Abstract

Fundo

A regeneração hepática (LR ) envolve uma fase indutiva precoce caracterizada pela proliferação de hepatócitos, e uma fase retardada angiogénico distingue-se pela expansão do compartimento não parenquimatoso. O interesse em compreender o mecanismo da LR ultimamente tem mudado desde a proliferação e crescimento das células do parênquima a remodelação vascular durante LR. A angiogénese acompanhada por LR exerce um papel central para realizar o processo. factor de crescimento endotelial vascular (VEGF) tem sido elucidado como o regulador mais dinâmico da angiogénese. A partir desta perspectiva, derivado de plaquetas /Intra-plaquetas (IP) VEGF-A deve ser associado a LR.

Material e Métodos

Trinta e sete pacientes diagnosticados com carcinoma hepatocelular e submetidos a hepatectomia parcial ( PH) foram incluídos no estudo. Soro e IP VEGF-A foi monitorada no pré-operatório e com quatro semanas de PH. volumetria hepática foi determinada em modelos de computador derivados de tomografia computadorizada (TC).

Resultados

Soro e IP VEGF-A foi significativamente elevado em quatro semanas de PH. Pré-operatório IP VEGF-A foi maior em pacientes com câncer avançado e invasão vascular. Pós-operatória IP VEGF-A foi maior após grande ressecção hepática. Houve uma correlação estatisticamente significativa entre pós-operatória VEGF-A IP e para o futuro volume de fígado remanescente. Além disso, o receptor-1 do fator de crescimento endotelial vascular solúvel (sVEGFR1) foi claramente regulada para baixo, sugerindo uma angiogênese aperfeiçoá-lo na fase posterior da LR.

Conclusão

IP VEGF-A é superexpresso durante a fase posterior do LR sugerindo suas implicações na indução de angiogênese durante LR

Citation:. Aryal B, Shimizu T, Kadono J, Furoi A, Komokata T, Inoue M, et al. (2016) um interruptor na Dinâmica da Intra-Platelet VEGF-A partir do Câncer para a fase posterior do fígado regeneração após hepatectomia parcial em humanos. PLoS ONE 11 (3): e0150446. doi: 10.1371 /journal.pone.0150446

editor: Domenico Ribatti, Universidade de Bari Medical School, ITALY

Recebido: 19 Janeiro, 2016; Aceito: 15 de fevereiro de 2016; Publicação: 01 de março de 2016

Direitos de autor: © 2016 Aryal et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Data Availability:. Todos relevante dados estão disponíveis no papel e seus arquivos de suporte de informação

financiamento:.. os autores não têm apoio ou financiamento para relatar

Conflito de interesses:. os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Abreviaturas: HCC, carcinoma hepatocelular; LR, a regeneração do fígado; PH, hepatectomia parcial; O VEGF-A, factor de crescimento endotelial vascular-A; TACE, quimioembolização arterial percutâneo; RFA, a ablação por radiofrequência; IP, intraplaquetário; ALT, alanina aminotransferase; ALP, fosfatase alcalina; AST, aspartato aminotransferase; GGT, gama-glutamil transferase; CRP, proteína C-reativa; De HGF, factor de crescimento de hepatócitos; EGF, factor de crescimento epidérmico; sVEGFR, solúvel do receptor de VEGF; Ang-1, angiopoetin-1; IL-6, interleucina-6; TNF-α, factor de tecido necrótico alfa; PDGF-BB, factor de crescimento derivado das plaquetas-BB; ELISA, enzyme-linked immunosorbent assay; ICG, indocianina verde; PRE OP, no pré-operatório; POST OP, no pós-operatório; RLV, o volume de fígado remanescente; FRLV, futuro remanescente volume do fígado

Introdução

A regeneração hepática é um fenômeno bem orquestrada essencial para a restauração aguda do volume do fígado após a ressecção e manutenção do seu volume durante a lesão hepática crónica. Um fígado em regeneração, após hepatectomia parcial (PH), requer a formação de uma rede complexa de sinusóides do fígado através do qual o sangue flui. Assim, a fase angiogénico é um processo fundamental de LR, que ocorre predominantemente na fase posterior [1]. Entre os sete membros do factor de crescimento endotelial vascular (VEGF) familiar (VEGF-A, VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D, VEGF-E, o VEGF-F, e PlGF), VEGF-A situa-se na vanguarda formação de vasos sanguíneos [2, 3]. O VEGF-A é conhecido como o factor de crescimento mais potente e específica para ambos angiogénese e vasculogénese [4, 5]. Importante, VEGF-A detém um papel regulador na diferenciação e o crescimento de células endoteliais hepáticas sinusoidais (LSECs) [6]. O VEGF-A tem sido considerada como um jogador angiogénico central da LR [7].

