Abstract

Este estudo avaliou os efeitos imunomoduladores em tratados previamente

KRAS

doentes com câncer colorretal metastático -mutant cancro que participaram em um estudo multicêntrico de fase II,-ensaio clínico aberto a receber lenalidomida sozinho ou lenalidomida mais cetuximab. As principais descobertas mostram as propriedades imunoestimuladoras de células T de lenalidomida como a droga induziu uma diminuição da percentagem CD45RA

+ células T naive de 3 vezes, enquanto o aumento da percentagem de HLA-DR

+ activadas as células T auxiliares e percentagem CD45RO total de

+ CD8

+ células T citotóxicas de memória, 2.6- e 2,1 vezes, respectivamente (p 0,0001). Além disso, lenalidomida diminuiu a percentagem de CD19 circulante

+ B células de 2,6 vezes (p 0,0001). Lenalidomida aumentou ainda significativa, alteração modesta, de 1,4 vezes na percentagem de circulação de células assassinas naturais. Nossos resultados indicam que a lenalidomida ativa significativamente células T, sugestivas de um papel imunoterapêutico para esta droga em ambientes de terapia de manutenção e de imunidade tumor. Além disso, relatado pela primeira vez, é o efeito de lenalidomida em combinação com cetuximab em função das células T, incluindo aumentos na circulação de células de memória T naive e centrais. Em resumo, a lenalidomida e cetuximab ter efeitos significativos no circulante células do sistema imunológico em pacientes com carcinoma colorectal

registo julgamento

ClinicalTrials.gov NCT01032291

Citation:. Gandhi AK, Shi T , Li H, Jungnelius L, Romano A, Tabernero J, et al. (2013) efeitos imunomoduladores em um estudo de Fase II da lenalidomida Combinado com Cetuximab no refratário

KRAS

-Mutant metastáticos colorretais pacientes com câncer. PLoS ONE 8 (11): e80437. doi: 10.1371 /journal.pone.0080437

editor: Evren Alici, Karolinska Institutet, na Suécia

Recebido: 29 Janeiro, 2013; Aceito: 07 de outubro de 2013; Publicação: 11 de novembro de 2013

Direitos de autor: © 2013 Gandhi et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Os autores gostaria de agradecer a Robert Beck por coordenar as transferências de dados e análise. serviços editoriais médicas foram fornecidas por Kim Grootscholten, MSc, da Excerpta Medica BV, financiado pela Celgene Corporation. Salvatore Siena é suportado por Oncologia Ca ‘Granda Onlus (OCGO) Fondazione. Os autores são totalmente responsáveis ​​por conteúdo e as decisões editoriais para este manuscrito. Celgene Corporation financiou este estudo e era inteiramente responsável pela concepção do estudo, coleta de dados e análise e decisão de publicar

Conflito de interesses:. Anita Gandhi, Tao Shi, Mingyu Li, Ulf Jungnelius, Alfredo Romano, Peter Schafer, e Rajesh Chopra são funcionários da Celgene Corporation, cuja empresa financiou este estudo. Salvatore Siena é membro de conselhos consultivos da Sanofi-Aventis, AstraZeneca, Roche, Genentech, Celgene, Genomic Health, Bayer, e Amgen. Josep Tabernero participou de conselhos consultivos da Amgen, Celgene, Genentech, Merck-Serono, Novartis, Roche, Sanofi-Aventis, e Symphogen. Lenalidomida (Revlimid) é um produto comercializado Celgene. Isto não altera a adesão dos autores para todas as políticas de PLoS One sobre os dados e materiais de compartilhamento.

