Abstract

O objetivo do estudo foi investigar o padrão de expressão e significado clínico-patológico de MTA3 em pacientes com não-pequenas cancro do pulmão (NSCLC). O perfil de MTA3 NSCLC em tecidos e tecidos pulmonares não cancerosas adjacentes expressão foi detectado por imuno-histoquímica. MTA3 foi sobre-expresso em 62 de 108 (57,4%) amostras de cancro de pulmão humano e correlacionada com a fase p-TNM (p 0,0001), metástases nodais (p = 0,0009) e de prognóstico reservado (p 0,05). Além disso, a depleção de expressão MTA3 com pequenos RNAs interferentes inibiu o crescimento celular e formação de colónias das linhas celulares de cancro A549 e H157 pulmonares. Além disso, o esgotamento MTA3 induzida paragem do ciclo celular no G1 /S limite. A análise Western blot revelou que o knockdown de MTA3 diminuiu os níveis de proteína de ciclina A, ciclina D1 e p-Rb. Estes resultados indicam que MTA3 desempenha um papel importante na progressão NSCLC

citação:. Li H, Sun G, Xu Y, Li Z, W Luo, Tang Z, et al. (2013) sobre-expressão de MTA3 se correlaciona com a progressão do tumor em Non-Small Cell Lung Cancer. PLoS ONE 8 (6): e66679. doi: 10.1371 /journal.pone.0066679

editor: Rossella Rota, Ospedale Pediatrico Bambino Gesù, Itália |

Recebido: 24 de novembro de 2012; Aceito: 09 de maio de 2013; Publicação: 19 de junho de 2013

Direitos de autor: © 2013 Li et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este trabalho foi apoiada por doações do National Science Foundation Natural da China (No. 30.972.967) e Fundo de Investigação especializada para o Programa de Doutorado da Educação Superior (nº 20092104110018) e Programa de Liaoning excelentes talentos na Universidade. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

o cancro do pulmão é uma das principais causas de todas as mortes relacionadas com cancro em todo o mundo e sua incidência está a aumentar [1], [2]. A maioria dos casos de câncer de pulmão diagnosticados são cancros do pulmão de pequenas células não-(NSCLCs). Embora três modalidades terapêuticas (ressecção cirúrgica, quimioterapia e radioterapia) foram estabelecidos, a sobrevivência a longo prazo dos pacientes com câncer de pulmão ainda é geralmente pobres [3]. Uma variedade de complexo genética, epigenética, e factores micro-ambientais desempenham um papel importante na sobrevivência e colonização de células tumorais em novos locais [4], [5]. Melhorias na compreensão dos processos moleculares envolvidos na carcinogênese pulmonar levou a novas opções de tratamento com pequenas moléculas terapêuticas e vacinas demonstram incentivar potencial. A melhor definição de patogénese do cancro do pulmão, biomarcadores úteis e novos alvos terapêuticos são tarefas exigentes.

MTA3 foi originalmente encontrado como um membro de uma família pequena proteína (incluindo MTA1, MTA2 e MTA3), que servem como subunidades do /NURD complexo remodelação da cromatina Mi-2 [6] – [13]. Relatórios de MTA3 em cancros humanos foram bastante limitada inicialmente. MTA3 foi relatado para participar no desenvolvimento de linfócitos B, em linhas de células de plasmacitoma, a superexpressão de BCL6 e MTA3 reprimidos genes de diferenciação celular de plasma [14]. Desde então, no entanto, a expressão de MTA3 tem encontrado para ser reduzida no cancro da mama, cancro do endométrio e do ovário [15] – [17]. MTA3 upregulation impede EMT reprimindo directamente

Snail

expressão, os níveis da proteína caderina-E, assim, upregulating no cancro da mama [13]. MTA3 também reprime a transcrição Wnt4 e secreção, inibindo genes Wnt-alvo em células epiteliais mamárias [18]. Um estudo recente descobriu que MTA3 facilita G2 progressão /M em células da granulosa de rato proliferação [19]. Além disso, MTA3 foi relatado como um marcador de prognóstico independente e desfavorável em carcinoma não-endometriod uterina [20]. Estes estudos sugeriram diferentes papéis de MTA3 em diferentes tipos de cancros humanos. No entanto, não foi analisada a expressão da proteína de MTA3 em câncer de pulmão primário e sua relação com fatores clínico-patológicos. Portanto, os papéis biológicos de MTA3 em células de câncer de pulmão ainda não estão claros. A fim de abordar as questões acima, examinamos a expressão da proteína MTA3 in-não-pequenas células do cancro do pulmão tecidos por imuno-histoquímica. Além disso, exploramos a associação de MTA3 com a proliferação de células em várias linhas celulares de cancro do pulmão.

