Abstract

-Metástase associado no câncer de cólon 1 (MACC1) foi recentemente identificada como um novo indicador de prognóstico independente para ocorrência de metástases, a sobrevida global ea sobrevida livre de câncer para os pacientes com câncer de cólon e outros tumores sólidos . Neste estudo, foram investigados o papel de MACC1 no desenvolvimento e progressão do carcinoma da pélvis renal, uma forma de carcinomas do tracto superior uroteliais. MACC1 proteína foi encontrado no citoplasma bem como no núcleo das células epiteliais de transição da pélvis renal normais em ensaios de imuno-histoquímica (IHC). exames IHC quantitativos revelaram que MACC1 abundância anormal em tecidos cancerosos pode representar um indicador biológico clinicamente sugestivos de malignidade do tumor na pelve renal. Além disso, a investigação da associação dos níveis de proteína MACC1 com os parâmetros clínico neste estudo sugeriu uma correlação de expressão MACC1 com o estágio do tumor-nódulo-metástase e grau histopatológico de doentes com carcinoma da pelve renal, com níveis de proteína MACC1 elevados frequentemente associadas com maior agressividade da doença. Além disso, tanto a sobrevivência livre de doença e sobrevivência global dos doentes no grupo de expressão elevada MACC1 foram significativamente mais baixos do que aqueles no grupo de baixa expressão. A análise multivariada com um modelo de riscos proporcionais de Cox sugeriu que MACC1 é realmente um indicador prognóstico independente de sobrevida global ea sobrevida livre de câncer para pacientes com carcinoma de pelve renal. Assim, MACC1 pode representar um candidato promissor biomarcador de prognóstico, bem como um potencial alvo terapêutico para esta doença

citação:. Hu H, Tian D, Chen T, R Han, Sun Y, Wu C (2014) metástase associados do cancro do cólon 1 é um romance de Biomarcadores Survival-relacionado para pacientes humanos com renal Pelvis Carcinoma. PLoS ONE 9 (6): e100161. doi: 10.1371 /journal.pone.0100161

editor: William B. Coleman, University of North Carolina School of Medicine, Estados Unidos da América

Recebido: 04 de fevereiro de 2014; Aceito: 22 de maio de 2014; Publicação: 20 de junho de 2014

Direitos de autor: © 2014 Hu et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este trabalho foi apoiado por uma bolsa da National Science Foundation Natural da China (Grant Number: 30700834), e um outro subsídio da Natural Science Foundation de Tianjin (Número Grant: 12ZCDZSY16600). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

Como um tumor maligno que surge a partir do epitélio transicional (um tecido epitelial altamente elástico que consiste em múltiplas camadas de células epiteliais que revestem a superfície interior dos órgãos do aparelho urinário), carcinoma de células transicionais, renal ou carcinoma urotelial renal (UC ) representa o quarto cancro mais comum no mundo [1]. Ocorrendo na pelve renal e ureter, carcinoma urotelial do trato superior (UTUC) é uma doença que afeta principalmente pessoas entre as idades de 50 e 75. Patologicamente, UTUC geralmente é mais invasivo do que a bexiga UC (60% vs. 15%) e é frequentemente associada a uma maior malignidade [2], [3], [4]. UTUC na pélvis renal, ou o carcinoma da pelve renal (RPC) representa aproximadamente 5% a 6% de todos os UC renais e são mais difíceis de diagnosticar do que bexiga UC. Na verdade, a taxa de sobrevida em 5 anos dos pacientes RPC é menor do que a encontrada na bexiga UC como contas a metástase por cerca de 70% de morte específica por câncer em RPC [5]. Notoriamente difícil para o diagnóstico clínico, UTUC representa um enorme desafio para a caracterização de imagens radiológicas, bem como para a visualização endoscópica e biópsia. Atualmente, existem cinco fatores que são as variáveis ​​mais freqüentemente avaliadas para carcinoma urotelial estratificação de risco antes da terapia definitiva: idade, arquitetura tumor, citologia, o grau do tumor biópsia, e na presença de hydronephrosisand. No entanto, embora os fatores preditivos patológicas como o estádio do tumor, grau, carcinoma in situ, invasão linfática e invasão linfonodal pode ser mais preciso do que os outros fatores clínicos para prever a recorrência da doença e sobrevivência [6] paciente, tais informações geralmente não está disponível antes que o paciente sofreu uma perda significativa de reserva renal e é menos provável que seja capaz de suportar tratamentos agressivos.

