Abstract

Fundo

O câncer colorretal (CRC) continua a ser um dos principais tipos de câncer e câncer relacionado morte no mundo. Sensíveis biomarcadores, não-invasivo que podem facilitar a detecção da doença, estadiamento e previsão de resultados terapêuticos são altamente desejáveis ​​para melhorar a taxa de sobrevivência e ajudar a determinar o tratamento otimizado para CRC. Os pequenos RNAs não codificantes, microRNAs (miRNAs), foram recentemente identificados como reguladores críticos para várias doenças, incluindo cancro e podem representar uma nova classe de biomarcadores de cancro. O objetivo deste estudo foi identificar e validar microRNAs no plasma humano em circulação para uso como tais biomarcadores em câncer de cólon.

Metodologia /principais conclusões

Usando reação em cadeia de polimerase reversa quantitativa, descobrimos que circulam miR-141 foi significativamente associada com o câncer de cólon estágio IV em uma coorte de 102 amostras de plasma. análise receiver operating characteristic (ROC) foi utilizado para avaliar a sensibilidade e especificidade dos marcadores de microRNA plasma candidato. Observou-se que a combinação de miR-141 e antigénio carcinoembrionário (CEA), um marcador amplamente utilizado para CRC, melhorada a exactidão de detecção. Estes resultados foram validados em uma coorte independente de 156 amostras de plasma coletadas em Tianjin, China. Além disso, nossa análise mostrou que altos níveis de plasma miR-141 previsto sobrevivência pobre em ambos os grupos e que miR-141 foi um fator prognóstico independente para o câncer de cólon avançado.

Conclusões /Significado

propor que o plasma miR-141 pode representar um novo biomarcador que complementa CEA na detecção de cancro do cólon com metástases à distância e que altos níveis de miR-141 no plasma foram associados com mau prognóstico

Citation:. Cheng H, Zhang L , Cogdell DE, Zheng H, Schetter AJ, Nykter M, et al. (2011) Circulação Plasma miR-141 é um biomarcador da novela para o cancro do cólon metastático e prediz mau prognóstico. PLoS ONE 6 (3): e17745. doi: 10.1371 /journal.pone.0017745

editor: Alfons Navarro, da Universidade de Barcelona, ​​Espanha |

Recebido: 15 de outubro de 2010; Aceito: 11 de fevereiro de 2011; Publicado: March 17, 2011 |

Direitos de autor: © 2011 Cheng et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este trabalho foi parcialmente financiado por uma bolsa da Fundação Nacional para a Pesquisa do Câncer (WZ e SRH) e Instituto do Câncer Tianjin e Hospital (KC). Hanyin Cheng foi apoiado por uma bolsa Pharmacoinformatic Training Grant do NIH (NIH Grant No. R90 DK071505-05). Dados e colheita de amostras foram apoiados pelo D. Anderson Fundo M. University Cancer, o Centro de Ciências da clínica e translacional da Universidade do Texas Health Science Center em Houston, e NIH Cancer Support Center Grant CA16672. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

O câncer colorretal (CRC) é um problema de saúde mundial, com 655.000 mortes por ano [1]. Nos Estados Unidos, CRC é o terceiro tipo de câncer mais comum ea segunda causa mais comum de morte relacionada ao câncer [2], com uma estimativa de 51,370 mortes em 2010 de acordo com o National Cancer Institute. Na China, CRC continua a ser o quinto tipo de câncer mais comum ea quarta causa mais comum de morte relacionada ao câncer [3]. Apesar de despistagem precoce e no desenvolvimento de novas estratégias de quimioterápicos, as taxas de sobrevivência de CRC durante os últimos 20 anos não melhorou substancialmente. Além disso, a incidência de CRC está a aumentar rapidamente nos últimos anos na China [4]. biomarcadores novos que são de valor clínico são, portanto, na necessidade urgente de melhorar as taxas de conformidade. antigénio carcinoembrionário (CEA) tem sido utilizado como um marcador do soro de CRC, embora a sua sensibilidade tem variado em diferentes estudos [5], [6]. Recentemente, uma família de pequenos RNAs reguladores, microARNs, emergiu como possíveis marcadores plasmáticos para doenças humanas incluindo cancros, devido à sua relativa estabilidade na circulação [7].