A lesão hepática provoca trapping e acumulação de plaquetas no fígado, onde eles aderem ao endotélio e esta interacção é considerado para activar por LSECs a libertação de vários factores de crescimento, incluindo VEGF-a [8]. Ao mesmo tempo, diferentes factores de crescimento libertados a partir de plaquetas activadas também são responsáveis ​​para os efeitos proliferativos em hepatócitos [8]. Notavelmente, recente

in vitro

estudo sugere que as plaquetas entregar seu conteúdo RNA ao hepatócito e esta transferência RNA contribui para a proliferação de hepatócitos mediada por plaquetas [9]. Um novo novo mecanismo pelo qual as plaquetas se comunicar com o meio ambiente tem sido conhecido, que envolve o

síntese proteica de novo [10] em vez de travamento a partir da circulação.

plaquetas secretada VEGF-A, como um fator angiogênico robusta, ganhou atenção significativa por seu papel duro aos biologia do tumor [11-14]. As plaquetas também modular a cicatrização de feridas e a regeneração dos tecidos pela libertação dos seus factores de crescimento, como VEGF-A [15]. Deve haver uma variação discernível entre a angiogénese patológica e fisiológica impulsionado pelo plaquetas VEGF-A. Neste estudo, avaliou-se o nível de IP VEGF-A pré-operatório e com quatro semanas de hipertensão pulmonar em pacientes com carcinoma hepatocelular (HCC). Como resultado, foi observado um nível significativamente mais elevado de IP VEGF-A a quatro semanas de PH. Pré-operatório IP VEGF-A apresentou associação positiva com a progressão HCC. O VEGF-A nível IP foi observado proeminente durante a fase posterior de LR ea elevação foi associada com o volume de fígado remanescente futuro (FRLV).

Pacientes e Método

Prospective Study coortes

de maio de 2013 a dezembro de 2014, 37 pacientes submetidos a ressecção hepática foram incluídos no estudo. Para manter a homogeneidade da amostra, apenas os pacientes com carcinoma hepatocelular primário (HCC) foram incluídos no estudo. O diagnóstico foi feito com base em tomografia abdominal computadorizada (TC), imagiologia por ressonância magnética (MRI), alfa-fetoproteína (AFP) e protrombina induzida pela ausência de vitamina K-II (PIVKA-II). ressecções hepáticas foram classificados de acordo com a Associação Internacional Hepato-Pancreato-biliar, Brisbane (IHPBA) 2000 nomenclatura: major hepatectomia definido como ressecção de 3 ou mais de 3 segmentos Couinauds e hepatectomia menor como a ressecção de menos de 3 segmentos Couinauds

Coleta de Amostras de

O sangue venoso foi coletado imediatamente antes da cirurgia (PRE OP) e quatro semanas após a cirurgia (pós-operatório). hemograma completo (CBC) foi realizada com um analisador hematológico automatizado Sysmex XE-5000 (Sysmex Corporation, Kobe, Japão).

O comitê de ética institucional (Universidade Kagoshima # 24-155 /26-77, Kirishima Medical centro # 2505 e Kagoshima Medical center # 25-30) aprovou análises de amostras de sangue e de dados do paciente; todos os pacientes deram assinado, o consentimento informado. Todos os três comitê de ética institucional revisto e aprovado especificamente neste estudo. Estudo foi realizado de acordo com os padrões éticos da Comissão de Experimentação Humana da instituição em que os experimentos foram feitos, ou de acordo com os padrões éticos da Declaração de Helsinque de 1975.

Soro e Plasma Preparação

o sangue total foi recolhido no tubo de separação de soro e um tubo de citrato, contendo 0,5 ml de citrato de sódio, e um tubo de EDTA-2K para contagem de células (Venoject II, Terumo Corp., Tóquio, Japão). O soro foi incubado tubo sem perturbação à temperatura ambiente durante 30 minutos para permitir a coagulação. Ambos os tubos de soro e plasma foram centrifugados a 1710 × g durante 10 minutos.

