de cancro epitelial do ovário, devido à alteração da diafonia entre granulosa e células epiteliais. Em sua recente estudos Tournier et al. identificou uma única mutação de novo (c.1157A G /p.Asn386Ser) no interior do gene que codifica o INHBA pA-subunidade de inibinas /activinas, que desempenham um papel chave no desenvolvimento dos ovários [36]. Além disso, num grupo de 62 casos, que detectada uma mutação da linha germinativa não declarada adicional do gene INHBA (c.839G A /p.Gly280Glu). Os autores fornecem argumentos que indicam que as mutações da linha germinativa de inibina contribuir para o determinismo genético de tumores ovarianos epiteliais através da alteração da produção de inibina /activina. Os resultados obtidos pelos autores sugeriram fortemente que as mutações inibina contribuiu para o determinismo genético de tumores ovarianos epiteliais [37]. O impacto da mutação INHBA na produção de inibina /activina e o papel da via de inibina em ovários e carcinogénese do ovário é de grande conclusão interest.In, com base nos nossos estudos, observou-se menor a 5 anos taxa de sobrevivência no grupo de pacientes com os níveis de B de inibina acima do limite superior da normalidade. Talvez, a avaliação Inibina B na prática clínica pode ajudar a encontrar um grupo de pacientes com câncer ovariano epiteliais, em quem prognósticos são ruins o suficiente para usar métodos de tratamento mais agressivas. Esta presunção exigem mais estudos, incluindo os sobre as possibilidades para bloquear vias de ativação B inibina na terapia carcinoma de ovário. Deve-se também prestar atenção ao fato de que, no grupo estudado de pacientes apenas o nível de desenvolvimento clínico, de acordo com a FIGO, foi um preditor independente de taxas de sobrevida em 5 anos com base em uma análise multivariada, que destaca um papel essencial de realizado adequadamente estadiamento cirúrgico.

Felizmente, estudos realizados por nós vai levar ao desenvolvimento de novos ensaios de diagnóstico que permite uma previsão mais precisa dos resultados do tratamento do câncer.

Conclusões

1. inibina A níveis séricos mais elevados foram encontrados em pacientes com carcinoma do ovário altamente diferenciada em comparação com o grupo de doentes com um cancro fracamente diferenciado, que pode confirmar a influência de inibina A em processos de proliferação celular.

2. Uma importância significativa de inibina B foi demonstrada na predição de morte dentro de menos de um período de cinco anos. A probabilidade de sobrevida em pacientes apresentando altos níveis de inibina B foi menor com significância estatística. Isso pode indicar a necessidade de mais estudos sobre como bloquear a via de ativação Inibina B na terapia carcinoma de ovário.