MicroRNAs são pequenos RNAs não codificantes (18- 22 nt de comprimento) que regulam a expressão de genes alvo por interferência com a transcrição ou inibindo a tradução [8]. Estudos têm demonstrado que microARNs desempenhar um papel crucial em quase todos os processos biológicos, incluindo o metabolismo celular, sobrevivência, diferenciação e apoptose. A desregulação da microARNs específicas contribui para uma variedade de doenças, em especial o desenvolvimento e progressão do cancro, incluindo CRC. Especificamente, microARN perfil de expressão em CRC mostraram que um número de microARNs, incluindo o miR-21, 20a e miR-miR155 foram regulados positivamente em tecidos de tumor e que a maior miR-21 estava associada com mau resultado terapêutico [9], [10]. O potencial de miARNs circula no plasma como biomarcadores de cancro foi também avaliado em alguns estudos. Para CRC, um estudo recente relatou que o miR-92 foi significativamente maior em amostras de plasma de pacientes do que em controlos saudáveis ​​e podem ser um marcador potencial para a detecção de CRC [11]. Um estudo de amostras de plasma de pacientes com câncer de próstata informou que plasma miR-141 níveis pode ser usado para detectar o câncer de próstata metastático com alta sensibilidade [12].

Nesta prova de princípio estudo para identificar potenciais biomarcadores para CRC, examinamos se microRNAs candidatos selecionados podem servir como não-invasivos, marcadores à base de sangue para CRC através da análise dos níveis relativos de três microRNAs (miR-21, miR-92, e miR-141) em uma coorte de 102 plasma amostras de indivíduos saudáveis ​​e pacientes com CCR obtidos a partir TexGen, uma colaboração de Texas Instituições centro médico. Nossos dados iniciais indicaram que entre estes três microRNAs, plasma miR-141 níveis foram significativamente elevados no plasma de pacientes com câncer de cólon com doença do estágio IV e poderia facilmente discriminar casos de metástases à distância dos controles normais e pacientes com outras etapas. Combinação de miR-141 com CEA foi complementares e poderia aumentar ainda mais a precisão da detecção de metástases à distância no câncer de cólon. Estes resultados foram validados numa coorte independente de 156 amostras de plasma obtidas a partir de Tianjin, China. Nossas análises posteriores fornecidos elementos de prova que o plasma miR-141 era um potencial fator prognóstico previsto para pior sobrevida em pacientes com câncer de cólon. Curiosamente, ao contrário do plasma, miR-141 não foi diferencialmente expressos em tecidos tumorais entre Stage IV e Stage I-II doentes com cancro do cólon ou entre tecidos tumorais e tecidos não tumorais adjacentes em pacientes Fase IV, sugerindo que a elevação de plasma miR-141 no Estágio IV pacientes pode ser derivada de outras respostas sistêmicas tais como reacções inflamatórias nestes pacientes.

Materiais e Métodos

Ética declaração

Ambos os estudos plasma e baseados em tecidos foram aprovados pelo Institutional Review Board (IRB) no MD Anderson Cancer Center e pela Comissão de Ética no Instituto do Câncer Tianjin University Medical and Hospital. Todos os participantes assinaram consentimento de suas informações a serem armazenados no banco de dados do hospital e usado para a pesquisa.

Amostras clínicas

Foram utilizados dois conjuntos independentes de amostras de plasma. Um total de 102 amostras de plasma de idade e no género indivíduos saudáveis ​​pareados e pacientes de CRC (Fase I-IV) foram obtidos a partir TexGen entre 2002 e 2008, uma colaboração de instituições Texas Medical Center que fornece amostras biológicas, bem como epidemiológica e clínica dados (amostras TexGen, consulte a Tabela S1). Uma coorte independente de 156 amostras de plasma de idade e género combinado doadores saudáveis ​​e pacientes com câncer de cólon (Fase I-IV) foram obtidos no Instituto Tianjin University Medical Câncer e Hospital, Tianjin, China (amostras TCH) entre 2007 e 2009 ( ver Tabela S2). classificação patológica da doença em todos os pacientes foi realizada seguindo o sistema TNM para câncer de cólon criada em 2003. As amostras de sangue foram coletadas de todos os pacientes antes da operação e terapia União Internacional Contra o Câncer (UICC) e pelo Comité Misto americana sobre o Câncer (AJCC). níveis de CEA de ambas as amostras de plasma TexGen e TCH foram medidos por ensaio imunoenzimático padrão como parte de testes clínicos de rotina e foram adquiridos a partir da base de dados clínica em cada instituto. Follow-up de dados de todos os pacientes com câncer de cólon recrutados tanto TexGen e TCH foram adquiridos e tempo de sobrevida foi calculado a partir da data do diagnóstico até a data da morte ou do último acompanhamento, em Junho de 2010. Todos os pacientes recrutados para este estudo não tinha quimioterapia ou radioterapia recebida antes de o sangue empates. A informação demográfica dos dois conjuntos de amostras é resumido no material suplementar.

