Abstract

Objectivo

Este estudo analisou a correlação clínico-patológica entre o câncer de ovário (OC) e RECQL1 helicase DNA para avaliar o seu potencial terapêutico.

Métodos

OC cirurgicamente ressecado de 118 casos retrospectivos, para os quais blocos de parafina e todos os dados clínicos eram completas, foram utilizados neste estudo. RECQL1 e Ki-67 imunocoloração foram realizadas em seções de correlacionar coloração RECQL1 com o subtipo e sobrevida do paciente. Dez OC e duas linhas de células normais foram então examinados para a expressão RECQL1 e foram tratados com siRNA contra RECQL1 para avaliar seu efeito sobre a proliferação celular.

Resultados

Dos 118 casos de adenocarcinoma (50, seroso; 26, endometrióide; 21, células claras; 15, mucinoso, 6, outra histologia), 104 (90%) mostraram níveis de expressão RECQL1 variando nos núcleos de células OC. O modelo de riscos Cox confirmou que difusa e forte coloração de RECQL1 foi correlacionada com tipo histológico. No entanto, a expressão RECQL1 não se correlacionaram com a sobrevida dos pacientes em geral ou estágio FIGO.

In vitro

, expressão RECQL1 foi excepcionalmente elevado em rápido crescimento linhas celulares OC, em comparação com as células normais. Utilizando uma análise de tempo-curso de RECQL1 siRNA-transfecção, foi observada uma inibição significativa da proliferação celular.

Conclusões

ADN da helicase RECQL1 é um marcador de células altamente proliferativas. RECQL1-siRNA pode oferecer uma nova estratégia terapêutica contra vários subtipos de OC, incluindo cânceres de platina-resistente, ou em cancros recorrentes que ganham resistência de platina

Citation:. Sanada S, Futami K, Terada A, Yonemoto K, Ogasawara S, Akiba J, et al. (2013) RECQL1 DNA Repair Helicase: um alvo terapêutico potencial e um marcador proliferativa contra o cancro do ovário. PLoS ONE 8 (8): e72820. doi: 10.1371 /journal.pone.0072820

editor: Rolf Müller, da Universidade Philipps, Alemanha |

Recebido: 28 de outubro de 2012; Aceito: 09 de julho de 2013; Publicação: 09 de agosto de 2013

Direitos de autor: © 2013 Sanada et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Os autores não têm apoio ou financiamento para relatar

Conflito de interesses:. temos os seguintes interesses. Kazunobu Futami e Yasuhiro Furuichi são empregados por Gene Cuidados Instituto Co., Ltd. Não há patentes, produtos em desenvolvimento ou produtos comercializados a declarar. Isto não altera a nossa adesão a todas as políticas de PLoS One sobre os dados e materiais de compartilhamento, como detalhado em linha no guia para os autores.

Introdução

O câncer de ovário (OC) representa cerca de 30% todos os cânceres do sistema reprodutivo feminino. A média taxa de sobrevida de 5 anos em estágio avançado é tão baixa quanto 31% (IIIC estágio FIGO) para 51% (FIGO estágio IIIA) (Federação Internacional de Ginecologia e Obstetrícia (FIGO)). Aproximadamente 75% dos doentes com doença avançada (III estágio) OC representam com recorrência após a cirurgia, que é fatal [1]. Isto é em grande parte atribuído a uma ausência de sintomas de alerta e uma falta de testes de diagnóstico que permitem a detecção precoce de OC e a sua recorrência [2]. O tratamento inicial para OC é a ressecção em massa seguida de quimioterapia combinada pós-operatório para os pacientes com um palco IC ou grau superior de tumor. Assim, o tratamento de primeira linha é direcionada para o tratamento curativo. Em comparação, apenas cuidados paliativos é fornecido para recorrência do câncer ou em pacientes que desenvolvem resistência à quimioterapia. Em OC avançado com a disseminação peritoneal, enquanto a regressão completa é alcançada, algumas células OC residuais podem promover o aparecimento de células resistentes aos medicamentos em quimioterapia prolongada. Dois subgrupos de COs notórios, histologicamente subclassificados como adenocarcinoma de células claras e adenocarcinoma mucinoso, são conhecidas por serem resistentes a várias drogas anti-cancro, incluindo os derivados de platina-interagindo ADN. Esses perfis de OCs representam sérios problemas entre oncologistas ginecológicas.