Os sobrenadantes resultantes foram cuidadosamente pipetado, pelo menos, 5 mm acima do coágulo.

plaquetas Isolamento

O sangue foi coletado em dois tubos de citrato. Os tubos foram centrifugados a 90 x g durante 15 minutos. O plaquetas resultante plasma rico (PRP) foi suavemente pipetados com as precauções para evitar a contaminação. Em seguida, o PRP foi centrifugado a 2810 x g para isolar as plaquetas. O sobrenadante (plasma pobre em plaquetas) foi recolhida de forma muito precisa e decantou-se para a completa remoção do plasma a partir dos peletes. peletes de plaquetas isoladas de cada 200 ul de PRP foram suspensos em 220 ul de tampão de lise (cloreto de sódio 150 mM, Tris-HCl 25 mM, pH 7,6, 1% de Tergitol-Tipo NP-40, 0,1% de dodecilsulfato de sódio, 1% de desoxicolato de sódio ); Após incubação durante 20 minutos, a solução foi pipetada lisado e agitadas até as peletes foram completamente dissolvidos na solução

CBC foi realizada em 3 preparações:.. sangue total, o PRP e o PPP

quantificação dos factores de crescimento e citocinas

soro, extractos de plaquetas e de plasma foram analisadas em conjunto comercialmente disponível por ensaio imunossorvente ligado a enzima (ELISA), ensaios para VEGF-a, HGF, factor de crescimento epidérmico (EGF), de plaquetas derivada do factor de crescimento BB (PDGF-BB), solúvel do receptor de VEGF-1 (sVEGFR-1) e VEGF-2 solúvel do receptor (sVEGFR-2), Angiopoetin-1 (Ang-1), Interleucina-6 (IL-6) (Quantikine, R D Systems, Minneapolis, MN, EUA) e factor de necrose tumoral alfa (TNF-α) (Novex, Life Technologies, Carlsbad, CA, EUA); de acordo com as orientações do fabricante

Cálculo do IP VEGF-A

Teor de plaquetas do VEGF-A por 10

6 plaquetas foi calculada usando a equação:.

intraplaquetário (IP) Ang-1 foi calculada usando a equação similar.

Avaliação da função hepática

bilirrubina sérica, albumina, aspartato aminotransferase (AST), alanina aminotransferase (ALT), fosfatase alcalina (ALP) , gama-glutamil transferase (GGT), alfa-fetoproteína (AFP), proteína C-reativa (PCR) e tempo de protrombina (PT) foram medidas como exame de sangue de rotina.

reserva funcional hepática foi avaliada por indocianina verde (ICG) teste de depuração, 99mTc-galactosil albumina do soro humano (GSA) cintilografia e escore de Child-Pugh

hepáticas pré-operatória análises volumétricas foram obtidos utilizando um analisador de volume tridimensional (a sinapse VINCENT;. FUJIFILM Medical Co., Tóquio, Japão). volume de ressecção ou FRLV foi expresso em porcentagem. Dos 37 pacientes, 33 pacientes foram submetidos a exame volumétrica do fígado e foram utilizados na análise com variáveis ​​detectáveis ​​de pós-operatório.

Análise Estatística

As análises estatísticas foram realizadas utilizando Graph Pad Prism (versão 6.0 d para Mac OS X, EUA, software GraphPad, San Diego Califórnia, EUA) e foram baseadas em testes não paramétricos (teste de Mann-Whitney, teste de Wilcoxon e de correlação de Spearman). IP VEGF-A e nível de IP Ang-1 foram expressos por 10

6 plaquetas; todos os biomarcadores são apresentados graficamente usando parcelas box-and-suiça. Bicaudal

foram considerados estatisticamente significativos valores de P

de menos de 0,05.

Resultados

dados demográficos do paciente

características clínicopatológicos de todos os pacientes estão resumidos na Tabela 1. Embora o estudo incluiu apenas pacientes com HCC, a evidência de cirrose não foi distribuída uniformemente. Todos os pacientes do estudo pertenciam à classe Child-Pugh A de acordo com a classificação de Child-Pugh. Dezenove pacientes receberam quimioembolização pré-operatório transcatheter arterial (TACE) ou ablação por radiofrequência (RFA). Nenhum dos pacientes receberam transfusões de plaquetas. Tomando pré-operatória IP VEGF-A, tal como uma referência, os caracteres 10 da linha de base (idade, sexo, etiologia, cirrose, estadiamento do tumor, o tamanho do tumor, invasão vascular, intervenções anteriores, no tipo de ressecção e AFP do soro) foram analisados. Exceto para o tamanho do tumor, estadiamento, invasão vascular e grupo ressecção, foi observada nenhuma diferença estatisticamente significativa nas características basais entre os grupos (Tabela 1)

