Abstract

Fundo

A associação entre NAD (P) H: quinona oxidoredutase 1 (

NQO1

) polimorfismo C609T gene (rs1800566) e cancro do pulmão tem sido amplamente avaliado, e uma resposta definitiva até agora está faltando. O primeiro realizou um estudo de caso-controle para avaliar esta associação, no nordeste chinês Han, em seguida, realizaram uma meta-análise para aprofundar esta questão.

Metodologia /Principais Achados

Este caso-controle estudo envolveu 684 pacientes clinicamente diagnosticados como câncer de pulmão e 602 controles sem câncer da mesma idade da cidade de Harbin, província de Heilongjiang, na China. A genotipagem foi realizada utilizando o PCR-LDR (reacções de detecção ligase) método. Meta-análise foi gerido pelo software STATA. De dados e estudo de qualidade foram avaliados em duplicado. Nossa associação estudo de caso-controle não indicou nenhuma diferença significativa nas distribuições genotípicas e alélicas do polimorfismo C609T entre pacientes e controles de câncer de pulmão, de acordo com os resultados do novo meta-análise envolvendo 7286 pacientes e 9167 controles tanto sob alélicas (odds ratio (OR ) = 0,99; 95% intervalo de confiança (IC): 0,92-1,06; P = 0,692) e dominante (OR = 0,98; IC 95%: 0,89-1,08; P = 0,637) modelos. No entanto, houve evidência moderada de heterogeneidade entre estudo e baixa probabilidade de viés de publicação. Outras análises de subgrupos por etnia, fonte de controles e tamanho da amostra não detectaram associações positivas nesta meta-análise.

Conclusões

O nosso estudo no nordeste chinês Han, juntamente com o meta-análise, não conseguiu para confirmar a associação de

NQO1

polimorfismo C609T gene com o risco de câncer de pulmão, mesmo entre diferentes populações étnicas

Citation:. Guo S, Gao M, Li X, Li Y, Chu S, Zhu D, et al. (2012) Ausência de associação entre NADPH quinona Oxirredutase 1 (NQO1) Gene C609T Polimorfismo e câncer de pulmão: Um Estudo de Caso-Controle e uma meta-análise. PLoS ONE 7 (10): e47939. doi: 10.1371 /journal.pone.0047939

editor: Michihiko Kuwano, da Universidade Kyushu, Japão

Recebido: 24 Julho, 2012; Aceito: 25 de setembro de 2012; Publicação: 24 de outubro de 2012

Direitos de autor: © 2012 Guo et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este trabalho foi apoiado pelo Shanghai Levante Star Program (11QA1405500), a National Science Foundation Natural da China (30.900.808) e do Fundo de Ciência da Shanghai Jiao Tong University School of Medicine (11XJ21034). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

o câncer de pulmão é um dos tumores malignos comuns, e quase 1,3 milhões de novos casos são diagnosticados anualmente em todo o mundo [1], [2]. Há evidências crescentes sugerindo que a causa de câncer de pulmão é multifatorial, e parte é devido a defeitos genéticos. Na última década, os esforços exaustivos têm se dedicado a desvendar as bases genéticas do câncer de pulmão; no entanto, os seus genes de condução e determinantes genéticos que atribuem ao desenvolvimento de câncer de pulmão até agora ainda imperceptíveis

O NAD gene que codifica (P) H:. quinona oxidoredutase 1 (

NQO1

) é um promissor candidato na patogénese do cancro do pulmão [3], [4]. NQO1 é uma enzima citosólica, e catalisa a redução de dois electrões de compostos quinóide para gerar as hidroquinonas menos tóxicos, o que pode aliviar a carcinogénese do cancro [5], [6]. Nos tecidos de cancro do pulmão humano,

gene NQO1

foi observada a ser sobre-expressa [5], [7] – [9]. É, portanto, de interesse adicionado a identidade defeitos genéticos de

gene NQO1

responsável pela sua actividade enzimática, ainda mais responsáveis ​​por carcinogênese de pulmão. A transição de C para T na posição 609 (rs1800566) de

gene NQO1

pode levar a atividade reduzida de quinona redutase [10] – [12]. O polimorfismo C609T tem sido amplamente avaliado em associação com câncer de pulmão em vários ethinicities, mas com resultados conflitantes, possivelmente devido aos tamanhos de amostra insuficientes, fundos genéticos e seleção de populações de estudo.