RECQL1 pertence a uma família de helicases de ADN, que são enzimas ubíquas que descontrair DNA de cadeia dupla para revelar single-stranded DNA durante os processos essenciais, tais como replicação, transcrição ou reparo. Bioquímica e celular mostram os dados biológica helicase RECQL1 participa na manutenção da integridade genômica e é altamente regulado para cima em células de proliferação rápida, incluindo os vários tipos de câncer, como pulmão, fígado, pâncreas, cólon, cérebro e cancros da cabeça e pescoço [3-9]. Anteriormente, no modelo de murganho de xenoenxerto de cancro do fígado, que mostrou uma terapia ARNi que silencia especificamente a expressão do ADN da helicase RECQL1 foi um tratamento anti-cancro eficaz e tem o potencial de ser desenvolvida como método terapêutico novo [10]. Embora a eficácia dos RECQL1-siARN foi provado correctamente com as linhas de células cultivadas obtidas a partir de várias origens de cancro e também nos modelos de xenoenxerto de ratinho, células OC não têm até agora sido estudada explicitamente [11]. Neste trabalho, nós analisamos, assim, a correlação clínico-patológico entre o câncer de ovário e de expressão RECQL1

in vivo

e

in vitro

e tornar ainda mais referência ao potencial terapêutico das RECQL1.

métodos

população do estudo e as amostras

Uma pesquisa retrospectiva de pacientes com diagnóstico de câncer de ovário entre 1998 e 2005 foi realizada utilizando arquivos do Departamento de Patologia do Hospital Universitário Kurume, Japão. consentimento escrito foi dada pelos pacientes para a sua informação a ser armazenada na base de dados do hospital e utilizadas para a investigação. O estudo foi aprovado pelo comitê de ética da Kurume University School of Medicine. Foram identificados Cento e dezoito cancros do ovário com correspondentes blocos de parafina. As informações clínicas e patológicas foram revisados, e os dados clínicos incluíram idade, terapia, estágio FIGO e follow-up. Hematoxilina-eosina (H E) manchado lâminas foram revisadas eo diagnóstico confirmado de forma independente por dois patologistas (SS, HY)

A análise imunohistoquímica

cortes seriados grossas Quatro ^ m foram obtidos a partir selecionada. os blocos de parafina e montaram-incorporado em lâminas de vidro revestidas usando o XT BenchMark (Ventana Automated Systems, Inc., Tucson, AZ, EUA) e métodos ChemMate ENVISION (DakoCytomation, Glostrup, Dinamarca). A imuno-histoquímica foi realizada utilizando o anticorpo monoclonal de ratinho RECQL1 (Cell Signaling Inc. EUA) a uma concentração de 6,8 ug /ml, e Ki-67 anticorpos que foram obtidos pré-diluída. Cada lâmina foi usando solução de recuperação de CC1 Ventana durante 30 min, e incubadas com anticorpos primários durante 30 minutos tratado termicamente. Este sistema automatizado utilizado o método complexo biotina estreptavidina com 3,3’diaminobenzidine como o cromogénio (kit de detecção Ventana iVIEW DAB). Usamos estroma ovariano normal e atrófica RECQL1-negativo da mulher na pós-menopausa (controle negativo). Algumas das amostras OC continha estroma ovariano intacta, de modo que nós também podemos vê-los como controles negativos internos. Pontuação baseou-se na quantidade e intensidade de coloração RECQL1 nuclear. A quantidade foi classificada como negativa ( 1% das células positivas), esporádicos (células positivas isoladas, mas 5%), (pequenos aglomerados de células, mas 25% das células positivas) focais, difusa ( 25% de células coradas). A intensidade foi classificada como de intensidade leve, moderada ou forte. coloração difusa e forte foi considerado como ++, coloração esporádica e focal, com qualquer intensidade foi considerado como +, negativo como -. As análises estatísticas foram realizadas para cada característica clínico-patológico entre a (-), (+) e (++) grupos. índice proliferativo foi avaliada utilizando Ki-67 contagens de células positivas por 10 campos de alta potência (Ki-67 índice de marcação (LI)). cortes de tecidos manchados foram marcados e examinados sem o conhecimento dos dados clínico-patológicos ou resultado paciente.