Materiais e Métodos

Pacientes e espécimes

Este estudo foi realizado com a aprovação do conselho de revisão institucional local na China Medical University. consentimento informado por escrito foi obtido de todos os pacientes e todas as investigações clínicas foram realizadas de acordo com os princípios expressos na Declaração de Helsinki. 108 casos de amostras com NSCLC foram obtidos a partir do primeiro hospital afiliado da China Medical University, durante o período de 2005 a 2008. O diagnóstico histológico e grau de diferenciação tumoral foram definidos através da avaliação de hematoxilina e secções de tecido manchado de eosina, de acordo com as diretrizes de classificação da Organização Mundial de Saúde. Todos os 108 espécimes foram reavaliados em relação aos seus subtipos histológicos, estado de diferenciação, e os estágios tumorais. Para amostras de NSCLC, carcinoma de células escamosas e adenocarcinoma foram identificados em 44 e 64 dos 108 casos, respectivamente. Metástases linfonodais foram observadas em 43 pacientes. O sistema de estadiamento p-TNM da União Internacional Contra o Câncer (7th Edition) foi utilizada para classificar as amostras em estágios I (n = 47), II (n = 36), III (n = 25).

linhas celulares

A549 e células H157 linhas foram obtidos a partir de American Type Culture Collection (Manassas, VA, EUA). As células foram cultivadas em meio RPMI 1640 (Invitrogen, Carlsbad, CA, EUA) contendo 10% de soro fetal de vitelo (Invitrogen), 100 UI /ml de penicilina (Sigma, St. Louis, MO, EUA), e 100 ug /ml de estreptomicina ( Sigma). As células foram cultivadas em placas de cultura de tecidos estéreis e passadas a cada 2 dias utilizando tripsina a 0,25% (Invitrogen).

A imuno-histoquímica

espécimes de tumores excisados ​​cirurgicamente foram fixadas com 10% de formalina neutra, embebidos em parafina e Prepararam-se 4 mm de espessura. A imunocoloração foi realizada utilizando o método do complexo avidina-biotina peroxidase (Ultra Sensível TM, Maixin, Fuzhou, China). Os cortes foram desparafinados em xileno, re-hidratadas em série de álcoois graduados e fervidas em tampão de citrato 0,01 M (pH 6,0) durante 2 minutos numa autoclave. A actividade da peroxidase endógena foi bloqueada utilizando peróxido de hidrogénio (0,3%), que foi seguido de incubação com soro de cabra normal para reduzir a ligação não específica. As secções de tecido foram incubadas com um anticorpo policlonal de coelho MTA3 (1:150 diluição) (Proteintech, Chicago, IL, EUA). De imunoglobulina de ratinho foi utilizado como um controlo negativo. A coloração com todos os anticorpos primários foi realizada à temperatura ambiente durante 2 h. IgG de soro de cabra anti-ratinho biotinilado, ou IgG de cabra biotinilado anti-soro de coelho (pronto a utilizar) (Maixin, Fuzhou, China) foi usado como anticorpos secundários. Após a lavagem, as secções foram incubadas com conjugado de peroxidase de rábano-estreptavidina-biotina, seguido de tetracloridrato de 3,3′-diaminobenzidina para desenvolvimento da reacção de peroxidase. Contracoloração das secções foi feito com hematoxilina e, em seguida desidratação do etanol foi realizada antes da montagem.