Introdução

A lenalidomida imunomodulador droga é um agente activo por via oral com uma actividade significativa em uma variedade de hematológica distúrbios, incluindo síndromes mielodisplásicas (SMD), mieloma múltiplo (MM) e linfoma não-Hodgkin (NHL).

a lenalidomida recebeu aprovação US Food and Drug Administration para o tratamento de MM em pacientes que tenham recebido pelo menos uma terapia anterior, e para o tratamento de anemia dependente de transfusões em pacientes com International prognóstico Scoring System-definida de baixa ou MDS Intermediário-1-risco com uma anomalia del (5q) citogenética, com ou sem anomalias citogenéticas adicionais. O alvo molecular da lenalidomida é a cereblon proteína (CRBN). CRBN é uma proteína expressa ubiquamente e membro do anel Cullin ligase de ubiquitina-ligase 4 complexo (CRL4) E3, e foi identificada como o alvo primário da talidomida teratogénico [1]. CRBN medeia as actividades antiproliferativas de lenalidomida em células de mieloma e activação de células T [2], [3]. Os efeitos imunomoduladores da gama lenalidomida em todo vários tipos de células, incluindo tanto linfóide e linhagens mielóides. Em particular,

In vitro

dados indicam lenalidomida tem actividade em células T, células T reguladoras (Tregs), células B, monócitos, células NK () T assassinas naturais, e células NK.

em anti-CD3 estimulou as células T, lenalidomida estimula a proliferação de células T, e a produção de interleucina (IL) -2, IL-12 e interferon gama [4], [5]. Além disso, tem sido mostrado lenalidomida para inibir a proliferação e função supressora Tregs

In vitro

[6]. Em pacientes com tumores sólidos avançados tratados com lenalidomida, naïve CD4

+

+ células T citotóxicas auxiliares e CD8 diminuiu, enquanto a memória CD4

+ células T de memória auxiliar e CD8

+ células de memória citotóxicos aumentou [7 ]. Estudos anteriores da atividade imunomoduladora da lenalidomida foram realizadas em doenças hematológicas malignas, onde parâmetros imunológicos podem ser confundidos pela doença. No entanto, existem poucos dados que descrevem a função imunomoduladora de lenalidomida em tumores sólidos.

Em um estudo clínico destinado a avaliar a eficácia e segurança do tratamento combinado com lenalidomida e cetuximab em

KRAS

(v -ki-ras2 Kirsten sarcoma de rato oncogene viral homólogo) pacientes com câncer colorretal metastático -mutant, avaliou 25 diferentes subpopulações de CD45

+ células do sistema imunológico (células T, células B e células NK). Esta foi uma fase II multicêntrico, aberto compreendendo uma fase lead-in de segurança (fase IIa) para determinar a dose máxima tolerada, e uma prova randomizado de fase de conceito (Fase IIb) para determinar a taxa de resposta de lenalidomida mais cetuximab combinação terapia. Fase IIa tratamento lenalidomida composto por via oral (dose inicial de 25 mg /dia) e cetuximab intravenosa (400 mg /m

2, seguido de semanal de 250 mg /m

2) em ciclos de 28 dias. Na fase IIb pacientes foram randomizados para a fase IIa esquema de tratamento da lenalidomida mais cetuximab terapia de combinação ou lenalidomida 25 mg /monoterapia dia. A combinação de lenalidomida e cetuximab pareceu ser bem tolerada, mas não tem actividade clinicamente significativa na

KRAS

pacientes com câncer colorretal metastático -mutant (12).