Para os tecidos tumorais análise baseada em tecidos de pacientes com câncer de cólon 21 com doença distante metastático (estágio IV) e 24 pacientes com câncer de cólon com não doença -metastatic (Fase I e II) foram coletados entre 2007 e 2009 pelo Instituto do Câncer Tianjin University Medical and Hospital dos mesmos pacientes cujas amostras de plasma foram utilizados.

isolamento do RNA e RT-PCR quantitativo

ARN pequeno foi enriquecido a partir de todas as amostras de plasma, utilizando o kit de isolamento de ARN miRvana PARIS (Ambion, Austin, TX). Resumidamente, 250 mL de plasma foi descongelada em gelo e centrifugado a 14000 rpm durante 10 minutos para remover os restos celulares e outros organelos celulares. Em seguida, 150 ul de sobrenadante foram lisadas com um volume igual de solução de desnaturação 2x. Para a normalização de variação de amostra-a-amostra durante os procedimentos de isolamento de ARN, 25 fmol de sintéticos

C. elegans

miARN CEL-miR-39 foi adicionado a cada amostra desnaturado. ARNs pequenos foram, em seguida, enriquecido e purificado, seguindo o protocolo do fabricante, com a excepção de que os pequenos RNAs enriquecidos foram eluídas em 45 mL de água isenta de nuclease de pré-aquecido. Método Padrão TRIZOL (Invitrogen) foi utilizado para isolar o ARN total a partir de tecidos do cólon.

Para os ensaios de RT-PCR à base microARN, 2,5 mL de pequenos RNAs enriquecidas a partir de amostras de plasma foram transcrito de forma inversa utilizando o Kit TaqMan MicroRNA reversa Transciption ( Applied Biosystems, San Diego, CA) de acordo com as instruções do fabricante, num volume de reacção total de 7,5 mL. Uma diluição de 1:20 produtos de RT foi utilizado como molde para a fase de PCR. reacção de PCR foi realizada em triplicado utilizando TaqMan Universal PCR Master Mix 2x com condições como descrito anteriormente [13]. Foram incluídos não-modelo controla tanto para RT passo e passo PCR para assegurar a amplificação específica alvo. 7900 Sequence Detection System padrões de software 2.3 (Applied Biosystems) foram usadas para calcular a variação relativa da expressão do ARN pela 2

-ΔΔCt método com intervalos de confiança de 95%. Os ensaios para as amostras TexGen foram realizadas no MD Anderson e ensaios para os espécimes TCH foram realizados no Instituto do Câncer Tianjin University Medical and Hospital.

Profiling MicroRNA

perfil de microRNA microarray foi realizada com ARN isolado a partir de coorte Maryland usando o Estado de Ohio microARN microarray versão 2.0, como previamente descrito [9]. dados de microarranjos (incluindo dados brutos e processados) foram depositados no Centro Nacional de Biotecnologia Informação de (do NCBI) Gene Expression Omnibus (NCBIGEO GSE7828).

A análise estatística

A significância estatística foi determinada utilizando o Wilcoxon testes-rank assinado entre os grupos. operating characteristic (ROC) do receptor foram gerados para avaliar a precisão do diagnóstico de cada parâmetro, e a sensibilidade e especificidade do ponto de corte óptima foram definidos como aqueles valores que maximizaram a área sob a curva ROC (AUC). Os níveis relativos de microRNA foram quantificados usando o 2

-ΔΔCt método, e os dados foram analisados ​​como o log

10 da quantidade relativa do alvo microRNA. A análise estatística foi realizada com o uso de pacotes de software SPSS versão 16.0 (WPSS Ltd., Surrey, Reino Unido) e gráficos foram gerados usando Graphpad Prism 5.0 (GraphPad Software Inc, Califórnia). A análise de correlação de Spearman foi realizado para revelar correlação entre plasma expressão de miR-141 e estágios CRC. Todos os testes estatísticos foram em frente e verso, e uma

P valor

de 0,05 foi considerado significativo. A correlação entre a sobrevivência e plasma geral miR-141 foi analisada utilizando o método de Kaplan-Meier e teste log-rank. A análise de regressão de riscos proporcionais de Cox foi utilizado para avaliar se plasma miR-141 foi um fator prognóstico independente para o câncer de cólon.