IP VEGF-A é elevado na fase posterior da LR

da mesma forma que os resultados anteriores, o soro continha a maior piscina de circulação de VEGF-a (

P

= 0,001; r = 0,378; S1A Fig), eo soro VEGF-a foi diretamente correlacionada com a contagem de plaquetas (

P Art 0,01; r = 0,302; S1B Fig). Houve uma diferença marginalmente significante entre os pré-operatórios e pós-operatórios contagem de plaquetas (média de plaquetas contar: PRE OP, 14,80 × 10

4 plaquetas; pós-operatório, 16,30 × 10

4 plaquetas;

P

= 0,08; S2A Fig), no entanto, não foi observada diferença significativa nas contagens de plaquetas entre o subconjunto de maior e menor grupo hepatectomia (média de plaquetas contar: PRE OP major, 15 × 10

4 plaquetas; PRE OP menor, 14,4 × 10

4 plaquetas;

P

= 0,66 e contagem de plaquetas mediana: POST OP major, 15.10 × 10

4 plaquetas; POST OP menor, 17,3 × 10

4 plaquetas;

P

= 0,7;. S2B Fig)

o estudo incidiu sobre a fase angiogênico ou atrasado de LR. Soro de VEGF-A foi analisado em dois eventos: no pré-operatório e em quatro semanas depois de pH; o nível pós-operatória de soro de VEGF-A foi maior do que o nível de pré-operatório (mediana soro VEGF-A: Pré-OP, 288,4 pg /ml; pós-operatório, 377,7 pg /mL,

P

0,01; Fig 1A). Da mesma forma, o pós-operatório IP VEGF-A foi significativamente mais elevada do que a do nível pré-operatório (mediana IP VEGF-A × 10

6 plaquetas: PRE OP, 0,8612 pg; pós-operatório, 1.362 pg,

P

0,001; Fig 1C). Não houve diferença significativa no nível de plasma VEGF-A entre os estados pré-operatório e pós-operatório (

P

= 0,495; Fig 1B). Estes resultados mostram que tanto o soro e IP VEGF-A é elevado em quatro semanas após o PH.

As amostras foram coletadas antes (PRE OP) e quatro semanas após a hepatectomia parcial (POST OP). IP VEGF-A concentração foi expressa por 10

6 plaquetas. *

P≤0

05

.; **

p≤

0,01; ***

P

≤0.001

Associação de IP VEGF-A com tamanho do tumor e RLV

Os pacientes foram divididos em dois grupos.; grupos menores e maiores hepatectomia. A diferença nas concentrações de soro e IP VEGF-A foram comparados entre os dois grupos (Fig 2A e 2B). Embora o nível pré-operatória de soro de VEGF-A no grupo principal foi aparentemente mais elevada do que a do grupo de menor importância, não se observou nenhuma diferença estatisticamente significativa entre os dois grupos (mediana soro de VEGF-A: pré OP importante, 398,0 pg /ml; PRÉ OP menor, 275,4 pg /ml;

P

= 0,082), mas o soro pós-operatório de VEGF-a no grupo principal foi significativamente mais elevada do que a do grupo menor (mediana soro VEGF-a: pós-operatório grande , 485,0 pg /ml; POST OP menor, 345,6 pg /ml;

P Art 0,05)

Diferença na de soro (a) e IP VEGF-a (B) em major. e grupos hepatectomia menores. Os níveis foram comparados antes (PRE OP) e após quatro semanas de hepatectomia parcial (POST OP). Gráfico de dispersão que mostra a correlação entre: pré-operatório IP VEGF-A e o tamanho do tumor (C), no pós-operatório IP VEGF-A e volume de ressecção (D) (expresso em percentagem). IP VEGF-A concentração foi expressa por 10

6 plaquetas. *

P≤0

05

.; **

p≤

0,01; ***

P

≤0.001

IP VEGF-A seguiram uma tendência semelhante, como soro de VEGF-A.; como mostrado na figura 2B, IP pré-operatória do VEGF-A nível no grupo principal foi significativamente maior do que o do menor (mediana IP VEGF-A × 10