A análise estatística

Os dados categóricos e expressão RECQL1 foi examinado pelo Χ

2 de teste. expressões Ki-67 LI e RECQL1 foram examinadas por Wilcoxon teste da soma de classificação. Grau histológico e expressão RECQL1 foram avaliadas pelo teste exato de tendência de Cochran-Armitage. modelo proporcional de Cox em uma regressão logística condicional foi realizada utilizando estágio FIGO e expressão RECQL1. teste de log-rank com o modelo de Kaplan-Meier foi utilizado para comparar populações de sobrevivência entre as expressões RECQL1. Todos os testes foram de 2 lados e um

valor P

de 0,05 foi considerado estatisticamente significativo. As análises estatísticas foram realizadas utilizando Software Análise Estatística (SAS) versão 9.2 (SAS Institute, Cary, NC).

Células e condições de cultura

Neste estudo, foram utilizados 10 linhas de células humanas OC ( A tabela 1) OVCAR-3, OVCAR-5 e SK-OV-3, TOV-21G, TOV-112D e ARPE-19 foram obtidas de ATCC (Manassas, VA, EUA). TIG-3 e MCAS foram obtidos a partir de Ciências da Saúde Banco de Recursos (Osaka, Japão). KOC-2S, KOC-3S, KOC-5C e -7C foram estabelecidos em Kurume University School of Medicine [12]. As células foram cultivadas em meio de Eagle ou RPMI-1640 modificado por Dulbecco (Nacalai Tesque, Kyoto, Japão) e foram incubados a 37 ° C numa câmara humidificada suplementada com 5% de CO

2.

Linha celular

tipo de célula

site de estabelecimento

OVCAR-3Serous adenocarcinomaATCC * celular adenocarcinomaATCCKOC-2SSerous adenocarcinomaKurume universityKOC-3SSerous adenocarcinomaKurume universityKOC-5CClear OVCAR-5Serous celular adenocarcinomaKurume universityKOC-7CClear celular adenocarcinomaKurume universitySK-OV-3Clear celular adenocarcinomaATCCTOV-21GClear adenocarcinomaATCCTOV-112DEndometrioid adenocarcinomaATCCMCASMucinous adenocarcinomaHealth Ciência Resource Bank ** celular APRE-19Normal para controle † celular ATCCTIG-3Normal para o controle ‡ Ciências da Saúde Resource BankTable 1. Tipos de linhas celulares e Sites de estabelecimento.

CSV Baixar CSV

Immunoblotting

os níveis de proteína de RECQL1 e outras proteínas que participam no sistema de reparação de danos no DNA celular foram monitorizados utilizando imunotransferência. As células foram lavadas com fosfato arrefecida com gelo de solução salina tamponada (PBS), sedimentadas por centrifugação e depois lisadas num tampão de sulfato de dodecilo de sódio (SDS) contendo 1% de SDS, 2% β-mercaptoetanol, 20% de glicerol, 30 mM Tris-HCl (pH 6,8) e 0,2 M de ditiotreitol. O lisado celular foi fervida durante 10 min e, em seguida, foi sujeito a electroforese em géis de gradiente de 5-20% de SDS-poliacrilamida. Proteínas fraccionadas em géis foram transferidas electroforeticamente para membranas de difluoreto de polivinilideno (Immobilon, Millipore, MA, EUA) e foram bloqueadas durante a noite com 5% de leite desnatado em PBS. As membranas foram então incubadas com anti-anticorpo monoclonal RECQL1 Q1N3 (Cell Signaling Technology, Tóquio, Japão) ou anti-actina β anticorpo monoclonal (ICN Biomedicals, Aurora, OH, EUA) durante 60 min à temperatura ambiente. As membranas foram lavadas com 0,05% de Tween-20 em PBS, incubadas com IgG anti-ratinho conjugado com peroxidase de rábano (DakoCytomation, Carpinteria, CA, EUA) e lavou-se. As membranas foram posteriormente desenvolvido utilizando um reagente de quimioluminescência aumentada (ECL Além disso, Amersham Biosciences, UK).

