Abstract

CAR é uma proteína transmembrana que é expressa em várias células epiteliais e endoteliais. CARRO medeia a infecção adenoviral, bem como oncólise mediada por adenovírus de AxdAdB-3, um duplo E1a /E1b-restrito adenovírus oncolítico, em células de cancro da próstata. Este estudo avaliou ainda a eficácia terapêutica de AxdAdB-3 com Arg-Gly-Asp (RGD) a modificação de Fibra (AxdAdB3-F /RGD), o que permite a infecção dependente de integrina, no cancro da próstata. Susceptibilidade das células de cancro da próstata LNCaP, PC3 e DU145 a infecção por adenovírus foi associada com a expressão CAR. Todas as linhas de células de câncer de próstata expressa α integrina

vp

3 e α

vp

5. AxdAdB-3 foi mais citopático em células de câncer de próstata Car-positivo do que em células CAR negativo, enquanto AxdAdB3-F /RGD causou potente onc�ise em ambas as células cancerosas da próstata CAR-positivos e carro-negativo. Em contraste, AxdAdB3-F /RGD não foi citopático contra células epiteliais de próstata normais, RWPE-1. injeção intratumoral de AxdAdB3-F /RGD em xenoenxertos de células de câncer de próstata Car-negativo em ratos pelados inibiu o crescimento do tumor. O presente estudo demonstra que E1A /E1B de adenovírus oncolítico duplo restrita com uma modificação de fibra de RGD aumenta a eficiência de infecção e actividade anti-tumoral em células de cancro da próstata em carros deficiente, enquanto poupam as células normais. Os estudos futuros avaliar o potencial terapêutico de AxdAdB3-F /RGD no cancro da próstata

citação:. Shen Y-H, Yang F, Wang H, Cai Z-J, Xu Y-P, Zhao, A. et al. (2016) Arg-Gli-Asp (RGD) -Modified E1A /E1B mutante duplo Adenovirus Melhora antitumoral Atividade no câncer de próstata Células

In Vitro Comprar e em camundongos. PLoS ONE 11 (1): e0147173. doi: 10.1371 /journal.pone.0147173

editor: Ilya Ulasov, sueco Neuroscience Institute, United States |

Recebido: 10 de maio de 2015; Aceito: 30 de dezembro de 2015; Publicação: 22 de janeiro de 2016

Direitos de autor: © 2016 Shen et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Data Availability:. Todos relevante os dados estão dentro do papel

Financiamento:. Este estudo foi apoiado em parte por uma bolsa da Natural Science Foundation da província de Zhejiang, China (# LY12H16031) e do Bureau da província de Zhejiang, China (# 2012KYA025) Saúde .

Conflito de interesses:. os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

o câncer de próstata é o tumor maligno mais comumente ocorrem no mundo, especialmente nos países ocidentais. Estima-se que o câncer de próstata irá causar 220,800 novos casos e 27.540 mortes relacionadas ao câncer em os EUA em 2015. [1] Na China, a incidência de câncer de próstata tem vindo a aumentar rapidamente nas últimas décadas, e mais de 70% dos pacientes com câncer de próstata ter avançado ou doença metastática. [2] até à data, a terapia hormonal é ainda a terapêutica mais útil para pacientes com cancro da próstata, mas é administrada durante um limitado período de tempo e quase todos os pacientes com cancro da próstata que recebem andrógeno ablação em última análise, progredir para doença refractária androgénio, [3] conhecido como cancro da próstata resistente à castração (CRPC). quimioterapia à base de docetaxel é muitas vezes usado para tratar pacientes com CRPC, mas a sobrevivência livre de progressão só dura seis meses. [4] Embora o novo inibidor receptor de andrógeno (enzalutamida) e citocromo P450, família 17, subfamília Um polipeptídeo inibidor (CYP17) ( abiraterona) foram relatados para tratar de forma mais eficaz os pacientes CRPC, esse tratamento só pode melhorar a sobrevivência de alguns meses. [5, 6] Portanto, são urgentemente necessárias novas e mais eficazes estratégias de tratamento para melhorar o prognóstico do câncer de próstata.