6 plaquetas: Pré-OP principais, 1.362 pg; PRÉ OP menor, 0,619 pg;

P Art 0,01). O IP pós-operatória VEGF-A no grupo principal foi significativamente elevado em comparação com o grupo menor (mediana IP VEGF-A × 10

6 plaquetas: POST OP principais, 1.938 pg; POST OP menores, 0,786 pg;

P

0,001). No subgrupo de grupo menor, IP VEGF-A foi significativamente elevados no pós-operatório (mediana IP VEGF-A × 10

6 plaquetas: PRE OP menores, 0,619; POST OP menor, 0,786:

P Art 0,01). Apesar do facto de 75% dos casos tinham pós-operatório elevados de IP-VEGF no grupo principal, estatisticamente foi observada apenas uma diferença marginal significativa entre o pré-operatório e pós-operatório de IP-VEGF A na grande subconjunto (mediana IP VEGF-A × 10

6 plaquetas:. PRE OP principais, 1.362, pg /ml; POST OP major, 1.938 pg /ml:

P

= 0,09)

Além disso, foram analisadas especificamente a correlação entre tumor tamanho pré-operatória e de IP do VEGF-A. A relação entre a percentagem de volume ressecção e IP pós-operatória VEGF-A foi analisado para verificar o impacto da RLV em IP VEGF-A sequestro. Encontramos uma correlação significativa entre o pré-operatório IP VEGF-A e o tamanho do tumor (

P Art 0,01; r = 0,4789; Fig 2C); semelhante IP pós-operatória VEGF-A e volume de ressecção também mostrou uma correlação estatisticamente significativa (

P Art 0,01; r = 0,452; Fig 2D). Estes resultados demonstram que o volume de IP VEGF-A está associado com o tamanho do tumor e o volume ressecado.

Associação de citocinas pró-inflamatórias de IL-6 em IP-VEGF uma absorção

Estudos anteriores têm mostrado o papel da IL-6 em VEGF-a produção de [16, 17]. De 37 casos, IL-6 foi detectável no soro pós-operatória em 25 pacientes. O nível sérico pós-operatória IL-6 foi significativamente elevado em relação ao nível pré-operatório (séricos médios de IL-6: PRE OP, 0 pg /ml; POST OP, 4.246 pg /ml;

P Art 0,01; Fig 3A). No entanto, o soro foi TNF- α nível abaixo da gama detectável em ambas as amostras pré-operatório e pós-operatório (Fig 3B).

As concentrações séricas de IL-6 (A) e TNF-α (B) foram analisadas no pré-operatório (PRE OP) e quatro semanas após a hepatectomia parcial (pós-operatório). Séricos de IL-6 em maior e menor grupo hepatectomia (C) (N = 25). Correlação entre pós-operatório níveis elevados de IL-6 no soro e IP VEGF-A (D). Correlação entre pós-operatória VEGF-A IP e volume de ressecção (E) (expresso em porcentagem). IP VEGF-A concentração foi expressa por 10

6 plaquetas (n = 25). *

P≤0

05

.; **

p≤

0,01; ***

P

≤0.001. ND = Não detectado

Em comparação com o grupo de menor hepatectomia, o grupo principal hepatectomia demonstraram uma elevação mais acentuada de soro de IL-6 (soro mediana da IL-6:. Major, 10,18 pg /ml; menor , 4,70 pg /mL;

P

0,05) durante LR como ilustrado na figura 3C. Elevação de IL-6 no soro é óbvio para vários dias após a cirurgia importante, no entanto, a elevação da IL-6 de um mês de hepatectomia não foi previsto. Encontramos uma correlação estatisticamente significativa entre IL-6 pós-operatória e IP VEGF-A (

P Art 0,05;

r

= 0,4905; Fig 3D). Além disso, a correlação significativa entre pós-operatória de IL-6 no soro e a percentagem de volume de ressecção (

P

0,05;

R

= 0,459; Figura 3E) corresponde à associação semelhante de VEGF IP -A ea extensão da ressecção. Tomados em conjunto, IL-6 é encontrado para ser elevado após quatro semanas de PH, e se correlaciona com IP VEGF-A.

