Abstract

O cromossomo Y foi recentemente sugerido para ter uma associação com o risco de câncer de próstata em populações humanas. Uma vez que este cromossoma é haplóide e carece de recombinação durante a maior parte do seu comprimento, construída a partir de haplótipos binário marcadores ao longo do cromossoma podem ser utilizadas para estudos de associação. Para avaliar a possível contribuição Y-cromossômica ao risco de câncer de próstata, temos, portanto, analisados ​​14 binário marcadores Y-cromossômicas em casos de câncer de próstata 106 e 110 controles da população coreana. Em contraste com os resultados anteriores na população japonesa, não foi observada diferença estatisticamente significativa na distribuição de haplogroup frequências Y-cromossômicas entre os grupos caso e controle de coreanos. Assim, nossos dados implicam que as associações previamente relatadas entre linhagens Y-cromossômicas e uma predisposição para, ou proteção contra, o câncer de próstata pode ser explicada por flutuações estatísticas, ou por efeitos genéticos que são vistos apenas em alguns ambientes.

Citação: Kim W, Yoo TK, Kim SJ, Shin DJ, Tyler-Smith C, Jin HJ, et al. (2007) Ausência de associação entre Y-cromossômica Haplogroups e câncer de próstata na população coreana. PLoS ONE 2 (1): E172. doi: 10.1371 /journal.pone.0000172

Editor do Academic: Mikhail Blagosklonny, Instituto de Pesquisa Ordway, Inc., Estados Unidos da América

Recebido: 07 de novembro de 2006; Aceito: 21 de dezembro de 2006; Publicação: 24 de janeiro de 2007

Direitos de autor: © 2007 Kim et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. WK é apoiado por uma bolsa da Ciência coreano e Foundation Engineering (KOSEF R01-2005-000-10534-0), República da Coreia. CTS é apoiado pelo Wellcome Trust

Conflito de interesses:. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

O câncer de próstata é um dos mais comum pelos homens. cancros específicos, mas sua incidência varia consideravelmente entre as populações, com a chance de desenvolver esse tipo de câncer ser mais alta nos países ocidentais e mais baixa nos países asiáticos. pesquisas recentes sugerem que as duas alterações genéticas e fatores dietéticos podem estar ligados ao câncer de próstata [1] – [5], embora a etiologia desta doença ainda não está claro, na maioria dos casos

Há cada vez mais evidências de uma. papel Y-cromossomo em malignidade e progressão do câncer específico do sexo masculino. mutações cromossómicas-Y estão associados a cancro da próstata, uma vez que a perda deste cromossoma é a aberração cromossómica mais frequente observada em tecido de cancro da próstata [1], [6]. Muitos genes ou loci no cromossoma Y podem contribuir não só para o desenvolvimento de células germinativas masculinas e manutenção, mas também aos mecanismos moleculares de desenvolvimento e progressão do cancro da próstata [7] – [10]. Por exemplo,

SRY

, a determinação do sexo gene no cromossoma Y, é regulada negativamente nesta cancro e é um regulador negativo do receptor de androgénio [11]. O

gene SRY

, portanto, parece ser candidato à participação na oncogênese do câncer de próstata [12].

O cromossomo Y tem características genéticas especiais que incluem uma ausência de recombinação durante a maior parte do seu comprimento e estado haplóide. A sequência de ADN da região de não recombinação do cromossoma Y contém, portanto, um único registro dos eventos mutacionais que ocorreram no passado. Como consequência, haplótipos construído a partir de alelos Y-cromossômicas têm sido usadas com sucesso para estudar linhagens paternas [13] – [16] e para diferenciar grupos populacionais humanos [17] – [20]. Além disso, qualquer mutação de predisposição para, ou proteger contra, cancro da próstata irá descansar na filogenia bem-estabelecida, de modo a que os marcadores de binários que definem as linhagens também pode ser utilizado para estudos de associação. Além disso, uma vez que as linhagens Y-cromossómicas (isto é haplogrupos) são altamente estratificado entre populações humanas, uma associação específica, tais-haplogrupo é provável que seja assim específicos de população.

