Abstract
Os microRNAs são reguladores chave da expressão do gene e foram mostrados para ter alterado a expressão de uma variedade de câncer tipos, incluindo câncer epitelial de ovário. miARN função é frequentemente alcançada através de ligação para a região 3 ‘não traduzida do gene que codifica a proteína alvo. triagem de mutação utilizando sequenciamento massivamente paralelo de 712 genes de miRNA em 86 casos de cancro do ovário identificadas apenas 5 miRNA genes mutados, cada um em um caso diferente. Uma mutação foi localizado no miARN maduro, e três mutações foram previstos para alterar a estrutura secundária da transcrição miARN. Triagem da região 3 ‘não traduzida de genes de câncer 18 candidatos identificada uma mutação em cada um dos
AKT2
,
EGFR
,
ERRB2
e
CTNNB1
. O efeito funcional destas mutações não é clara, como dados de expressão disponíveis para
AKT2
e
EGFR
não mostrou nenhum aumento na transcrição de genes. Mutações em genes de miRNA e regiões 3 ‘não traduzidas são, portanto, incomum no câncer de ovário
Citation:. Ryland GL, Bearfoot JL, Doyle MA, Boyle SE, Choong DYH, Rowley SM, et al. (2012) Genes microRNA e seu alvo Regiões 3 ‘não traduzida são pouco somaticamente mutado em cancros do ovário. PLoS ONE 7 (4): e35805. doi: 10.1371 /journal.pone.0035805
editor: Austin John Cooney, Baylor College of Medicine, Estados Unidos da América
Recebido: 29 Janeiro, 2012; Aceito: 22 de março de 2012; Publicação: 20 de abril de 2012
Direitos de autor: © 2012 Ryland et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados
Financiamento:. Este trabalho foi apoiado pelo mama Victorian Cancer Research Consortium, Austrália e da Austrália Nacional de Saúde e Pesquisa médica do Conselho (NHMRC). GLR é suportado por uma concessão do Australian Pós-Graduação. O cancro do ovário Grupo de Estudo australiano foi apoiado pelo Medical Research Exército dos EUA e Comando de Material sob DAMD17-01-1-0729, o cancro da Tasmânia Conselho, a Fundação do Câncer da Austrália Ocidental e do NHMRC. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito
CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes
Introdução
MicroRNAs (miRNAs), uma classe de pequenas moléculas de RNA não-codificantes, têm funções reguladoras importantes em diversas vias celulares incluindo a proliferação, diferenciação, senescência e metabolismo [1]. Esta regulação é conseguida através de emparelhamento de base semi-complementar com a região 3 ‘não traduzida (3′-UTR) do ARN alvo mensageiro (ARNm) [1] – [3], assim como a região 5’ não traduzida ou codificação regiões de ARNm, que são subsequentemente degradados ou pós-transcricionalmente silenciados [4] – [6]. Acumulando agora evidência demonstra que a expressão de miARN é aberrante em cancro [7], que conduz à hipótese de que alterações nos percursos de miARN pode ser um passo importante na iniciação e progressão para malignidade. Consistente com esta hipótese é a observação de que genes de miRNA são frequentemente localizadas em regiões genômicas comumente alterados no câncer, incluindo as regiões mínimas de eliminação, perda de heterozigosidade e amplificação, bem como sites frágeis [8] – [10]. A mutação é um mecanismo alternativo para miARN desregulação na configuração do cancro, em que a mutação pode alterar a transcrição miARN, processamento ou interacções miARN-ARNm. Este mecanismo foi primeiramente descrita por Calin
et al.
[8], que identificou uma variação da linha germinativa no
hsa-miR-16-1
que foi ligada com a susceptibilidade a leucemia linfocítica crónica. Desde então, os polimorfismos em genes da linha germinal de miARN têm sido associados com a predisposição para outros tipos de cancro [11]. Apesar da hipótese de que miARN pode funcionar como oncogenes ou supressores de tumor convencional, vários estudos têm sugerido que a mutação somática dentro miARNs são uma ocorrência rara e aqueles que têm sido relatados pouco efeito mostra na actividade miARN [10], [12] – [14] . No entanto, a maioria desses estudos têm favorecido uma abordagem gene candidato e até à data, a avaliação não-tendenciosa da ocorrência de alterações somáticas em genes de miRNA em qualquer tipo de câncer está faltando.
