Abstract

Introdução

O câncer colorretal (CRC) é um dos três tipos de câncer mais comuns do mundo e sua incidência está a aumentar. Para identificar os pacientes que se beneficiam da terapia adjuvante exige novos biomarcadores. O gene de regeneração dos ilhéus-derivado (REG) 4 pertence a um grupo de pequenas proteínas secretoras envolvidas na proliferação de células e a regeneração. A sua expressão sobre-regulada ocorre em doenças inflamatórias dos intestinos, também em cancros gastrointestinais. Relatórios sobre a associação da expressão REG4 com CRC prognóstico têm sido mistos. Nosso objetivo foi investigar a expressão REG4 tumor em pacientes com CCR e sua co-expressão com outros marcadores intestinais.

Métodos

expressão Tumor de REG4 foi avaliada por imuno-histoquímica em 840 cirurgicamente consecutivo pacientes tratados com CRC na Universidade de Helsinki Hospital Central. Expressão da proteína MUC1, MUC2, MUC5AC, synapthophysin e chromogranin foi avaliada num subgrupo de 220 pacientes operados consecutivamente CRC. expressão REG4 com os parâmetros clínico, outros marcadores intestinais, bem como o impacto de expressão REG4 na sobrevivência foram avaliados.

Resultados

expressão REG4 associado com os parâmetros clínico favoráveis ​​e com maior sobrevida global de não-mucinoso CRC (p = 0,019). Para tais pacientes com menos de 65 anos, sua expressão foi um marcador independente de menor risco de morte dentro de 5 anos que o câncer; taxa de risco univariável (HR) = 0,57; intervalo de confiança de 95% (CI) (0,34-0,94); multivariable HR = 0,55; IC de 95% (0,33-0,92). Em CRC não-mucinoso, REG4 associado com MUC2 positivo, MUC4, e expressão MUC5AC.

Conclusão

Nós mostramos, a nosso conhecimento, pela primeira vez, que a expressão REG4 IHC a ser um independente marcador de prognóstico favorável em não-mucinoso CRC. Nossos resultados contradizem os de estudos baseados em quantificação dos níveis de mRNA REG4, uma discrepância que justifica mais estudos

Citation:. Kaprio T, Hagström J, Mustonen H, Koskensalo S, Andersson LC, Haglund C (2014) REG4 Independentemente prediz melhor prognóstico em mucinoso não-câncer colorretal. PLoS ONE 9 (10): e109600. doi: 10.1371 /journal.pone.0109600

editor: Anthony WI. Lo, Queen Mary Hospital, Hong Kong

Recebido: 21 de julho de 2014; Aceito: 11 de setembro de 2014; Publicação: 08 de outubro de 2014

Direitos de autor: © 2014 Kaprio et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Data Availability:. O autores confirmam que todos os dados subjacentes às conclusões estão totalmente disponíveis sem restrições. Todos os dados relevantes estão dentro do papel e seus arquivos de suporte de informação

Financiamento:. Este estudo foi apoiado por subsídios da Finska Läkaresällskapet, o och Doris Palander Fundação Kurt, o Juselius Fundação Sigrid, e medicinska understödsföreningen Liv och Hälsa, K. Albin Johansson Foundation, e um subsídio governamental especial de investigação e formação. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

terceiro câncer mais comum do mundo, com uma incidência anual de mais de um milhão de novos casos, é o cancro colorectal (CRC) [1]. Sua cura é baseado no diagnóstico precoce, a cirurgia radical, e possível terapia adjuvante. Essa terapia é rotina para pacientes em estágio III. Na fase II, a vantagem da terapia adjuvante é, no entanto pouco clara, uma vez que cerca de 80% dos doentes tratados cirurgicamente fase II sobreviver sem quimioterapia. Embora saibamos que muitos fatores de alto risco; T4-estágio, a baixa diferenciação, invasão vascular, obstrução tumor, perfuração intestinal e inadequada ressecção dos linfonodos, não podemos sempre identificar pacientes que serão beneficiados com a terapia adjuvante. Seria benéfico encontrar novos biomarcadores para auxiliar nas decisões de tratamento.

