Abstract
Fundo
A expressão do RNA- a ligação às proteínas motivo 3 (RBM3) foi mostrado para correlacionar com os parâmetros clínico favoráveis e prognóstico em várias doenças cancerosas. O objetivo deste estudo foi examinar a capacidade de expressão e prognóstico da RBM3 em pacientes com tumores de células germinativas testiculares não seminomatosas (NSGCT).
Pacientes e Métodos
expressão RBM3 imunohistoquímica foi analisada em microarrays de tecido com tumores de 206 pacientes. teste do qui-quadrado foi aplicado para analisar a associação entre a expressão RBM3 e os parâmetros clínico. A análise de Kaplan-Meier foi utilizado para avaliar o impacto de expressão RBM3 na sobrevivência específico do cancro (CSS) e sobrevida livre de falha (FFS). regressão Cox modelos de riscos proporcionais foram usadas para estimar o risco relativo para o fracasso.
Resultados
Em toda a coorte, houve uma associação significativa entre o estadiamento clínico (
p = 0
.
044
) e expressão RBM3. expressão RBM3 fraca correlação com a FFS significativamente reduzidos [79,3% contra 90,4% (
p = 0
.
019
)] e CSS [87,5% versus 97,3% (
p = 0
.
047
)]. Para os pacientes com doença metastática (
n = 88
), foram encontradas associações significativas entre a expressão RBM3 eo grupo IGCCC (
p = 0
.
007
). O FFS foi significativamente inferior para pacientes com baixa expressão RBM3 específicos do tumor [59,3% versus 79,0% (
p = 0
.
013
)], e essa associação permaneceu significativa no modelo multivariável para pacientes com doença metastática (HR = 3,67; IC 95% 1,14, 11,89).
Conclusão
expressão Baixa RBM3 é um preditor independente de falha do tratamento em NSGCT metastático, em relação ao prognóstico fatores incluídos no Cell International Germ Consenso Classificação (IGCCC). Estes achados sugerem que RBM3 pode ser um potencial biomarcador para estratificação de tratamento em pacientes com tumores de células germinativas não-seminomatosas metastáticos, e, portanto, merecem uma validação adicional
Citation:. Olofsson SE, Nodin B, Gaber A, Eberhard J, Uhlen M, Jirström K, et al. (2015) Baixo RBM3 Protein Expression correlaciona-se com o estágio clínico prognóstico Classificação e aumento do risco de Tratamento Falha no testicular não-seminomatosas Cancer Germ Cell. PLoS ONE 10 (3): e0121300. doi: 10.1371 /journal.pone.0121300
Editor do Academic: Yuan-Soon Ho, Taipei Medical University, TAIWAN
Recebido: 04 de dezembro de 2014; Aceito: 29 de janeiro de 2015; Publicação: 26 de março de 2015
Direitos de autor: © 2015 Olofsson et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados
Disponibilidade de dados: Todos os dados relevantes estão dentro do papel e seus arquivos de suporte de informação
Financiamento:. Este trabalho foi apoiado pela Landstinget Kronoberg para SEO, o Knut e Alice Wallenberg Foundation para KJ, e da Universidade Faculdade de Medicina Lund e Hospital Universitário Bolsas de investigação a MJ. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito
Conflito de interesses:. JE e KJ são co-inventores de duas patentes relacionadas ao uso de RBM3 como biomarcador de prognóstico no câncer testicular: 1) proteína RBM3 em diagnósticos de cancro testicular e prognósticos patente da UE não. (EP) 2.396.659, validado na Dinamarca, França, Irlanda, Nederlands, Schweiz, Grã-Bretanha, Suécia e Alemanha. Patente Austrália não. (AU) 2010212769. Há patentes pendentes no Japão (2011-549603), Canadá (2749349) e EUA (13/210809). 2) Previsão de resposta à terapia baseada em platina. Patente da UE não. (EP) 2.396.660, validado na Dinamarca, França, Irlanda, Nederlands, Schweiz, Grã-Bretanha, Suécia e Alemanha. Patente Austrália não. (UA) 2010212772, EUA patente n. (US) 8.747.910. Há patentes pendentes no Brasil (PI1008875-0), Hong Kong (12.107.047,4), Japão (2011-549604), Canadá (2.749.350) e China (201080007960,0). Isto não altera a adesão dos autores para todos os PLoS ONE políticas sobre a partilha de dados e material. Os demais autores declararam que não existem interesses conflitantes.