Curiosamente, os estudos recentes têm sugerido que certas Y linhagens -chromosomal foram associados com o risco de câncer de próstata na população japonesa [12], [21]. Tais resultados precisam ser replicados em uma amostra da população independente onde as linhagens relevantes são comuns. Com base nos resultados de estudos de população anteriores, os japoneses parecem ter uma relação genética mais próxima coreanos do que para outras populações asiáticas [20], [22] [23], de modo que a população coreana é particularmente adequado para testar a mesma correlação.

no presente estudo, temos, portanto, investigou a associação entre haplogrupos Y-cromossômicas e uma predisposição ao câncer de próstata na população coreana, examinando 106 casos de câncer de próstata e 110 controles usando marcadores binários 14 Y-cromossômicas.

resultados e Discussão

observamos onze diferentes linhagens Y-cromossómicas definidas pelos catorze binário marcadores nos casos de câncer e amostras de controlo, a maioria dos quais são os haplogrupos predominantes esperadas no leste da Ásia. distribuições de freqüência dos quatorze binário marcadores e correspondentes haplogrupos Y-cromossômicas são listados na Figura 1. A população coreana pesquisados ​​aqui é caracterizado por uma elevada frequência de haplogroup O-M175 (e seus sublinhagens) em ambos os grupos de pacientes com câncer de próstata (84,0% ) e controles normais (76,3%) (Figura 1 e Tabela 1). Este resultado é consistente com relatórios anteriores, mostrando que a maioria das populações do sudeste asiático, compartilham uma característica genética comum de altas frequências de cromossomos haplogroup O-M175-derivado [20], [24], [25]. A distribuição de freqüências do cromossomo Y aqui estudado também foi concordante com os resultados anteriores de pesquisas coreano [20], [25].

distribuição haplogrupo Y-cromossômica em casos de câncer de próstata e controles na população coreana. A árvore parcimoniosa no topo mostra a relação evolutiva de quinze haplogrupos. A nomenclatura é de acordo com o Consórcio cromossomo Y [37].

aProstate câncer;

controle BNORMAL; Exata

P valor

= 0,44225 ± 0,02442

Não houve diferença estatisticamente significativa (p 0,05) foi observada na distribuição de haplogroup frequências Y-cromossômicas entre o caso e controle grupos (Figura 1). Nós especificamente re-investigou as associações anteriormente relatados encontrados na população japonesa nas amostras coreanos. Paracchini et ai. [12] relatou que as linhagens haplogrupo O-M122-derivados (O3 no seu papel) foram associados com uma predisposição estatisticamente significativa ao câncer de próstata em sua amostra japonês. Nós não encontramos nenhuma associação significativa com o risco de câncer de próstata em nossas amostras de linhagens haplogrupo O-M122-derivados (OR 1,16 (0,68-1,97), p = 0,60; Tabela 1), mesmo que essas linhagens são mais frequentes na população coreana do que nos japoneses [12], [20], [25]. Nem a estratificação por idade ( 65), nem pela gravidade da doença (. Utilizando os critérios do Paracchini et al [12]) levou a uma associação significativa (OR 1,50 (0,64-3,50), p = 0,35; OR 1,09 (0,59-2,02 ), p = 0,77, respectivamente; Tabela 2). EWIS et ai. [21] descobriram que o haplogrupo D /E-YAP foi significativamente sobre-representados em seus pacientes com câncer de próstata e haplogrupo O-SRY (incluindo o sublineage O-47z; O2b * e O2b1 respectivamente em seu papel) foi significativamente sub-representadas. A ausência do haplogrupo D /E-YAP da nossa amostra coreano (0%) tornou impossível avaliar a correlação entre esta linhagem e os casos de câncer (Figura 1). No entanto, podemos avaliar o efeito protetor da linhagem O-SRY. Na amostra coreana, nenhum efeito protector foi visto (OR 1,05 (0,58-1,92), p = 0,87; Tabela 1). Estas diferenças podem reflectir associações falsos positivos nos estudos anteriores, ou uma susceptibilidade genética expressa pela vida japonesa em um ambiente diferente: os pacientes examinados por Paracchini et al. [12], por exemplo, eram de os EUA. No entanto, os efeitos não parecem ser uma característica geral das populações do sudeste asiático, desde que eles não são detectados nas amostras adicionais de Coreia. Ainda é desejável estudar outras populações onde as linhagens são comuns.

