Sumário

Neste estudo, um novo apoptótica de alcalóides monoterpenóide, subditine (1), e quatro compostos conhecidos foram isolados a partir da casca de

Nauclea subdita

. Completa

1H- e

foram relatados dados de 13C NMR do novo composto. As estruturas dos compostos isolados foram elucidadas com vários métodos espectroscópicos tais como 1D- e 2D- RMN, IV, UV e LC-MS. Todos os cinco compostos foram rastreados quanto à actividade de citotoxicidade em células LNCaP e PC-3 linhas de células de cancro da próstata humanos. Entre os cinco compostos, o novo alcalóide, subditine (1), demonstrou a actividade de inibição do crescimento das células mais potente e selectiva contra LNCaP com um IC

50 de 12,24 ± 0,19 ^ M e PC-3 com um IC

50 de 13,97 ± 0,32 mM, em comparação com RWPE linha epitelial humana normal de células (IC

50 = 30,48 ± 0,08 M). Subditine (1) o tratamento induziu a apoptose em células LNCaP e PC-3 tal como evidenciado por um aumento da permeabilidade da célula, perturbações de estruturas do citoesqueleto e aumento da fragmentação nuclear. Além disso, subditine (1) as espécies de oxigénio reactivas intracelulares aumentadas (ERO), tal como reflectido pelo aumento da expressão de glutationa redutase (GR) para eliminar os radicais livres em ambas as linhas de células de cancro da próstata. Excesso de ROS pode levar ao rompimento do potencial de membrana mitocondrial (MMP), liberação de citocromo c e subsequente caspase 9, 3/7 ativação. Outras análises de Western blot subditine mostrou (1) induzido a sub-regulação de Bcl-2 e Bcl-XL expressão, enquanto que o p53 foi regulado para cima em LNCaP (p53 de tipo selvagem), mas não em PC-3 (p53-null) . Em geral, os nossos dados demonstram que a nova subditine composto (1) exerce um efeito anti-proliferativo em células LNCaP de cancro da próstata e células PC-3 humanas através da indução de apoptose

citação:. Liew SY, Looi CY, Paydar M, cheah FK, Leong KH, Wong WF, et al. (2014) Subditine, um novo monoterpênicos Indole Alcalóide da Casca da

Nauclea subdita

(Korth.) Steud. Induz apoptose em células cancerosas humanas da próstata. PLoS ONE 9 (2): e87286. doi: 10.1371 /journal.pone.0087286

editor: Chih-Pin Chuu, Institutos Nacionais de Pesquisa em Saúde, Taiwan

Recebido: 16 de Agosto de 2013; Aceito: 20 de dezembro de 2013; Publicação: 14 de fevereiro de 2014

Direitos de autor: © 2014 Liew et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. O trabalho foi financiado pela Universidade de Malaya Research Grant RP001 /2012; University of Malaya High Impact Research Grant UM.C /625/1 /HIR /Mohe /SC /37 e HIR: E00002-20001; Centro Nacional Francês de Pesquisa Científica CNRS conceder 57-02-03-1007; e fundos de pesquisa de pós-graduação da University of Malaya (PV050 /2012A). Este trabalho foi realizado no âmbito de um acordo oficial entre o CNRS e da Universidade de Malaya (Malásia). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

a família Rubiaceae (família Madder) é uma das maiores das angiospermas com mais de 637 gêneros e cerca de 10.700 espécies [1]. O gênero

Nauclea

que pertence a esta família, é composta por cerca de 35 espécies em todo o mundo [2] e na Malásia, há duas

Nauclea

espécie;

N. officinalis

e

N. subdita

[3].

Nauclea subdita

(Korth.) Steud. é uma planta tropical que cresce em terras baixas às florestas de montanha, em lugares pantanosos e frequentemente ao longo dos córregos e rios [4]. É uma árvore pequena ou média de circunferência de 25 m de altura e 60 centímetros [3]. As plantas deste gênero são conhecidos por produzir alcalóides monoterpênicos interessantes com alta diversidade estrutural, tais como naucline [5], nauclealines B [6] e naufoline [7]. Muitos deles apresentaram atividades biológicas significativas; anticonvulsivo [8], anti-proliferativa [9] e actividades vasorelaxante [5].

O câncer de próstata é o cancro mais frequentemente diagnosticado entre os homens no mundo desenvolvido. Estima-se que 238,590 novos casos serão diagnosticados e 29,720 mortes resultarão de câncer de próstata nos Estados Unidos em 2013 (Cancer Facts and Figures 2013, da American Cancer Society, 2013). Embora os mecanismos que impulsionam o câncer de próstata não foram completamente esclarecidos, idade, história de corrida, e da família dos pacientes com câncer de próstata têm sido mostrados para ser os fatores potenciais estreitamente associados a esta doença fatal [10].

nosso esforço contínuo para procurar novas e bioativos constituintes químicos da flora Malásia [11] – [15], uma nova citotóxica e apoptótica de alcalóides monoterpenóide, subditine (1), foi isolado a partir da casca de