Regenerar gene derivado de ilhota (REG) proteínas representam um grupo de pequenas proteínas secretoras envolvidas na proliferação de células e a regeneração, que também participam na formação da sistema imune [2], [3]. Eles pertencem à lectina dependente de cálcio (C-lectina) e superfamília são divididos em quatro famílias, REG I a IV, com base na sua estrutura primária. Em desacordo com as outras proteínas REG, REG4 liga polissacarídeos independentemente de cálcio [4]. Os genes que codificam REG I a III são genes localizados no cromossoma 2p12, enquanto que é de REG4 em 1p12-13. REG4 foi primeiro clonado e identificado por Hartupee et [5] al e por Kämäräinen et ai [6]. Contendo 158 aminoácidos e com um peso molecular de 18 kDa de, é fisiologicamente expresso no cólon e no intestino delgado, com expressão elevada em células enteroendócrinas. [6], [7]. No epitélio gastrointestinal, REG4 é activado durante fases específicas da diferenciação e da maturação, a sua expressão é espacialmente específico, e tem sido sugerido para suportar a diferenciação mucinoso e neuroendócrino ou [8], [9]. -Regulada REG4 expressão ocorre em doenças inflamatórias do intestino (IBD) [6] e também ocorre em muitas malignidades: colorectal, gástrico e pancreático [10] – [12]. REG4 é sugerido para participar na carcinogénese e a regeneração de tecidos, para actuar como um factor anti-apoptótico, e para promover a proliferação e invasão [13]. Os papéis fisiológicos e patológicos finais de REG4 ainda permanecem ainda desconhecidos, no entanto. Expressão de REG4 em cancros tracto gastrointestinal tem em vários estudos parecia ser de valor preditivo e prognóstico [10], [11], [14], [15]. Os achados CRC têm, porém, sido controverso: o aumento da expressão é um sinal de mau prognóstico de acordo com Numata et al [16], mas nenhuma associação com o prognóstico surgiu em outros estudos [17], [18]

Este estudo teve como objetivo avaliar no CRC o papel de REG4 como um marcador de prognóstico e sua associação com os parâmetros clínico em uma coorte de 840 pacientes. Além disso, em um subgrupo de 220 pacientes, nós nos concentramos em associação de expressão REG4 com outros marcadores: marcadores de diferenciação mucinoso MUC1, MUC2, MUC4 e MUC5AC, e também marcadores de fenótipo neuroendócrino:. Sinaptofisina e cromogranina

métodos

os pacientes

a população de estudo compreendeu 840 pacientes com câncer colorretal consecutivos submetidos a cirurgia em 1983-2001, no Departamento de cirurgia da Helsinki University Central Hospital. Um subgrupo de 240 composta consecutivamente pacientes operados entre 1998-2001. REG4 foi estudada em toda a série de pacientes, e os outros marcadores estudados no subgrupo. O finlandês População Register Centre forneceu os dados de estado vital de acompanhamento necessários para calcular estatísticas de sobrevivência, e Estatística Finlândia fornecida causa de morte para todos aqueles falecido. A idade média ao diagnóstico foi de 66 anos, com um período de acompanhamento médio de 5,1 anos (intervalo 0-25,8). A taxa de sobrevida específica da doença de 5 anos foi de 58,9% (95% CI 55,0-62,8%). Para o subgrupo, a idade média no diagnóstico foi de 67 com um período de acompanhamento médio de 6,0 anos (intervalo 0-13,2). A taxa de sobrevida específica da doença em 5 anos foi de 64,8% (95% CI 58,1-71,5%). características clínico-patológicas de ambos os grupos estão em S1.

Este estudo está em conformidade com a Declaração de Helsinki e foi aprovado pela Comissão de Helsinki University Central Hospital (Dnro HUS 226 /E6 /06, extensão TMK02 §66 17,4 Ética Surgical 0,2013) ea Autoridade Nacional de Supervisão de Bem-Estar e Saúde deu a permissão para usar amostras de tecido sem o consentimento informado individual neste estudo retrospectivo (Dnro Valvira 10041 /06.01.03.01 /2012).

microarray Tissue

-fixados em formalina e amostras de tumores embebidos em parafina foram extraídas dos arquivos do Departamento de Patologia da Helsinki University Central Hospital. áreas representativas de amostras de tumores em hematoxilina e lâminas coradas-eosina foram marcados por um patologista experiente. Três socos 1,0 mm de diâmetro retirados de cada amostra foram montados em cada bloco de parafina receptor com um instrumento de tissue microarray semi-automática (TMA) (Beecher Instruments, Silver Spring, MD), como descrito [19].