siRNA e RNA de interferência

siRNAs (21 pb) visando mRNA RECQL1 (RECQL1-siRNA) e negativo ARNsi de controlo (NS-siARN) foram sintetizados quimicamente (GeneDesign, Inc., Osaka, Japão). Todas as sequências de siRNA tinha um saliente 3′-dTdT na extremidade 3 ‘[11]. silenciamento de genes específicos de sequência foi confirmada utilizando a análise de cDNA microarray com o sistema Affymetrix GeneChip (Human Genome U133 mais 2,0 Array). Para a transfecção, decorridas 24 horas após o plaqueamento, as células foram incubadas com 30 nM de ARNsi duplex, durante 4 h, na presença de RNAiMAX (Invitrogen, Carlsbad, CA, EUA), diluiu-se 2 vezes com o soro contendo meio fresco e foram cultivadas a 37 ° C por períodos indicados. O ARN total foi extraído a partir de células cultivadas em vários pontos de tempo, utilizando um Kit RNeasy Mini (Qiagen GmbH, Hilden, Alemanha) de acordo com o protocolo do fabricante após o tratamento os compostos químicos. análises de transcriptase reversa-PCR foram realizadas utilizando o Sistema de Detecção de Sequência ABI Prism 7000 com sondas TaqMan e iniciadores (ABI, Foster, CA, EUA). O gene β-actina foi utilizado como um padrão interno (TaqMan sonda ID; 431088E; ABI). A proliferação celular foi medida a 24, 48, 72, 96 e 120 horas por ensaio fluorescente usando celular Titer-Glo Luminescent (Promega, WI, EUA) de acordo com um protocolo. Como para análise do ciclo celular, as células foram transfectadas com ARNsi RECQL1 ou com NS-siARN sob as mesmas condições descritas anteriormente, e foram incubadas durante 72 horas a 37 ° C. As células e os restos celulares foram coletadas, lavadas com PBS e foram fixadas em metanol arrefecido com gelo durante 2 horas. Em seguida, as células foram tratadas com RNase A pancreática (Nippon Gene, Toyama, Japão), coradas com iodeto de propídio (Sigma, St. Louis, MO, EUA) durante 30 minites, e analisadas por citometria de fluxo. A fluorescência foi medida utilizando EPICS XL (Beckman Colter, Tóquio, Japão). Para cada amostra, foram analisadas 7000 eventos. Estas análises foram repetidas 3 vezes para cada linha de células. A fase do ciclo celular e a população de células são mostrados com a média ± SD valores em cada fluxo de perfil de citometria.

Resultados

Os achados clínicos e microscópicos

A faixa etária para pacientes com câncer de ovário foi 20-82 (média de 57,1) anos. Todos os 118 pacientes foram submetidos a histerectomia total, salpingo-ooforectomia bilateral, omentectomia e nó dissecção linfática ou amostragem. espécimes cirurgicamente ressecados revelou que 50 pacientes foram adenocarcinoma seroso, 26 eram adenocarcinoma endometrioid, 21 foram adenocarcinoma de células claras, 15 eram adenocarcinoma mucinoso (invasão expansível e adenocarcinoma mucinoso invasivo), e 6 eram de outra histologia, incluindo 3 carcinoma de células escamosas, 2 mista carcinoma (carcinoma de células escamosas e adenocarcinoma seroso ou carcinoma de células escamosas e adenocarcinoma de células claras) e 1 carcinoma de células transicionais.