Distribuição das linhagens haplogrupo O-M122 derivadas contra todas as outras linhagens combinadas em pacientes com câncer de próstata coreano pesquisados ​​aqui

os exames recentes da Ásia (por exemplo, Japão, Singapura e Coreia) têm mostrado uma tendência geral de um aumento da incidência de câncer de próstata, embora a incidência é ainda mais baixo na Ásia do que nos países ocidentais [26]. Parecem e Cheng [27] observaram que os aumentos nas taxas de mortalidade ajustadas por idade por 100.000 pessoas-ano, ajustados ao padrão mundial, variou de 50% na Tailândia e 260% na Coréia. A demografia mudando de cancro da próstata na Ásia pode ser explicada por factores ambientais. Muitos países asiáticos pode estar perdendo seus hábitos alimentares protetoras e adquirir aqueles de alto risco através da adopção de estilos de vida ocidentais [27]. Assim, novos estudos com outras amostras diferentes podem ser necessários para avaliar as acções conjuntas de fundo genética e fatores ambientais para a mais completa compreensão da oncogênese do câncer de próstata.

Métodos

Pacientes e controles

foram analisados ​​um total de 106 pacientes com câncer de próstata coreanas, que foram recrutados para o estudo do departamento de urologia da University School of Medicine Eulji em Seul e Daejeon, Coreia. A classificação histológica do câncer de próstata foi determinada de acordo com a recomendação da Organização Mundial da Saúde (OMS) e do padrão de Gleason. Próstata amostras de tecido de câncer de todos os pacientes foram coletados a partir de amostras congeladas. Além disso, um total de 110 homens coreanos que tinham sido diagnosticados como livre de câncer de próstata pelo hospital University Eulji em Seul e Daejeon, Coreia foram recrutados como controles normais. Estes assuntos foram selecionados de forma aleatória (e, portanto, provável que seja relacionado) da mesma área geográfica como os casos. Este estudo foi aprovado pelo Comitê de Eulji Medical Center da University School of Medicine Eulji em Seul Ética e consentimento informado foi obtido de todos os participantes.

DNAs foram preparados a partir das amostras de câncer de próstata de pacientes e sangue total amostras de controles de acordo com métodos padrão [28]

a genotipagem

Quatorze marcadores binários Y-cromossômicas foram escolhidos ao genótipo todos os indivíduos amostrados:. YAP [29], M7, M9 [30], RPS4Y

711 [31], SRY

465, DXYS5Y [32], P31 [33], M95, M119, M122, M134, M175, M214 [16], LINE1 [34]. Todos são conhecidos por ser polimórfico no leste da Ásia. A Y

Alu

de inserção (YAP), RPS4Y

711 (C à substituição T), M9 (C à substituição G), M175 (-5 pb), M95 (C a substituição T), SRY

465 (C à substituição T), DXYS5Y (G à substituição C), e inserção LINE1 foram digitados utilizando o protocolo descrito anteriormente [20].

o M7 (C à substituição G), M134 (-1 pb), M214 (T para C substituição), M119 (a a substituição de C), P31 (T para substituição C), e M122 (T para substituição C) marcadores foram amplificados utilizando os seguintes conjuntos de iniciadores e modificações relatadas pelos hammer et al. [33] e Underhill et ai. [16], [30]: M7, 5′-CTTGACCAATGCCTTGCAAA-3 ‘e 5′-CAGCCTTGTGATCCAATTA-3′; M134, 5’-AATCATCAAACCCAGAAGGG-3 ‘e 5′-CCTTGTTAGCTAATTTTGAGC-3′; M214, 5’-TGCTGATACAACACACTGGA-3 ‘e 5′-AGCCATGGAAATGCCACTTCAC-3′; M119, 5’-GTTATGGGTTATTCCAATTCAGC-3 ‘e 5′-GAATGCTTATGAATTTCCCAGA-3′; P31, 5’-TAAGGCTGCGTGTTCCCTAT-3 ‘e 5′-ATATCGTGCCATTGCACACC-3′; M122, 5’-CAGCGAATTAGATTTTCTTGC-3 ‘e 5′-TGGTAAACTCTACTTAGTTGCCTTT-3’. Cada reacção de PCR foi realizada num volume total de 25 uL contendo 25 ng de DNA genómico, 10 pM de cada iniciador, dNTP 0,2 mM, MgCl 2,0 mM