estudos anteriores mostraram que um adenovírus oncolítico foi capaz de replicar e matar selectivamente as células cancerosas, enquanto poupando células normais. Esta terapia viral oncolitico poderia ser clinicamente promissor para o tratamento de cancros humanos, incluindo o cancro da próstata. [7-9] O nosso estudo anterior demonstrou que um duplo E1a /E1b adenovírus mutante oncolítico, AxdAdB-3, tinha actividade anti-tumor num ortotópico, SCID cancro da próstata (imunodeficiência grave combinada) modelo de rato [10]. no entanto, AxdAdB-3 mostrou efeitos citopáticos insuficiente em algumas linhas celulares de cancro da próstata que expressavam baixos níveis de receptor de vírus coxsackie adenovírus (CAR). [10] CAR é uma proteína transmembranar que é expresso em várias células e funções epiteliais e endoteliais para mediar a infecção por adenovírus. As células cancerosas com a diminuição da expressão de automóveis têm sido referidos como sendo resistentes à infecção virai e a terapia génica mediada por adenovírus. [11] no cancro da próstata, a expressão CAR é frequentemente ausente, [12, 13], que pode limitar o uso de terapia de genes entregues por adenovírus . Um estudo anterior demonstrou que a inserção do péptido Arg-Gly-Asp (RGD) no circuito de HI do domínio botão de fibra melhorado o adenovírus mediada transdução de genes em células de car-negativo, através da ligação do péptido RGD de integrinas nas células alvo [14]. Assim, no presente estudo, avaliou-se a eficácia terapêutica do duplo E1a /E1b adenovírus mutante oncolítico, AxdAdB-3, com Arg-Gly-Asp (RGD) a modificação de Fibra (AxdAdB3-F /RGD) na próstata cancer

in vitro Comprar e em ratinhos nus.

Materiais e Métodos

As linhas celulares e cultura

linha de células de cancro da próstata andrógeno-dependentes humano LNCaP (metástase para o nódulo linfático), independente de androgénio humano linhas celulares de cancro da próstata PC3 (metástases para o osso) e DU145 (metástase para o cérebro), e células epiteliais de próstata normais de adultos infectados com uma única cópia do vírus do papiloma humano 18 (chamado RWPE 1) foram obtidos de American Type Culture Collection (ATCC) (Manassas, VA, EUA). células LNCaP têm o tipo p53 selvagem e expressão p16; [15, 16] células PC3 ter sofrido uma mutação p53 mas metilado tipo selvagem p16;. [15, 16] e DU-145 células têm tanto p16 p53and mutado [15, 16] de rim embrionário humano 293 células (HEK-293) foram obtidos a partir do Banco celular da Academia chinesa de Ciências (Xangai, China). As linhas celulares foram mantidas em Roswell Park Memorial Institute ou meio essencial mínimo de Eagle (por HEK293) suplementado com 10% de soro bovino fetal, 100 Ul /ml de penicilina, e estreptomicina 100 ug /ml em humidificada com 5% de CO

2 atmosfera a 37 ° C. RWPE-1 foram mantidas em K-SFM meio completo (Cell Systems, Kirkland, WA, EUA) e, em seguida, presas em K-SFM sem factor de crescimento de soro antes da infecção viral.

adenovírus recombinantes e infecção de células

AxCAZ3-F /RGD [17] e AxCAlacZ [18] são E1 suprimido vectores de adenovírus de replicação deficiente que expressa