Imunohistoquímica

TMA- e tecido blocos foram recém-cortada em seções 4 mícrons. Após desparafinização em xileno e re-hidratação através de uma concentração gradualmente decrescente de etanol para água destilada, as lâminas foram tratadas de um módulo de pré-tratamento (Laboratório de Visão Corp., Fremont, CA) em tampão de pré-tratamento durante 20 minutos a 98 ° C para a recuperação de antigénio . O processo de coloração pelo sistema Dako REAIS Detecção EnVision, Peroxidase /DAB +, Coelho /Mouse (Dako, Glostrup, Dinamarca) usou um Autostainer 480 (Lab Vision). Os tecidos foram incubadas com anticorpos primários durante uma hora à temperatura ambiente. O anticorpo REG4 é tal como descrito em [20], outros eram a partir de fontes comerciais. Os anticorpos e as suas diluições estão na Tabela 1.

Scoring de amostras

REG4 expressão citoplasmática foi marcado em células tumorais como quer negativo de positivo. expressões MUC1 e MUC2 foram citoplasmática em células tumorais e foram classificados como negativos de baixa a moderada de alta intensidade de acordo com a. Para a análise estatística eles foram agrupados em: baixo (negativo para baixo) e alta (moderado a elevado). expressões citoplasmáticos MUC4 e MUC5AC foram marcados negativo ou positivo. diferenciação Neuroendocrinic (negativo vs positivo) foi avaliada por synapthophysin citoplasmática e positividade chromogranin. Colorações foram pontuadas de forma independente por T.K. e J. H., que eram cegos aos dados clínicos e resultado. Diferenças na pontuação foram discutidos até consenso. Imagens representativas de expressão estão na Figura 1. Expressão REG4 foi comparado com o índice de proliferação, Ki-67 coloração, que nós publicamos anteriormente [21]

Imagens representativas de colorações de anticorpos no câncer colorretal.; REG4-negativo e -positivo (A B), MUC1- negativo e -positivo (C D); MUC2-negativo e -positivo (E F), MUC4-negativo e -positivo (G H), MUC5AC-negativo e -positivo (I J), synapthophysin-negativo e -positivo (K L ), chromogranin-negativo e -positivo (M N) ampliação original era x 20.

análise estatística

Avaliação da associação entre a expressão REG4 e os parâmetros clínico ou expressões MUC foi feito pelo teste do qui-quadrado de Pearson exata ou o teste exato de linear-by-linear associação para os parâmetros solicitados. sobrevida global específica da doença foi contado a partir da data da cirurgia até a data de morte por cancro colorectal, ou até o final do follow-up. A análise de sobrevida pelo método de Kaplan-Meier foi comparada pelo teste de log rank. O modelo de riscos proporcionais de Cox serviu para análise de sobrevida uni e multivariada, ajustada por sexo, idade, classificação de Dukes, e diferenciação. O teste do modelo de Cox pressuposto de razões de risco constante no tempo envolveu a inserção de um co-variável dependente do tempo separadamente para cada variável testáveis. A taxa de risco de diferenciação foi analisada em dois períodos (de 0 a 1,25 e 1,25 a 5 anos), a fim de atender às premissas do modelo de Cox, com o modelo de Cox dependente do tempo. termos de interação foram consideradas e uma interação entre a expressão REG4 e idade surgiram. Nós, portanto, calculou o papel prognóstico do REG4 separadamente para pacientes com menos e mais de 65. Todos os testes foram em frente e verso. Um valor p de 0,05 foi considerado significativo. Todas as análises estatísticas foram realizadas com SPSS versão 20.0 (IBM SPSS Statistics, versão 20.0 para Mac; SPSS, Inc., Chicago, IL):

Resultados

Imunohistoquímica

REG4. expressão em células tumorais foi citoplasmática e ligeiramente granular. Quando presente, a expressão foi evidente na maioria das células tumorais, mas sem expressão nuclear. Em secções de tecido inteiro, sem distinção clara na expressão apareceu entre a frente invasiva e o resto do tumor. Além disso, em secções integrais, expressão REG4 apareceu em alguns casos em epitélio normal, mas foi regulada negativamente em células tumorais. A expressão de mucinas, synapthopysin e chromogranin foi citoplasmática, sem expressão nuclear

Dos 840 tumores representados no TMA, coloração REG4 poderia ser avaliada em 793.; 580 (73,1%) foram classificados como negativos e 213 (28,9%) teve como positivo. Em um subgrupo de 220 tumores, MUC 1 expressão foi avaliada em 206 (baixo 83,5% e alta de 17,5%), expressão MUC2 em 210 (baixo 17,1% e alta de 82,9%), expressão MUC4 em 208 (negativo de 51,0% e positiva de 49,0% ), e MUC5AC expressão em 205 (93,2% negativa e positiva de 6,8%). positividade Neuroendocrinic (ou /tanto synaptohysin- e cromogranina-positivo) pode ser avaliada em 212 (92,9% negativa e positiva de 7,1%).

