Abstract

função parácrina é um importante mecanismo de comunicação célula-célula dentro microambiente do tecido em desenvolvimento normal e doença.

In vitro

modelos de cultura de células que simulam tecido ou tumor microambiente são ferramentas necessárias para delinear as interações epiteliais-estromal incluindo função parácrina, mas um modelo ideal tridimensional (3D) de tumor estudando especificamente função parácrina actualmente não existe. A fim de preencher este vazio foi desenvolvido um novo modelo de co-cultura 3D em microesferas de alginato de hidrogel de camada dupla, incorporando epitelial câncer de próstata e células estromais em compartimentos separados das microesferas. As células permaneceu confinado e viável dentro das respectivas esferas há mais de 30 dias. Como prova de princípio quanto à função parácrina do modelo, medimos componente shedded da caderina-E (SE-cad) no meio condicionado, um importante ligada à membrana molécula adesiva célula que é altamente desregulada em cânceres, incluindo câncer de próstata. Além de demonstrar que a SE-cad pode ser quantificado de forma fiável no meio condicionado, as experiências do curso do tempo também demonstraram que a quantidade de SE-cad é influenciada pela interação epitélio-estromal. Em conclusão, o estudo estabelece um romance 3D

in vitro

modelo de co-cultura que pode ser usado para estudar a interação parácrina célula-célula

Citation:. Fang X, Sittadjody S, Gyabaah K, Opara CE, Balaji KC (2013) Novel Co-Cultura modelo 3D para epitélio-estroma células Interação em câncer de próstata. PLoS ONE 8 (9): e75187. doi: 10.1371 /journal.pone.0075187

editor: Elad Katz, AMS Biotechnology, Reino Unido

Recebido: 03 de junho de 2013; Aceito: 11 de agosto de 2013; Publicação: 20 de setembro de 2013

Direitos de autor: © 2013 fang et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este trabalho é suportado por Forest University Wake fundos institucionais para KC Balaji e pelo NIH CA079448 subvenção para X. fang. website do financiador é https://www.wakehealth.edu/. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito.

Conflito de interesses: Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

Vários dos

modelos in vitro

células co-cultura disponíveis para. interações célula-célula de estudo usar bidimensionais pratos (2D) de Petri ou placas [1,2,3]. No entanto, na maioria dos organismos vivos células são incorporados num microambiente tridimensional (3D), rodeada por outras células e influenciada por factores solúveis secretados no ambiente extracelular. Alternativamente modelos sanduíche podem ser utilizados para o crescimento de múltiplas camadas de células, mas as limitações são óbvias, como as células de alterar os seus padrões de características morfológicas, metabolismo e expressão de genes em cultura 2D, especialmente quando eles estão de organismos superiores [4,5]. Além disso, as culturas de células em 2D convencionais limitar as comunicações celulares e transporte de factores solúveis, oxigénio e nutrientes, a remoção de resíduos e o metabolismo celular como presente em ambientes biológicos nativos [6,7]. Portanto, é fundamental desenvolver

in vitro

sistemas modelo que simulam microambientes de tecido para produzir resultados experimentais confiáveis ​​e biologicamente significativas.

foram desenvolvidos sistemas de modelagem 3D que simulam microambiente tecido para resolver limitações associadas a 2D modelos [8]. Enquanto 3D

in vitro

modelos de cultura celular superar várias limitações dos modelos 2D, a melhoria na modelagem 3D é necessário discriminar tipos específicos de interação célula-célula, como as funções diretas, autócrinos ou parácrinos célula-célula. Avanços em biomateriais e técnicas de bioengenharia permitir a utilização de novos materiais, tais como géis de colagénio, laminina e Matrigel ™ em cultura celular, o desenvolvimento da matriz extracelular de síntese e criar uma variedade de modelos 3D [5,9,10,11,12,13,14, 15]. Entre os biomateriais disponíveis, hidrogel de alginato dispuser preferido propriedades para transplante de células, a entrega de drogas e engenharia de tecidos. O alginato é um polissacarídeo e um polímero biocompatível derivado de algas castanhas. Através da adição de catiões divalentes tais como o cálcio ou o bário, polímeros de alginato pode ser reticulado ionicamente para formar um hidrogel. A natureza hidrofilica dos andaimes de alginato permite o carregamento elevado de células que permanecem viáveis ​​e funcionais em cultura [16,17,18]. Além disso, a produção de hidrogel de alginato é relativamente simples e de encapsulação pode ser conseguida sob condições não rigorosas. Vários tipos de células, incluindo células neuronais, osteoblastos, condrócitos, mioblastos, foram encapsulados, cultivadas e expandidas em hidrogéis de alginato [19,20,21,22,23].