imunofenotipagem

resultados da imuno-histoquímica estavam disponíveis para 118 OCs cirurgicamente ressecados. expressão RECQL1 foi observada nos núcleos de células ° C até vários graus em 104 (90%) dos 118 espécimes OC (tipo serosa, 94%; Tipo de endometrióide, 89%; Tipo de células claras, 81%; Tipo de mucinoso, 87%; e outros, 100%). Com base na quantidade e intensidade, 55 casos foram considerados como (++), para o qual 30 casos (54,5%) eram do tipo seroso, 9 (16,3%) do tipo endometrioid, 9 (16,3%) do tipo células claras, 3 ( 5,4%) de mucinoso e 4 (7,2%) de outros (Figura 1). Sessenta e casos foram considerados como (+) e (-), para os quais 20 (31,7%) eram do tipo seroso, 17 (27,0%) de tipo endometrióide, 12 (19,0%) do tipo de células claras, 12 (17,5%) de mucinoso e 2 (1,6%) dos outros. RECQL1 – (++) expressão em tecidos ressecados cirurgicamente tem uma propensão para ser observado no tipo seroso, e menos frequentemente em endometrioid, tipos claras e mucinoso (p 0,03) (Tabela 2). Ki-67 O índice de marcação (LI) revelou o mais elevado potencial proliferativo no adenocarcinoma seroso, com uma média de 20,8% (endometrióide, 15,8%; células claras, 7,3%; e mucinoso, 9,4%). RECQL1 – (++) casos foram significativamente associados com alta Ki-67LI (p = 0,02) (Figura 2A)

(++) expressão em cânceres de ovário..

(A) adenocarcinoma seroso, (B) adenocarcinoma de células claras (C) adenocarcinoma endometrioid, (D) adenocarcinoma mucinoso e (E) estroma ovariano intactas como controle negativo. (inserção: hematoxilina e eosina)

marcados RECQL1Expression

(-) e (+)

(++)

ParametersHistological tipo

aserous type20 (31,7%) 30 (54,5%) endometrioid type17 (27,0% ) 9 (16,3%) TYPE12 de células claras (19,0%) 9 (16,3%) TYPE12 mucinoso (17,5%) 3 (5,4%) outros2 (1,6%) 4 (7,2%) estágio FIGO

soprador (fase I e II) 60 (50,8%) 45 (38,1%) estágio avançado (estágio III e IV) 3 (2,5%) 10 (8,5%) Tabela 2. Golos de expressão imuno-histoquímica RECQL1 e Relação com Tipo histológico e FIGO Stage.

CSV baixar CSV

(A) Correlação entre Ki-67 índice de marcação e casos RECQL1 (++). Fotomicrografia ilustra alta coloração Ki-67 no adenocarcinoma seroso. RECQL1 (++) casos foram significativamente associados com alta Ki-67LI (p = 0,02). (B) estimativa de Kaplan-Meier de sobrevivência entre RECQL1 (++) e (+), (-) casos. Através de análise de log-rank, não houve significância entre a expressão RECQL1 e sobrevida global (p = 0,72).

A inclusão de fatores clínicos

A Cox modelo de risco confirmou que difusa e forte coloração de RECQL1 (HR 2.3) foi correlacionada com o tipo histológico, alta Ki-67 LI e avançado estágio FIGO, embora estágio FIGO perdeu o seu valor preditivo quando ajustado por tipo histológico (Tabela 2). Através de análise de log-rank, não houve associação significativa entre a expressão RECQL1 e sobrevida global (p = 0,72) (Figura 2B).

níveis de expressão RECQL1 em ​​linhas celulares OC

Como uma quantidade maior de RECQL1 imunorreatividade foi observada nas amostras OC cirurgicamente ressecados, investigamos a expressão RECQL1 utilizando várias linhas celulares OC. Como controlos, células normais ARPE-19 e TIG-3 foram caracterizados de modo semelhante. A maioria, se não todas, as células de cancro examinados até agora mostraram um nível mais elevado de proteína helicase RECQL1 expressão em comparação com as células normais (Figura 3A). RECQL1 expressão foi encontrado para ser excepcionalmente elevada nas linhas de células de crescimento rápido, tais como KOC-2S, 3S, KOC-OVCAR-3, OVCAR-5, KOC-7C, SK-OV-3 e linhas de células TOV-112D. Curiosamente, TOV-21G e MCAS mostrou uma expressão de baixo semelhante para a linha celular TIG-3 normal.