Escherichia coli

gene lacZ sob o controlo do promotor CAG com ou sem um péptido RGD na ciclo HI do domínio globular da fibra. AxdAdB-3 tem um Ad5 mutante competente para replicação contendo a mutação SXGXE (STGHE) em vez do motivo LXCXE (LTCHE) Rb-ligação no E1A e eliminação de E1B55 KD [19]. Para construir AxdAdB3-F /RGD utilizando pWEAxKM-F /RGD, que clonados os aminoácidos RGD-4C no circuito HI do domínio globular da fibra entre os resíduos de aminoácidos 546 e 547, com uma deleção de E3. As sequências de aminoácidos de RGD-mutação foram T 546 547. CDCRGDCFCP AxdAdB3-F /RGD foi gerado por células HEK293 co-transfecção com pWEAxKM-F /ADN cosmídeo RGD, que tinha sido digerido com

Cla I

e

Pac

I, juntamente com o

EcoR

I e

Ase

I-ADN digerido-TPC (complexo proteico terminal) de AxdAdB3 [17]. Os vectores virais foram fornecidos pela Riken Gene Bank (Tsukuba, Japão) e transfectado para células HEK293 para produzir adenovírus e o título virai foi determinado por um ensaio de placas padrão.

Para a infecção, as células foram semeadas sobre um 6 placa -bem e cresceu durante a noite. No dia seguinte, as células foram infectadas com AxCAlacZ ou AxCAZ3-F /RGD a uma multiplicidade de infecção (MOI) de 100, durante 24 h. A expressão da proteína hexon de adenovírus nas células infectadas foi determinada por análise de Western blot. Enquanto isso, as células foram infectadas com AxCAlacZ ou AxCAZ3-F /RGD adenovírus a uma MOI de 100 durante 24 h e níveis de proteína hexon adenoviral em células infectadas foram então avaliadas utilizando citometria de fluxo (descrito na secção seguinte) com um anti-rato monoclonal anticorpo hexon (MAB805, Chemicon International, Temecula, CA).

extracção de proteínas e de Western blot

as células foram lisadas em tampão de lise de 100 ul e a concentração de proteína foi medida pelo método BCA. Em seguida, quantidades iguais de amostras de proteína no sobrenadante foram separados utilizando dodecilsulfato de sódio a electroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) num gel de SDS-PAGE a 12% e, em seguida, transferidos para uma membrana de difluoreto de polivinilideno (Millipore, Billerica, MA, EUA) . A membrana foi então incubada com um anticorpo monoclonal de ratinho anti-hexon (MAB805, Chemicon International, Temecula, CA, EUA) e subsequentemente incubados com um anti-rato IgG durante 1 h seguido por quimioluminescência aumentada (ECL; Cell Signaling Technology, MI , CA, EUA). A membrana foi, em seguida, expostos a filmes de raios-x digitalizados e para quantificação usando o Image J Software (Instituto Nacional de Saúde, Bethesda, MD, EUA).

A citometria de fluxo para determinar a expressão de níveis CAR e integrina nas células

As células foram semeadas numa placa de 6 poços e cultivadas durante a noite. Para detectar a expressão de CAR e integrina α

Vp

3 e α

Vp

5, as células foram separadas utilizando uma solução de dissociação isento de enzima e, em seguida, incubadas com um anticorpo monoclonal de ratinho CARRO anti-humano (Upstate Biotechnology, Lake Placid, Nova Iorque, EUA), um rato monoclonais α integrina anti-humanos

vp

3 anticorpo (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, EUA), ou um monoclonal anti-integrina humana α

Vp

5 anticorpo (R D Systems, Inc., Minneapolis, MN, EUA), todos a uma diluição de 1: 100 durante 1 h em gelo. Em seguida, as células foram lavadas três vezes com solução salina tamponada com fosfato (PBS), e depois ainda incubada durante 30 min com um anticorpo conjugado com isotiocianato de fluoresceína secundário. Após as lavagens, as células foram imediatamente analisadas por um citómetro de fluxo (Becton Dickinson, San José, CA, EUA).