Materiais e Métodos

os pacientes, materiais e métodos

Esta fase II, multicêntrico, aberto foi conduzido de acordo com os princípios éticos da Declaração de Helsinque e Boas Práticas Clínicas, e de acordo com a Conferência Internacional de Harmonização dos Requisitos técnicos para o Registro de Produtos farmacêuticos para Uso Humano. O protocolo do estudo, o termo de consentimento proposto, e outras informações para indivíduos, foram aprovadas pelo Comitato Ético-Scientifico, Ospedale Niguarda Ca ‘Granda, Milão, Itália e devidamente constituídos Institucionais Review Boards /Comissões de todas as instituições participantes de Ética Independente (Medical Comissão de ética do UZ KULeuven, Leuven, Bélgica; Comité do Hospital Universitário Vall d’Hebron, em Barcelona, ​​Espanha ética em Pesquisa Clínica; Comité das Ospedale Niguarda Ca ‘Granda, Milão, Itália ética científica; Comitê de ética Azienda Ospedaliero-Universitaria San Martino, Genova, Itália; Comitê de Ética Azienda Ospedaliero-Universitaria Ospedali Riuniti Umberto I – GM Lancisi – G. Salesi di Ancona, Torrette, Itália; Regional de revisão Ética Conselho de Estocolmo, Instituto Karolinska, na Suécia, e Comissão de Ética Flinders Clinical Research, Southern Australia, Austrália). O estudo foi registrado na Clinicaltrials.gov com identificador NCT01032291. O protocolo para este ensaio e apoiando lista de verificação CONSORT estão disponíveis como informação de apoio; veja Checklist S1 e Protocolo S1.

O consentimento informado foi obtido de todos os participantes envolvidos no estudo. O estudo consistiu em uma fase de lead-in de segurança (fase IIa), em que o principal objectivo foi determinar a dose máxima tolerada de lenalidomida em combinação com cetuximab em indivíduos com

KRAS

-mutant mCRC, e uma prova do conceito de fase (POC) (fase IIb), em que o principal objectivo foi determinar a taxa de resposta nestes indivíduos por os Critérios de Avaliação de resposta em tumores sólidos (RECIST) versão 1.1. Um total de 48 dos 50 indivíduos que receberam droga foram avaliados para análise de citometria de fluxo imunológico.

Coleta de amostras

O sangue foi coletado no início do estudo (ciclo 1 dia 1 [C1D1]), o ciclo de dois dias 1 (C2D1) e ciclo de 3 dias 1 (C3D1) em ambos os 5 ml Lavender /tubos de vidro preto Cyto-Chex® BCT (Innovations Streck, Omaha, NE, Estados Unidos da América) ou 2,6 ml amarelas melhores tubos de dextrose de citrato ácido, dependendo de onde a amostra foi recebido e mantido à temperatura ambiente até que a citometria de fluxo foi realizada no ICON central Laboratories (Farmingdale, Nova Iorque, EUA) no prazo de 72 horas após a recolha da amostra. análises de estabilidade foram realizados durante a validação do ensaio e suporta até 72 horas o tempo de processamento de coleta de amostras para análise. Os anticorpos (anti-CD3, CD4, CD8, CD16, CD19, CD25, CD45, CD45RA, CD45RO, CD62L, CD107a, CD127, granzima B, e HLA-DR; BD Biosciences, San Jose, CA, EUA) e 100 ul de sangue total paciente foram transferidas para 12 x 75 mm tubos de ensaio (BD Falcon ™; BD Biosciences), seguido por agitação em vórtice suave e 15 minutos de incubação à temperatura ambiente. Para isso, foi adicionado solução de lise BD Pharm Lyse ™ (BD Biosciences) durante 10 min. O tubo foi centrifugado, lavado em PBA (Dulbecco PBS /0,2%) e o sedimento foi ressuspenso em PBA antes da análise de B, subconjuntos de células T e NK em um fluxo FACSCanto ™ II (citómetro Biosciences BD). Para a coloração de proteína intracelular, um passo adicional de permeabilização foi adicionado após a primeira adição de PBA com uma solução de permeabilização-fixação de trabalho (eBioscience, Inc., San Diego, CA, EUA), seguida de duas lavagens em tampão de permeabilização (eBioscience, Inc.) , incubação com anticorpos intracelulares, e outra lavagem com tampão de permeabilização. controles de compensação adequados foram incluídos durante cada análise. Cada população subconjunto de células foi relatado como um valor absoluto por 1 mm

3 de sangue ou como uma percentagem de CD45

+ células.