Neste estudo, nós estabelecemos um câncer de próstata em 3D interacção epitélio-estromal em microesferas de hidrogel de alginato por células co-cultura de cancro da próstata (C4-2 estavelmente transfectadas com Proteína Quinase D1 (PKD1) ou vector de controlo) e células estromais da próstata normais (WPMY-1 células) no mesmo, mas em microcápsula sub-camadas separadas. Este sistema é ideal para estudar a influência parácrina entre os dois tipos de células, porque a interacção directa entre as células epiteliais e do estroma não é permitido. Como prova de princípio para estudar a função parácrina, medimos derramamento de E-caderina (SE-cad), em meio solúveis. O SE-cad é uma de 80 kDa clivada fragmento da E-caderina, uma proteína adesiva celular transmembrana que está desregulada em vários tipos de câncer, incluindo próstata [3,24,25,26]. Cima SE-CAD tem sido relatada em fluidos e soro de pacientes com uma variedade de cancros e outras doenças [25,27,28,29,30] e os níveis séricos foram mostrados para correlacionam-se positivamente com cancro da próstata metastático e recorrência da doença. Assim, SE-cad é sugerido para ser um biomarcador da novela para prognóstico do câncer. Nós já descreveu a regulação para baixo dos PKD1 no câncer de próstata avançado [31], e que PKD1 promove a E-caderina derramamento através do aumento das metaloproteinases da matriz (MMP) -2 e -9 secreção [24].

Materiais e métodos

Cultura celular

C4-2 células estavelmente transfectadas com vector pcDNA3.1 (células vetor) ou PKD1-GFP (células PKD1) foram desenvolvidos em nosso laboratório como descrito anteriormente [31]. As células estromais da próstata normais (WPMY-1) foram obtidas a partir de ATCC. As células foram cultivadas em meio DMEM (glucose elevada) (Hyclone, Cat # SH30243.01) com 10% de FBS e 1% Antibioltic antimicóticos (Hyclone Cat # SV30079.01) em placa de cultura estéril de 15 cm e incubadas a 37 ° C com 5% de CO

2. Quando as células atingiram 80% de confluência, os meios foram removidos a partir de cada placa e as células foram lavadas com PBS estéril, três vezes, tratados com tripsina (Hyclone, Cat # SH30236.01) durante 20 minutos e transferidas para tubos de centrífuga estéreis. Eles foram novamente lavadas com PBS, e depois ressuspenderam-se em meio DMEM para encapsulamento.

A fabricação de microcápsulas

O estromal, as células de vector e de PKD1 foram encapsulados em hidrogel de alginato utilizando um dispositivo de micro-fluídica com algumas modificações de encapsulamento como descrito por Tendulkar et ai. e Khanna et al. [32,33]. Resumidamente, o primeiro tipo de célula (estroma ou vector ou PKD1) foi misturado com 1,5% (w /v) ultrapura baixa viscosidade alta-manuronato alginato (LVM) (Novamatrix, Sandvika Noruega) e extrudida através do dispositivo de micro-encapsulação fluídica. As gotículas produzidos foram recolhidos numa solução de cloreto de cálcio 100 mM. Após a reticulação do alginato por cinco minutos em CaCl

2, as microcápsulas foram lavadas com NaCl a 0,9% contendo 20 mM de CaCl

2. As microcápsulas foram então incubadas com poli-L-ornitina (PLO) (0,1% w /v) durante 20 minutos para criar uma camada PLO, que serve como uma membrana basal selectiva Perm. As microcápsulas PLO-revestidas foram, em seguida, misturado com o segundo tipo de células (estromais ou vector ou PKD1) suspenso em 1,5% (w /v) de MVE e encapsulado usando novamente o dispositivo de micro-fluídicos, a fim de se obter microcápsulas com várias camadas. As microcápsulas foram lavadas com 0,9% de NaCl contendo 20 mM de CaCl