Contagem

célula viabilidade celular Kit-8 (CCK-8) ensaio

células (3 x 10

3 por poço) foram semeadas em placas de 96 poços e infectadas com AxCAlacZ, AxCAZ3-F /RGD, AxdAdB-3, e AxdAdB3-F /RGD a uma MOI de 30 durante 0, 1, 3, 5 e 7 dias. A viabilidade celular foi avaliada utilizando CCK-8 (Dojindo, Japão) de acordo com o protocolo do fabricante. Resumidamente, 10 uL de CCK-8 solução foi adicionada a cada poço e as células foram incubadas durante 4 h. A absorvência do formazano corado foi medida utilizando um leitor de microplacas a 450 nm.

As experiências com animais

Os efeitos antitumorais de AxdAdB3-F /RGD foram avaliadas num modelo de tumor subcutâneo em 6 de semana ratinhos BALB /C macho velhas. Resumidamente, os ratinhos foram injectados subcutaneamente com 5 x 10

6 células PC3 para a formação de xenoenxerto de tumor de cerca de 6-7 mm de tamanho. Os ratinhos foram, em seguida, administrada uma injecção intratumoral de AxCAZ3-F /RGD, AxdAdB-3, ou AxdAdB3-F /RGD (1 x 10

8 unidades formadoras de placas), uma vez por dia durante três dias consecutivos. O tamanho do tumor foi então medida utilizando um paquímetro semanal e volume tumoral electrónico foi calculada utilizando a seguinte fórmula: Volume = x maior dimensão menor dimensão

2 x 0,4. No dia 28 após o tratamento, os ratinhos foram sacrificados e os xenoenxertos de tumor foram tomadas e processadas para análise imuno-histoquímica da proteína hexon adenoviral para determinar a replicação adenoviral em lesões de tumor. Resumidamente, secções embebidas em parafina foram desparafinizadas em xileno, re-hidratada com etanol, e, em seguida, imunocoradas de acordo com as instruções do fabricante, usando um kit de imuno-histoquímica contendo técnica de estreptavidina-biotina (kit LSAB, Dako, Japão) e um anticorpo monoclonal de ratinho anti-hexon (# MAB805, Chemicon International).

a análise estatística

As análises estatísticas foram realizadas utilizando software SPSS para Windows, versão 19 (SPSS Inc., Chicago, IL, EUA). Os dados foram resumidos como média ± desvio padrão e a significância das diferenças entre os grupos foram analisados ​​estatisticamente usando um teste não pareado bicaudal t. P 0,05 foi considerado estatisticamente significativo.

Resultados

CAR e integrina expressão em células de câncer de próstata e células epiteliais da próstata normais

citometria de fluxo dados mostraram um alto nível de expressão CAR em DU145 células, um nível moderado em LNCaP e as células RWPE-1 e um nível muito baixo em células PC3 (figura 1). a expressão da integrina também foi diferente nestas linhas celulares, mas a linha celular PC3 CAR-negativa expressa níveis elevados de α integrina

Vp

5 (Figura 1).

As células foram cultivadas e imunocoradas com CARRO , α integrina

Vp

3, ou α

Vp

5 de anticorpo e, em seguida, submetidas a análise citométrica de fluxo. Colunas, percentagens de células que expressam CAR, avp3 e avp5. Os dados são apresentados como médias ± desvio padrão para três experiências independentes.

RGD-fibra modificada capacidade de infecção de adenovírus

Depois de 24 h infecção com o adenovírus, foi utilizada a análise de Western blot para detectar a expressão da proteína hexon de adenovírus nas células infectadas (figura 2A). a expressão da proteína hexon foi semelhante nas linhas celulares Car-positiva DU145, LNCaP e RWPE-1 após uma AxCAlacZ ou AxCAZ3-F infecção /RGD. No entanto, a linha celular PC3 CAR-negativa (que expressam α integrina

Vp

5) mostrou elevados níveis de expressão da proteína hexon após AxCAZ3-F /infecção RGD em comparação com células infectadas com AxCAlacZ (Fig 2A), o que indica que RGD modificação de fibra reforçada adenovírus (AxCAZ3-F /RGD) capacidade de infecção em células cancerosas da próstata Car-negativo.