Análise estatística

Para avaliar as mudanças na diferentes populações de células imunes em C2D1 e C3D1 contra linha de base, cada uma das medições de citometria de 50 fluxo (isto é, uma contagem absoluta de célula e uma medição da percentagem de cada uma das 25 sub-populações de células imunitárias CD45 +) foram primeiro log2 transformado e um modelo linear foi então equipado com o número de ciclo (ou seja, C1D1, C2D1, e C3D1) como uma variável independente de 3 níveis e paciente como uma variável de bloqueio usando o pacote de software R limma [8]. Moderados t-estatísticas e os valores de p correspondentes para os dois contrastes de interessados: C2D1 vs. C1D1 e C3D1 vs. C1D1 foram calculados utilizando o método de Bayes empírico implementado em limma. Esta etapa Bayes empírico foi realizada separadamente para as contagens de células absolutas e medições percentuais devido às suas muito diferentes escalas e variações. Para cada um dos dois contrastes, os valores de p foram depois combinadas para contagens absolutas de célula e medições percentuais e foram ajustadas para comparações múltiplas de acordo com o método de Hochberg-Benjamini [9]. p-valores ajustados £ 0,05 foram considerados estatisticamente significativa, o que é equivalente a controlar a taxa de detecção falsa de 5%. Realizou-se acima indicado analisa separadamente em três diferentes populações de pacientes, ou seja, 20 pacientes do braço de lenalidomida, 28 pacientes do lenalidomida mais braço cetuximab, ou 48 pacientes dos dois braços combinados (principais análises). Também foi realizada a análise nos três populações, mas com os 19 pacientes que estavam em uma medicação concomitante que codificado para uma categoria química terapêutica anatómica denotando um corticosteróide sistémica ou tópica removido (análises de sensibilidade, resultados não apresentados). Todas as análises estatísticas foram realizadas utilizando o software R [10].

Resultados

Um total de 48 de 50 indivíduos que receberam o fármaco do estudo foram avaliados para análise de células imunes no sangue periférico. O esquema do estudo é mostrado na Figura 1 e as características basais dos doentes estão resumidos na Tabela 1. Havia 20 doentes no braço lenalidomida e 28 no braço lenalidomida cetuximab. O biomarcador e análises correlativas efectuadas e do número de indivíduos incluídos em cada análise é apresentado na Tabela S1. O número absoluto e percentagem de 25 subconjuntos diferentes de células, B, NK e T foram analisados ​​nestes 48 pacientes e os fenótipos celulares estão listados na Tabela 2. As populações de células com, pelo menos, um valor de p ≤ 0,05 nas comparações de C2D1 e C3D1 contra C1D1 no braço de lenalidomida monoterapia, a lenalidomida mais braço cetuximab, e em todos os pacientes encontram-se nas Tabelas 3, 4 e 5, respectivamente.

estudo foi encerrado antes da parte de expansão de fase IIb. * Um paciente foi randomizados para o grupo lenalidomida monoterapia, mas interrompido antes de tomar qualquer medicamento em estudo e, portanto, foi excluído das análises. AE, evento adverso; ITT, intenção de tratar; PD, doença progressiva.

As principais conclusões incluem quatro populações de células imunes com altamente significativa (p ≤ 0,0001) muda de C1D1 (baseline ) de C2D1 e C3D1, tanto no número absoluto e a percentagem de células medido em ambos os braços de tratamento. O movimento nestas populações são mostrados na Figura 2 e incluem um aumento no número total de células de memória T citotóxicas activadas e células T auxiliares, e uma diminuição em células B e células T auxiliares totais ingénuos. As mudanças nas restantes subpopulações de células em todos os assuntos são apresentados na Figura S1.

significativa (p ≤ 0,0001) mudanças na porcentagem e número absoluto em quatro subconjuntos de células imunes de ciclo 1 dia 1 (C1D1) para o ciclo 2 dia 1 (C2D1) ou ciclo de 3 dias 1 (C3D1) em todas as disciplinas. O bordo superior da caixa indica o percentil 75 ao passo que o bordo inferior indica o percentil 25. A linha de dentro de cada caixa é o mediano. As linhas se estendem para os valores máximos e mínimos excluindo valores extremos. As linhas cinzentas indicam dados sujeito individual. Abs, absoluta.