Resultados

plasma níveis de miR-141 são correlacionados com os estágios clínicos em câncer de cólon

Três microRNAs (miR-21, miR-92 e miR-141) foram selecionados em nossos estudos para examinar o seu potencial para servir como biomarcadores para o câncer de cólon. Estes miARNs candidatos foram seleccionados porque 1) miR-21 foi encontrado para ser regulada positivamente em tecidos de tumor de CRC [9], [10], [14]; 2) o miR-92 foi recentemente relatado para ser um marcador de plasma para o cancro do cólon [11]; e 3) o miR-141 tem mostrado ser um potencial marcador de plasma para o cancro da próstata metastático [12]. RT-PCR quantitativa ensaios microRNA com base nesses três miRNAs foram realizadas. Em primeiro lugar, examinou a correlação entre esses três miRNAs e estágios clínicos de cancro do cólon. Fase I e Fase II casos foram agrupados em nossa análise, porque só Stage limitada I casos estavam disponíveis. análise de calor mapa mostrou que os níveis de miR-141 agrupado de acordo com diferentes fases (Figura 1, A). análise de correlação de Spearman mostrou que o plasma miR-141 níveis foram altamente correlacionados com os estágios do câncer de cólon (r = 0,605, P = 1,17 × 10

-8). Em contraste, o miR-21 e miR-92 eram menos correlacionada com os estágios clínicos (figura 1, A).

(A) Cada linha corresponde a um plasma de miARN e cada coluna corresponde a cada amostra. Os níveis de expressão para cada miRNA são normalizados entre as amostras e à sombra nas cores tais que o vermelho denota alta expressão e verde denota baixa expressão. Correlação de Spearman mostra que o miR-141 está altamente correlacionado com as fases (r = 0,605, P = 1,17 × 10

-8). (B-G) Os níveis relativos de microARNs plasma seleccionadas foram normalizados para cravar-no controle CEL-miR-39 e mostrado como o log10 da quantidade relativa (RQ). Os testes de duas amostragens Wilcoxon foram realizados para examinar a diferença de microRNAs plasma selecionados entre controles normais e pacientes com câncer de cólon (B-D), ou entre controles normais e /ou em pacientes com câncer de cólon com diferentes estágios clínicos (E-G).

a seguir, analisou se esses microRNAs candidatos poderia servir como circulação de marcadores de cancro do cólon, comparando seus níveis plasmáticos entre doentes com cancro e controles normais. Surpreendentemente, ao contrário do relatório anterior que a regulação alta de plasma miR-92 foi um biomarcador de câncer de cólon, o teste de duas amostras de Wilcoxon mostrou que entre estes três microRNAs, plasma miR-92 foi significativamente reduzida no grupo TexGen de pacientes com câncer de cólon (

P

= 0,03) (Figura 1, D). No entanto, a diminuição na concentração plasmática de miR-92 foi observada apenas na fase I-II e Fase III e o nível aumentou para um nível semelhante ao dos controles normais em cancro do cólon Estágio IV (figura 1, G). Os níveis plasmáticos de miR-21 e miR-141 não apresentaram diferença significativa entre controles e pacientes com câncer (Figura 1, B C). Após a estratificação dos pacientes com câncer, de acordo com os seus estágios clínicos, plasma miR-141 foi significativamente regulada em estágio IV cancro do cólon (Figura 1, E). Para uma extensão muito menor, de plasma de miR-21 também mostrou-se elevada em cancro do cólon Estágio IV (Figura 1, F). Com base nestas observações, procurou-se concentrar em miR-141 para posterior caracterização.

High plasma miR-141 níveis estão associados com câncer de cólon estágio IV e complementar com CEA no diagnóstico