a, RGD-fibra modificada capacidade de infecção de adenovírus. A análise por Western blot da expressão da proteína hexon de infecção simulada em (1) ou infecção com AxCAlacZ (2) e AxCAZ3-F /RGD (3) em células de cancro da próstata. B, análise de citometria de fluxo da expressão da proteína hexon em células infectadas com adenovírus RGD ou células infectadas com adenovírus AxCAlacZ AxCAZ3-F /. Os dados são apresentados como médias ± desvio padrão para três experiências independentes. ** P 0,01 e N. S., não é estatisticamente significativa. C, efeitos citopáticos de RGD fibra modificada adenovirus em células de cancro da próstata. As células foram infectadas com AxCAlacZ (losangos), AxCAZ3-F /RGD (quadrados), AxdAdB-3 (triângulos) e AxdAdB3-F /RGD (círculos) a uma MOI de 30 durante 0, 1, 3, 5, e 7 dias e, em seguida, submetido a um ensaio de viabilidade celular. Os dados são apresentados como médias ± desvio padrão para três experiências independentes. ** P 0,01 e N.S., não estatisticamente significativa.

também avaliada por infecciosidade de células activada por fluorescência para detectar a proteína hexão do adenovírus nas células infectadas (Fig 2B). DU145 CAR-positivo, células LNCaP e RWPE-1 mostraram expressão semelhante da proteína hexon após uma AxCAlacZ ou AxCAZ3-F infecção /RGD. Em agudo contraste, a linha celular PC3 CAR-negativo, que expressa a aVp5, mostrou expressão de proteína hexon em células infectadas com AxCAZ3-F /RGD mas não com AxCAlacZ, o que era consistente com os resultados de Western blot.

efeitos citopáticos de adenovirus em células de câncer de próstata

AxdAdB-3 foi mais citopático em células de câncer de próstata Car-positivo (LNCaP ou DU145) do que em células CAR negativo (PC3). AxdAdB3-F /RGD causou potente onc�ise em linhas celulares de cancro da próstata CAR-positivos e carro-negativos (Fig 2C), indicando que RGD de fibra de adenovírus modificado (AxdAdB3-F /RGD) atividade antitumoral aumentada em células de câncer de próstata CAR negativo . No entanto, AxdAdB3-F /RGD não foi citopático na próstata normal de linha de células RWPE-1 epiteliais imortalizada-HPV (Fig 2B).

A actividade antitumoral de AxdAdB3-F /RGD

in vivo

em primeiro lugar, estabelecidos xenoenxertos de células PC3 câncer de próstata em ratos nus e, em seguida, injetada diretamente AxdAdB3-F /RGD ou controle de vírus AxdAdB-3 em lesões tumorais, uma vez por dia durante três dias. Os ratinhos foram sacrificados no dia 28 e a actividade antitumoral AxdAdB3-F /RGD. curva de crescimento do tumor, e o volume tumoral foram medidos (Figura 3). xenoenxertos de tumor também foram analisadas quanto à expressão de proteína hexon viral (Figura 4). Os nossos dados mostraram que AxdAdB3-F /RGD crescimento significativamente inibida dos xenoenxertos de tumor in

em vi vo

a 4 semanas depois do tratamento em comparação com AxdAdB-3 (P 0,005; Figura 3).

células PC3 cancro da próstata foram injectados subcutaneamente em ratinhos nus. Depois de lesões do tumor atingiu cerca de 6-7 mm de tamanho de vírus foi injectado na lesão do tumor uma vez por dia durante três dias e os ratinhos foram sacrificados no dia 28. O volume do tumor foi medido após os animais foram tratados com o vírus (n = 5 por grupo) . Os dados são apresentados como o volume de tumor média ± desvio padrão. ** P 0,005.