efeitos imunomoduladores em indivíduos que receberam lenalidomida única

No lenalidomida única Arm (n = 20), 12 populações de células T, células totais NK, células B total, e populações de células de linfócitos totais (porcentagem ou contagem absoluta) foram alteradas de forma significativa (p ≤ 0,05) em qualquer C2D1 ou C3D1 contra C1D1, ou ambos. Estas populações de células T, começando com o mais significativo, incluem células totais naïve T auxiliares, células T auxiliares activadas, células T citotóxicas activadas, células T reguladoras, as células citotóxicas T naive totais, células efectoras T auxiliares, células citotóxicas T efectoras, memória total As células T citotóxicas, células T citotóxicas de memória efectora, as células T auxiliares, células T citotóxicas e células T totais. As células B absolutos e percentuais diminuiu 1.78- para 3,41 vezes. A percentagem de células NK aumentou significativamente em C2D1 de 1,4 vezes entre os indivíduos que tomam única lenalidomida. Os linfócitos absolutos diminuiu significativamente 1,36 vezes entre os indivíduos a tomarem lenalidomida única (Tabela 3). De nota, ao contrário do

in vitro

dados mostrando lenalidomida inibe a expansão Tregs [11], a lenalidomida aumentou significativamente a percentagem de Tregs por 4 a 12 vezes.

efeitos imunomoduladores em indivíduos que receberam lenalidomida além

cetuximab

no lenalidomida mais braço cetuximab (n = 28), 15 populações de células T, uma população NK celular, as células totais B e populações de células de linfócitos totais (porcentagem ou contagem absoluta) foram significativamente alteradas ( p ≤ 0,05) em qualquer C2D1 ou C3D1 contra C1D1, ou ambos. Estas populações de células T, começando com o mais significativo, incluem células activadas T auxiliares, células totais de memória T citotóxicas, células T helper ingênuos totais, células T citotóxicas ingênuos totais, células citotóxicas memória T efetoras, células T citotóxicas activadas, células T citotóxicas efetoras , células citotóxicas T de memória centrais, células auxiliares T efetoras, células de memória efetoras T helper, as células totais de memória T auxiliares, células auxiliares T de memória central, células naïve T citotóxicas, células T citotóxicas e células T helper ingênuos. As células B absolutos e percentuais diminuiu 2.01- para 3,6 vezes. A percentagem de granzima B

+ células NK aumentou significativamente em C2D1 por 1,15 vezes e em C3D1 por 1,25 vezes em indivíduos que tomam lenalidomida cetuximab. A percentagem de linfócitos aumentou significativamente 1.11- a 1,45 vezes em indivíduos que tomam lenalidomida cetuximab (Tabela 4). Destes, os seguintes sete subpopulações foram significativamente modulada no braço lenalidomida mais cetuximab, mas não apenas o braço de lenalidomida: células citotóxicas T de memória centrais, células auxiliares de memória T efetoras, as células totais de memória T auxiliares, células auxiliares T de memória centrais, naïve As células T citotóxicas, células T helper naïve, e granzima B

+ NK células. De nota, a adição de cetuximab à lenalidomida não resultou em um aumento na Tregs como foi observado por lenalidomida sozinho.