Principais mitógenos e Outros Platetet Key factores de crescimento derivados não são elevados na fase posterior da LR

factor de crescimento de hepatócitos (HGF) e factores de crescimento epidérmico (EGF) são os principais mitogénios; a brecha nas vias de sinalização associados a esses fatores provavelmente abolir o processo de LR [18]. Não houve mudança significativa nas concentrações séricas HGF entre as fases pré e pós-operatório foi encontrado (mediana HGF soro: PRE OP, 2401 pg /ml; POST OP = 2565 pg /ml;

P

= 0,511; Fig 4A) . Soro EFG é largamente secretada pelas plaquetas. Também encontramos uma correlação positiva entre a contagem de plaquetas e EGF soro (S3A Fig). Serum EGF também não deu uma diferença significativa entre as duas fases (EGF soro mediana: PRE OP = 291,3 pg /ml; POST OP = 287,5 pg /ml;

P

= 0,40; Fig 4B). Plaquetas derivadas do factor de crescimento (PDGF) -BB, conhecido como o mitogénio mais potente para a proliferação de células estreladas hepáticas, é substancialmente produzido pelas plaquetas. Não surpreendentemente, soro PDGF-BB foi positivamente correlacionada com a contagem de plaquetas (

P Art 0,001; r = 0,41; S3B Fig). Nós não encontrou uma diferença significativa na concentração sérica de PDGF entre os estados pré-operatórios e pós-operatórios (soro mediana PDGF-BB: PRE OP de 1912 pg /ml; POST OP, 2178 pg /ml;

P

= 0,30; A Fig. 4C)

A concentração sérica de grandes mitógenos, HGF (A) e EGF (B) foram analisados ​​antes da cirurgia (PRE OP) e quatro semanas após a hepatectomia parcial (pós-operatório). A concentração sérica de PDGF-BB (C) e Ang-1 (D) foram analisados ​​antes da cirurgia (PRE OP) e 4 semanas após a cirurgia (pós-operatório).

Em seguida, avaliamos angiopoetin (Ang ) -1 como outro importante marcador de angiogênese durante LR [19]. A maior parte de soro de Ang-1 deriva da de plaquetas [20]. A correlação direta entre Ang-1 sérico e contagem de plaquetas foi encontrado (

P Art 0,01; r = 0,32; S3C Fig). Surpreendentemente, não foi observada diferença significativa no nível de soro de Ang-1 entre pré-operatório e pós-operatório fases (Ang 1 soro mediana: PRE OP = 24504; OPERATÓRIO PÓS = 25449 pg /ml;

P

= 0,79; Fig 4D) . Além disso, a análise do IP Ang-1 a partir das plaquetas isoladas também não demonstrou nenhuma diferença significativa entre as concentrações no pré-operatório e pós-operatório (mediana IP ANG1 × 10

6 plaquetas: PRE OP = 13688 pg /ml; POST OP = 15262 pg /ml;

P

= 0,676; S3D Fig). Colectivamente, estes resultados sugerem que há uma elevação seletiva de VEGF-A na fase posterior da LR.

O esgotamento do nível de Solúvel VEGF Receptor-1 na fase posterior da LR inversamente correlacionado com o volume ressecção

receptores de VEGF solúveis determinar o nível de circulação de VEGF-a [21]. Nossos resultados retratam uma unidade angiogênico em curso de um mês de hepatectomia. Observamos uma queda significativa no nível de sVEGFR1 pós-operatória do que a do pré-operatório (mediana sVEGFR1: PRE OP, 189,6 pg /ml; pós-operatório, 124,3 pg /ml;

P Art 0,0001; Fig 5A) . Ao contrário sVEGFR1, não observamos diferença significativa no nível de sVEGFR2 soro entre os dois eventos (mediana sVEGFR2: PRE OP, 7773 pg /ml; POST OP, 8306 pg /ml;

P

= 0,976; Fig 5B). Nenhuma associação direta entre receptores VEGF solúveis e IP VEGF-A foi anotada. Surpreendentemente, no entanto, a queda acentuada no nível de sVEGFR1 (delta sVEGFR1) foi inversamente correlacionada com o volume ressecção (

P . 0

05; r

= -0,3620; Fig 5C) .