AxdAdB3-F /RGD tratamento resultou em necrose tumoral mais extensa do que AxdAdB-3 (coloração HE, magnificação original x 200 no painel superior, x 400 no painel do meio). coloração imuno-histoquímica dos tumores tratados com RGD AxdAdB3-F /detectada proteína hexon adenoviral (painel inferior, ampliação x 400 original).

Discussão

O nosso estudo demonstra que a fibra RGD é capaz de modificar a atividade antitumoral do E1A /E1B dupla adenovírus mutante AxdAdB3-F /RGD em células de câncer de próstata

in vitro Comprar e no modelo de ratinho de xenoenxerto nu. Os nossos dados actuais indicam que AxdAdB3-F /RGD possui uma actividade terapêutica potente no cancro da próstata. AxdAdB3-F /RGD causou fortes efeitos citopáticos em todas as linhas de células de câncer de próstata testados, independentemente de expressão CAR. AxdAdB3-F /RGD também inibiu o crescimento de xenoenxertos de cancro da próstata em ratinhos nus. No entanto, sem modificação RGD, vírus AxdAdB-3 apenas mostrou atividade antitumoral em células de câncer de próstata Car-positivo. São necessários mais estudos para avaliar a segurança global destes adenovírus antes do uso em doentes humanos.

infecção adenoviral requer a ligação do vírus à superfície das células-alvo por ligação do domínio maçaneta da fibra de CAR, e, em seguida, subsequente internalização através da interacção de motivos RGD da base do pentão com receptores de integrina α

Vp

3 e α

Vp

5. [14, 20] Assim, CARRO desempenha um papel crucial na mediação e promoção da infecção por adenovírus. Normalmente, as células de cancro expressam níveis muito baixos de proteína CAR e resistir à infecção adenoviral, e são, portanto, refractários à terapia viral mediada por adenovírus. [11] No presente estudo, confirmou-se que a infecção AxdAdB-3 foi capaz de reduzir a viabilidade de cancro da próstata linhas celulares DU145 e LNCaP, que expressam níveis elevados ou moderados de carro, mas tiveram efeitos limitados de células PC3, que expressa níveis muito baixos de carro. Na verdade, linhas celulares de cancro da próstata e tecidos tumorais frequentemente diminuíram ou perda de expressão CAR. [12] Para melhorar a infectividade do adenovírus oncolytic no cancro da próstata CAR-negativo, nós modificamos o vírus com RGD para produzir um AxdAdB3-F /RGD vírus, o que aumentou significativamente a atividade de adenovírus oncolytic no câncer de próstata.

AxdAdB3-F /RGD é um vírus contendo um peptídeo RGD, que pode mediar não só a entrada do vírus dependente de carro, mas também independente do CAR e RGD-integrina (α

vp

3 e α

vp

5) a entrada do vírus dependente em células-alvo. As células cancerosas que expressam carro ou integrina seria, portanto, suscetíveis a AxdAdB3 F-infecção /RGD. Assim, embora perda ou diminuição da expressão CAR ocorre com freqüência no câncer de próstata, expressão abundante de α integrina

vp

3 e α

vp

5 deve facilitar a infecção pelo vírus. [21] Nosso estudo confirmou esta hipótese e mostrou que AxCAZ3-F /capacidade de infecção reforçada RGD em comparação com AxCAlacZ (sem RGD) em células PC3 Car-negativo. Além disso, AxdAdB-3 foi mais citopático em células CAR-positivos em comparação com células Car-negativo; no entanto, AxdAdB3-F /RGD causado efeitos citopáticos potentes, tanto em células CAR-positivas e células Car-negativo. Além disso, AxdAdB3-F /RGD inibiu o crescimento de xenotransplante no modelo nu mouse. Estes dados sugerem que RGD adenovírus modificado fibras aumenta a capacidade de infecção por adenovírus e onc�ise eficácia através de integrina (avp3 e avp5) entrada dependente. Devido à sua maior capacidade de infecção, AxdAdB3-F /RGD a uma dose viral mais baixa poderia potencialmente evitar alguns efeitos secundários adversos, aumentando a eficácia da terapia virai.