efeitos imunomoduladores em todos os assuntos

em todos os 48 indivíduos, 16 populações de células T, 1 populações de células NK, células B totais, e linfócitos totais (porcentagem ou contagem absoluta) foram moduladas de forma significativa (p ≤ 0,05) em qualquer C2D1 ou C3D1 contra C1D1, ou ambos. Estas populações de células T, começando com o mais significativo, incluem células activadas T auxiliares, células T helper ingênuos totais, células totais de memória T citotóxicas, células T citotóxicas ingênuos totais, células T citotóxicas activadas, células de memória efetoras T citotóxicas, células auxiliares T efetoras , células T efectoras citotóxicas, células T citotóxicas de memória central, células T auxiliares de memória efectora, células T reguladoras, as células auxiliares T de memória central, as células citotóxicas T naive, as células de memória total de T auxiliares, células T citotóxicas e células T ajudantes naive. As células B absolutos e percentuais diminuiu entre 2.35- e 3,05 vezes. A percentagem de granzima B

+ NK células aumentou significativamente de 1,21 vezes em C3D1, enquanto que a percentagem de linfócitos aumentou 1,33 vezes em C3D1 em todas as disciplinas (Tabela 5).

Efeitos de agentes imunossupressores concomitantes

no geral, 19 dos 48 pacientes foram identificados como sendo em ambos os corticosteróides sistémicos ou tópicos intermitentes, concomitantes ao dia ou. Destes 19 pacientes em corticosteróides concomitantes durante vários períodos de tempo, 5 receberam dexametasona (variando de 8 mg por dia ou 10 mg por semana), 10 receberam prednisona (variando de 25 mg duas vezes por dia a 4 mg por dia), 5 receberam betametasona (variando a partir de 4 mg por dia a 4 mg, conforme necessário), e 5 receberam corticosteróides tópicos ULTRAPOTENT. Para afastar qualquer possível efeito destas terapias imunossupressoras de corticosteróides sobre a expressão de qualquer uma das populações de células, uma análise de sensibilidade foi realizada excluindo os pacientes sobre medicamentos imunossupressores concomitantes ea análise foi refeita. Nas análises de sensibilidade, os mesmos quatro populações de células mostrou consistentemente significativa (p ≤ 0,0001) muda de C1D1 (baseline) para C2D1 ou C3D1 em ambas as medidas avaliadas (número absoluto e percentual) que significam esses efeitos não são devido ao uso de esteróides. De facto, os doentes em medicação concomitante imunossupressores teve magnitude semelhante de efeitos imunológicos (activação de células T e de inibição de células B), e um maior número de subconjuntos de células imunitárias moduladas em comparação com pacientes não em terapias concomitantes. Além disso, uma análise das alterações imunológicas em usuários de esteróides concomitantes contra os não usuários foi realizado e os resultados foram comparáveis ​​(dados não mostrados).

Correlações de efeitos imunomoduladores com resposta clínica

Conforme relatado pelo Siena et ai. [12], 8 pacientes foram incluídos na porção de dose máxima tolerada IIa fase do estudo e 43 pacientes foram incluídos na porção IIb POC fase. Melhor resposta foi doença estável (SD) em 9 pacientes e estudar a inscrição foi encerrado prematuramente devido à falta de eficácia em qualquer um dos braços de tratamento e impossibilidade de atingir o objetivo resposta planejada. Não houve significativa (p ≤ 0,05) correlações entre as mudanças de linha de base (C1D1) para C2D1 ou C3D1 de qualquer população de células imunes na sobrevida global (OS), independentemente do grupo de tratamento (dados não mostrados).

Discussão

lenalidomida está aprovado para utilização tanto em MM e SMD, e relatou actividade clínica no tratamento da leucemia linfocítica crónica (CLL) e NHL [13], [14]. A maior parte da actividade de lenalidomida nestas doenças hematológicas malignas tem sido atribuído a efeitos de morte celular autónomas. Num ensaio clínico relatado por Siena et al (12) teve como objetivo avaliar a eficácia e segurança do tratamento de combinação com lenalidomida e cetuximab em

KRAS

(v-Ki-ras2 Kirsten sarcoma de rato viral homólogo oncogene) metastático -mutant pacientes com câncer colorretal, avaliou 25 diferentes subpopulações de CD45