REG4 no linfonodo metástases

Com base nos resultados TMA , escolhemos 10 pacientes com doença Dukes C, 5 com tumores REG4-positivo e 5 com tumores negativos. Nenhum dos tumores negativos REG4 dos pacientes mostraram positividade em suas metástases do nó de linfa, enquanto que dos 5 pacientes com REG4 positivo tumor, 2 apresentaram positividade também na sua metástases em linfonodos (Figura 2).

REG4- expressão negativa no tumor e no epitélio adjacente -positivo (a). expressão REG4 positiva no tumor primário (B) e negativo em sua correspondente metástases em linfonodos (C) .Positive expressão REG4 no tumor primário (D) e positiva na sua metástase correspondente da linfa (E). parâmetros

REG4 e clínico-patológicos Original ampliação x 4 na figura A e x 20 na B-E.

expressão REG4 citoplasmática associada a fase menos avançada (p = 0,014), localização no hemicólon direito (p = 0,035), e a histologia mucinosa (p 0,0001). Não vimos qualquer associação com a idade, o sexo, a diferenciação, ou localização (cólon vs. reto) (Tabela 2). Como REG4 associado fortemente com a histologia do tumor, analisamos mucinoso e não mucinoso CRC separadamente. Em não-mucinoso CRC, expressão REG4 associado com o estágio menos avançado (p = 0,005) e maior differentiaton (p = 0,023). Nenhuma associação apareceu com idade, sexo, localização do tumor, nem o lado tumor. (Quadro 3) Em CRC mucinoso, expressão REG4 não associar com qualquer parâmetro clinocopathological (dados não mostrados). Não houve associação entre REG4 e Ki-67 foi visto no CRC, nem em qualquer um dos subgrupos analisados ​​(dados não mostrados).

REG4 e outros marcadores intestinais

No subgrupo de 220 tumores, verificou-se que a expressão REG4 significativamente associada com maior expressão de MUC2, MUC4 e MUC5AC, mas não com a expressão MUC1. Nem REG4 expressão associada com marcadores de diferenciação neuroendócrina. O mesmo permaneceu fiel quando não mucinoso CRC foi analisada isoladamente (Tabela 4). Em CRC mucinoso, expressão REG4 associado sem outros marcadores estudados (dados não mostrados).

Survival análise

Em não-mucinoso, CRC REG4 positividade foi um sinal de prognóstico favorável ( p = 0,019, teste log-rank); DSS em 5 anos para pacientes com expressão tumor REG4 citoplasmática positiva foi de 67,9% (IC 95% 60,5-75,3) em comparação com 57,8% (IC 95% 53,5-62,1) para aqueles com nenhuma expressão citoplasmática (Figura 3). Em CRC mucinoso, apareceu nenhuma diferença (dados não mostrados). Quando estratificados não-mucinoso CRC para os pacientes em ou acima de 65 anos, a expressão REG4 era um sinal de prognóstico favorável em pacientes menores de 65 anos (p = 0,049, teste log-rank.), Sem diferença para os mais velhos (p = 0,195, log -rank-teste). (S2 S3)..

análise de sobrevivência doença-específica de acordo com o método de Kaplan-Meier para a expressão REG4 no câncer colorretal não-mucinoso pelo teste de log-rank

regressão Cox análises univariáveis ​​confirmaram esses resultados, com expressão REG4 ser um sinal de um risco reduzido de morte dentro de 5 anos para a não-mucinoso CRC. Uma diferença significativa surgiu também para pacientes com menos de 65 (HR 0,57, IC 95% 0,34-0,94, p = 0,029), mas não para os mais velhos (HR 0,83, 95% CI 0,57-1,22, p = 0,34). regressão de Cox análise multivariada para pacientes de CRC não-mucinoso menos de 65 anos, ajustados por sexo, fase, e diferenciação, mostrou que REG4 era um fator independente de prognóstico favorável (HR 0,55, 95% CI 0,33-0,92, p = 0,022) (Tabela 5 ).