O acima resultados demonstraram que entre os três microRNAs selecionados, miR-141 foi significativamente correlacionada com os estágios do câncer de cólon. O teste de Wilcoxon de duas amostras detalhada mostrou que o plasma de miR-141 foi significativamente elevada no estágio IV casos quando comparados com a fase I-II, e a Fase III Fase I-III combinada. A curva ROC foi construída para identificar um valor de corte que poderia distinguir o câncer de cólon estágio IV de outros grupos. A análise da curva ROC mostrou que o óptimo de corte, de plasma de miR-141 tinha uma sensibilidade de 90,9% e uma especificidade de 77,1% em separar casos Fase IV a partir de casos fase I-II com uma AUC de 0,861 (Figura 2, B), uma 77,1% de sensibilidade e uma especificidade de 89,7% na separação da fase IV e processos de fase III com uma AUC de 0,803 (figura 2, C), e uma sensibilidade de 77,1% e uma especificidade de 89,7% em separar a fase IV e casos combinados Fase I-III com uma AUC de 0,836 (figura 2, D). Nossa análise também revelou que nesta coorte, plasma miR-141 foi significativamente elevado em Fase III pacientes em comparação com pacientes em estágio inicial (

p

= 0,025) (Figura 2, A). Estes resultados sugerem que circula o miR-141 pode ser um biomarcador novo para o cancro do cólon metastático.

(A) RNA pequeno foi isolado a partir de amostras de plasma e miR-141 foi medida por ensaios de RT-PCR quantitativo. O teste de duas amostras de Wilcoxon foi realizada para avaliar diferenças de miR-141 níveis entre os grupos Fase III e Fase I-II. análise ROC foi realizada para determinar a sensibilidade e especificidade com o valor de AUC no painel da direita. Os testes de duas amostragens Wilcoxon entre (B) Stage IV e Stage I-II, (C) Stage IV e Sage III, e foram realizadas (D) grupos da fase IV e Stage I-III para avaliar a associação de plasma miR-141 com o estado da doença do estágio IV.

como o teste CEA sangue é marcador amplamente utilizado para pacientes com CCR, buscou-se comparar o desempenho de miR-141 com CEA como um biomarcador. Nós examinou se uma combinação de miR-141 e CEA foi mais sensível do que qualquer um dos marcadores quando usado individualmente. Nossa análise mostrou que eles eram de fato complementares. Quando a especificidade foi de 100%, miR-141 identificados sete Stage IV câncer de cólon que foram perdidas pela CEA sozinho e CEA identificou quatro Fase IV casos de câncer de cólon metastático que foram perdidas por miR-141 sozinho (Figura 3).

classificação de dois parâmetros (expressão de miR-141 e CEA no plasma) é utilizada para discriminar o cancro do cólon metastática distante. O valor de corte para a CEA é de 5,0 ng /mL, e por miR-141 é 16,77 definida a partir da curva ROC. Os valores de corte correspondentes são marcadas por linhas cinzentas.

provas Validação de plasma miR-141 como um marcador de câncer de cólon em uma população independente

Os resultados dos estudos acima, desde que altos níveis circulantes de miR-141 poderia ser um potencial biomarcador que complementa CEA para câncer de cólon metastático. Para validar ainda mais a utilidade potencial de miR-141 no manejo clínico de câncer de cólon, foi realizado um estudo de validação com um conjunto independente de amostras de plasma (amostras TCH) (ver Tabela S2 para informações demográficas dos casos TCH). As medições foram feitas de forma independente seguindo os mesmos procedimentos experimentais utilizados para as amostras TexGen.

Os resultados validados que o nível plasmático miR-141 foi significativamente maior em pacientes com estágio IV do que em controles normais, Estágio I-II e Estágio pacientes III (Figura 4 A). Especificamente, as curvas ROC mostrou que um cut-off para o plasma de miR-141 pode ser determinada com uma sensibilidade de 66,7% e uma especificidade de 80,8% para a separação da Fase IV casos dos casos fase I-II (AUC = 0,756) (Figura 4 , B), uma sensibilidade de 66,7% e uma especificidade de 89,7% para a separação da fase III casos (AUC = 0,779) (Figura 4, C), e uma sensibilidade de 66,7% e uma especificidade de 84,0% para a separação a partir de casos Fase 1-III ( AUC = 0,764) (Figura 4, D). Ao contrário de amostras de plasma TexGen, que no entanto não conseguiu detectar uma diferença significativa no miR-141 níveis entre Fase III e Fase I-II casos (não mostrados), sugerindo que a maior plasma miR-141 está mais associada à distante e menos com lymph- metástases no cancro do cólon.

isolamento do RNA pequeno e miR-141 ensaios quantitativos de RT-PCR foram realizadas da mesma maneira como para a coorte de formação. (A) O teste de duas amostras de Wilcoxon foi realizada para comparar os níveis de miR-141 entre os controles normais e /ou em pacientes com câncer de cólon com diferentes estágios clínicos. (B-D) As mesmas análises foram realizadas para comparar os níveis de miR-141 entre a Fase IV casos e casos Fase I-II (B), entre a Fase IV e Fase III casos (C), e entre a Fase IV e Stage I-III (casos D), respectivamente. análise ROC foi realizada para determinar a sensibilidade e especificidade com o valor de AUC no painel da direita. (E) Combinação de pacientes metastáticos CEA e miR-141 identificados adicionais que foram perdidas por qualquer marcador sozinho. Veja a Figura 3 para a definição dos valores de corte para o CEA eo miR-141.