De forma análoga a mutações que ocorrem dentro das sementes miRNA regiões, mutações que ocorrem no interior da sequência de ARNm alvo pode alterar a regulação de ligação e subsequente dependente de miARN da expressão do gene. Enquanto as alterações da linha germinativa em miARN locais de ligação em 3′-UTR podem contribuir para a susceptibilidade para cancro [11], [15] – [17], relatórios de mutações somáticas que ocorrem num contexto semelhante está limitado a um único relatório caso [13] e possui ainda para ser investigados em grandes grupos de tumor. Se as mutações somáticas que ocorrem em locais de ligação de miRNA, constituiria um mecanismo genético anteriormente inexplorada para a repressão ou ativação de um mRNA associado a um cancro.
A actividade aberrante miRNA é frequentemente associada com a patogênese e progressão do câncer epitelial de ovário , a forma mais comum de tumor maligno de ovário. Mirna estudos de perfil de forma consistente observar silenciamento mundial de expressão miRNA em tumores de ovário, que é contribuíram para em parte pela perda de genômica e alterações epigenéticas [10], [18] – [22]. Do mesmo modo, a expressão de muitos genes de cancro conhecidos e putativos é desregulado no cancro do ovário, por exemplo,
BRCA2
, para que apenas uma proporção da perda observada de expressão pode ser atribuída a uma mutação, e metilação do promotor não é observada [ ,,,0],23]. Anteriormente, demonstramos que a frequência de mutações somáticas em 10 miRNAs implicados-câncer é baixa em tumores ovarianos [24]. No presente estudo, nós estendemos esta análise, de forma abrangente caracterizar mutações somáticas em 712 genes miRNA utilizando massivamente paralelo alvo re-sequenciação. Além disso, nós analisamos o extremo 3 ‘UTRs de 18 genes do cancro candidato com o objectivo de identificar mutações somáticas que alteram previstos locais de ligação de miRNA. Embora esses genes são frequentemente implicados no processo tumorigénico, codificação de mutações, de metilação ou número de cópias alterações representam apenas um subconjunto das diferenças de expressão observados em tumores de ovário.
Resultados e Discussão
mutações somáticas segmentação genes microRNA são eventos pouco freqüentes nos tumores ovarianos
para investigar se a mutações em genes de miRNA contribuem para a actividade miRNA alterada no cancro do ovário, 86 tumores ovarianos epiteliais primárias foram avaliados para mutações somáticas em regiões genômicas correspondentes a precursora ou miRNA madura sequências. As características clínicas destes casos, encontram-se resumidos na Tabela S1. O próximo alvo sequenciamento geração foi utilizado para avaliar 712 genes miRNA anotados no banco de dados Sanger miRNA (versão 13.0, março de 2009). Seguindo o alinhamento de dados, 95% das bases específicas no âmbito dos 712 genes de miRNA tinha uma cobertura mínima sequência de 10 vezes, com uma cobertura média correspondente de 92 vezes. Filtragem para remover da linha germinativa variantes detectadas no DNA dos linfócitos normais pareados e validação por sequenciação convencional identificou mutações somáticas em 5 genes miRNA:
hsa-miR-10a
,
hsa-miR-622
,
hsa-miR-767-5p,
hsa-miR-888 Comprar e
hsa-miR-1280
(Figura 1). Em geral, as mutações somáticas foram detectados em 6% (5/86) de tumores e em menos de 1% (5/712) dos genes de miARN analisados, sem os genes de miARN recorrentemente segmentados por mutação. Consistente com relatórios anteriores, mutações dentro miRNAs maduros eram incomuns; apenas uma mutação foi localizado no interior da região madura de
HSA-miR-767-5p
(mas externa à região da semente), enquanto os restantes quatro ocorreram dentro do gancho de cabelo precursor. Estes dados estão de acordo com estudos de menor escala anteriores sugerindo que mutações somáticas em genes de miRNA são um evento pouco frequente em amostras de tumor [8], [12], [14], [24], [25].
mutações específicas de tumor são marcados como barras pretas em relação ao microRNA maduro (caixa branca) e precursor microRNA (caixa cinza) sequências. As posições das mutações são relatadas no que diz respeito aos seguintes transcrições de microRNA precursores:
hsa-miR-10a
NR_029608.1;
hsa-miR-622
NR_030754.1;
hsa-miR-767-5p
NR_030409.1;
hsa-miR-888
NR_030592.1;
hsa-miR-1280
NR_031703.1.