Introdução
Desde a introdução da cisplatina para o tratamento de câncer testicular (CT), mais de 95% dos pacientes são curados. Para pacientes sem qualquer evidência de doença metastática, ou seja, estágio clínico I (CS I), a sobrevivência se aproxima de 100% [1, 2]. O Cell International Germ Consenso Classificação (IGCCC) para tumores de células germinativas não-seminomatosas (NSGCT) [3] é usado para classificar os pacientes com doença metastática em três grupos com bom, intermediário ou mau prognóstico, com base em parâmetros clínicos presentes antes da terapia ( Tabela S1). Em uma meta-análise, realizada em 2005, sobrevida de 5 anos estimativas de pacientes com bom prognóstico foram de 94%, prognóstico intermediário 83% e 71% no grupo de mau prognóstico [4]. A maioria dos pacientes são jovens de diagnóstico e, portanto, é importante para evitar a morbidade a longo prazo que podem resultar do tratamento TC. Por isso, embora alguns fatores clinicopatológicos provaram ser de valor para orientar o tratamento, há uma clara necessidade de marcadores prognósticos adicionais para melhor discriminar entre pacientes de alto risco e de baixo risco de doença [5]. Em EC I pacientes, os fatores de risco para doença metastática oculta são vascular linfática invasão, índice 70% e mais de 50% carcinoma embrionário [6]. Avaliação imunohistoquímica de proliferação do tumor utilizando MIB-1 (receptor de Ki-67) pode ser utilizado para identificar pacientes em CS I com baixo risco de recaída. O anticorpo MIB-1 também pode ser utilizado no diagnóstico de NSGCT [6].
Baixa expressão de proteína de ligação de ARN motivo 3 (RBM3) tem sido demonstrada estar correlacionada com um prognóstico pior em várias formas de cancro principais, por exemplo mama, ovário, próstata, colo-rectal, cancro da bexiga e melanoma maligno [7-12]. RBM3 expressão também tem sido demonstrada estar correlacionada com a sensibilidade à quimioterapia à base de platina em cancro do ovário in vivo e in vitro [8, 13]. Em gónadas, RBM3 foi encontrado para ser expresso em células de Sertoli, mas não células germinativas, de túbulos seminíferos [14]. O objetivo do presente estudo foi examinar a expressão e significado prognóstico da RBM3 em NSGCT. Neste trabalho, nós não examinou o impacto de diagnóstico de expressão RBM3.
Materiais e Métodos
Os pacientes
Todos os pacientes adultos com diagnóstico de NSGCT testicular na Região de Saúde Sul da Suécia entre 01 de julho de 1995 e 31 de dezembro de 2007, nos quais dados clínicos estavam disponíveis, foram incluídos neste estudo. O status de sobrevivência de todos os pacientes foi verificada em relação ao registo nacional da população em 2012. Os pacientes foram tratados de acordo com o SWENOTECA protocolos (sueco-norueguês Grupo câncer testicular) IV (doença metastática) e SWENOTECA III e VI (doença não-metastático) [ ,,,0],15]. O banco de dados SWENOTECA contém informações detalhadas sobre o estágio do tumor, classificação de prognóstico, tratamento, curto, bem como de longo prazo toxicidade do tratamento e os dados de seguimento 10 anos após o diagnóstico.
Declaração de Ética
Todos UE e regulamentos e exigências para a manipulação de amostras humanas foram integralmente cumpridas durante a realização deste projecto nacionais; ou seja, a Decisão n. 1110/94 /CE do Parlamento Europeu e do Conselho (OJL126 18,5,94), a Declaração de Helsinki em princípios éticos para a investigação médica envolvendo seres humanos, ea Convenção do Conselho da UE sobre Direitos Humanos e Biomedicina. O estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética da Universidade de Lund (ref nr 386/99), segundo o qual a comissão dispensou a necessidade de consentimento de forma diferente da opção de opt-out.