Dois investigadores independentes examinaram todos os slides tumorais aleatoriamente. Cinco pontos de vista foram examinados por lâmina, e 100 células observadas per view em 400 × ampliação. A imunocoloração de MTA3 foi pontuada numa escala semi-quantitativa, avaliando em áreas tumorais representativos com uma maior percentagem de células e intensidade da imunocoloração do que as células de controlo. coloração nuclear das células tumorais foi considerado imunocoloração positiva. A intensidade da coloração nuclear MTA3 foi também pontuada como 0 (sem coloração), 1 (fraca), ou 2 (marcado). contagens percentuais foram designados como 1 (positivo 1-25%), 2 (26-50%), 3 (51-75%) e 4 (76-100%). Os escores de cada amostra de tumor foram multiplicados para dar uma pontuação final de 0-8 e a expressão total de MTA3 foi determinada como qualquer expressão negativa ou baixa (-) com uma pontuação 4 ou superexpressão (+) com uma pontuação ≥4 .

quantitativa PCR em tempo real (Método SYBR verde)

quantitativa PCR em tempo real foi realizado utilizando SYBR Green PCR Master mix (Applied Biosystems) num volume total de 20 uL em 7900HT rápido real-Time PCR System (Applied Biosystems) como se segue: 95 ° C durante 30 s, 40 ciclos de 95 ° C durante 5 s, e 60 ° C durante 30 s. Um passo de dissociação foi realizada para gerar uma curva de fusão para confirmar a especificidade da amplificação. β-actina foi utilizado como o gene de referência. Os níveis relativos de expressão de genes foram representados como referência -Ct gene ΔCt = Ct, e a mudança de dobragem da expressão do gene foi calculada pela 2

-ΔΔCt método. As experiências foram repetidas em triplicado. As sequências dos iniciadores utilizados foram: para a frente MTA3, 5′-CCCACCCAGTCAGAAGAAGA-3 ‘, reverso MTA3, 5′-TTGGACTCCCAGTGTTTCG-3′; β-actina para a frente, 5’-ATAGCACAGCCTGGATAGCAACGTAC-3 ‘, reverso β-actina, 5′- CACCTTCTACAATGAGCTGCGTGTG-3′; Caracol para a frente, 5’-CCTCAAGATGCACATCCGAAGCCA-3 ‘, reverso do caracol, 5′-AGGAGAAGGGCTTCTCGCCAGTGT-3′; Slug para a frente, 5’-AGATGCATATTCGGACCCAC-3 ‘, reverso Slug, 5′-CCTCATGTTTGTGCAGGAGA-3’.

Análise Western Blot

Total de proteínas a partir de linhas de células foram extraídas em tampão de lise (Thermo Fisher Scientific, Rockford, IL) e quantificada através do método de Bradford. Cinquenta microgramas de proteína foram separadas por SDS-PAGE (12%). Após a transferência, os fluoreto de polivinilideno (PVDF) membranas (Millipore, Billerica, MA, EUA) foram incubadas durante a noite a 4 ° C com os anticorpos seguintes: MTA3 (1:1000; Proteintech, Chicago, IL, EUA), beta-actina ( 1:500; Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA), ciclina A (1:1000), ciclina B (1:1000), ciclina D1 (1:1000), CDK2 (1:1000), CDK4 (1:1000 ), CDK6 (1:1000), e p-Rb (1:2000) (Cell Signaling Technology, Boston, MA, EUA). Após incubação com IgG anti-ratinho acoplado com peroxidase e anti-IgG de coelho (Santa Cruz Biotechnology) a 37 ° C durante 2 h, as proteínas ligadas foram visualizadas utilizando ECL (Thermo Fisher Scientific) e detectados utilizando sistemas bioimaging (UVP Inc., Upland , CA, EUA). Os níveis relativos de proteína foram calculados com base em β-actina como controlo de carregamento.

pequeno ARN interferente Tratamento

Os siRNAs para MTA3 (siRNAa, 5′-CAGUGUAGAUUAUGUGCAATT-3 ‘e siRNAb, 5 siRNAs de controlo negativo (5’-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3 ‘)’ -AGAUAAGCAUGCUAAAGAATT-3 ‘) e foram adquiridos da Genepharma (Genepharma, Xangai, China). Para transf ecções, as células foram semeadas numa placa de 24 poços 24 h antes do experimento. As células foram transfectadas com ARNsi utilizando DharmaFECT 1 (0,20 uL /​​poço; ThermoFisher Scientific) de acordo com o protocolo do fabricante. Os níveis de ARNm e de proteína foram avaliadas 48 h após a transfecção.