nos últimos 5 anos, os pesquisadores ganharam grande conhecimento sobre a biologia e comportamento clínico de UTUC. Um progresso considerável foi feito na identificação de indicadores moleculares prognósticos para pacientes com carcinoma urotelial e pode aumentar a precisão da previsão de risco. moléculas de sinalização que estão relacionados com os processos celulares, tais como angiogénese, a morte celular, a adesão celular, e proliferação de células têm sido investigados extensivamente como potenciais indicadores de prognóstico para o desenvolvimento e progressão da doença, tais como p53, EGFR, survivina, Bcl-2 , Ki-67, e-caderina, hipoxia-inducible factor 1-a (HIF1a), componente de ARNm de telomerase, metaloproteinases de matriz (MMP-2, MMP-9, TIMP1 e TIMP-2), e mais (revisto em [7], [ ,,,0],8]). Identificadas numa análise de todo o genoma como um gene expresso diferencialmente em tecidos de cancro do cólon humano e metástases,-metástases associadas em cancro do cólon 1 (MACC1) tem sido sugerido como um indicador de prognóstico independente de formação de metástases e sobrevida livre de metástases para pacientes com carcinoma de cólon [9]. Detectado numa variedade de tecidos normais, tais como intestino, estômago, glândula pituitária, do rim, da traqueia, do pâncreas, glândula mamária, medula óssea, ovário, pulmão, coração, fígado, e B-linfoblastos, MACC1 é mais abundante nos tecidos resultantes a partir da endoderme (por exemplo, intestino e estômago) do que os tecidos provenientes de mesoderme (por exemplo, rim, coração) ou ectoderma (por exemplo, pituitária e glândula mamária). É concebível, MACC1 pode desempenhar um papel na organogénese derivadas de endoderme durante o desenvolvimento embrionário. Originalmente descoberto no cancro do cólon, sobre-expressão MACC1 foi demonstrada para promover a proliferação do tumor, invasão e metástase em um amplo espectro de tumores sólidos, incluindo cancros gastrointestinais (por exemplo, cancro do cólon [9], [10], carcinoma gástrico [11]), hepatocelular carcinoma de [12], [13], osteossarcoma [14], glioma [15], [16], do pulmão [17], [18], [19], esofágica [20], pancreático [21], do ovário [22] , cervical e câncer de mama [23] (revisto em [24]). Além disso, o exame de níveis de expressão MACC1 em tecidos tumorais de vários estágios clínicos revelaram que o nível de expressão MACC1 mais elevada foi observada mais frequentemente em tecidos tumorais malignas dos pacientes, que demonstram frequentemente características clinicopatológicas mais desfavoráveis, incluindo metástases do linfonodo reforçada e metástases distantes metachronously desenvolvidos . Em outros casos, tais como em gliomas humanos raramente metastático, a expressão do gene é mais dramaticamente MACC1 regulados positivamente em tecidos de maior malignidade, que reflecte a deterioração dos sintomas da doença [15]. MACC1 expressão elevada tem sido sugerido para assim servir como um indicador de prognóstico independente para a recorrência de cancro, potencial exacerbação de benigno em tumores malignos, ou em certas circunstâncias, o aparecimento de metástases. Além disso, também MACC1 emergiu como um indicador de previsão de sobrevivência livre de recidiva e sobrevivência global (OS) de doentes com cancro em diversos estudos quantitativos realizados em vários tumores sólidos (revisto em [24]). Estabelecido como um novo indicador de prognóstico para a metástase em uma ampla gama de tumores sólidos, MACC1 também tem sido proposta para ser um candidato alvo para o desenvolvimento de estratégias terapêuticas para intervenção com a progressão do tumor e metástases.