2 e cultivadas em DMEM contendo soro fetal de bovino (10% v /v) a 37 ° C com 5% de CO

2.

viabilidade Ensaio

para avaliação da viabilidade de células encapsuladas, algumas cápsulas de cada grupo transfectadas foram retirados e transferidos para limpar placas de 24 poços, os meios foram aspirados para fora com cuidado e as células marcadas. único tipo de células de controlo de coloração: CFDA SE (Vybrant® CFDA SE Kit celular Tracer, Invitrogen) reconstituído em DMEM isento de soro (SFM, Hyclone) (1: 400) foi adicionado a cada poço (500 ul /poço) e incubou-se durante 15 minutos a 37 ° C, 5% de CO

2 na incubadora. Então SFM com CFDA SE foi substituído por DMEM com FBS a 10% e incubou-se novamente durante mais 30 minutos a 37 ° C, 5% de CO

2 na incubadora. O meio contendo soro foi então substituída com 50 ug /ml de iodeto de propídio (PI) (Life Technologies /Invitrogen, Grand Island, NY) e incubadas à temperatura ambiente durante 2 min e as microcápsulas foram lavadas 3 vezes para remover o excesso de PI. As microcápsulas foram então observadas ao microscópio de fluorescência invertida (Zeiss Axiovert 200M) e fotografada. O número de células vivas e mortas foi determinada qualitativamente a partir da imagem composta adquiridos utilizando software mais Imagem-Pro (versão 6.3.1.542). Duplo tipo de célula coloração: Para demonstrar a compartimentalização diferencial de diferentes tipos de células em micro-cápsulas, multi-camada, as células do núcleo interno foram pré-corados com verde celular Rastreio (Invitrogen, Cat # C2925) e as células da camada exterior foram pré- coradas com celular rastreador-laranja (Invitrogen), antes de a síntese de multi-camada de micro-cápsulas. Antes de observação, as microcápsulas foram coradas com Azul Ácido Nucleico SYTOX Mancha (Invitrogen, Cat # S11348) para células mortas. Os multi-camadas micro-cápsulas foram então fotografadas usando o microscópio de fluorescência (Zeiss Axiovert 200M).

Enzyme Linked imunoabsorvente (ELISA)

Para avaliar as funções parácrinos de células encapsuladas, os níveis de sE-cad foi medida nos meios de cultura. Cada grupo de microcápsula foi cultivada em quadrigêmeos e da mídia passou foi recolhido todos os dias alternados. Enquanto a coleta dos meios gastos, os meios de comunicação em cada poço foi muito bem misturados; 1 ml (metade do volume total) foi retirado de cada poço e substituído com 1 ml de DMEM completo fresco com 10% de FBS e 1% de antibióticos. O meio de amostra foi armazenada num tubo Eppendorf limpo a -20 ° C. Para as células que crescem em cultura de tecidos 2D placas de petri tratadas, os meios foram recolhidos quando as células atingiram confluência de 90-100% (três dias de incubação). O número de células foi contado para cada linha de células para a normalização mais tarde. Os níveis de SE-cad foram quantificados utilizando o kit de ELISA da R . Sistemas D, Quantikine (humana SE-caderina) de acordo com as instruções dos fabricantes

Resultados

A viabilidade celular mantida por pelo menos um mês em microesferas

com base nos relatórios anteriores de microcápsulas multi-camada produzidos em Protein Delivery [32,33] que concebido microcápsulas de camada dupla, que foram compostos por um núcleo interior de alginato e a camada externa de alginato (Figura 1 ) separados por um PLO) revestimento de permeabilidade selectiva policatiónico electrostaticamente -Conectado poli-L-ornitina (com um tamanho de poros 150 kDa [32]. Considerando que a interacção célula-célula directo modelo impedido, secreções celulares pode permear através do revestimento PLO permitindo parácrina. Como passo inicial para validar o modelo para a função parácrina, avaliou-se a viabilidade celular.

Esquerda é um modelo dos desenhos animados da microesfera de camada dupla. O núcleo interior e camada exterior foram separados por revestimento PLO como mostrado. As células que crescem em camadas separadas foram indicados com setas vermelhas. Direita é uma microesfera real observada em microscópio de luz. As células estromais foram cultivadas no núcleo interior durante 7 dias, e a camada externa está em branco.