Neste estudo, primeiro decidimos avaliar a assocation do polimorfismo C609T do

gene NQO1

com o risco de câncer de pulmão em uma grande população Han nordeste chinesa. Em seguida, com base nos dados que se acumulam e lançar alguma luz sobre reivindicações incertos atuais, buscou-se realizar uma meta-análise abrangente desta associação de Inglês e literatura chinesa.

Métodos

estudo da População

O projeto deste estudo foi descrito anteriormente [13]. Resumidamente, este foi um estudo de caso-controle de base hospitalar com um total de 1286 indivíduos consecutivamente recrutamento de três hospitais na cidade de Harbin, província de Heilongjiang, na China. A população do estudo incluiu 684 pacientes clinicamente diagnosticados como câncer de pulmão e 602 controles sem câncer da mesma idade, e todos os sujeitos eram residentes locais de Han descida. Este estudo foi aprovado pelo Comitê da Universidade Médica Harbin Ética, e foi conduzido de acordo com a Declaração de Princípios de Helsínquia. Todos os indivíduos assinaram o consentimento informado por escrito.

Critérios de Diagnóstico e características demográficas

O câncer de pulmão foi diagnosticado pela radiografia do tórax e, ou tomografia computadorizada de alta resolução (TC) ou reforçada emissão de CT ou de positrões tomografia computadorizada (PET) scan -CT, o que foi confirmado pelos médicos clínicos de medicina respiratória. Aqueles que eram suscetíveis ao câncer de pulmão foram ainda patologicamente confirmado por biópsia, e aqueles com CT normal ou aumentada, CT ou resultados PET-CT foram tratados como controles sem câncer neste estudo. subtipos clínicos de cancro do pulmão incluiu o cancro de células escamosas, o adenocarcinoma, o câncer de pequenas células e câncer de pulmão não especificado. Idade e sexo foram registrados no momento da inscrição. O status de tabagismo e consumo de álcool foram definidos no momento da pesquisa. Fumar foi expressa por cento de cada vez ou tabagismo atual. Beber foi categorizado como nunca, nunca ou beber atual. Aqui, beber atual se refere ao consumo de, pelo menos, uma bebida alcoólica durante os últimos 30 dias.

A genotipagem

As amostras de sangue (1 mL) foram recolhidas e o ADN genómico extraiu-se a partir de células de sangue branco, utilizando o kit de ADN TIANamp sangue (Tiangen Biotect [Pequim] Co., LTD). A genotipagem foi realizada utilizando o método de PCR-LDR (reacções de detecção de ligase) por sistema ABI 9600 (Applied Biosystems, USA) [14]. Os parâmetros de ciclagem foram como a seguir: 94 ° C durante 2 min; 35 ciclos de 94 ° C durante 15 s; 60 ° C durante 15 s; 72 ° C durante 30 s; e um passo de extensão final a 72 ° C durante 5 min. Duas sondas específicas para discriminar as bases específicas e uma sonda comum foram sintetizados (disponível mediante solicitação). A sonda comum foi marcado na extremidade 3 ‘com 6-carboxi-fluoresceína e fosforilado na extremidade 5’. As condições de reacção de LDR foram: 94 ° C durante 2 min, 20 ciclos de 94 ° C durante 30 s e 60 ° C durante 3 min. Após a reacção, produtos de reacção 1 ml LDR foram misturados com 1 ml de referência ROX passiva e 1 mL de tampão de carga, e depois desnaturadas a 95 ° C durante 3 min, e arrefecida rapidamente em água com gelo. Os produtos fluorescentes de LDR foram diferenciadas com ABI sequenciador 377 (Applied Biosystems, EUA).