+ células do sistema imunológico (células T, células B e células NK) nesta população de doentes que não têm de confusão alterações hematológicas. Os principais resultados são significativos (p ≤ 0,0001) mudanças desde o início até C2D1 e para C3D1 nas quatro populações de linfócitos seguintes: B células (diminuição), ativadas células T helper (aumento), total de células de memória T citotóxicos (aumento) e totais As células T helper naïve (diminuição). Um potencial relevância clínica destes resultados implicam lenalidomida é um activador de células T que poderão desempenhar um papel na sua actividade anti-tumoral. Além disso, a regulação negativa da contagem de células B pode ser ligada à sua actividade em células B malignas. Estes efeitos foram detectados em ambos os braços de tratamento. Como todos os indivíduos foram tratados com lenalidomida, estas alterações podem ser atribuídas aos efeitos farmacodinâmicos da lenalidomida. As análises de correlação mostrou que as mudanças nas populações de células (número absoluto ou percentagem) testadas não se correlacionou com braço de tratamento, resposta por versão RECIST 1.1 critérios, ou OS. As respostas clínicas deste estudo são apresentados em detalhe por Siena et al. [12].

Além disso, lenalidomida cetuximab tinha efeitos notáveis ​​(aumentos até 60 vezes) na memória central e as células T ingénuas sugestiva de que a própria cetuximab pode desempenhar um papel na activação de células T e a função. Efeitos semelhantes foram relatados por Botta et al. [15] num regime de poliquimioterapia com base em cetuximab em pacientes com mCRC avançada. Este é o primeiro estudo, a nosso conhecimento, para relatar um perfil abrangente dos que circulam subconjuntos de células imunes em indivíduos que receberam lenalidomida e mostrar evidências da célula T função da lenalidomida mais cetuximab ativando.

Os pacientes com mCRC administrados com a célula B agente empobrecimento rituximab têm demonstrado tanto a regressão de metástases e alcance de SD [16]. No nosso estudo, embora a maioria dos pacientes tratados com lenalidomida mostraram diminuições significativas em células B, este efeito farmacodinâmico não se correlacionou com SO. De modo semelhante, um análogo de pomalidomide relacionadas, tem sido relatado para reduzir CD19

+ células B de sangue periférico de pacientes com MM receber alternativo tomas diárias de 1-10 mg de [17].

pré-clínicos e clínicos indicam que os dados lenalidomida activa as células T. Bartlett et ai. [7] mostrou que, em pacientes com tumores sólidos avançados, o tratamento com lenalidomida durante 4-5 semanas diminuiu as percentagens de células auxiliares T ingénuos e citotóxicos, e aumentado as percentagens de auxiliar de memória e células citotóxicas-ambas estas conclusões foram confirmadas no presente estudo. Pomalidomide também foi relatado para aumentar sangue periférico CD3

+ e CD8

+ T células em pacientes com MM [17]

In vitro

, lenalidomida inibe Tregs.; No entanto, neste estudo, uma tendência crescente (p 0,05), tanto em número absoluto e percentual de circulação de Tregs no sangue periférico, tanto C2D1 e C3D1 em indivíduos a tomar lenalidomida sozinho. Da mesma forma, o nível de circulação de Tregs foi aumentada em pacientes com MM dentro de 2 semanas de receber lenalidomida [18]. Estes pacientes com MM mostrou um aumento significativo no

+ células T (CD4

+ e CD8

+ subconjuntos) HLA-DR. O aumento do CD4

+ FOX-P3

+ células T reguladoras foi observada após 9 ciclos (9 meses) de terapia de manutenção com lenalidomida. Portanto, o aumento das células T reguladoras podem ser uma resposta tardia aos números de células T efectoras aumentadas e actividade.