Mirna biogênese é um processo de várias etapas iniciado pela transcrição do RNA polimerase II mediada, seguido de corte RNAse III-dependente em um intermediário hairpin e subsequente clivagem em um miARN madura funcional [1], [26]. Este processo é dependente de motivos de sequências de RNA e os elementos de estrutura secundária dentro das moléculas de miARN primárias e precursoras [26]. Como tal, as mutações nas regiões precursoras resultantes podem alterar a estrutura secundária do ARN e, assim, bloquear a transformação em miARN maduro. Para determinar se as alterações estruturais de ARN pode resultar de mutações somáticas de miARN identificadas, foi utilizado o programa RNAfold [27] para prever a estrutura secundária mais estável tanto para o tipo selvagem e as sequências mutantes. mudanças conformacionais foram previstos para o mutante
hsa-miR-622
,
hsa-miR-767-5p
e
hsa-miR-1280
(Figura S1). No entanto, mudanças de conformação previu
in silico
raramente equivale a um efeito fisiológico [12] e a implicação funcional de mutações identificadas aqui requer uma investigação mais aprofundada com o
in vitro
ensaios.
em contraste com a observação frequente de variações específicas do tumor que contribuem para a activação ou a repressão dos genes codificantes em cancro da proteína, estes resultados demonstram que as mutações somáticas em genes de miARN são um acontecimento pouco frequente durante a patogénese do ovário e adicionar a evidência acumulada a partir de uma gama de tumores tipos sugerindo que miARNs raramente são desregulados por este mecanismo. Dado o grande número de alvos de ARNm previsto para um único miARN e as diversas funções desses genes alvo para, qualquer mutação somática num gene miARN (e particularmente aqueles que ocorrem dentro da sequência de sementes) são susceptíveis de impacto muitas vias biológicas [2], [3], alguns dos quais podem estar envolvidas na manutenção da homeostase celular. Por conseguinte, mesmo que um gene miARN expressão de ARNm mutado somaticamente alterados para afectar positivamente a sobrevivência do tumor, é provável que não haveria um número maior de mudanças de expressão de genes que não seria favorável para a sobrevivência de células de tumor. Por outro lado, em certas situações, o ARNm repressão transcripcional pode resultar da acção de várias miARNs [28] e como tal, a actividade alterada de uma única miARN pode ser insuficiente para resultar em um efeito biológico. Finalmente, é cada vez mais reconhecido que as alterações de miARN observados em tecidos de cancro pode ser secundária a defeitos em componentes da maquinaria de processamento de miARN, incluindo factores de transcrição e os genes de cromatina remodelação regulam miARN transcrição, bem como componentes de miARN regulação pós-transcricional [29 ], [30]. Em tumores de ovário,
DICER1
e
EIF2C2
(Argonaute2) cópias de ADN número ganhos foram observados em 24,5% e 51,5% dos tumores, respectivamente, [9] e sobrevida global mediana é reduzida entre as mulheres cujos tumores têm menor
DICER1
e
Drosha
expressão de mRNA [31]. É necessária mais investigação estabelecer a importância das alterações a estes e outros componentes da via biogênese miRNA na patogênese do câncer de ovário.
mutações somáticas alvo 3 ‘não traduzida regiões são eventos infrequentes em tumores de ovário
para investigar a possibilidade de que mutações somáticas que ocorrem dentro da extremidade 3 ‘UTRs de genes do cancro alterar um local de ligação existente miARN, e, portanto, significam um novo mecanismo para a expressão do gene ARNm aberrante em cancro, que sequenciou o extremo 3’ UTRs de 11 oncogenes (
AKT2
,
BRAF
,
CCNE1
,
CTNNB1
,
EGFR
,
ERBB2
,
FGF1
,
KRAS
,
MYC
,
PIK3CA
e
RAB25) por alvejado re-sequenciação nos tumores ovarianos 86. No caso de um oncogene, a revogação de um local de ligação de miARN pode permitir a expressão do oncogene desregulada. Além disso, o extremo 3 ‘UTRs de genes supressores tumorais 7 (ETG) (
BRCA1
,
BRCA2
,
CDKN2A
,
PTEN
,
RB1
,
SPARC
e
TP53
) também foram sequenciados para avaliar a prevalência de mutações somáticas que geraria um sítio de ligação
de novo
miRNA e resultar no TSG infra-regulação. Estes genes são reconhecidas pelo gene Census cancro a ser causalmente implicado no desenvolvimento do tumor de ovário, quer por mutação somática, a amplificação de genes ou supressão [32].