Análise Estatística

As comparações entre pacientes com câncer de pulmão e os controles foram realizados por t não pareado -test para variáveis ​​contínuas e por χ

2 de teste para as variáveis ​​categóricas. Para evitar erros de genotipagem bruta, o polimorfismo C609T foi verificada a sua coerência com Hardy-Weinberg por χ

2 de teste. Na opinião dos pacientes e controles pareados por idade, genótipos foram comparados por análise de regressão logística condicional sob premissas de aditivo, os modelos dominantes e recessivos de herança, respectivamente. A significância estatística foi aceito como P . 0,05

Análise Meta

Esta meta-análise será relatado de acordo com os itens de relatório preferido para revisões sistemáticas e meta-análises (PRISMA) diretriz (consulte PRISMA lista de verificação:. Tabela S1) [15]

Navigator enorme e PubMed, bem como banco de dados Wanfang (https://www.wanfangdata.com.cn) foram pesquisados ​​até julho de 2012 para artigos que investigaram a associação entre o polimorfismo C609T eo risco de câncer de pulmão. Os termos sujeitos utilizados foram “cancro do pulmão” ou “neoplasia pulmonar” e “NAD (P) H: oxidorredutase quinona” ou “NQO1”, anexa com “gene” ou “alelo” ou “genótipo” ou “variante” ou “polimorfismo “ou” mutação “. Foram identificados os artigos escritos em linguagem e estudos realizados em seres humanos Inglês ou chinês. O resultado da pesquisa foi complementada por comentários de listas de referência para todos os estudos relevantes e artigos de revisão. Além disso, se houver foram compartilhados ou duplicado amostras entre os estudos, foram recrutados aqueles com o grande tamanho da amostra

Estudos foram qualificados se eles preencheram os seguintes critérios:. (I) sobre um projeto de caso-controle retrospectivo ou aninhado ; (Ii) Aprovar o método de genotipagem validado; (Iii) fornecer contagens de genótipos de

NQO1

C609T polimorfismo do gene entre os pacientes com câncer de pulmão e controles.

A qualidade dos estudos foi avaliada usando uma avaliação da qualidade pontuação exploradas para estudos de associação genética por Thakkinstian et al [16]. Os escores totais variou de 0 (pior) a 12 (melhor). Os critérios para avaliação da associação genética entre o

NQO1

polimorfismo C609T gene analisado com câncer de pulmão estão descritos na Tabela S2 qualidade.

Na meta-análise, o modelo de efeitos aleatórios utilizando o DerSimonian e Laird método foi utilizado para combinar as estimativas de tamanho do efeito individual para calcular RUP ponderados reunidas, e a estimativa da heterogeneidade foi determinada utilizando o modelo de Mantel-Haenszel. heterogeneidade entre estudo foi explorado pelo χ

2 de teste, ea heterogeneidade foi avaliada pelo índice de inconsistência

I

2 Estatística (variando de 0 a 100%), que é definida como a percentagem de a variabilidade entre-estudo observou que é devido à heterogeneidade em vez de erro aleatório [17].

o viés de publicação foi avaliada pelo gráfico de funil do Begg, teste de Egger e a guarnição e o método [18] preencher. Para o

I

2 e as estatísticas de Egger, a significância estatística foi fixado em 0,1. Todas as análises estatísticas foram geridos pelo software STATA (versão 11.0).

Resultados

características basais

Os dados demográficos e fatores de risco da população do estudo estão resumidos na Tabela 1. Casos e os controles foram bem pareados por idade. sexo masculino, fumar e beber foram associados com risco aumentado para câncer de pulmão. Entre todos os pacientes com câncer de pulmão, o subtipo de adenocarcinoma, carcinoma de células escamosas, câncer de pequenas células e câncer não especificado foi responsável por 37,54%, 32,26%, 20,83% e 9,38%, respectivamente.

Análise Single-lócus

As taxas de sucesso de genotipagem para o polimorfismo C609T foram 99,71% e 99,17% em pacientes e controles, respectivamente. distribuições de genótipos de polimorfismo analisou respeitado Hardy-Weinberg nos controles (P 0,05). Não houve diferença significativa nas distribuições genotípicas e alélicas do polimorfismo C609T entre pacientes com câncer de pulmão e controles, e isso não significância também foi espelhado sob os pressupostos do aditivo (OR = 0,99; IC 95%: 0,85-1,17; P = 0,634 ), dominante (OR = 1,01; IC 95%: 0,81-1,33; P = 0,607) e recessiva (OR = 1,04; IC 95%: 0,80-1,34; P = 0,791) modelos (Tabela 2)

artigos elegíveis para Meta-análise

A busca inicial rendeu 83 artigos potencialmente relevantes. Após a aplicação dos critérios de inclusão /exclusão, 22 artigos foram elegíveis para inclusão. Um fluxograma esquematizar o processo de seleção e exclusão de artigos com motivos específicos é mostrado na Figura 1. Os artigos recuperados foram publicados entre 1997 e 2011, com 20 artigos escritos em Inglês e dois em chinês.