os níveis de (A) RECQL1 expressão em linhas de células de dez OC. expressão RECQL1 foi encontrado para ser excepcionalmente elevada em KOC-2S, KOC-3S, OVCAR-3, OVCAR-5, KOC-7C, SK-OV-3 e linhas de células de cancro do ovário tov-112D, em comparação com as duas linhas de células normais (ARPE-19 e TIG-3). (B) O efeito de silenciamento RECQL1 sobre o crescimento da linha celular OC por análise de tempo-curso. Um total de dez linhas celulares OC foram transfectadas quer com RECQL1-siARN (círculo sólido) ou NS-siARN (triângulo) por um período de 120 horas, tal como descrito nos Materiais e Métodos. A viabilidade celular diminuiu com o tempo após o tratamento de siARN. RECQL1 siRNA inibiu significativamente a proliferação de uma grande variedade de linhas celulares de CO de acordo com a redução do ARNm de RECQL1 (mostrados como histogramas). Durante o tempo de curso, RECQL1 expressão de ARNm foi reduzida diferencialmente, dependendo da linha celular. Os dados representam as médias ± DP, n = 3 (C) O efeito de silenciamento RECQL1 sobre o ciclo celular da linha celular de CO medido por análise de citometria de fluxo. As linhas celulares foram transfectadas com NS-siARN (painéis superiores) ou RECQL1-siARN (painéis inferiores) durante 72 horas. A percentagem de populações de células no subG1, G1 /S e G2 /M fases são apresentados como média ± SD em cada fluxo de perfil de citometria.

A inibição da proliferação de células OC por RECQL1 silenciamento

por immunoblotting, todas as linhas de células de dez OC foram encontrados para expressar maior quantidade de proteína helicase RECQL1 que as células normais. Com base nestes resultados, nós investigamos o efeito de silenciamento RECQL1 sobre o crescimento de várias linhas de células OC por uma análise de tempo-curso. As linhas celulares de 10 ° C e a 2 linhas de células normais foram transfectadas quer com RECQL1-siRNA ou com NS-siRNA (triângulo) para 120 horas. Tal como mostrado na Figura 3B, RECQL1-siARN (círculo sólido) inibiu significativamente a proliferação de uma grande variedade de linhas celulares de CO de acordo com a redução do ARNm de RECQL1 (mostrados como histogramas), ao mesmo tempo que não teve nenhum efeito sobre o crescimento dos dois linhas normais de células (dados não apresentados neste documento) [10]. A viabilidade celular, como o crescimento relativo em comparação com a de células não-tratadas, decresceu com o tempo após o tratamento com siARN. Durante o tempo de curso 24-120 horas, expressões ARNm RECQL1 foram reduzidos diferencialmente dependendo da linha celular. Curiosamente, o nível de ARNm RECQL1 aumentou para o final do tempo-curso para algumas das linhas celulares, embora este aumento nunca foi superior a 40% da expressão original.

No que diz respeito ao mecanismo subjacente à reduziu a viabilidade das células, investigou-se a funcionalidade de ciclo celular de várias células tratadas RECQL1 OC-siRNA. As células tratadas com siRNA (pós-transfecção de 72 horas) foram isoladas a partir da cultura e foram submetidas à análise do ciclo celular. Como mostrado na Figura 3C, as populações de células de todas as células OC-tratados RECQL1 siRNA continha uma fracção distinta célula subG1 de células mortas, e uma acumulação de células na difusa G1 /S e G2 /fases M, mostrando uma mitótico característica de morte celular que ocorrem durante o ciclo de célula (painéis inferiores). Em algumas células de OC-tratados RECQL1 siRNA, o aumento das populações de G1 e G2 /M, fases células indicativo de uma paragem do ciclo celular devido a danos do ADN sistema de ponto de verificação. Por contraste, não existem tais características anormais são observados com as células OC cognatos tratados com o siRNA não-silenciamento usado para as experiências de controlo (painéis superiores). Assim, a inibição do crescimento de células cancerosas aparente (visto na Figura 3B) não é devido ao retardamento do crescimento celular, mas é devido a morte de células viáveis ​​OC e redução do número de células causados ​​por morte celular mitótico.