FGF1
,
RAB25
e
SPARC
foram escolhidos com base em seu papel funcional demonstrado no cancro do ovário [33] – [37]. 3′-UTR foram sequenciados a 108 vezes a média de cobertura e maior do que 99% das bases específicas no âmbito destas regiões foram cobertos por 10 ou mais sequência lê. mutações específicas do tumor foram raramente identificados em 3′-UTR de amostras de ovário: 4/86 amostras de tumor foram cada uma delas identificada com uma mutação em um dos quatro oncogenes diferentes (
AKT2
,
CTNNB1
,
EGFR
e
ERBB2) (Tabela 1), sem mutações detectadas nos 7 ETG investigados.
In silico
miRNA algoritmos de previsão alvo sugerem que loci mutado em
AKT2
,
CTNNB1
e
ERBB2
pode ocorrer dentro da região de um miRNA previu vinculativo local, com duas mutações, a C * 538T . a (
CTNNB1
) e c * 460g . C (
ERBB2
) substituições, prevista para ocorrer dentro da sequência de semente de
hsa-miR-630 Comprar e
hsa-miR-640
ligação respectivamente. expressão de ARN de perfis estava disponível para as amostras com mutações em
AKT2
e
EGFR
e demonstraram que os níveis de transcrição destes genes não foi alterada em amostras com somática 3′-UTR mutações em relação ao outro tumor amostras do mesmo subtipo de ovário (Figura S2).
Embora se reconheça que os miRNAs também podem transmitir repressão da transcrição por acção sobre o 5′-UTR de um alvo mRNA, este estudo fornece evidências preliminares de que mutações somáticas que alteram sítios de ligação de miRNA dentro do 3′-UTR de genes de câncer comuns são pouco frequentes nos tumores ovarianos epiteliais. silenciamento translacional efetiva pode exigir ação sinérgica de miRNAs em vários locais em toda a UTR, seja por uma única família de microRNAs ou por uma combinação de microRNAs não relacionados e, portanto, as únicas mutações somáticas identificadas aqui são susceptíveis insuficiente para silenciar a respectiva transcrição [28] , [38]. A prevalência de mutação somática in 3′-UTR regiões de genes do cancro candidato sequenciados foi de 1,43 mutações por Mb. Em comparação, a prevalência mutação na proteína regiões de genes de câncer conhecidos de codificação nesta coorte tumor é 570,57, 183,60 e 32,63 mutações por Mb para
TP53
,
KRAS Comprar e
PIK3CA
, respectivamente, enquanto que a prevalência estimada mutação no exome codificação é de 2,4 por mutações em tumores de ovário Mb [23]. Assim, é provável que a baixa taxa de mutação em comparação com 3’UTRs exões indica que a maioria das mutações em regiões 3′-reguladoras identificadas aqui ocorrer como acontecimentos bystander no desenvolvimento de células de tumor.
Em resumo, mutações somáticas em genes de miARN foram raramente observados em tumores do ovário e, assim, é pouco provável que representam a actividade de miARN alterado observado neste tipo de tumor. Além disso, nós fornecemos evidências preliminares de que a seleção de mutações somáticas dentro dos 3′-UTRs de genes do câncer de candidatos, que seriam hipotéticos para interferir com a regulação de genes dependente miRNA, é improvável que representam um mecanismo comum para a expressão do mRNA alterada em tumores ovarianos.
materiais e Métodos
Ética declaração
acumulação e utilização de material de pacientes para este estudo foi aprovado pelos Comitês de Ética em Pesquisa seguintes: Comissão de Ética Southampton Hospital Human Research, Peter Comissão MacCallum Cancer Centre Ética em Pesquisa do Instituto Queensland de Comissão de Ética médica Research Pesquisa com Seres Humanos da Universidade do Comitê de Ética em Pesquisa Humana Melbourne, Comissão de Ética Westmead Hospital Humano Research. Todos os indivíduos deram seu consentimento informado para a utilização dos seus tecidos em pesquisa. Este projeto foi aprovado pela Comissão de Peter MacCallum Cancer Centre Ética em Pesquisa (Aprovação # 29/09).