Na nossa presente estudo, investigou-se a papel de MACC1 no desenvolvimento e progressão do carcinoma da pelve renal humana. Demonstrámos em ensaios imuno-histoquímicos do padrão de expressão de proteína MACC1 em espécimes de tecidos renais humanas de carcinoma do pélvis, bem como na pélvis renal normal. Além disso, examinou a correlação entre a superexpressão MACC1 e os parâmetros clínico (incluindo idade, sexo, tumor-nódulo-metástase (TNM) estágio e grau patológico), bem como a sobrevida livre de doença (DFS) e sobrevida global (OS) em pacientes com carcinoma de pelve renal. Finalmente, também examinada usando univariada e multivariada a elegibilidade de MACC1 como um novo indicador de prognóstico independente para o carcinoma de pelve renal.

Materiais e Métodos

declaração Ética

, pacientes e amostras de tecido

Um total de 73 pacientes RPC foram recrutados para este estudo em janeiro de 2002 e janeiro de 2005. A RPC pacientes participaram deste estudo incluiu 52 homens e 21 mulheres. A idade média foi de 61,2 anos, com um intervalo de 48-79 anos. Os pacientes foram submetidos nephroureterectomy radical com registros de história clínica completa do Departamento de Cirurgia Urológica, a Segunda Hospital da Universidade de Medicina de Tianjin. Os pacientes que desenvolveram metástases e receberam quimioterapia pós-operatória ou de radioterapia foram excluídos deste estudo. secções de tecido normal neste estudo eram derivados de 32 pelve renal não-tumorais adjacentes tecidos epiteliais (ANRPETs, pelo menos, 2 cm de distância a partir do bordo do tumor) e 34 da pelve renal tecidos normais epiteliais (NRPETs, tecidos uroteliais de pacientes com cancro renal, que são menos de 3 cm de diâmetro, com polaridade celular tecido intacto e são considerados tecidos epiteliais normais).

Todos os diagnósticos de RPCs foram confirmados e ainda classificados pelo exame histopatológico no pós-operatório, seguindo os critérios de 2004 Organização Mundial de Saúde Classificação. Tumorais graus de diferenciação celular foram classificados de acordo com os critérios de 1.997 Organização Mundial de Saúde Classificação. Tumor estágio clínico foi determinado de acordo com a sétima edição do TNM Classification do Comité Misto americana sobre o Câncer. Cada amostra foi fixada em formalina, processados ​​por rotina, e embebido em parafina. dados de acompanhamento pós-operatório foram obtidos de todos os pacientes, com um período de acompanhamento médio de 41,5 meses (variando de 8 a 54 meses). Este estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética da Segunda Hospital, Tianjin Medical University, e consentimento informado por escrito para o uso das amostras de cada paciente inscrito foi obtido em conformidade.

Os dados clínicos coleção

Todos dados clínicos foram prospectivamente coletadas, processadas e armazenadas de acordo com os critérios /normas descritas acima. As variáveis ​​clínicas incluíram sexo, idade, tipo histológico, estágio TNM e grau nuclear (Tabela 1). dados de acompanhamento foram coletados em exames físicos intercalares dos pacientes. Para cada paciente, a sobrevida livre de doença (DFS) neste estudo é definido como o intervalo de tempo entre a data do diagnóstico até à primeira recorrência (incluindo recorrência local ou regional e metástase sistêmica). A sobrevida global (OS) é definido como o intervalo entre a data da cirurgia ea data de morte. Os pacientes, que estavam vivos no último follow-up foram censurados na data da sua última visita à clínica, e os pacientes, que morreram de outras causas que RPC foram censurados no momento da sua morte.

imuno-histoquímica (IHQ)