Nauclea subdita

juntamente com os quatro alcalóides conhecidos; angustoline (2) [11], [16], [17], angustidine (3) [18], [19], angustine (4) [20], [21], nauclefine (5) [22], [23 ] (Figura 1). No presente artigo, relatamos o isolamento e caracterização de subditine (1), as atividades citotóxicos de alcalóides 1-5, bem como o mecanismo de apoptose de 1 contra células cancerosas humanas da próstata LNCaP e PC-3.

a estrutura do novo composto, subditine (1) foram elucidadas utilizando vários métodos espectroscópicos que foram 1D-RMN (

1H,

13 C, DEPT), 2D-RMN (HSQC, HMBC, NOESY), UV, IR e LCMS enquanto a estrutura dos outros quatro compostos conhecidos foram confirmadas através da comparação de dados de RMN com os valores da literatura.

Materiais e Métodos

Procedimentos gerais

o 1D – e 2D-NMR foram registados em clorofórmio deuterado (CDCl

3) (Merck, deuterização min 99,8%.) usando JEOL LA 400 MHz FT RMN e JEOL ECA 400 MHz FT NMR espectrômetro. Os espectros de massa foram obtidos num Shimadzu LC MS-TI-TOF. Os espectros de absorção de ultravioleta foram obtidos utilizando Shimadzu UV-250 Espectrómetro de ultravioleta-visível. solvente utilizado foi metanol (CH

3OH). Os espectros de IV foram obtidos num aparelho Perkin Elmer Spectrum-400 FTIR com CHCl

3 como solvente. Todos os solventes, com excepção das utilizadas para a extração em massa são grau AR. gel de sílica 60 (Merck, 0,040-0,063 mm) foi utilizada para cromatografia em coluna (CC). Alumínio suportado gel de sílica 60 F

sub placas de 20 x 20 cm foram utilizadas para cromatografia em camada fina (TLC) (Merck, Alemanha). Cromatografia em camada fina preparativa (PTLC) em gel de sílica 60 F placas

254 de vidro de 20 x 20 cm (Merck, Alemanha) foram utilizadas para a separação de compostos que não podem ser separados por meio de coluna convencional. pontos de TLC foram visualizadas sob luz UV (254 e 365 nm), seguido de pulverização com reagente de Dragendorff para a detecção de alcalóide. Um resultado positivo do teste foi indicada pela formação de manchas laranja.

material vegetal

A casca da

Nauclea subdita

foi recolhido a Hutan Simpan Bukit Kinta, Chemor, Perak, Malásia pelo grupo de fitoquímica do Departamento de Química da Faculdade de Ciências da Universidade de Malaya. As amostras de comprovação (KL 5254) dessas plantas foram depositados no Herbário do Departamento de Química da Universidade de Malaya, Kuala Lumpur, Malásia. coleção de plantas foram aprovados pelo chefe de Jabatan Perhutanan Negeri Perak (Perak Estado Departamento Florestal). Os estudos de campo não envolvem espécies ameaçadas ou protegidas.

extração e isolamento

secas, casca à terra da planta (1,7 kg) foi desengordurada primeiro com hexano (17 litros) por 3 dias a temperatura do quarto. O extracto de hexano foi filtrado e seco à temperatura ambiente. Em seguida, os materiais de planta secos foram humedecidos com uma solução de amoníaco e embebidas durante 2 horas. Eles foram re-extraiu-se com CH

2Cl

2 (17 litros) duas vezes por um período de 3 dias. O sobrenadante obtido foi concentrada utilizando evaporador rotativo sob pressão reduzida até um volume de 500 mL e analisada para o seu teor de alcalóides (utilizando TLC e confirmada por pulverização com reagente de Dragendorff). O extracto foi finalmente concentrado para proporcionar o extracto em bruto de diclorometano (5,0 g). O extracto em bruto foi submetido a CC sobre gel de sílica usando 60 CH

2Cl

2 e MeOH solvente (100:0, 99:1, 98:2, 97:3, 96:4, 95:5, 94 :6, 90:10, 83:17, e 75:25) e, finalmente, com 100% de MeOH foi usado como eluente. Ao comparar os padrões de TLC destas frações, quinze frações foram finalmente obtido.

Purificação do Composto

Outra purificação da fração de 5 por CCFP rendeu alcalóide 1 (10,6 mg, MeOH-CH

2 Cl

2; 98:2: saturado com NH

4Oh). Ambos os compostos conhecidos de 3 (5,5 mg, MeOH-CH

2Cl

2; 98:2: saturado com NH

4Oh) e 5 (6,2 mg, MeOH-CH

2Cl

2 ; 98:2: saturado com NH

4Oh) foram obtidos após purificação por PTLC fracção de sete enquanto que os compostos 2 (7,5 mg, MeOH-CH

2Cl

2; 95:5: saturado com NH

4Oh) e 4 (12,5 mg, MeOH-CH

2 Cl

2; 98:2: saturado com NH

4Oh) foram obtidos a partir fração de doze e seis, respectivamente

Alcalóide. 1