A activação das células NK por lenalidomida foi demonstrado

In vitro

por tanto o aumento NK a produção de citocinas de células, bem como em estudos funcionais. Em um modelo de células mononucleares de sangue periférico /tumor co-cultura de células, a co-estimulação das células T conduz à lise mediada por células NK aumentada de várias células tumorais, incluindo próstata e células de cancro do ovário [19]. Lenalidomida melhora das células NK e anticorpo mediada por monócitos citotoxicidade dependente celular (ADCC) do rituximab contra uma variedade de linhas de células hematológicas

in vitro

, incluindo NHL e B-CLL [20], bem como promover a célula NK mediada a lise de células de cancro da mama e colo-rectais revestidos cetuximab e trastuzumab, respectivamente [21]. No presente estudo, embora sem efeitos significativos foram observados em mudanças de células NK periféricas, uma tendência de aumento não significativo foi observado tanto em número absoluto e percentual do total de células NK e ativadas células NK (granzima B

+ e NKD

+) após 28 dias de dosagem versus o valor basal. Estes dados não excluem a possibilidade de que o aumento lenalidomida células NK e ADCC no local do tumor. Os nossos dados indicaram previamente que a dexametasona antagoniza a capacidade estimuladora de lenalidomida em ambas as células NK e T

In vitro

[22]. O efeito da dexametasona na activação lenalidomida de células NK em pacientes com MM indica que, embora o número de células NK aumenta após lenalidomida mais dexametasona tratamento circulante, a capacidade citotóxica das células NK torna-se prejudicada devido à supressão induzida por dexametasona de produção de IL-2 a partir de CD4

+ células T [23]. Para controlar possíveis efeitos farmacodinâmicos do uso de esteróides concomitante sobre as mudanças de linha de base sobre as populações de CD45

+ células analisadas no presente estudo, análises de sensibilidade foram realizadas para excluir os dados de indivíduos que usaram um corticosteróide sistémica ou um corticosteróide tópico potente durante o estudo. Os resultados da análise de sensibilidade foram consistentes com os da análise principal, indicando que a inibição de células B é um verdadeiro efeito farmacodinâmico da lenalidomida e este efeito não é confundido pelas intermitentes terapias imunossupressoras, administradas concomitantemente. As doses e frequência de dexametasona tomadas neste estudo não foram suficientes para antagonizar os efeitos de células T de lenalidomida, consistentes com descobertas anteriores de que uma dose baixa de dexametasona permite uma maior ativação das células T pela lenalidomida.

Em conclusão, apesar de pré-clínico provas, os presentes dados clínicos de Siena et al (12) sugerem que o efeito modulador da lenalidomida é incapaz de superar a resistência primária de

KRAS

-mutant mCRC ao EGFR inibição alvo de cetuximab. É importante ressaltar que esses dados ilustram os efeitos imunomoduladores da lenalidomida que ajuda a compreender o mecanismo da droga e potencial de aplicabilidade para outros tipos de tumores.

Informações de Suporte

Figura S1.

Alterações na percentagem ou número absoluto nos restantes 21 subconjuntos de células imunes do ciclo 1 dia 1 (C1D1) para o ciclo 2 dia 1 (C2D1) ou ciclo de 3 dias 1 (C3D1) em todas as disciplinas. A borda superior da caixa denota a 75

percentil enquanto que a borda inferior denota a 25

percentil. A linha de dentro de cada caixa é o mediano. As linhas se estendem para os valores máximos e mínimos excluindo valores extremos. As linhas cinzentas indicam dados sujeito individual. Abreviatura: Abs:. Absoluta

doi: 10.1371 /journal.pone.0080437.s001

(DOC)

Tabela S1.

biomarcadores e análises correlativas realizadas e número de indivíduos incluídos em cada análise.

a1 paciente foi inscrito, mas não recebeu fármaco em estudo. Abreviatura: Len:. Lenalidomida

doi: 10.1371 /journal.pone.0080437.s002

(DOC)

Checklist S1.

CONSORT Checklist

doi:. 10.1371 /journal.pone.0080437.s003

(DOC)

Protocolo S1.

Julgamento Protocolo

doi:. 10.1371 /journal.pone.0080437.s004

(PDF)