As células do estroma (WPMY-1), células vetor C4-2 (C4-2 células estavelmente transfectadas com pcDNA3 0,1) e as células C4-2 PKD1 (células C4-2 transfectadas de forma estável e expressar PKD1) manteve-se viável dentro núcleo interno ou camada externa nas microcápsulas em camadas duplas para 4 semanas, e permaneceu confinado às suas respectivas camadas sem a migração através da OLP ( Figura 2). Em seguida, dois tipos de células diferentes foram co-cultivados no núcleo interno ou camada exterior do mesmo microcápsula, e ambos os tipos de células permaneceram viáveis ​​em co-cultura durante pelo menos 4 semanas, independentemente da combinação de camadas ou tipo de células (Figura 2). Os resultados demonstram que as microesferas de alginato pode ser utilizado para cultivar células epiteliais ou do estroma compartimentadas em camadas diferentes

in vitro

durante pelo menos um mês.

BS, microcápsulas em branco com células do estroma e do núcleo interior em camada externa. PS, microcápsulas com células C4-2 de PKD1 em células do estroma e do núcleo interior em camada exterior. células verdes, ao vivo no núcleo interno. glóbulos vermelhos, ao vivo no camada exterior. , células mortas azuis. barra de escala, de 100 um.

As células cultivadas em microesferas demonstrou função secretora

A fim de provar que as células viáveis ​​em microesferas também permanecem funcionais, medimos a concentração de fragmento de E-caderina solúvel (sE-CAD, ou shedded caderina-e) nos meios condicionados como um marcador da função secretora. E-caderina é uma importante molécula de adesão célula-célula transmembranar que é desregulada em vários cancros humanos [3,34]. O domínio extracelular da E-caderina é clivada por várias proteases extracelulares. A clivagem resulta na descamação de um fragmento de 80 kDa, aproximadamente, que foi demonstrado ser um biomarcador de fenótipo agressivo em vários cancros humanos, incluindo próstata [25,27,28,29,30]. Os nossos estudos anteriores demonstraram que a desregulação de PKD1 influencia E-caderina derramamento em células de cancro da próstata [24]. Portanto, nós utilizamos estavelmente transfectadas células C4-2 PKD1 para quantificar o nível de E-caderina shedded. De forma a incluir uma variedade de controlos positivo e negativo, testou-se o nível de SE-CAD no meio condicionado de diferentes linhas de células humanas, incluindo células tanto normais como neoplásicas. Enquanto alguns tipos de células não mostraram muita evidência de E-cad derramamento reflectido pelo nível baixo /traço de SE-Cad, outros secretado altos níveis de SE-cad no meio condicionado (Figura 3). Os resultados mostraram que linhagens de células metastáticas (MCF-7, PC3 e células LNCaP) têm alto nível SE-Cad, e linhas de células benignas (células HEK293T, 3T3 e células MS1) apresentaram baixo nível /traço de SE-Cad. Houve diferenças significativas entre os níveis sE-Cad de células metastáticas e células benignas, que foram confirmados pelo teste t de Student (Figura 3). Estes resultados são consistentes com a literatura publicada que nível se-CAD correlaciona com a invasividade de células [25].

nível SE-Cad foi medida por ELISA e foi normalizados para reflectir a secreção de 10

7 células para cada linha celular. SE-Cad nível de linhas de células metastáticas (células MCF-7, LnCap e PC3) foram comparados com HEK293T (como representante das linhas celulares normais) e os valores de P foram calculados pelo t-teste de Student. Cada coluna representa a média de três experiências em paralelo. barra de erro representa o erro padrão.

Co-cultura de células epiteliais e estromais influências shedded secreção de E-caderina como uma evidência da função parácrina

Para testar a interação parácrina entre duas células diferentes linhas, células estromais, células de vector e células C4-2 C4-2 PKD1 foram cultivadas em microcápsulas em uma variedade de combinações e sE-CAD no meio condicionado foi quantificado. Quando um único tipo de células foi cultivada em qualquer núcleo interior ou exterior da camada de microcápsulas, as células do estroma não secretam SE-CAD, ao passo que ambas as células de vector e células C4-2 C4-2 PKD1 fez quando encapsulados em conjunto em compartimentos separados (Figura 4A ). Quantificação de SE-Cad foi realizada para células cultivadas em ambiente 2D e resultados semelhantes foram observados (Figura 4B). Os resultados validam a confiabilidade do modelo de discriminar epitelial de funções células estromais ‘.