2, KCl 50 mM, Tris-HCl a 10 (pH 8,3), e 1,5 U de Ampli

Taq DNA polimerase (Perkin-Elmer, Foster, CA, EUA). As condições dos ciclos de PCR para o marcador M7 utilizado um primeiro passo de desnaturação a 94 ° C durante 5 min, e depois 35 ciclos a 94 ° C durante 45 seg, 54 ° C durante 45 seg, 72 ° C durante 1 min, e uma última extensão a 72 ° C durante 3 min. As condições de ciclização para o marcador M134 usado um primeiro passo de desnaturação a 94 ° C durante 5 min, e depois 35 ciclos a 94 ° C durante 45 seg, 55 ° C durante 45 seg, 72 ° C durante 1 min, e uma extensão final a 72 ° C durante 3 min. As condições de ciclização para o marcador M214 usado um primeiro passo de desnaturação a 94 ° C durante 5 min, e depois 35 ciclos a 94 ° C durante 45 seg, 53 ° C durante 45 seg, 72 ° C durante 1 min, e uma extensão final a 72 ° C durante 3 min. As condições de ciclização para M119 foram de 94 ° C durante 5 min, e depois 35 ciclos a 94 ° C durante 45 seg, 56 ° C durante 45 seg, 72 ° C durante 45 seg, e uma extensão final a 72 ° C durante 5 min . P31 foi amplificado com as condições de PCR de 95 ° C durante 5 min, e depois 35 ciclos a 94 ° C durante 30 seg, 56 ° C durante 30 seg, 72 ° C durante 45 seg, e uma extensão final a 72 ° C durante 2 min. As condições de ciclização para o marcador M122 foram de 94 ° C durante 5 min, e depois 35 ciclos a 94 ° C durante 1 min, 54 ° C durante 1 min, 72 ° C durante 1 min, e uma extensão final a 72 ° C durante 2 min. Os produtos de PCR foram digeridos para M122 com

Hsp

enzima 92II (New England Biolabs, Beverly, MA, EUA) e fraccionado em gel de agarose a 2%. Mutações do M7, M119, M134, M214 e P31 marcadores foram detectados por um método de PCR-SSCP, após amplificação por PCR descrito por Kutach et ai. [35]. Os padrões de bandas de seus alelos foram avaliados em uma corrida de gel de 10% PAGE nativa a 10 ° C em câmara fria e visualizados por coloração com prata como descrito em outro lugar [36].

Haplogrupos binários

Y-cromossômicas para todas as amostras próstata de casos e controlos cancerosas foram definidas pela análise de todos os 14 polimorfismos binários. A nomenclatura dos haplogrupos seguido a do consórcio cromossomo Y (YCC) [37].

Dados analisa

Y haplogroup frequências foram calculadas pela contagem dos fenótipos observados. Para testar a diferenciação populacional significativa entre os casos de câncer de próstata e os grupos de controlo, foi utilizado um teste qui-quadrado e exato de Fisher implementado no pacote Arlequin versão 2.0 [38]. O nível de significância do teste foi aplicado, com uma probabilidade de 0,05 como ponto de corte. Além disso, um teste de proporção e odds ratio (OR) com intervalo de confiança de 95% (IC) foram também calculados (https://home.clara.net/sisa/).

Reconhecimentos

Nós gostaríamos de agradecer a todos os voluntários para fornecer amostras de DNA para fazer este estudo possível. Um agradecimento especial a todos os urologistas e patologistas em Eulji Centro Médico do Hospital Universitário Eulji.