Os nossos dados demonstram que os níveis actuais de RCA e integrina α

vp

3 expressão são ricos em DU145 e pobre em células PC3, que é semelhante aos achados em um estudo prévio por Adams

et

.

al

. [22]. Curiosamente, o nosso estudo constatou que α integrina

vp

5 expressão foi alta em DU145 e células PC3. Isto é inconsistente com o estudo Adams “[22], que mostrou que α integrina

vp

5 expressão é rico em DU145, mas pobre em células PC3. No entanto, de acordo com nossos resultados, os níveis de α integrina

vp

5 foram superiores a integrina α

vp

3 em células PC3 em relatório Adams ‘. [22]. No entanto, as quantidades de α integrina

vp

5 variada. Outro estudo anterior [23] também demonstraram que as células LNCaP PC3 e expressou α integrina

vp

5 em níveis semelhantes, o que é consistente com nossos resultados atuais. Assim, mais estudos são necessários para verificar estes dados e os seus mecanismos moleculares subjacentes.

Além disso, nossos dados atuais demonstram que AxdAdB3-F /RGD tem menos efeitos citopáticos nas células epiteliais da próstata normal, imortalizado pelo HPV. Adams

et

.

al

. [22] relatou que o mutante adenoviral oncolytic AdΔΔ em modelos de câncer de próstata (AdΔΔ tem uma mutação de E1A no CR-2) eliminou a ligação a pRb e exclusão de 19 KD E1B reforçada a potência oncolytic. No entanto, os estudos publicados demonstraram que quer E1A ou E1B mutante único era capaz de se replicar em células normais. [24,25] O nosso estudo anterior mostrou que E1A /E1B de adenovírus duplo mutante oncolítico, AxdAdB-3, não induzem toxicidade significativa em comparação para E1A ou E1B único adenovírus mutante em linhas de células normais derivadas da próstata. [10] o nosso estudo é consistente com os estudos anteriores que mostraram que o duplo E1a /E1b adenovírus oncolítico mutante foi menos tóxico em comparação com E1A ou E1B mutantes simples em condições normais células, mas teve um efeito oncolítico semelhante em células cancerosas. [19, 26] recentemente, os ensaios clínicos de adenovírus oncolíticos entregue intratumoral, intraperitonealmente, e intravenosamente para tratar pacientes com recidiva ou quimioterapia avançada tumores sólidos refractários foi relatado para ser seguro e potencialmente eficaz. [27] Assim, esses estudos são encorajadores e suportam o uso de AxdAdB3 /F-RGD como um agente terapêutico para o cancro da próstata. Além disso, o cancro da próstata é bem adequado para a terapia adenoviral oncolítico devido à facilidade de entrega de adenovírus no intra-próstata, permitindo altos títulos de adenovírus para infectar as células de tumor sem disseminação para outros locais. [9] Os resultados de replicação O adenovírus na libertação de progenitura vírus para infectar as células de tumor adjacentes, que conduz à amplificação do vírus de entrada. Mais uma vez, duplo E1a /E1b adenovírus oncolítico mutante é capaz de se replicar em células alvo e células tumorais lisam que têm anormalidades no p53 e /ou p16 /RB /vias de E2F. [19] O cancro da próstata muitas vezes tem uma ampla variedade de mutações genéticas, incluindo o p53, pRb e p16 vias, [28] e seria um local órgão ideal para a terapia adenovírus oncolytic.

Nosso estudo atual fornece a prova de princípio, e mais trabalho é necessário antes que os nossos resultados podem ser traduzidos para aplicação clínica. Nossos dados atuais demonstram que E1A /E1B de adenovírus oncolytic duas vezes restrito com modificação de fibra de RGD aumenta a capacidade de infecção viral e atividade antitumoral em ambas as células cancerosas da próstata CAR-positivos e negativos

in vitro Comprar e em xenoenxertos nu do rato, enquanto poupadores células normais.