os blocos de parafina representativos exibindo tecidos tumorais RPC típicos, e tecidos normais, incluindo ANRPETs e NRPETs foram selecionadas para coloração imuno-histoquímica depois que examinou cuidadosamente as lâminas de coloração hematoxilina-eosina de todos os espécimes cirúrgicos. Foi realizada coloração IHC para MACC1 por um método de polímero conjugado com peroxidase de duas etapas usando kit Chemmate Detecção Envision. Resumidamente, os cortes foram de-manteiga com xileno e re-hidratadas através de uma série graduada de etanol. As lâminas foram então sujeitas a recuperação de epítopo induzida por calor por microondas em tampão de citrato 0,01 M (pH 6,0) durante 18 min e foram arrefecidas durante 30 min à temperatura ambiente. As lâminas foram incubadas em peróxido de hidrogénio a 3% durante 10 minutos para inactivar a peroxidase endógena. As secções foram então incubadas com anticorpo anti-MACC1 (policlonal de ratinho, Ig G, ab106579; 01:50 diluída, Abcam, Cambridge, Reino Unido) como anticorpos primários durante a noite a 4 ° C numa câmara humidificada. Depois de lavada em PBS, as secções foram incubadas com imunoglobulina de coelho anti-ratinho biotinilada (Dakopatts, Glostrup, Dinamarca) diluída a 1:200 durante 30 minutos, seguido de mais 30 minutos de incubação com estreptavidina conjugada com peroxidase (Dakopatts) diluído em 1: 300. Subsequentemente, as secções foram submetidas a diaminobenzidina e depois contrastadas com hematoxilina. Secções de tecidos de câncer de cólon humano foram incluídos como controlos positivos em cada corrida. Os controles positivos apresentaram coloração positiva clara e a intensidade foi muito semelhante entre as diferentes corridas. O controlo negativo foi feito com albumina de soro de bovino não-imune como uma substituição do anticorpo primário com a mesma concentração em cada processo de coloração. As secções foram lavadas três vezes com PBS entre cada passo.

A avaliação quantitativa de coloração imuno-histoquímica

A coloração imuno-histoquímica de MACC1 foi quantitativamente analisada por avaliação visual e Imagem Pro-Plus neste estudo. pontuação de avaliação visual dos níveis de expressão MACC1 foi realizada por um patologista seguido de reexame /reconfirmação de outro patologista. A proporção de células tumorais foi pontuado como se segue: 0 (sem células tumorais positivas), 1 ( 10% de células tumorais positivas), 2 (células tumorais positivas 10-50%), e 3 ( células tumorais positivas de 50% ). A intensidade de coloração foi classificada de acordo com os seguintes critérios: 0 (sem coloração), 1 (fraca coloração = amarela clara), 2 (moderada = coloração amarela castanha), e 3 (= forte coloração castanha). O índice de marcação foi calculado multiplicando a intensidade de coloração e pontuação a proporção de células tumorais positivas. Usando este método de avaliação, foram avaliados os níveis de expressão de proteína MACC1 em benigna pelve renal epitélios e lesões malignas através da determinação do índice de coloração, resultando em escores como 0, 1, 2, 3, 4, 6 ou 9. Para efeitos estatísticos, pontuação IHC foram agrupados em dois grupos, grupo expressão baixa (≤4) eo grupo expressão elevada (≥6).

Quanto ao sistema de pontuação imagem Pro-Plus, expressão MACC1 foi avaliada quantitativamente usando a imagem Pro Plus análise 6.0 sistema (Media Cybernetics, Silver Spring, MD) introduzido por Xavier e os resultados foram reexaminados por mais dois patologistas de forma independente após a primeira rodada de análise. Resumidamente, 10 imagens digitais em 1360 × 1024 pixels de resolução e 400 × ampliação foram capturados pela câmera CCD DP 70 (Olympus, Japão) acoplado a uma Olympus AX-70 microscópio (Olympus). Quantificação da área manchada e a densidade óptica integrada (IOD) de MACC1 em cada imagem foi determinada depois e submetida para análise posterior. densidade óptica média (AOD = IOD /Area) foi usado neste estudo para análise estatística.

Para facilitar a análise estatística para dados de sobrevivência, todo o grupo de pacientes foram divididos em dois grupos, grupo expressão alta MACC1 (60,6 %) e do grupo baixa expressão MACC1 (39,4%), respectivamente.

a análise estatística

Os resultados foram expressos como média ± desvio padrão. Comparação entre dois grupos foi realizada utilizando uma amostra independente

t

teste ou não paramétrico de 2 caudas

t

test (teste de Mann-Whitney). One-way ANOVA (teste F) foi realizado para comparar os parâmetros para vários grupos. Correlação entre os níveis de expressão de MACC1 (quantitativamente medidos de acordo com MACC1 força coloração imuno-histoquímica) e características clínico-patológicas em pacientes RPC foi avaliada por meio do teste do coeficiente de correlação de Pearson. Todas as análises estatísticas foram realizadas utilizando software SPSS (versão 17.0, SPSS, Inc., Chicago, IL). teste de 2-sided foi adotada neste estudo, e

p Art 0,05 é considerado estatisticamente significativo. A taxa de sobrevivência foi estimada pelo método de Kaplan-Meier. Análises univariada e multivariada foram realizadas com os modelos de riscos proporcionais de regressão de Cox.