Materiais
os doentes foram identificados na base de dados SWENOTECA e as corrediças correspondentes e os blocos de tecido embebidos em parafina e fixados com formalina foram obtidos dos arquivos de patologia. Antes da construção micro array (TMA) de tecido, tudo hematoxilina disponível e eosina lâminas coradas de cada caso foram reavaliados por um patologista especialista (KJ). O número total de subtipos histológicos, bem como as suas proporções estimada foi denotado. Independentemente do número de componentes histológicos, um conjunto padrão de núcleos 4x1mm foram tomadas a partir de cada tumor invasivo de uma forma proporcional, cobrindo até 3 componentes diferentes. Além disso, 2×1 núcleos mm foram amostradas em áreas com neoplasia de células germinativas intratubular (ITGCN) a partir de 127 casos e adjacente, testículos de aparência inócua de 49 casos. Um dispositivo arraying semi-automático foi usado (TMArrayer; Patologia Devices, Inc, de Westminster, MD, EUA). Para análise imuno-histoquímica de RBM3, 4 uM TMA-secções foram automaticamente pré-tratada (desparafinização, reidratação e recuperação de epítopo) usando o sistema de PT-Link (Dako, Copenhaga, Dinamarca) e, em seguida, corado numa Techmate 500 (Dako, Copenhaga, Dinamarca ) com o anticorpo monoclonal RBM3 rato, CL0296 clone, produto ID AMAb90655, Atlas Anticorpos AB, Estocolmo, Suécia (antigamente conhecido como AAb030038, Atlas Antibodies, Estocolmo, Suécia) diluído 1: 5000. O anticorpo foi validado em estudos anteriores [8, 10]. Para a avaliação da expressão RBM3 nuclear, tanto a fracção de células positivas e intensidade de coloração foram tidos em conta para cada núcleo tecido, utilizando um sistema de pontuação semiquantitativo, pelo que a percentagem estimada de células com expressão RBM3 nuclear foi registada como fracção nuclear (NF) e classificados em quatro grupos, ou seja, 0 (0-1%), 1 (2-25%), 2 (26-50%), 3 (51-75%), 4 ( 75%) e a intensidade da coloração nuclear ( NI) denotado como 0 = negativo, 1 = ligeira, 2 = médio e 3 = forte intensidade. Uma pontuação combinada nuclear (NS) de NFxNI, que tinha um intervalo de 0 a 12, foi então calculado. intensidade de coloração citoplasmática foi denotada como 0 = negativo, 1 = ligeiro 2 = moderado e forte, e a fracção de células positivas não tido em conta. A coloração foi avaliada por dois observadores independentes (KJ, SEO), que foram cegos aos dados clínicos e resultados.
Endpoints e métodos estatísticos
expressão RBM3 (intensidade × fração) foi dicotomizada em fraca vs análise forte utilizando a classificação e regressão árvore (CRT) [16]. testes de qui-quadrado e Mann-Whitney U foram utilizados para comparação entre as características clínicas e expressão RBM3. falha do tratamento foi definida como recidiva após o tratamento para a doença metastática, a recaída para os pacientes em CS I submetidos a quimioterapia adjuvante, encontrando de câncer ativo no momento da cirurgia pós quimioterapia ou morte por NSGCT. Um tumor contralateral não foi considerado uma recaída. sobrevida livre de falha (FFS) foi definido como o tempo de orquiectomia ao insucesso do tratamento ou de outra forma censurados na última follow-up (FU) ou morte por outras causas. A sobrevida global (OS) foi definido como o tempo de orquiectomia à morte por qualquer causa ou de outra forma censurados na FU passado. sobrevida específica do câncer (CSS) foi definido como o tempo de orquiectomia à morte de NSGCT ou tratamento ou de outra forma censurados na última FU ou morte por outras causas. Tempo para a recaída foi definida, para os pacientes livres da doença, como o tempo de final do tratamento de recaída e censurada em última FU ou morte por outras causas. As curvas de sobrevida e de incidência cumulativa para os parâmetros acima foram estimadas pelo método de Kaplan-Meier e testes de log-rank foram utilizados para comparações. regressão Cox modelos de riscos proporcionais foram usadas para estimar o risco relativo para o fracasso em ambas as análises uni e multivariada. Um valor p de 0,05 foi considerado significativo e todos os testes foram em frente e verso. Todas as análises estatísticas foram realizadas utilizando o IBM SPSS Statistics versão 20.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, EUA).