Teste de Proliferação de Células e Ensaio de Formação de Colónias

O ensaio de proliferação celular foi realizada por meio de contagem celular Kit-8 solução (Dojindo, Gaithersburg, MD ) de acordo com o protocolo do fabricante. Resumidamente, as células foram semeadas a uma concentração de 5 × 10

3 células /100 uL /​​poço em placas de 96 poços de cultura e tratadas com 10 ul /poço de celular de contagem Kit-8 solução durante as últimas 4 horas de cultura. A densidade óptica do poço foi medido a 450 nm utilizando um leitor de microplacas. Para o ensaio de formação de colónia, as células foram semeadas em três pratos de cultura de células de 6 cm (1,000 por prato para A549 e linhas de células H157) e incubaram-se durante 12 dias. As placas foram lavadas com PBS e coradas com Giemsa. As colónias com mais de 50 células foram contadas.

ciclo celular Análise

As células (500.000) foram semeadas em pratos com 6 cm de cultura de tecidos. Doze horas mais tarde, as células foram transfectadas com as quantidades indicadas de ARNsi. As células foram sincronizadas após privação de soro durante 20 h e o tempo tomado pontos às 24 h após a incubação em meio de soro a 10% para determinar os efeitos sobre o ciclo celular. As células foram colhidas, fixadas em paraformaldeído a 1%, lavadas com solução salina tamponada com fosfato (PBS) e coradas com 5 mg /ml de iodeto de propidio em PBS suplementado com ARNase A (Roche, Indianapolis, IN) durante 30 min à temperatura ambiente. Os dados foram coletados por meio de fluxo BD Calibur citômetro.

Análise Estatística

SPSS versão 16.0 para Windows foi utilizado para todas as análises. O teste do qui-quadrado foi usado para examinar possíveis correlações entre a expressão MTA3 e fatores clínico-patológicos. O método de Kaplan-Meier foi utilizado para estimar a probabilidade de sobrevida do paciente, e as diferenças na sobrevivência dos subgrupos de pacientes foram comparadas pelo teste de log-rank de Mantel. O teste t de Student foi utilizado para comparar outros dados. O valor de p foi baseada na análise estatística dos dois lados, e p 0,05 foi considerado estatisticamente significativo

Resultados de

1.. Superexpressão de proteína MTA3 em células não pequenas do pulmão Cancer tecidos

Foi analisada a expressão da proteína de MTA3 em 108 espécimes NSCLC e seus correspondentes tecidos normais por imuno-histoquímica. a expressão da proteína MTA3 foi observada nos compartimentos nucleares de células de tumor, enquanto o epitélio brônquico normais apresentaram coloração negativa ou baixa (Figura 1A-F). Nós investigamos a relação entre a expressão MTA3 total e parâmetros clínicos. Como mostrado na Tabela 1, não houve diferença estatística entre a superexpressão MTA3 e características de envelhecimento (p = 0,1404), sexo (p = 0,8683), o estado do tumor (p = 0,1556), diferenciação (p = 0,1985) e tipo de tumor (p = 0,0604). No entanto, os pacientes com expressão alta MTA3 mostraram aumento metástases (p = 0,0009) e teve um estágio avançado de NSCLC (p 0,0001). Analisamos ainda mais a relação entre a expressão da proteína MTA3 eo prognóstico de pacientes com câncer de pulmão e descobriram que a superexpressão MTA3 correlacionada com uma redução na sobrevida global (p 0,05) (Figura 2A). MTA3 superexpressão correlacionados com os pobres sobrevivência de pacientes em Estágio I (p 0,05), mas não de pacientes com estágio II-III NSCLC (p = 0,17) (Figura 2 B, C)

A.. coloração negativa no epitélio brônquico normal no tecido pulmonar não-cancerosas. B. Controlo negativo utilizando imunoglobulina de coelho. C. coloração MTA3 fraco no adenocarcinoma de pulmão. D. coloração MTA3 fraco em um caso de carcinoma de células escamosas. E. MTA3 coloração positiva num caso de adenocarcinoma do pulmão. coloração F. positiva MTA3 em um caso de carcinoma de células escamosas.

A. A taxa de sobrevida global foi significativamente menor nos pacientes com expressão MTA3 positivo do que em pacientes sem. B. A taxa de sobrevida em pacientes com estágio I NSCLC. C. A taxa de sobrevida em pacientes com estágio II-III NSCLC.