Características de Estudos

uma vez que mais de um grupo de estudo foi incluído em alguns artigos, que tratou-os separadamente. No total, 30 estudos separados, mais o presente estudo abrangendo um total de 7286 pacientes com cancro do pulmão e 9167 controles foram finalmente meta-análise, com 12 estudos realizados em asiáticos [19] – [29], 12 em caucasianos [19], [ ,,,0],30] – [39], 4 em afro-americanos [33], [35], [38], [40], e 3 em etnias mistas [19], [31], [40]. 18 estudos relataram informações correspondentes na idade entre pacientes e controles. A pontuação de estudos individuais de qualidade variou de 2 a 10 (média: 7,6) a partir de uma pontuação máxima de 12. As frequências de alelo 609T variou muito, que eram extremamente maior nos asiáticos do que em caucasianos para ambos os pacientes (28,44-54,21% versus 14,23-21,96%) e controles (30,88-46,60% versus 12,41-20,47%). As características basais dos estudos qualificados são apresentados na Tabela 3 e Tabela 4.

Resultados de meta-análise

Depois de combinar todos os estudos qualificados, encontramos associação nula de

NQO1

polimorfismo C609T gene com câncer de pulmão tanto sob alélicas (OR = 0,99; IC 95%: 0,92-1,06; P = 0,692) e dominante (OR = 0,98; IC 95%: 0,89-1,08; P = 0,637) modelos, e este associação sofria de evidência significativa de heterogeneidade entre os estudos (alélicas e modelos dominantes:

I

2 = 32,1% e 43,7%) (Figura 2). No entanto, houve baixa probabilidade de viés de publicação para ambos os modelos (P

Egger = 0,608 e 0,81) (Figura 3).

Para ter em conta as potenciais fontes de heterogeneidade, realizamos um conjunto de análises de subgrupos de acordo a etnia, fonte de controles e tamanho da amostra (Tabela 5). Apesar da grande divergência do alelo 609T, as estimativas de risco foram comparáveis ​​em magnitude entre asiáticos e caucasianos. Notavelmente, o alelo 609T foi associada com uma redução de 13%, embora não significativa, o risco de câncer de pulmão em afro-americanos (95% CI: 0,66-1,16; P = 0,341), sem heterogeneidade (

I

2 = 0,0%) ou viés de publicação (P

Egger = 0,192). Após a estratificação por fonte de controles, a magnitude do risco foi relativamente forte em estudos baseados em hospitais do que em estudos de base populacional, enquanto heterogeneidade e viés de publicação emaranhado o primeiro. Restringindo a análise de estudos com ≥500 pacientes ainda não detectaram alterações significativas nas estimativas de risco, tanto alélicas e modelos dominantes, indicando a robustez dos resultados.

Discussão

Embora numerosos estudos tenham considerado

NQO1

polimorfismo C609T gene como um candidato promissor para câncer de pulmão, nosso estudo de caso-controle, no nordeste chinês Han, juntamente com o meta-análise, não conseguiu confirmar esta relação, mesmo entre diferentes populações étnicas. Esta não significância também se refletiu nos estudos amostra de tamanho maior, que são menos propensos a resultados aleatórios, indicando a robustez de nossas descobertas. Para conhecimento dos autores, este é o meta-análise mais abrangente investigar a susceptibilidade genética do

NQO1

polimorfismo C609T gene de câncer de pulmão.