Resultados

Exame de expressão da proteína MACC1 na pelve carcinoma renal (RPC) do tecido, pelve renal não-tumorais adjacentes tecido epitelial (ANRPET ) e pelve renal normais tecido epitelial (NRPET) espécimes

imuno-histoquímica (IHC) exame da expressão da proteína MACC1 foi realizada em amostras de tecido 73 RPC, 32 ANRPET (pelo menos ~ 2 cm de distância do bordo do tumor) e 41 NRPET (uroteliais tecidos de pacientes de cancro renal, que são menos do que 3 cm de diâmetro, com polaridade celular tecido intacto e são considerados tecidos epiteliais normais). Como revelado nas secções de tecidos normais, não-neoplásicas da pelve renal derivadas de pacientes com carcinoma de células renais, MACC1 foi corada no citoplasma bem como no núcleo das células epiteliais que residem no epitélio estratificado e transitória (Figura 1B B ‘). Em contraste, a coloração MACC1 foi significativamente reduzida no tecido estromal. Imagens na Fig. 1A A ‘são o controle negativo colorações IHC para MACC1

(A) coloração controle negtive.; (B) MACC1 coloração positiva; (C-E) imagens representativas de expressão negtive, baixo, alto MACC1 em tecidos RPC, respectivamente. (A’-E ‘) uma maior ampliação da área seleccionada em (A-E), respectivamente. Ampliação: 100 x em (A-E); × 200 em (A’-E ‘).

sinais MACC1 positivos foram detectados em 66 das amostras das lesões de câncer 73 RPC (~90.4%), bem como em 24 dos 32 ANRPET ( ~75.0%) e 29 das amostras de 41 NRPET (~70.7%) foram examinados neste estudo. Imagens na Fig. 1C-E, 1C’-E ‘são as imagens de coloração MACC1 IHC representativos nos tecidos RPC com MACC1 detectados no negativo (Fig 1C . C’), baixo (Fig 1D . D ‘) e alta (Fig 1E. e ‘) os níveis de expressão, respectivamente. Embora a expressão MACC1 está presente principalmente no citoplasma nas secções de tecido de RPC, a localização nuclear de MACC1 é prontamente perceptível, como mostrado na Fig. 1. Curiosamente, apesar da coloração citoplasmática preferencial na maior parte das células epiteliais nas secções de tecido canceroso RPC, existem de facto pequenas populações de células que exibem coloração nuclear consideravelmente mais forte do que a coloração citoplasmática. Em NRPETs, MACC1 foi distribuídos mais ou menos uniformemente no citoplasma e núcleo das células epiteliais (Fig 1B . B ‘). Nesta fase, não é claro sobre as consequências biológicas da coloração nuclear mais fraca de MACC1 em comparação com a coloração citoplasmática exibiu nos tecidos RPC malignas.

Em seguida, a força coloração imuno-histoquímica de MACC1 foi medido quantitativamente por Imagem avaliação Pro Plus. A quantificação da área corada, a densidade óptica integrada (IOD) e a densidade óptica média (AOD = IOD /Área) de MACC1 em cada imagem foi realizado e submetidos para análise posterior. Como mostrado na Tabela 1, a leitura de AOD MACC1 foi mostrado como 0,0648 ± 0,0312 em tecidos RPC, 0,0218 ± 0,0144 em ANRPETs, e 0,0210 ± 0,0151 em NRPETs, respectivamente. Como não havia nenhuma diferença substancial entre ANRPETs e NRPETs (

p Art 0,05), esses dois grupos foram combinados como um único grupo, ‘epitélio normal’, como mostra a análise estatística posterior abordamos abaixo. Como resultado, a pontuação AOD do epitélio normal foi de 0,0213 ± 0,0147. Colectivamente, quando comparados com tecidos de RPC, a pontuação de AOD de tecidos epiteliais normais imuno-histoquimicamente coradas foi significativamente menor, a aproximação de um terço da resistência identificados em coloração de RPC (

P

0,05) (Tabela 1). Estes resultados sugerem que MACC1 abundância anormal pode representar um indicador biológico clinicamente sugestivos de malignidade do tumor nos tecidos da pelve renal.

