Abstract
Fundo
A glicosilação é um importante e universal modificações pós-translacionais para muitas proteínas e regula as funções das proteínas. No entanto, os métodos simples e rápidos para analisar glicanos de proteínas individuais não estavam disponíveis até recentemente.
Métodos /principais conclusões
Uma nova técnica para analisar glicopeptídeos de uma forma altamente sensível pela matriz assistida dessorção por laser /espectrometria de massa de ionização (MALDI-MS), utilizando a matriz líquida 3AQ /CHCA foi desenvolvido recentemente e que esta técnica optimizada para analisar uma pequena quantidade de proteína transmembranar separadas por SDS-PAGE. Foi utilizado o método MALDI-MS para avaliar o estado de glicosilação de tipo membrana 1 metaloproteinases da matriz (MT1-MMP).
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-glycosylation de MT1-MMP é relatado para modular a sua actividade de protease e assim, afectar a invasão de células de cancro. MT1-MMP expressa em células de fibrossarcoma humano HT1080 foi imunoprecipitado e resolvido por SDS-PAGE. Após a digestão em gel tríptica da proteína, uma única gota de o produto da digestão foi aplicada directamente à matriz de líquido sobre uma placa alvo de MALDI. Concentração de glicopéptidos hidrofílicos dentro da área central ocorreu devido à evaporação gradual da solução da amostra, enquanto que os péptidos hidrofóbicos não glicosiladas manteve-se na periferia. Esta separação específica e concentração dos glicopeptídeos habilitado análise abrangente da MT1-MMP
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-glycosylation.
Conclusões /Significado
Nós demonstramos, pela primeira vez, heterogénea
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-glycosylation perfil de uma proteína por uma análise de proteína total utilizando MALDI-MS. Uma vez que as células cancerosas são referidos como tendo glicosilação alterada das proteínas, este método fácil de utilizar para análise glicopéptido abre a possibilidade para identificar padrões de glicosilação específicos de proteínas que podem ser utilizadas como biomarcadores para tumores malignos.
citação: Shuo t, Koshikawa N, Hoshino D, Minegishi t, Ao-Kondo H, Oyama M, et al. (2012) Detecção do Heterogêneo
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-Glycosylation Perfil de MT1-MMP expressa em células cancerosas por um simples método MALDI-MS. PLoS ONE 7 (8): e43751. doi: 10.1371 /journal.pone.0043751
editor: Nikos K. Karamanos, University of Patras, Grécia