2. MTA3 depleção inibe a proliferação em linhas celulares de cancro de pulmão

A expressão de MTA3 foi analisado através de Western blotting e em tempo real de PCR num painel de linhas celulares de cancro de pulmão (Figura 3 A, B). Verificou-se que o nível de expressão MTA3 em H157 e A549 células foi maior do que as outras células lines.To explorar a função biológica de MTA3 em células de cancro de pulmão, utilizou-siRNA para knockdown

expressão MTA3

em ambos H157 e A549 linhas de celular. Dois siRNAs MTA3 (a e b), tendo como alvo diferentes

MTA3

sequências, foram avaliados. O siRNAa foi mais eficaz na redução da

MTA3

expressão; assim, ele foi usado para estudos posteriores (Figura 3 C, D). Para confirmar a capacidade de siRNAa de regular negativamente MTA3 (e, portanto, as suas funções transcricional repressão) também examinaram a expressão da MTA3 genes alvo a jusante

Snail

e

Slug

. Como esperado, o tratamento com MTA3 siRNAa regulada a expressão de mRNA de

Snail

(Figura 3E). CCK-8 ensaio mostrou que a depleção MTA3 reduzida proliferaion celular em ambas as linhas celulares. Análise de formação de colónias mostrou que a depleção de MTA3 em células H157 e A549 levou a uma redução significativa do número e tamanho de focos (controlo A549 vs MTA3si: 275 ± 7 vs 81 ± 10; controlo H157 vs MTA3si: 476 ± 10 vs 276 ± 32), o que sugere que MTA3 modula a proliferação de células de cancro de pulmão (Figura 4).

os níveis a e B. Expressão de MTA3 foi analisada por western blot e em tempo real de PCR num painel de linhas celulares de cancro de pulmão. análise de mancha C. ocidental de duas eficiências MTA3 siRNA em células cancerosas. D. em tempo real A análise de PCR de duas eficiências MTA3 siRNA em células cancerosas. tratamento E. MTA3 siRNA regulada caracol expressão de mRNA.

A. ensaio CCK-8 foi realizado após o tratamento MTA3 siARN. Observou-se uma redução da absorção (p 0,05 no dia 5 para ambos A549 e H157). B. Avaliação de potenciais clonogénicas das células cancerosas com depleção de MTA3. Números de colónias foram contadas. O número de colónias formadas pelas células tratadas com siRNA MTA3 era muito menos do que a de células de controlo (p 0,05). Colunas, quer dizer; Barras, DP. * P . 0,05

3. Depleção de MTA3 downregulated Cyclina e Ciclina D1 Expressão em células de cancro de pulmão

ciclo celular As análises foram realizadas em células A549 e H157 com ou sem knockdown MTA3, e descobriram que a percentagem de células na fase G1 foi aumentada em células com knockdown MTA3, enquanto que a percentagem de células na fase S diminuída nestas células em comparação com células de controlo (controlo A549 vs MTA3si: fase G1: 62,59% ± 0,9 vs 79,71% ± 1,5; fase S: ​​31,27% ± 0,52 vs 15,21% ± 0,88; controle H157 vs MTA3si: fase G1: 53,83% ± 1,4 vs 64,61% ± 1,8; fase S: ​​32,64% ± 0,8 vs 18,59% ± 0,48). Estes resultados indicam que o esgotamento de MTA3 induz a paragem do ciclo celular em G1 /S limite. Não houve alteração significativa na proporção de células em fase G2 (Figura 5). Para investigar o mecanismo subjacente a paragem do ciclo celular, foram examinados os níveis das proteínas relacionadas com o ciclo utilizando células colhidas no mesmo ponto de tempo que as células utilizadas na análise de ciclo celular. Foram testados os efeitos de knockdown MTA3 sobre os níveis de ciclina A, ciclina D1, ciclina B, CDK2, CDK4, CDK6 e p-Rb. A análise Western blot revelou que o knockdown de MTA3 diminui os níveis de proteína de ciclina A, ciclina D1 e expressão de p-Rb (Figura 6). Juntos, estes resultados sugerem que a inibição da expressão MTA3 induz a paragem do ciclo celular na transição G1-S, suprimir o crescimento de células de cancro de pulmão.

A percentagem de fase G1 foi aumentada em células com knockdown MTA3 (H157 e A549, p 0,05), ao passo que as percentagens de fase S (H157 e A549, p. 0,05) foi diminuída nestas células em comparação com células de controlo

análise de Western blot de uma série de factores relacionados com o ciclo celular mostraram os níveis de proteína da ciclina a, D1 e p-Rb foram diminuiu após o silenciamento MTA3 em H157 e células A549, enquanto não houve mudança significativa da ciclina B, CDK2, CDK4 e expressão CDK6.