VEGF solúvel receptor-1 (A) e solúveis de VEGF receptor-2 (B) avaliada antes da cirurgia (PRE OP) e quatro semanas após a hepatectomia parcial (POST OP). Correlação entre Delta sVEGFR-1 e volume de ressecção (C). *

P≤0

05

.; **

p≤

0,01; ***

P

≤0.001, ****

P Art 0,0001

Discussão

Duas fases distintas de LR após PH foram relatados:. Uma fase indutiva cedo com a rápida proliferação dos hepatócitos seguida por uma fase angiogênico distingue-se pela expansão da não- compartimento parenquimatosa. Nosso estudo analisou IP VEGF-A na fase posterior da LR.

conjunto de soros Maior de VEGF-A é atribuído às plaquetas ativadas em cânceres e outras patologias [12, 13, 22]. Soro de VEGF-A por contagem de plaquetas foi estudada em doentes com HCC, ilustrando a sua associação com a progressão da doença [13]. Nosso estudo analisou o VEGF-A conteúdo real em plaquetas isoladas de pacientes com HCC e observou sua associação com a progressão do câncer. Há ampla evidência de que as plaquetas estão diretamente envolvidos no crescimento tumoral, angiogênese e metástase. Os efeitos adversos de plaquetas no HCC são essencialmente devido aos fatores de crescimento secretadas de seus grânulos [23]. Além disso, outro estudo sugere que o VEGF pode melhorar LR após PH [8]. Notavelmente, que demonstraram elevação proeminente de soro e IP VEGF-A, numa fase remoto de LR. Nossas descobertas para a frente uma visão sobre o papel duplo de IP VEGF-A em HCC e LR.

ferida operatória induz o início de reacções locais e sistémicas, onde plaquetas ativadas secretam vários fatores de crescimento para reparar as estruturas lesadas [15] . Análise na fase inicial após cirurgia de grande porte não apenas refletem a resposta plaquetas para LR, como a cicatrização da ferida cirúrgica está ativo para as primeiras semanas de operação. Bondestam J et al. [24] observaram elevação de soro de VEGF-A após uma grande cirurgia no primeiro e terceiro dias de pós-operatório, mas não nas amostras posteriores. No estudo atual, as citocinas foram analisados ​​quatro semanas após a cirurgia, quando o nível de CRP já tinha voltado ao normal (S4 Fig), minimizando as chances de sobreposição entre a resposta plaquetas para a cicatrização da ferida cirúrgica e LR. Uma regeneração activa com aumento da actividade mitótica foi demonstrada até 10-35 dias após hepatectomia em fígados normais, enquanto que os fígados com cirrose ou hepatite mostraram evidência histológica de regeneração durante os primeiros dois meses [25]. Embora o grande volume de regenera por mais um mês, LR continua durante todo o primeiro ano pós-operatório [26]. A maioria das falhas do fígado pós-operatórias são conhecidos por ocorrer dentro de um mês de ressecção hepática [27]. Quatro semanas após o PH é um período decisivo da LR. Além disso, o objetivo deste estudo foi examinar a IP VEGF-A na fase posterior da LR quando a angiogênese é suposto ser mais proeminente.

Os níveis circulantes dos principais mitógenos de proliferação de hepatócitos, HGF e EGF [18], não mostraram alterações significativas no soro em quatro semanas de PH. Outros factores angiogénicos principais, EGF, Ang-1 e PDGF-BB, considerado essencial em LR [19], são amplamente secretada pelas plaquetas [20]. PDGF-BB é conhecida pelo seu efeito potente sobre a proliferação de células estreladas hepáticas [28]. No entanto, a falta de mudanças significativas no nível dos principais factores de crescimento, incluindo os derivados de plaquetas em si reflectir a possibilidade perpétua de IP VEGF-A na modulação da angiogênese durante a fase posterior do LR.

Os dois principais pro-inflamatória citocinas IL-6 e TNF-α são centralmente responsável pela activação de STAT-3, NF-kB, fosfatidilinositol 3-quinase (PI3K) e Akt durante vias LR [29, 30]. A deficiência de uma dessas citoquinas nas células de sangue derivadas de medula óssea significativamente prejudicada LR em ratos [31]. A relação entre a IL-6 e VEGF-A produção já foi estabelecida em modelos celulares diferentes [16, 17, 32]. Que a expressão do VEGF-A é regulada por IL-6 na linha celular megacarioblástica humano MEG-01 [33] solicita a especulação de que o VEGF-IP A pode derivar a partir dos megacariócitos. Excepto para a sua competência proliferativa na fase precoce da LR, IL-6 pode reforçar a angiogénese durante a fase posterior de LR, promovendo IP VEGF-A produção.

os níveis circulantes de sVEGFR1 essencialmente determinar os papéis patofisiológicos de VEGF Uma vez que se liga a libertar VEGF-a, reduzindo a quantidade efectiva de ligação ao endotélio [34]. Além disso, como um agente sVEGFR1 antiangiogeneic reduz significativamente o número de LSECs após PH, suprimindo assim LR [35]. Angiogenesis depende de um equilíbrio entre os reguladores endoteliais positivas e negativas [36]. A supressão da sVEGFR1 observado em nosso estudo reflete uma angiogênese aperfeiçoá-lo durante a fase posterior do LR.