A correlação entre os níveis de expressão de proteína MACC1 e fatores prognósticos em pacientes com carcinoma de pelve renal

para determinar o significado clínico da superexpressão MACC1 no desenvolvimento e na progressão da RPC, a correlação entre os níveis de expressão de proteína MACC1 e os fatores prognósticos (incluindo idade, sexo, estágio TNM e grau nuclear) nos pacientes RPC foi investigado (Tabela 2) . análise quantitativa de coloração IHC por Image Pro Plus análise foi realizada. Como mostrado na Tabela 2, os níveis de proteína MACC1 elevadas parecem estar associadas com maior agressividade de RPC, com o resultado de AOD de MACC1 em TNM fase Ta, I, II, e III-IV revelado como 0,0355 ± 0,0247, 0,0563 ± 0,0281, 0,0752 ± 0,0264, e 0,0965 ± 0,0185, respectivamente. Visivelmente, MACC1 demonstraram maior abundância em tecidos tumorais final estágio como TNM fases III-IV, quando comparado com o que na fase inicial ea diferença foi estatisticamente significativa (

p Art 0,05). Além disso, a pontuação AOD de MACC1 no estágio RPC Ta também foi substancialmente mais alto do que o medido no epitélio normal (0,0213 ± 0,0147) (

p Art 0,05). No que diz respeito ao grau nuclear do tumor, houve também uma diferença estatisticamente significativa entre os escores AOD de MACC1 medidos no baixo grau (G1, G2: 0,0509 ± 0,0281) e os escores medidos nos tecidos RPC de alto grau (G3: 0,0729 ± 0,0304) (

p Art 0,05). De facto, houve aumento ~43.2% detectado em tecidos de tumor de grau 3, quando em comparação com o grau 1 ou 2, sugerindo que a abundância de proteínas MACC1 pode ser fortemente correlacionada com o desenvolvimento e progressão da RPC.

contraste, embora MACC1 exibiu um nível de proteína aumentou no grupo de pacientes mais idosos ( 61 anos de idade) com a contagem de AOD medido como 0,0654 ± 0,0298 quando comparado com o grupo de pacientes mais jovens ( 61 anos de idade) (pontuação AOD: 0,0628 ± 0,0343), não foi observada diferença estatisticamente significativa entre os dois grupos (

p Art 0,05). Da mesma forma, não foi observada diferença estatisticamente significativa entre o grupo masculino (pontuação AOD: 0,0662 ± 0,0305) e o grupo feminino (pontuação AOD: 0,0612 ± 0,0335) (

p Art 0,05) (Tabela 2). Além disso, a correlação estatisticamente significativa foi revelada entre a expressão da proteína MACC1 e citologia urinária ou o comportamento de fumar (dados não mostrados).

A associação entre os níveis de proteína MACC1 de expressão e sobrevida global (OS), sobrevida livre de doença (DFS ) em pacientes com carcinoma de pelve renal

para facilitar a análise estatística, os pacientes RPC foram divididos em três grupos de acordo com a avaliação visual da força coloração imuno-histoquímica em cortes de tecidos foram examinados (, grupo expressão negativa baixo MACC1 e alta grupo expressão MACC1, respectivamente). A pontuação de AOD MACC1 obtido a partir de Análise de Imagem Pro Plus foi evidentemente aumentado no grupo expressão MACC1 baixo em comparação com o grupo negativo, e era ainda mais elevada no grupo de expressão elevada MACC1 (

P

0,001, Fig. 2A). Além disso, em Spearman análise do coeficiente de correlação medir a força da relação linear entre os escores MACC1 AOD de Análise de Imagem Pro Plus e notas de avaliação visuais, foi observada uma relação linear positiva estatisticamente significativa entre estes dois conjuntos de pontuação em pacientes com RPC (

r

= 0,669,

p Art 0,001) (Fig 2B).. Assim, concluiu-se o padrão de expressão MACC1 deduzida da avaliação visual de fato fielmente se assemelha ao extraído da análise utilizando o Pro sistema de pontuação Além disso AOD Imagem.