Resultados
As características dos pacientes
Entre 1º de julho de 1995, e 31 de dezembro de 2007 um número total de 300 pacientes adultos foram diagnosticados com NSGCT testicular na Região de Saúde Sul da Suécia. Em 219 pacientes, os dados clínicos estavam disponíveis no banco de dados SWENOTECA no momento da extracção de dados
Treze (6%) casos foram excluídos do estudo.; quatro pacientes que iniciaram a quimioterapia antes da orquiectomia, três casos com falta blocos de tecido e seis casos com uma quantidade insuficiente de tecido disponível para análise. Dos 206 pacientes incluídos, 118 (57%) tinha estágio clínico 1 da doença (CSI) e 88 (43%) a doença metastática. As características dos pacientes, dados relacionados com a terapia, e os dados de sobrevivência são apresentados na Tabela 1. Em pacientes com doença metastática no momento do diagnóstico (CSII-IV e só (Mk +) marcador elevada), 73% foram classificados como tendo bom prognóstico, prognóstico intermediário 15% e 12% de acordo com o mau prognóstico IGCCC. A FU mediana para doentes sobreviventes (
n = 193
) foi de 76 meses (intervalo de 3-167). O OS 5 anos foi de 96,0% para todos os pacientes. Treze pacientes morreram durante o acompanhamento, seis devido a uma doença progressiva e dois devido ao tratamento. Cinco pacientes morreram de outras causas, sem evidências de NSGCT. Havia 14 recaídas, seis em pacientes com doença metastática em remissão completa após a quimioterapia e cirurgia (
n =
61, 69%) e oito em pacientes com doença CS I das quais três após a quimioterapia adjuvante. Vinte pacientes com CS doença que eu tinha falha do tratamento, 14 com câncer vital na amostra após a cirurgia, cinco recaídas e um morreu devido à progressão da doença. Três pacientes com doença CS eu tive uma recaída após o tratamento adjuvante dos quais um morreu mais tarde no cancro testicular.
expressão RBM3
imagens de imuno-histoquímica de amostra são mostrados na figura 1.
Caso 1-coluna 1: testículo atrófica; coluna 2-4: carcinoma embrionário com expressão RBM3 negativo (nota linfócitos do estroma positivas). Caso 2 colunas 1: intratubular neoplasia de células germinativas (ITGCN); coluna 2-4: carcinoma embrionário com 10% seminoma (coluna 2) com melhor pontuação 12 e pior pontuação 2. Caso 3-coluna 1 testículo normal; coluna 2-4: tumor com componentes de carcinoma embrionário, teratoma imaturo e tumor do saco vitelino com melhor pontuação 12 e Pior pontuação 8. Caso 4-coluna 1 testículo normal; coluna 2-4: tumor com histologia predominante seminomatoso (~ 80%) misturado com teratoma (não representados no TMA), melhor marcar 12 e pior pontuação 8.
Em testículo normal, RBM3 foi expressa no fraco para intensidade em espermatogônias e negativo em espermatócitos moderada. Em neoplasia de células germinativas intratubular (ITGCN), RBM3 foi expressa com forte intensidade, na grande maioria das células neoplásicas. Em tumor de células germinativas testiculares (TGCT), RBM3 foi expressa em várias fracções e intensidades, principalmente no núcleo, mas também no citoplasma, com uma expressão particularmente forte em componentes seminomatosas.
A distribuição da expressão para o RBM3 Quer dizer, a maior ea menor pontuação é mostrada na Figura 2. Houve uma diferença significativa na pontuação média de expressão RBM3 entre tumores de pacientes em CS I e CS II-IV, Mk + em todas as três categorias (Fig 2D-2F). A pontuação mais baixa mostrou a melhor correlação com os parâmetros clínico (dados não mostrados), e, por conseguinte, tem sido usado na seguinte análise CRT análises estatísticas sugeriu um ponto de corte na NS 0,5 para determinar o impacto prognóstico ideal de expressão RBM3 em FFS e NS 2,5 para CSS (S1 Fig). baixa expressão RBM3 foi associado com um FFS significativamente piores [79,3% contra 90,4% (
p = 0
.
019
)] (Fig 3C e S2 Table) e CSS [87,5% versus 97,3 % (
p = 0
.