A, as células foram cultivadas em ambiente 3D para 6 dias. BS, microcápsulas com em branco células do núcleo e do estroma internas em camada externa. BV, microcápsulas com espaço em branco núcleo interno e as células vetor C4-2 na camada exterior. BP, microcápsulas com espaço em branco núcleo interno e as células C4-2 PKD1 na camada exterior. nível SE-Cad foi medida por ELISA. B, as células foram cultivadas em ambiente de 2D (placa de Petri). SE-Cad nível foi medido por ELISA e normalizados para reflectir a secreção de 10

7 células para cada linha de células de valores de P foram calculados pelo t-teste de Student. Cada coluna representa a média de três (cultura 2D) ou quatro (cultura 3D) experiências paralelas. barra de erro representa o erro padrão.

C4-2 PKD1 células aumento da secreção de SE-cad comparação com células C4-2 vetor (controle) (Figura 4), o que é consistente com as nossas publicações anteriores [ ,,,0],24]. Nós também já demonstraram que a PKD1 up-regulamentado expressão da caderina-E [24]. No modelo experimental de células C4-2 de PKD1 actuais, mas não células do vetor C4-2 agregam-se para formar colónias compactos (depois cultivadas durante três semanas em microcápsulas) (Figura 5), ​​que é um fenótipo bem estabelecido de aumento da expressão de E-caderina. Quando as células epiteliais e de estroma foram co-cultivadas em camadas independentes dentro do mesmo microcápsula, a quantidade de SE-CAD secretada por células (C4-2 ambos vector e células transfectadas PKD1) foi reduzida, sugerindo células estromais em influenciar a secreção epitelial SE-CAD (Figura 6). Porque o estroma e células epiteliais são compartimentada e incapaz de interagir diretamente, postulamos que células estromais influenciar a função secretora de células epiteliais via mecanismo parácrino.

As microcápsulas foram incubadas durante 23 dias são exibidos. PB, microcápsulas com células C4-2 PKD1 no núcleo interior e camada exterior em branco. VB, microcápsulas com células C4-2 vetor no núcleo interior e camada exterior em branco. Verde, coloração CFDA para células vivas. Red, iodeto de propídio (PI) para a coloração de células mortas. As setas indicam as colónias de células. barra de escala, de 100 um.

nível SE-cad foi medida por ELISA após co-cultura durante 30 dias. SB, microcápsulas com células estromais no núcleo interior e camada exterior em branco. BV, microcápsulas com espaço em branco núcleo interno e as células vetor C4-2 na camada exterior. BP, microcápsulas com espaço em branco núcleo interno e as células C4-2 PKD1 na camada exterior. SV, microcápsulas com células estromais no núcleo interno e as células vetor C4-2 na camada exterior. SP, microcápsulas com células estromais no núcleo interno e as células transfectadas em C4-2 PKD1 camada exterior. Os valores de P foram calculados pelo t-teste de Student. Cada coluna representa a média de quatro experiências em paralelo. barra de erro representa o erro padrão.

Discussão

O modelo de microesferas de dupla camada descrito neste estudo é um ambiente 3D que simula o

in vivo

microambiente, passíveis para fácil e escalável material de produção, purificação e processamento, sem citotoxicidade discernível, e é quimicamente compatível com soluções aquosas e as condições fisiológicas. Ao contrário de outros

in vitro

modelo 3D disponível atualmente, o modelo de microesferas neste estudo permite analisar especificamente a interação parácrina entre diferentes tipos de células. No entanto, este modelo também apresenta certas limitações. A quantidade de secreção quantificável de SE-CAD de células que crescem no núcleo interior é menor do que a do mesmo número e tipo de células que cresceram na camada externa da microcápsula (dados não mostrados). Esta diminuição da secreção pode ser devido ao facto de SE-CAD secretado pelas células no núcleo interno precisa de se difundir através de duas camadas de hidrogel antes de entrar no meio condicionado. É também possível que a permeabilidade selectiva de revestimento PLO diminuição da secreção de SE-Cad. Para optimizar este modelo para a detecção de outras proteínas específicas, as características químicas do revestimento PLO reticulado pode necessitar de ser optimizado para as necessidades específicas de estudo. A influência de exossoma também deve ser tomado em consideração, tal como E-caderina foi identificada em microvesículas purificadas a partir de células dendríticas murinas normais e células cancerosas humanas [35,36]. Ainda é possível que sE-Cad pode ser preso nos exossomos, ainda pouco se sabe sobre como microvesículas regular a interação célula-célula no sistema parácrina.