Discussão

a regulação negativa da MTA3 foi relatado no cancro da mama, cancro do endométrio e do ovário [15] – [17], enquanto a regulação positiva da expressão MTA3 tem sido implicado no cancro coriônica humana [21]. MTA3 superexpressão serve como um marcador de prognóstico para avaliar a sobrevivência de pacientes com câncer não-endometriod uterinos [20]. No entanto, o padrão de expressão de MTA3, bem como a sua correlação com fatores clínicos e patológicos ainda não tinha sido definido no cancro do pulmão humano. Neste estudo, foi demonstrado que a expressão da proteína MTA3 nos tecidos de pulmão humano é superior correspondente tecidos pulmonares normais. Houve uma correlação estreita entre estágio MTA3 upregulation pTNM e metástase nodal. É importante ressaltar que fomos capazes de mostrar que MTA3 correlaciona-se com os pobres sobrevivência de pacientes com câncer de pulmão. Isto estava de acordo com os dados anteriores que sugeriram que MTA3 desempenha um papel importante na progressão do cancro do pulmão. Para validar o papel potencial de MTA3 no desenvolvimento do cancro do pulmão, que em primeiro lugar verificado o seu nível de expressão em várias linhas de células e utilizaram-se células A549 e H157 (com níveis relativamente elevados MTA3) para estudos posteriores. Nós empregamos siRNA para knockdown expressão MTA3 nestas duas linhas celulares. Encontramos uma habilidade formação capacidade de proliferação e colônia prejudicada em ambas as linhas celulares após knockdown MTA3. Assim, nosso estudo sugere que

MTA3

funciona como um oncogene no desenvolvimento do câncer de pulmão.

Um estudo rencent informou que t o esgotamento dos MTA3 endógena nas células da granulosa principal do mouse diminui significativamente ciclina B1 e ciclina expressão B2, diminui a proliferação celular e increaseds a percentagem de células em G2 /M, o que pode ser revertido pela co-expressão de MTA3 exógeno [19]. A maioria dos factores de crescimento de células proliferativas influenciar por acção sobre a progressão do ciclo celular. Assim, empregue análise do ciclo celular e encontraram um aumento em células MTA3 deficiente na fase G1 e uma diminuição na fase S em comparação com células de controlo. A inibição do G1 para S transição na progressão do ciclo celular pode explicar os mecanismos por trás dos efeitos MTA3 sobre a proliferação de células de câncer de pulmão.

Para encontrar os potenciais mecanismos de MTA3 na regulação do ciclo celular, que examinou o efeito do knockdown MTA3 sobre uma série de moléculas-ciclo celular relacionados. Nós verificamos a expressão de ciclinas (A, B e D1), CDK2, CDK4, CDK6 e P-Rb. Nós descobrimos que os níveis de cyclinA, D1 e p-Rb diminuiu após knockdown MTA3. A ciclina D1 interage com Cdk4 /6 para formar um complexo que fosforila Rb e regula a proliferação celular por meio do controle a progressão através do ponto de restrição na G1-fase do ciclo celular [22]. A ciclina D1 é sobre-expresso numa variedade de cancros e está associada à proliferação de células de cancro [23] – [25]. A ciclina A é necessária para que a célula progride através da fase S [26]. A ciclina B é uma ciclina mitótica e a sua acumulação única se encontra na zona de transição G2-M [27]. Assim, os nossos resultados mostrando a diminuição dos níveis de ciclina A, D1, e p-Rb correlacionam-se com a diminuição dos níveis de células em S e fase G2 e o aumento dos níveis de células em fase G1 após knockdown MTA3, sugerindo MTA3 desempenha um papel importante no controle do ciclo celular de células de câncer de pulmão.

em conclusão, o presente estudo showes que MTA3 é abundante em NSCLC e correlaciona-se com seu estágio avançado e mau prognóstico. Nosso estudo também demonstra que a superexpressão de MTA3 pode promover a proliferação celular através da regulação do ciclo celular.

Reconhecimentos

Os autores gostariam de agradecer ao Dr. Qingchang Li pelo seu excelente assistência técnica.