047
)] (S2 Tabela). Em toda a coorte, baixa expressão RBM3 (NS = 0,5) foi observada em 16 (7,8%) casos e houve uma associação significativa entre o estadiamento clínico (
p = 0
044
) e expressão RBM3 (Tabela 2). Não foram encontradas associações significativas entre a idade, CS I vs CS I e expressão RBM3. expressão RBM3 citoplasmática não foi associada a quaisquer fatores clínico-patológicos.
(A) média do escore, (B) maior pontuação e (C) pontuação mais baixa. distribuição de coloração de acordo com a CS RBM3 I e CS 1 em (D) média do escore, (E) maior pontuação e (F) pontuação mais baixa. Boxplots mostra as cinco estatísticas (mínimo, primeiro quartil, mediana, terceiro quartil e máximos). P-valores referem-se ao teste de Mann Whitney para comparação das medianas.
(A) 118 pacientes com estágio clínico 1, (B) 88 pacientes com doença metastática e (C) 206 pacientes com estágio clínico I a IV e Mk +.
estágio clínico I
para os pacientes em CSI não houve associações significativas entre a expressão RBM3 e resultados (Fig 3A e S2 tabela).
Clinical estágio II-IV, Mk +
Houve uma associação significativa entre a expressão RBM3 e IGCCC (
p = 0
.
007
), combinado estatuto de marcador tumoral (
p = 0
.
001
), e com o nível de β-gonadotrofina coriônica humana (HCG) (
p = 0
.
010
) (Tabela 2), mas não com os níveis de α-fetoproteína (AFP) (
p = 0
.
127
), lactato desidrogenase (LDH) (
P = 0
.
088
) ou a presença de metástase visceral não-pulmonar (NPVM) (
p = 0
.
148
). O FFS foi significativamente inferior para os casos com baixa expressão RBM3 específicos do tumor [59,3% versus 79,0% (
p = 0
.
013
)] (Fig 3B e S2 Tabela). Em relação CSS, esta diferença não foi significativa [88,9% versus 93,6% (
p = 0
.
618
)] (S2 Tabela). Em um modelo de análise multivariada; incluindo o nível de marcador de tumor e a presença de NPVM ou não; essa elevação de risco permaneceu significativa (HR = 4,35; IC de 95% 1,28, 14,13), quando os marcadores tumorais foram analisados como variáveis contínuas (Tabela 3). No entanto, quando os marcadores tumorais foram classificados utilizando os pontos de corte na IGCCC, apenas o nível de AFP manteve-se como um marcador de prognóstico significativo. Quando combinado com grupos IGCCC em um modelo multivariado, expressão RBM3 não foi significativamente associada com maior risco de fracasso terapêutico (HR = 2,62; IC 95% 0,67, 10,31). (Tabela 4)
Discussão
Nossos resultados demonstram que a expressão RBM3 é regulada no carcinoma testicular in situ (CIS) em relação ao testículo normal e expresso em várias frações e intensidades em TGCT, com a mais alta expressão em componentes seminomatosas. Em pacientes com doença metastática, reduzida expressão RBM3 significativamente correlacionada com a ferramenta estabelecida prognóstico (IGCCC), estado marcador tumoral combinadas e nível β-HCG, bem como um tempo significativamente mais curto para o insucesso do tratamento. Além disso, em um modelo de regressão de Cox multivariada, incluindo os fatores prognósticos usados no modelo IGCCC, baixa expressão RBM3 foi um preditor independente para falha do tratamento, quando os marcadores tumorais (AFP, hCG e LDH) foram inseridos como variáveis contínuas. RBM3 foi demonstrado ser um biomarcador prognóstico em vários cancros, e.g. câncer urotelial [12], o cancro da mama [7], o cancro colorectal [10], o câncer de próstata [9], de esôfago e adenocarcinoma gástrico [18] e do ovário [8]. Além disso, a expressão RBM3 tem sido demonstrada estar correlacionada com a sensibilidade ao tratamento com cisplatina em cancro do ovário in vitro
[8]
. Na presente série, a baixa expressão de RBM3 foi um preditor de maior risco de fracasso do tratamento em pacientes com NSGCT metastático, e pode-se supor que RBM3 pode ser um preditor de sensibilidade ao tratamento com cisplatina também neste tipo de câncer. No entanto, se RBM3 só foi relacionado a sensibilidade cisplatina, seria de esperar um maior risco de recidiva em pacientes com CS1 e baixa RBM3, recebendo adjuvante BEP, o que não foi observado.