Com o aumento dos estudos de associação genética, é altamente estimulados a sintetizar os dados disponíveis para resolver as dificuldades persistentes na obtenção robustos, resultados replicáveis. Considerando o fato de que os defeitos genéticos mais comuns costumam fazer uma contribuição pequena a moderada para o futuro risco de doença, o estudo insta a necessidade de grandes tamanhos de amostra para conduzir estimativas suficientemente precisas entre variação genética e da doença. Vários estudos individuais relataram sinais positivos de

NQO1

polimorfismo C609T gene com câncer de pulmão [19], [20], [22], [23], [26], [29], [39], [ ,,,0],40]; Em contraste, tal como ilustrado nas nossas conclusões globais entre 16453 indivíduos houve nenhum risco detectável, mesmo em populações diferentes de descidas. No entanto, é interessante notar que o efeito protetor conferido pelo alelo 609T foi sensivelmente óbvia em afro-americanos. Considerando os relativamente poucos estudos foram realizados em afro-americanos ea maioria destes estudos eram pequenos, há uma indicação de possível benefício, reforçando grandes estudos adicionais para confirmar ou refutar esta conclusão. Mesmo assim, não podemos descartar um possível efeito significativo do alelo 609T na carcinogênese de pulmão, e também é possível que o papel potencial do polimorfismo examinada é diluído ou mascaradas por outras interações gene-gene ou gene-ambiente.

Vários pontos fortes que distinguem o presente inquérito merecem consideração adequada. Em primeiro lugar, este é até hoje a maior síntese de explorar a associação de

NQO1

polimorfismo C609T gene com câncer de pulmão. Em segundo lugar, os resultados do estudo de caso-controle estavam em linha com a do meta-análise correspondente e restringindo análises para estudos maiores gerado os resultados similares. Em terceiro lugar, nossos resultados são menos propensas a viés de seleção devido à baixa probabilidade de viés de publicação.

Além disso, algumas limitações devem ser consideradas na interpretação dos resultados. Primeiro, o desenho transversal dos estudos incluídos nesta meta-análise pode impedir comentários sobre a causalidade, e um viés de sobrevivência não pode ser excluída. Em segundo lugar, como com todos os meta-análises, viés de publicação pode ter ocorrido porque as nossas análises foram inteiramente baseado em estudos publicados de inglês e jornais de língua chinesa. Em terceiro lugar, embora o modelo de efeitos aleatórios adotada leva tanto uma variação entre-estudo e do interior-estudo variações em conta, este modelo não pode ser considerada como uma panaceia para heterogeneidade [41]. Além disso, como afirmado por Higgins et al [42], a assunção de verdadeiras quantidades dos estudos individuais, após um certo distribuição de probabilidade em um modelo de efeito aleatório é um tanto arbitrária e faz a interpretação das suas previsões difícil. Em quarto lugar, os dados sobre os níveis circulantes de proteína NQO1 ou seus produtos catalisadas estavam indisponíveis, se opõe a uma avaliação mais robusta de fontes de heterogeneidade, e tornando-nos incapazes de comparar os níveis entre os genótipos. Em quinto lugar, nós nos concentramos em apenas um polimorfismo no

gene NQO1

, e não cobrem outros genes de susceptibilidade ou polimorfismos. Dadas estas limitações, não podemos saltar para uma conclusão até nova verificação dos nossos resultados in vitro, in vivo e em grandes estudos prospectivos.

Em suma, este estudo de caso-controle, no nordeste chinês Han, juntamente com o meta-análise abrangente, não conseguiu confirmar a associação de

NQO1

polimorfismo C609T gene com o risco de câncer de pulmão, mesmo entre diferentes populações étnicas. No entanto, por razões práticas, esperamos que este estudo não permanecerá apenas mais um ponto final da pesquisa, em vez de um começo para estabelecer os dados de base para investigar os mecanismos moleculares da

NQO1

câncer gene e pulmão.

Informações de Suporte

Tabela S1.

lista de itens para incluir ao relatar uma revisão sistemática ou meta-análise (revisão de diagnóstico que consiste em estudos de coorte).

doi: 10.1371 /journal.pone.0047939.s001

(DOC)

Tabela S2.

Critérios para avaliação da associação genética do polimorfismo C609T gene NQO1 com câncer de pulmão de qualidade.

doi: 10.1371 /journal.pone.0047939.s002

(DOC)