Discussão

Aqui nós mostramos pela imuno-histoquímica que a expressão REG4 em não-mucinoso associados com cancro colorectal com os parâmetros clínico favoráveis ​​e que REG4 é um marcador independente de prognóstico favorável em pacientes com menos 65. associa expressão REG4 com expressão de outros marcadores intestinais:. MUC1, MUC2 e MUC5AC

expressão REG4 foi maior em tumores de baixo estágio e naqueles com histologia de mucinoso. Com tumor mucinoso excluídos, expressão REG4 associado significativamente com maior diferenciação e baixo palco. REG4 expressão também associada com MUC1, MUC2 e MUC5AC, que apoia a descoberta de que os tumores REG4-positivas são mais altamente diferenciada que são aqueles que são REG4 negativo. Estes resultados estão de acordo com achados de Li et al [17], que mostraram em que, para REG4, imuno-histoquímica (IHQ) expressão na CRC associados significativamente com maior diferenciação e com ausência de invasão venosa. Além disso, a expressão REG4 mostrou uma tendência como associação com baixo T-estágio, a ausência de metástase ganglionar e doença local (Dukes A-B vs C-D). Resultados semelhantes aparecem para o cancro da vesícula biliar, onde a expressão REG4 IHC positivos, associados com Differention tumor mais elevada [22]. Resultados controversos para CRC em Numata et al. mostram que mais elevados associados REG4 expressão de mRNA com diferenciação maior, mais profunda invasão (T-stage), invasão linfática, presença de metástase hepática e fase mais avançada [16]. Eles, no entanto mediram os níveis de mRNA por PCR, não como nós fizemos a expressão da proteína real.

associação entre níveis REG4 e carcinoma tem sido estudado no soro e tecidos. concentração sérica elevada de REG4 em pacientes com carcinoma em comparação com aqueles em controles saudáveis ​​tem sido um achado no câncer de pâncreas [12], câncer gástrico [11] e câncer de vesícula biliar [22], indicando que REG4 soro poderia servir como um biomarcador de diagnóstico. O aumento da expressão REG4 IHC tem sido sugerida como um marcador de prognóstico no cancro gástrico [23], e os níveis elevados de ARNm de tecido REG4 pode ser um marcador de prognóstico pobre na CRC [16]. REG4 expressão IHQ mostrou, no entanto, qualquer efeito sobre o prognóstico em CRC [17], [18]. Uma razão para isso poderia ser que os cancros mucinosos e não mucina não foram analisados ​​separadamente. Também diferenças em anticorpos, procedimentos de coloração e análise de colorações poderia ter diferiu do nosso estudo. No câncer de vesícula biliar, expressão REG4 IHC tem sido associada com melhor prognóstico [22].

Os nossos resultados mostram que a expressão REG4 IHC é um marcador de prognóstico favorável na CRC não-mucinoso, enquanto nenhuma diferença surgiu na CRC mucinoso. expressão REG4 é constitutivamente alta no tumor mucinoso (isto é pseudomixoma peritoneal, e cystadenomas mucinoso e câncer gástrico mucocellular) Isto pode explicar porque nenhuma variação clara na expressão REG4 foi encontrado por IHC no grupo de tumores CRC mucinoso. As diferenças na expressão REG4 foi por outro lado resulta em não-mucinoso CRC. Em nossos pacientes com menos de 65, REG4 elevada foi um fator independente para melhor prognóstico em não-mucinoso CRC. Parece, portanto, que os níveis de mRNA plausível REG4 podem ser elevados em pacientes de CRC com prognóstico pobre, mas isto não é traduzido para a proteína. Mais estudos são, portanto, necessários para comparar os níveis de mRNA REG4 com caso REG4 IHC a caso.

Nossos resultados referentes cinco pares de tumores primários REG4-positivas e seus correspondentes metástases do nó de linfa mostrou que, de cinco gânglios linfáticos, apenas dois mostraram expressão REG4; isto pode implicar que uma subpopulação REG4-negativa de células tumorais é mais provável de metástase de células REG4-positiva.

REG4, é expresso em doenças inflamatórias do intestino e também nas margens de úlceras pépticas, é considerado um marcador de inflamação [6]. Em alguns dos nossos de tecido todo o tecido seções tumor manchado negativo para REG4, mas o epitélio benigno adjacente expressa REG4 fortemente, aparentemente representando uma reação inflamatória contra o tumor.

É digno de nota que a expressão REG4 confere um prognóstico mais favorável apenas no CRC, sem diferenciação mucinoso. Na verdade, a alta expressão de REG4 tem aparecido em formas agressivas de câncer gastrointestinal que mostram carcinoma (célula anel de sinete) mucinoso fenótipo semelhante mucocellular do estômago [9]. Por outro lado, REG4 também está presente em abundância na cystadenomas rico em mucina do apêndice e na sua maligna, forma disseminada, pseudomixoma peritoneal, que é notoriamente resistente à terapia.