Nós também avaliou os dados CEA no conjunto de dados TCH. À semelhança do que foi mostrado nas amostras TexGen, combinação de miR-141 e CEA identificados casos metastáticos adicionais que foram perdidas por outra forma qualquer um dos marcadores usados ​​por si só (Figura 4, E). Esta constatação validada que a combinação destes dois biomarcadores foi uma abordagem mais eficaz para detectar pacientes Stage IV CRC.

Plasma miR-141 está correlacionada com pior sobrevida no câncer de cólon

Para melhor avaliar se plasma miR-141 níveis podem predizer o prognóstico, o próximo realizada uma análise de sobrevivência em casos TexGen e TCH. curvas de sobrevida de Kaplan-Meier mostrou que a maior expressão de plasma miR-141 foi significativamente correlacionada com a sobrevivência pobre tanto em TexGen (

P

= 0,004, teste log-rank) e Tianjin (

P

= 0.002,-rank log de teste) coortes (Figura S1, A e B). Univariada Cox análise de regressão demonstraram que o plasma miR-141 era um indicador de prognóstico significativa do cancro do cólon em TexGen (HR = 3,80, 95% CI = 1,46-91) e casos de Tianjin (HR = 4,83, IC 95% = 2,06-11,35) , respectivamente (Tabela 1). Para evitar qualquer viés potencial entre a coorte TexGen e Tianjin coorte, foi realizada analisa a sobrevivência uni e multivariada para todos os casos. A Cox análise de regressão de risco proporcional multivariada mostrou que o plasma miR-141was um marcador de prognóstico independente em pacientes com câncer de cólon quando fundiu as amostras de ambos os centros (HR = 2,40, IC 95% = 1,18-4,86) (Tabela 1).

miR-141 não é diferencialmente expressos em tecidos de câncer de cólon

Nós procuraram determinar se os pacientes elevados miR-141 no plasma de Estágio IV CRC refletido expressão diferencial nos tecidos tumorais de doença diferente estágios. Em primeiro lugar, em comparação miR-141 níveis em tecidos tumorais entre a fase I-II e Fase IV na coorte TCH, que mostrou surpreendentemente que miR-141 não foi regulada no estágio IV casos (

p

= 0,495) (Figura 5, A). Nós próxima analisados ​​nossos dados microRNA microarray de perfis descritos anteriormente (GEO, GSE7828). A análise também confirmou que o nível de miR-141 não foi significativamente mais elevada nos tecidos de tumor do que em tecidos normais adjacentes na fase IV pacientes, assim como em doentes de outras fases (Figura 5, B).

(A ) o ARN total foi isolado a partir de tecidos tumorais de pacientes metastático ou não metastático da coorte Tianjin, e os níveis de miR-141 foram medidos com RT-PCR quantitativo utilizando RNU6B como um controle endógeno. O teste de Wilcoxon de duas amostras foi realizada para comparar a expressão de miR-141 em tecidos de tumor entre estes dois grupos. A

P Art 0,05 é considerado significativo. (B) Os níveis de expressão de miR-141 foram medidos usando microRNA perfis de dados da coorte de Maryland de amostras de CRC. Foram realizados os testes de Wilcoxon-pares combinados para comparar os níveis de miR-141 entre os tecidos tumorais e tecidos normais adjacentes nestes pacientes CRC.

Discussão

Neste estudo, fizemos uma focada abordagem e analisou os três microRNAs candidatos para o seu valor potencial como biomarcadores de plasma para o cancro do cólon. Os resultados do estudo Texas revelou que o plasma miR-141 era um marcador sensível e complementado CEA para a detecção de câncer de cólon estágio IV. Este resultado foi independente validado usando uma coorte de amostras de pacientes com câncer de cólon em Tianjin, China. Assim, esta investigação colaborativa realizado por duas equipes independentes de pesquisadores em dois locais diferentes em diferentes populações de pacientes étnica fornece fortes evidências de que o miR-141 é um marcador de plasma válido que complementa CEA na determinação de câncer de cólon estágio IV.