(A), os pacientes com RPC foram divididos manualmente em três grupos de acordo com suas pontuações avaliação visual em IHC coradas secções de tecido (grupo expressão negativa, baixa MACC1 e grupo expressão alta MACC1, respectivamente). O valor de AOD de MACC1 obtido a partir de imagem Pro Plus análise foi evidentemente aumentado no grupo expressão MACC1 baixo em comparação com o grupo negativo, e era ainda mais elevada no grupo de expressão elevada MACC1 (

P

0,001). AOD = densidade óptica integrada (IOD) /Área de coloração MACC1 positiva em cada imagem coloração IHC; B, Spearman análise do coeficiente de correlação medir a força da relação linear entre MACC1 AOD Imagem Pro Plus dezenas e dezenas avaliação visual. Foi observada uma relação linear positiva estatisticamente significativa entre estes dois conjuntos de pontuação na RPC (

r

= 0,669,

p Art 0,001).

Em seguida, examinamos o significado prognóstico da superexpressão MACC1 na sobrevida global (oS) e sobrevida livre de doença (DFS) entre os pacientes RPC. 28 pacientes morreram no 5-year follow-up, e entre os 28 mortos, 18 morreram com a metástase do câncer ou recidiva local. Como mostrado na Fig. 3A B, os pacientes com nível de expressão alta MACC1 determinadas pelo sistema de pontuação avaliação visual mostrou um sistema operacional significativamente menor (

p Art 0,001) e DFS (

p Art 0,001) do que o grupo de pacientes com nível de expressão MACC1 baixa. Como ilustrado na Fig. 3A, no grupo expressão elevada MACC1, a taxa média foi de 29,9 meses OS com a taxa SO cinco anos aproxima de 70%. Para pacientes no grupo de expressão MACC1 baixa, a taxa média OS foi de 45,6 meses, ~ 50% mais elevados do que o grupo de alto MACC1. Além disso, a taxa de DFS foi ± 22 meses como revelado no grupo de alto MACC1, enquanto a taxa quase duplicou no grupo MACC1 baixa (~42 meses) (Fig. 3B). Da mesma forma, a taxa de DFS de 5 anos no grupo de baixo MACC1 era evidentemente maior que a taxa no grupo de alto MACC1 (57,5% versus 42,3%). Conclusivamente, o nível de expressão alta MACC1 é significativamente correlacionada com a diminuição da sobrevida global ea sobrevida livre de doença em pacientes RPC como revelado na imuno-histoquímica análises quantitativas.

As curvas de sobrevivência de Kaplan-Meier revelou que os pacientes no grupo de alta expressão MACC1 demonstrou sobrevida global significativamente menor (oS) (

p Art 0,001) (a) e sobrevida livre de doença (DFS) (

p Art 0,001) taxas do que aqueles em (B) o grupo de baixa expressão MACC1.

MACC1 univariada e multivariada estabelecido como um romance indicador prognóstico independente para RPC

neste estudo, análises univariada e multivariada foram realizadas para a avaliação do poder prognóstico da superexpressão MACC1 (Tabelas 3 4). Como mostrado na Tabela 4, a análise de regressão de Cox multivariada demonstrou que os níveis de expressão MACC1 e grau nuclear são indicadores prognósticos de fato independentes para a sobrevida global dos pacientes com RPC após o ajuste para idade, sexo e estádio TNM (Grade,

p

= 0,001, o rácio de perigo: 0,086, IC 95%: 0,019-0,387; MACC1,

p

= 0,024, a razão de perigo: 0,282, IC 95%: 0,094-0,844 Tabela 4).. Além disso, os níveis de expressão MACC1 e grau nuclear também foram identificados fatores prognósticos independentes para sobrevida livre de câncer em pacientes com RPC (Grade,

p

= 0,001, a razão de perigo: 5.444, 95% CI: 1,964-15,093 ; MACC1,

p

= 0,002, a razão de perigo:.. 4.207, 95% CI: 1,668-10,613 Tabela 4)