A maioria das células entero-endócrinas em condições normais mucosa intestinal apresentam elevada expressão fisiológica de REG4 com co-expressão de sinaptofisina e cromogranina. tumores neuro-endócrino intestinal de baixo e alto grau também mostram positividade REG4, frequentemente com uma distribuição anatómica particular com a expressão mais forte em uma única camada de células na periferia do tumor que estão em contacto íntimo com o estroma circundante [6] Diante disso, ele foi um pouco intrigante que synaptophysin- e cromogranina positivas tumores CRC neste estudo manteve-se negativa para REG4.

Vários relatos sugerem que o papel oncogênico dos REG4 no desenvolvimento de câncer no trato gastrointestinal. Os mecanismos moleculares finais têm, no entanto, manteve-se elusiva. Bishnupari et al [24] relataram que o tratamento de células de adenocarcinoma do cólon cultivadas com proteína recombinante REG4 fosforilação induzida do receptor do EGF e Akt. Eles sugeriram que REG4 é um transactivador da via de sinalização de EGFR /Akt. Uma maior elucidação do papel dos REG4 exógeno como um regulador potencial de crescimento da célula é, contudo, aguardando a identificação do receptor putativo REG4. Não existem provas de que a expressão aumentada de REG4 por si só induz o crescimento canceroso, no entanto. As nossas observações em murganhos transgénicos para ADNc REG4 humano sob o promotor de vilina que leva à sobre-expressão global REG4 na mucosa intestinal não induziu o aumento da formação de tumores ou hiperplasia da mucosa (dados não publicados).

A regulação da expressão é ainda REG4 mal entendido. Nós originalmente relatado fortemente expressão de REG4-regulada também na inflamado mucosa IBD de focos IBD-like de metaplasia intestinal induzida por gastrite no estômago [6]. Isto sugere que as citoquinas inflamatórias podem influenciar a expressão REG4. Diferenciação neuroendócrina, por outro lado, como visto nas células enteroendócrinas, parece conferir expressão constitutiva de REG4. Recentemente, relatou a co-expressão de REG4 com o factor de transcrição neuronal Acaso-1 (atonal, matemática-1) em tumores neuroendócrinos [9]. O que continua a ser estabelecida é se um regulador de expressão REG4 é Hath-1.

Em comparação com secções de tecido inteiro, a técnica TMA permite a análise de grandes grupos de pacientes, mas com uma proporção menor dos tumores avaliados. Isso não representava nenhum problema aqui, no entanto, como o padrão de coloração REG4 em toda a nossa seção de coloração homogênea. Por razões técnicas, até 5% dos espécimes foram perdidos na TMA-produção e processo -staining. A força deste estudo é um grande bem caracterizada coorte, CRC-paciente com o nosso longo tempo de acompanhamento.

Aqui nós mostramos, a nosso conhecimento, pela primeira vez, que a expressão REG4 IHC é um marcador independente de prognóstico favorável no câncer colorretal não-mucinoso em pacientes menores de 65 anos Estes resultados estão em desacordo com os obtidos através da avaliação de níveis de mRNA; nossas divergências com achados de outros justificam estudos adicionais.

Informações de Suporte

Figura S1.

características clínico-patológicas da população população do estudo e subgrupo

doi:. 10.1371 /journal.pone.0109600.s001

(DOCX)

Figura S2.

expressão REG4 indicando melhor prognóstico no câncer colorretal não-mucinoso para pacientes mais jovens. análise de sobrevida específica da doença de acordo com o método de Kaplan-Meier para a expressão REG4 no câncer colorretal não-mucinoso em pacientes menores de 65 anos pelo teste de log-rank

doi:. 10.1371 /journal.pone.0109600.s002

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Figura S3.

expressão REG4 mostrando nenhuma diferença na sobrevida no câncer colorretal não-mucinoso em pacientes mais velhos. análise de sobrevida específica da doença de acordo com o método de Kaplan-Meier para a expressão REG4 no câncer colorretal não-mucinoso em pacientes acima de 65 anos pelo teste de log-rank

doi:. 10.1371 /journal.pone.0109600.s003

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Reconhecimentos

Agradecemos Päivi Peltokangas, Gynel Arifdshan, e Elina Aspiala por sua excelente assistência técnica.