discussão

para ambos adenocarcinoma seroso e endometrioid, terapia de combinação com carboplatina e paclitaxel é uma estratégia eficaz e dá origem a um excelente resultado terapêutico, mesmo se o câncer for encontrado em um estágio avançado. Em contraste, não existe qualquer regime curativa contra COs resistente a platina, como o adenocarcinoma de células claras e adenocarcinoma mucinoso, ou o OCS recorrentes de um tipo refractário. adenocarcinoma de células claras e mostrar adenocarcinoma mucinoso comportamento indolente quando eles estão confinados ao ovário e muitas vezes são diagnosticados numa fase inicial, o que confere um melhor prognóstico para o paciente. No entanto, uma vez que a doença estende-se para o espaço extra-ovarianos, as suas taxas de cura são muito mais baixos do que a de adenocarcinoma seroso e adenocarcinoma endometrióide [13,14]. agentes de platina como um regime terapêutico padrão incluem carboplatina, o que tem como alvo a síntese de ADN em fase S e induz a apoptose. O paclitaxel, por comparação, interfere com a síntese de tubulina de contribuir para a paragem do ciclo celular. Por esta razão, estes agentes quimioterapêuticos funcionar de forma mais eficaz em tumores ativos, proliferativa, enquanto de crescimento lento, Ki-67 baixas tumores Li, tais como adenocarcinoma de células claras e adenocarcinoma mucinoso, não respondem bem, e o tratamento com essas terapias podem resultar em hiposensibilidade

até agora, vários estudos para identificar quimioterápico alternativo ou agentes moleculares-alvo foram feitas contra OCs resistente à platina.; no entanto, um consenso geral sobre a terapia de primeira linha mais ideal ainda não foi alcançado [15-20]. Além disso, os estudos mostram que um número considerável de pacientes com recidiva para carcinomas que foram originalmente sensível à platina, tais como adenocarcinoma seroso e adenocarcinoma endometrióide, acabar com carcinomas resistente a platina.

Tem sido relatado que a expressão RECQL1 é observada no fígado, colo-rectal, cancro do pulmão, glioblastoma e cancro da cabeça e pescoço [7,21]. Neste estudo, usando espécimes OC cirurgicamente ressecado, observou-se expressão RECQL1 nuclear em 90% dos 4 subtipos principais de OC (serosa, endometrióides, células claras e tipo mucinoso), com elevada (++) expressão visto em 54,5% dos casos . Uma comparação entre a expressão RECQL1 e Ki-67 LI indica que RECQL1 (++) grupo foi associado com alta Ki-67LI (p = 0,02); Assim, RECQL1 pode ser um marcador molecular proliferativa útil. Nós relatado anteriormente que RECQL1 positividade em carcinoma hepatocelular foi correlacionada com grau histológico e Ki-67 LI [10]. Assim, a expressão RECQL1 pode sugerir ser fortemente correlacionada com a progressão do tumor e diferenciação. Em termos de progressão do tumor, expressão RECQL1 foi significativamente associada com a distribuição estágio FIGO (p = 0,01), embora tenha perdido o seu valor quando ajustado para o tipo histológico. Portanto, enquanto que a expressão RECQL1 pode actuar como um parâmetro proliferativa, que não conseguiu provar associações entre RECQL1 e FIGO fase e sobrevivência global. Especula-se que este pode ser por isso que o tamanho da doença residual correlaciona claramente com a sobrevivência em pacientes com um tumor fase avançada [22].

No nosso

em

análise vitro, foi investigada a efeito anticancerígeno potencial da RECQL1-silenciamento em linhas celulares que são representativos da serosa, endometrioid, de células claras, e adenocarcinomas mucinosos. A maioria, se não todas, as células de cancro examinados até agora mostraram níveis de expressão mais elevados de proteína helicase RECQL1 em ​​comparação com as células normais. Considerando-se que RECQL1 é altamente regulado para cima em células que crescem rapidamente, incluindo vários tipos de câncer e células transformadas [4-6,8], de células claras e adenocarcinoma mucinoso que são conhecidos por relativamente lento OC crescimento, mostrou menor expressão RECQL1 pode ser razoável. Em tais células cancerosas de crescimento lento, a quantidade de enzimas de reparo de DNA incluindo RECQL1 helicase pode ser poupado, talvez porque o tempo suficiente proporcionada pelo crescimento lento, em vez ajuda a cumprir todas as tarefas necessárias exigidas no reparo do DNA.