Discussão

Embora carcinoma da pelve renal é relativamente menos comum, é mais difícil de diagnosticar do que carcinoma urotelial da bexiga e representa uma doença agressiva, com altas taxas de recorrência e de progressão. Em adição ao fumo do tabaco, análise de outros factores de risco ambientais sugeriu que a exposição ocupacional a substâncias químicas industriais também pode contribuir para o desenvolvimento do carcinoma urotelial, v.g. quimioterapia (mais notavelmente, ciclofosfamida) e terapia de radiação, irritação da bexiga e infecção crónica, bem como a exposição arsénio [25]. China tem a maior população de fumar do mundo – ~350 milhões, cerca de um quarto a um terço da população do mundo de fumantes. Além disso, como resultado do rápido crescimento industrial, sem precedentes, a poluição química industrial também se tornou uma ameaça assustadoramente crescente para a saúde de muitas pessoas na China nos últimos 2-3 décadas. Os produtos químicos que têm sido sugeridas para promover o carcinoma de uretra tracto superior incluem aminas aromáticas, tais como benzidina (impressoras), 2-naftilamina (borracha e corantes trabalhadores), 4-aminobifenilo (cabeleireiros), hidrocarbonetos aromáticos policíclicos, tais como o benzo (a) pireno (trabalhadores de alumínio) e fumaça de óleo diesel [26]. Além disso, com maior precisão o rastreio do cancro na China nos últimos anos, o aumento dramático na prevalência de câncer na população tem representado um grande desafio nos últimos 5-10 anos. De facto, uma maior frequência de carcinoma da pelve renal foi identificado nas últimas décadas 2-3 na China. Assim, é importante para desenvolver indicadores de prognóstico mais eficazes e identificar pacientes de alto risco para a intervenção adequada e oportuna.

Emergindo como uma medida potencialmente menos invasiva, a avaliação do estado de biomarcadores específicos de tecidos é sugerido para ter a capacidade de melhorar a precisão do diagnóstico e prognóstico no processo de tomada de decisão, quando integrados em modelos prognósticos atuais. Nos últimos anos, os biomarcadores associados com o prognóstico de pacientes com carcinomas do tracto superior uroteliais têm sido amplamente explorados. De facto, uma ampla gama de biomarcadores à base de tecidos têm sido relatados e avaliados quanto à sua potencial aplicação como carcinomas uroteliais indicadores de prognóstico, tais como moléculas que regulam o ciclo celular (por exemplo, p53, p21, pRb, p27, a ciclina D1 e E1 ciclina), apoptose (por exemplo, a survivina, Bcl-2, osteopontina, Bax, caspase-3), o crescimento celular e a transdução de sinal (por exemplo, HER-2, NF-kB, EGFR, beta-catenina, a galectina-3, RAS-MAPK), a migração celular e invasão (por exemplo, MMP), e a angiogénese (por exemplo vasohibin-1, VEGF, TSP-1) (revisto em [7], [8]). Como se mostra neste estudo, foi demonstrado pela primeira vez que um nível anormalmente elevado de expressão MACC1 está associada com um mau prognóstico de carcinoma da pelve renal e é de facto um indicador independente de prognóstico para a sobrevivência livre de doença e sobrevivência global dos doentes. Uma vez que, nesta fase, não temos qualquer tratamento eficaz para pacientes com carcinoma da pelve renal metastático, a detecção de níveis elevados de MACC1 pode ajudar a prever a progressão e o prognóstico da doença. Notavelmente, em tecidos de tumores sólidos metastáticos, como demonstrado em estudos anteriores, em adição ao aumento da intensidade de coloração MACC1 no citoplasma, coloração nuclear adicional também tem sido reconhecido sugerindo translocação melhorado nuclear e a elevação subsequente da actividade de transcrição MACC1 [15], [27 ], [28].