Um mecanismo de ação proposto para RBM3 é que ele pode promover tumorigênese em estágios iniciais de câncer, afetando DDR (DNA reparação de danos) e integridade posto de controle, diminuindo assim o limite para seleção de clones mais malignas [8, 13] e uma vez que um tumor invasivo é estabelecido, altos níveis de RBM3 pode influenciar a estabilidade genómica e, portanto, sensibilidade quimioterapia. Em outros tipos de tumores, expressão RBM3 foi encontrado para ser regulada positivamente em tecidos cancerosos e pré-invasivas [9, 19, 20]. No presente estudo, todas as amostras tomadas a partir de componentes in situ revelou expressão elevada RBM3. CIS tem mostrado ser altamente sensíveis à radioterapia, que oferece uma cura definitiva [5, 21, 22]. Uma hipótese possível é que na maioria dos tumores de células germinativas testiculares, o sistema DDR é virtualmente não activado e intacto e, assim, pode contribuir para a sensibilidade a agentes de quimioterapia, como a platina e a radioterapia. Ao longo desta linha, a expressão RBM3 verificou-se ser particularmente elevado em componentes de histologia seminomatoso, que estão entre as mais sensíveis à radioterapia [22]. No entanto, como expressão RBM3 correlacionados com o estágio do tumor e nível de HCG, RBM3 também pode estar relacionado com a inibição do crescimento do tumor e divulgação, através de mecanismos ainda desconhecidos. estudos funcionais adicionais são necessárias, e do ponto de vista clínico, seria interessante examinar expressão RBM3 nas metástases após a cirurgia pós-quimioterapia, onde uma baixa expressão RBM3 indicaria redução da sensibilidade a cisplatina.
O IGCCC discrimina entre o bem, pacientes prognóstico intermediário e pobres com câncer testicular metastático. Baseia-se no sítio primário, o nível de marcador de tumor e a presença de NPVM ou não. A utilização desta classificação é guiar decisões de tratamento para o paciente individual, com a intenção de optimizar a sobrevivência e minimizar a toxicidade. Frequentemente, intermediário e pobre em risco os pacientes são reunidas e tratadas com protocolos semelhantes [23, 24]. Por conseguinte, há uma clara necessidade de novos biomarcadores, para uma identificação mais precisa dos pacientes ganhando de tratamento intensivo mais adiantado, tais como intensificação da dose ou a quimioterapia de dose elevada (HDCT) com suporte de células estaminais. Nossos dados sugerem que a expressão RBM3 pode fornecer informação prognóstica adicional ao do nível de marcador tumoral e padrão de metástases. Quando combinado com o IGCCC em um modelo multivariável, RBM3 falhou ao adicionar informações de prognóstico significativo. Isto pode ser devido ao facto de que os níveis de plasma de marcadores tumorais (hCG, AFP e LDH) são categórica na IGCCC, e utilizado como variáveis contínuas na nossa análise. Para a utilização óptima dos RBM3 em um modelo de prognóstico, pode precisar de outros limites de corte para marcadores tumorais plasma a ser aplicada.
Em conjunto, nossos resultados sugerem que RBM3 pode ser um potencial biomarcador para estratificação de tratamento em pacientes com tumores de células germinativas não-seminomatoso metastáticos, e, portanto, merecem uma validação adicional.
Informações de Apoio
S1 Fig. análise CRT
análise CRT para (A) a sobrevida livre de falhas e específicas de sobrevivência do cancro (B)
doi:.. 10.1371 /journal.pone.0121300.s001
(TIF)
S1 Table. . IGCCCG sistema de estadiamento prognóstico
Internacional Germ Cancer Cell Collaborative Group sistema de estadiamento prognóstico para câncer de células germinativas não-seminomatoso metastático
doi:. 10.1371 /journal.pone.0121300.s002
(DOCX)
S2 Mesa. FFS 5 anos e CSS de 5 anos por características do paciente e expressão RBM3
doi: 10.1371. /Journal.pone.0121300.s003
(DOCX)
Reconhecimentos
As autores gostariam de agradecer aos membros do SWENOTECA pelo fornecimento de dados clínicos.