Outra preocupação é a propriedade mecânica sustentada de hidrogel de alginato, como ionicamente alginatos reticulados apresentaram diminuição da força gel após 90 dias

in vitro

[37]. Para resolver este problema, as ligações cruzadas covalentes estáveis ​​podem ser introduzidos em hidrogéis de alginato utilizando bi-funcionais reticuladores. Além disso, é possível que um período prolongado de

incubações in vitro

pode resultar em um desequilíbrio nas concentrações de iões predominantes (que é necessário para manter a estabilidade da microcápsula), mas não em

In vivo

condições, como nenhuma degradação destas microesferas de alginato foi observado por pelo menos três meses em nossa recente

in vivo

estudos (dados não publicados). Apesar destas limitações, o modelo como descrito pode ser utilizado eficazmente para estudar a interacção do epitélio-estromal parácrina.

interacções epitélio-estromal desempenhar um papel importante no desenvolvimento normal e transformação neoplásica. Na próstata humana normal, as células de estroma são compostas principalmente de células de músculo liso e de fibroblastos, enquanto o restante são feitos de células endoteliais, pericitos, macrófagos e linfócitos [38]. Tem sido relatado que o estroma associado a carcinoma (CAS) poderia alterar a morfologia das células /taxa de crescimento /agressividade de células epiteliais prostáticas humanas neoplásicas, mas as células epiteliais prostáticas não normais [39]. Efeitos semelhantes foram relatados usando células de carcinoma da próstata em co-cultura com células estromais óssea pleuripotent [40]. fibroblastos normais não demonstrar tal efeito transformador sobre as células epiteliais, o que sugere uma interação característica epitélio-estromal durante a células neoplásicas processo [39]. Neste estudo, foi demonstrado que um possível mecanismo de influência do estroma em células cancerosas epiteliais é através de um mecanismo parácrino. Como prova do princípio que demonstraram uma redução na secreção de SE-CAD por células de cancro da próstata em presença de células de estroma e o modelo pode presumivelmente ser usados ​​para estudar outras funções celulares influenciado por um mecanismo parácrino.

Proliferação

influências interacção estromal, apoptose e metástase de células epiteliais. No câncer de pâncreas, um antagonista do Hedgehog (Hh) inibiu o crescimento tumoral apenas quando existe estroma associado a um cancro, indicando via de sinalização dependente de estroma [41]. Em próstata, foi relatado que factores, tais como do estroma caveolin-1 e fosforilase de timidina estavam relacionados com a agressividade do tumor [42]. Outras novas proteínas que desempenham um papel na interacção epitélio-estromal foram identificados por perfis de transcrição na próstata [43]. Um deles, decorina, foi regulada negativamente no cancro da próstata [43]. Diminuição Decorina resultou em uma redução significativa da caderina-E ambos

in vivo

e

in vitro

e interação física entre Decorina e E-caderina foi confirmada por co-imunoprecipitação [34]. A decorina expressão é estritamente limitada de células mesenquimais /estroma, mas não em células epiteliais da próstata em [43], e a sua expressão é significativamente reduzida em estroma associado a carcinoma de [43]. Se Decorina também desempenha um papel na queda da caderina-E permanece desconhecida.

Outro grupo importante de proteínas da matriz extracelular, MMPs, poderia ser possíveis candidatos dos reguladores do estroma que influenciaram o derramamento E-cad. Nós já mostrou que a secreção de MMP-2 e -9 aumentos de E-caderina derramamento PKD1-induzidos e suprime a proliferação de células [24].

Em resumo, o estudo demonstra a viabilidade e utilidade de usar modelo de microesferas de alginato 3D para estudar a função parácrina de células. Em particular, foi utilizado o modelo para explorar a interação epitélio-estromal e demonstrou que células estromais da próstata normais influenciar secreção de SE-Cad por células epiteliais de cancro da próstata pela interação parácrina. O modelo pode ser usado para validar linhas celulares adicionais e parácrina interacção de diferentes tipos de células.