coorte tumor de ovário
86 amostras epiteliais primárias de tecido de tumor de ovário foram obtidos através do Peter MacCallum Cancer Centre Tissue Bank, Austrália Ovarian Cancer Study ou de pacientes apresentando aos hospitais no sul da Inglaterra [39]. Todas as amostras de ADN de tumor foram microdissecadas a assegurar componente celular epitelial maior do que 80%. Esta coorte do tumor composto por uma mistura de serosa (n = 45), endometrióide (n = 28), mucinoso (n = 7) e clara de células (n = 6) subtipos. Correspondentes amostras de sangue periférico também foram coletadas de todos os pacientes no momento da coleta de tumor e usado como fonte de DNA germinal.
Candidato identificação região por alvo próxima geração seqüenciamento
Os 3′-UTRs de 18 genes codificadores de proteínas foram selecionados para a triagem mutação somática. Genoma coordenadas para selecionados 3′-UTRs foram identificados com base naqueles anotada no banco de dados Ensembl (versão 54) para os seguintes transcrições:
AKT2
(ENST00000392038),
BRAF
(ENST00000288602) ,
CCNE1
(ENST00000262643),
CTNNB1
(ENST00000349496),
EGFR
(ENST00000275493 e ENST00000344576),
ERBB2
(ENST00000269571),
FGF1
(ENST00000359370),
KRAS
(ENST00000256078),
MYC
(ENST00000259523 e ENST00000377970),
PIK3CA
(ENST00000263967),
RAB25
(ENST00000361084),
BRCA1
(ENST00000309486),
BRCA2
(ENST00000380152),
CDKN2A
(ENST00000304494),
PTEN
(ENST00000371953),
RB1
(ENST00000267163),
SPARC
(ENST00000231061) e
TP53
(ENST00000269305). As coordenadas genómicos para miARNs precursoras humanas foram obtidas a partir do Sanger Institute miRBase (versão 13.0, Março 2009) [40], [41], incluindo os genes de miARN 548 individuais, bem como 164 miARNs dentro de 62 grupos de miARN. Todos os exons codificantes do
TP53
,
KRAS Comprar e
PIK3CA
foram incluídos para análise da sequência.
Biblioteca preparação e alvo de enriquecimento
200 ng de ADN de linfócitos de tumor ou normais combinados aleatoriamente foi fragmentado a aproximadamente 200 pb (Covaris, Woburn, MA) e reparação final e a-tailing realizada de acordo com a biblioteca de ADN genómico Ilumina protocolo de preparação (Illumina, San Diego, CA). Após isso, o DNA foi ligado com um dos 7 adaptadores costume multiplexação compatíveis com Illumina único fim de sequenciamento. As amostras de ADN foram reunidas indexados igualmente antes do enriquecimento de PCR. Todos os reagentes utilizados durante a preparação da biblioteca foram obtidos de New England Biolabs (NEB, Ipswich, MA). Uma captação boutique exão (SureSelect, Agilent Technologies, Santa Clara, CA) foi utilizada para enriquecer especificamente para seleccionados 3′-UTR, miARNs e exões codificantes de genes do cancro a partir de bibliotecas de DNA genómico anteriores para a próxima geração de sequenciação. sondas de captura foram projetados usando parâmetros padrão submetendo genômicas coordenadas para eArray (Agilent Technologies, Santa Clara, CA). hibridização solução, lavagem, eluição e amplificação foram realizadas de acordo com o protocolo recomendado.
análise de mutações somáticas pela Illumina GAIIx sequenciamento e eletroforese capilar
alvo enriquecido bibliotecas de DNA foram sequenciados em um Illumina GAIIx, gerando 75 bp sequência única final lê. análise de imagem e chamada base foi realizada utilizando o v1.6 Genome Analyser Pipeline. Sequência lê estavam alinhados ao genoma de referência humana (GRCh37 montagem /hg19) usando BWA e permanecendo não mapeada lê estavam alinhados com software Novoalign [42]. Isto foi seguido por realinhamento local com GATK [43]. As mutações pontuais e inserções /deleções (Indels) foram identificados utilizando GATK e Dindel [44], respectivamente, e anotados com informações de liberação Ensembl 56. Somente mutações dentro de transcrições de miRNA anotados em miRBase foram consideradas para análise posterior.
mutações pontuais e indels foram identificados como alterações somáticas somente quando (
i
) a variante não foi chamado na amostra normal correspondente ou identificadas como uma alteração da linha germinativa em outro tumor pair /normal (
ii
) a variante não foi observado em 2% de leituras na amostra normal combinado seguinte inspecção manual dos lê sequência genómica utilizando o visualizador integrado [45] (
iii) a variante foi encontrada em pelo menos quatro sequência única lê com pelo menos dois mapeamento nos dois mapeamento para a frente e na orientação inversa.