A evidência clínica de plaquetas como indutor relevante da LR tem sido demonstrada em seres humanos [37, 38]. acumulação intra-hepática de plaquetas foi observada em modelos de ratos [39]; em um estudo mais recente, Starlinger et. al [38] relataram que as plaquetas acumulam selectivamente no local de LR após PH em sujeitos humanos. Embora o mecanismo subjacente de acumulação intra-hepática não é completamente compreendido, presume-se que um gatilho potencial de migração das plaquetas e prendendo dentro do fígado poderia ser as alterações hemodinâmicas gerados no fígado remanescente através do procedimento cirúrgico. A activação de plaquetas pode ser induzida pela própria tensão de cisalhamento ou por ligação a um receptor ligado à membrana ainda não identificado em LSEC ou hepatócitos de plaquetas, ou por interiorização de plaquetas [8]. Independentemente do mecanismo subjacente sólido, é agora reconhecido que a acumulação intra-hepática de plaquetas após uma lesão tenha um efeito mitogénico em LR. As plaquetas efeito proliferativo em células do fígado é atribuída à liberação de seu fator de crescimento e transferência de plaquetas RNA [9].

Em nosso estudo, embora a maioria dos pacientes tinha uma contagem de plaquetas pós-operatória elevada, não houve estatisticamente diferença significativa entre as contagens de eventos pré e pós-operatório não houve qualquer diferença óbvia observada entre a contagem de plaquetas do grupo de maior e menor (S2 Fig). Dependendo do RLV, no entanto, cada uma das plaquetas foi carregado com uma quantidade em excesso de VEGF-A. O IP VEGF-A, descrito como o excesso em cancros [11-14], é demonstrado aqui a ser muito maior após um mês de PH.

Em uma grande coorte de pacientes com câncer gástrico, a ressecção radical do do tumor resultou numa diminuição significativa no soro pré-operatória do VEGF-a, durante um período de 30 dias [40]. Em outro estudo, o soro VEGF-A levantadas durante os primeiros 3-5 dias, mas não em dias posteriores após grande cirurgia cardiovascular em pacientes sem câncer [24]. Pelo contrário, verificou-se elevação substancial da concentração de VEGF-A em um mês de pH, indicando a sua relevância para a fase posterior de LR. Como limitação de nosso estudo, o grau de neo-angiogénese não foi avaliado na amostra ressecado ou o fígado regenerar. No entanto, a elevação proeminente no IP VEGF-A concentração juntamente com significativa diminuição da regulação de neutralizar sVEGFR1 mantido um ambiente pró-angiogénicos sustentado para a neovascularização durante a fase posterior do LR.

VEGF-A,-regulada em vários cancros, está estreitamente relacionado com as características patológicas do tumor, metástase e prognóstico. Nossos resultados mostraram associação de IP VEGF-A com o tamanho do tumor HCC, palco e invasão vascular. Tomados em conjunto, estes resultados sugerem que a pré-operatória IP VEGF-A pode representar um preditor potencial de progressão HCC. Por outro lado, a angiogese acompanhada por LR é indispensável para a regeneração sustentada. Múltiplos fatores angiogênicos são necessários após a ressecção hepática ou lesão hepática, e VEGF-A como um mitógeno pró-proliferativa é essencial durante LR. Além disso, um estudo recente indicou uma associação importante entre lançamentos defeituosos de plaquetas VEGF-A e disfunção hepática após PH em seres humanos [38]. O VEGF-A se comporta predominantemente como um mitogénio completa para LSECs [41]. Encontrámos selectiva elevação VEGF-A na fase tardia de LR, enquanto outros mitogénios principais pró-proliferativas tais como HGF, EGF, Ang-1 e PDGF-BB não foram significativamente alteradas para o nível pré-operatório. Estes resultados sugerem que a competência de IP VEGF-A em facilitar a angiogênese até a fase posterior do LR.