Anteriormente, mostrou efeito antiproliferativo por RECQL1 siRNA em várias linhas celulares de cancro [10,21]. Isto é resultado de um aumento da acumulação de danos no DNA em células cancerosas causadas por RECQL1 silenciamento levou a uma detenção fase M e morte celular por causa dos sistemas de ponto de verificação incompletos, que indicativa de uma catástrofe mitótica [10,21]. Por outro lado, as linhas celulares normais, incluindo TIG-3 e APRE-19, mostraram a tolerância para a catástrofe mitótica por RECQL1 silenciamento [10,21]. principal diferença entre células normais e células cancerosas seria explicado pela habilidade no controle do ciclo celular. A maioria das células cancerosas são deficientes em G1 e G2 função de ponto de verificação e, assim, deixar de deter o ciclo celular nas fases G1 e G2 para permitir a célula a se envolver no reparo do DNA. Em vez disso, as células de proceder no ciclo celular para a fase M, onde a reparação do ADN não é permitida. Assim, as células sofrem morte celular, eventualmente, à medida que entram mitose [23-25]. Em contraste, os sistemas de ponto de verificação em células normais permanece intacta, o que resultando na paragem do ciclo celular transiente até que o problema é resolvido de ADN através do recrutamento de um sistema de reparação adequado [21]. Em outras palavras, pode ser considerado como células normais são resistentes a RECQL1 silenciamento, enquanto que as células cancerosas são defeituosos ponto de verificação não.

Neste estudo, também mostraram RECQL1 siRNA silenciamento morte celular induzida e a proliferação celular inibida em linhas celulares de OC. Nossos dados anteriores apoiariam que a diminuição da viabilidade celular OC foi também resultou da catástrofe mitótico por RECQL1-siRNA silenciamento. Mais ou menos, observou-se expressão RECQL1 para todos os subtipos histológicos de CO, o que pode sugerir uma eficácia de RECQL1 siRNA em cancros resistente a platina, como o adenocarcinoma de células claras, adenocarcinoma mucinoso e alguns dos cancros recorrentes com tipo resistente a platina.

observou-se um efeito anti-cancro sinérgico quando RECQL1-siARN foi administrada localmente em ratinhos com tumores da cabeça e pescoço em conjunto com uma injecção intravenosa de um derivado de cis-platina [14]. Os resultados sugerem o envolvimento potencial de helicase de ADN RECQL1 na redução de danos no ADN induzida por cis-platina. Em relação à aplicação terapêutica de ARNsi contra tumores malignos, vários investigadores relataram a eficácia de uma combinação de outros agentes quimioterapêuticos, tais como gemcitabina [26], camptotecina [27] e a adriamicina [28]. Os resultados destes estudos indicaram que uma terapia combinatória tal poderia reduzir os efeitos adversos dos agentes quimioterapêuticos, enquanto que o aumento da sensibilidade das células cancerosas. Comparativamente, muitos outros agentes quimioterapêuticos tendem a danificar o tecido não canceroso. Por exemplo, supressão da medula óssea, doença do nervo periférico, cardiotoxicidade e nefrotoxicidade são muitas vezes induzidas.

Recentemente, a expressão do gene heterogêneo em tecidos de câncer foi relatado através de estudos sobre os espécimes de tumor por biópsia renal consecutivos [29]. Mesmo na mesma amostra de tumor, diferentes assinaturas de expressão de genes foram detectados por diferentes áreas de amostra e primário contra metástases [29]. Até agora, numerosas alvos moleculares foram identificadas para o desenvolvimento de drogas anti-cancro. Do ponto de vista de mutações ou expressões diferenciais de genes durante o desenvolvimento do câncer, é imperativo que o gene mais indispensável necessário para o crescimento do câncer é alvo. Em comparação com outras terapias alvo molecular, RECQL1-siRNA tem como alvo apenas a reparação do ADN, e age independentemente de qualquer mutação genética ou expressão mudança assinatura específica para o câncer. Acreditamos que RECQL1 é um dos poucos genes alvos candidato que não afectam as populações de células normais.

Em conclusão, RECQL1 deve ser considerado como um novo marcador proliferativa. Além disso, RECQL1-siARN podem ter o potencial de ser aplicado como um novo método terapêutico contra OC de várias características histológicas e clínicas, incluindo aquelas de um subtipo resistente a platina.