Todas as mutações que atendiam aos critérios acima foram submetidos a validação através de amplificação por PCR convencional e eletroforese capilar bidirecional na ABI3130 Genetic Analyser usando Big Dye Terminator v3 .1 sequenciação química (Applied Biosystems, Foster City, CA).
Identificação dos locais miRNA-ligação
O TargetScan (versão 5.2) [46], Metas microcosmo (versão 5) [40 ], Diana-MicroT (versão 3.0) [47], [48] e miranda (libertação Agosto 2010) [49] algoritmos de previsão foram utilizados para determinar se as mutações somáticas detectados em ARNm 3’UTRs ocorreu dentro de locais de ligação de miARN. Um limite da pontuação de mirSVR inferior a -0,1 e limite da pontuação de energia de dobragem mínimo de menos do que ou igual a -16 kcal /mol foram usadas para o algoritmo Miranda. parâmetros padrão foram utilizados para todos os outros algoritmos.
Informações de Apoio
Figura S1.
Previsto alterações de estrutura secundária, como resultado de mutações somáticas em transcrições de miRNA. sequências maduras são sombreados e a base mutante indicado pela seta no (a)
hsa-miR-622
, (b)
hsa-miR-1280 Comprar e (c)
HSA
-miR-767-5p. A sequência de miARN precursor de mais 50 pb que flanqueia o precursor na extremidade 5 ‘e 3’ foi utilizado para prever a estrutura secundária com a menor energia livre pelo programa RNAfold [29] utilizando parâmetros padrão
doi:. 10.1371 /jornal. pone.0035805.s001
(PDF)
Figura S2.
AKT2
e
EGFR
expressão de ARNm não é alterada na presença de região 3 ‘não traduzida mutações somáticas em relação a outras amostras de ovário do mesmo subtipo. (A)
expressão AKT2
em tumores endometrióides, incluindo P1768 amostra com um
AKT2
c * 892C . T mutação somática (indicado em vermelho). expressão de mRNA de perfis de dados foi obtida a partir de Tothill
et al.
[50].
AKT2
sonda expressão define 225471_s_at e 226156_at são mostrados. (B)
expressão de EGFR
em tumores endometrióides, incluindo amostra IC151 com um
EGFR
c * 101C . G mutação somática (indicado em vermelho). expressão de mRNA de perfis de dados foi obtida a partir de Ramakrishna
et al.
[51]. As barras de erro são representativos da média ± SD
doi:. 10.1371 /journal.pone.0035805.s002
(PDF)
Tabela S1.
As características clínicas dos tumores ovarianos sequenciados para mutações somáticas em genes microRNA e candidato regiões 3 ‘não traduzidas.
doi: 10.1371 /journal.pone.0035805.s003
(XLS)
Reconhecimentos
Agradecemos a colaboração das instituições na Austrália participando do Australian Study cancro do ovário (AOCS). Nós também reconhecemos a contribuição das enfermeiras do estudo AOCS, assistentes de pesquisa e todos os colaboradores clínicos e científicos, e gostaria de agradecer a todas as mulheres que participaram AOCS. Membros do Grupo de Estudo do cancro do ovário australiano, colaboradores e hospitais envolvidos no AOCS pode ser encontrada em https://www.aocstudy.org
Australian Ovarian Cancer Study Group:. David Bowtell (Centro de Peter MacCallum Cancer, East Melbourne, Victoria, Austrália), Georgia Chenevix-Trench (Instituto Queensland de Pesquisa médica, Brisbane, Queensland, Austrália), Adele Green (Queensland Institute of Medical Research, Brisbane, Queensland, Austrália), Penny Webb (Queensland Institute of Medical Research, Brisbane, Queensland, Austrália), Anna DeFazio (Instituto Westmead for Cancer Research, Westmead Millennium Institute, Westmead, New South Wales, Austrália), Dorota Gertig (Citologia cervical Registry vitoriana, Carlton South, Victoria, Austrália).