células CPE padrão poderia ser caracterizada por formas contratados e esféricos, descolamento um do outro, se não afastamento da placa de cultura de tecidos. culturas Mammosphere da sua linha de células 4T1 foram reconhecidos e afligidos por oncolytic HSV1 GFP. Forte fluorescência verde devido à expressão GFP constitutiva foi encontrado em várias células das esferas em comparação com o controlo infectado simulada. Colectivamente, estes dados indicam que ambas as monocamadas 4T1 e mammospheres pode ser atacado por oncolítico HSV-1 GFP.
ALDHbr e células ALDHlo pode ser uniformemente infectado por 4T1 células marcadas com aldefluor substrato exibiu a fluorescência brilhante verde, que não poderia, talvez, ser distinguido da expressão GFP em células infectadas com HSV1 GFP. No entanto, a fluorescência natural rapidamente desapareceu da pós-fixados células ALDHbr porque eles não estavam no buffer aldefluor, que bloqueou transportadores ABC e manteve o substrato fluorescente nas células, mas eram como uma alternativa no método e bainha de fluido quando revestida em receitas.
Por esse motivo, as células foram separadas ALDHbr fluorescente livre e HSV1 guiado expressão da GFP pode ser utilizado para avaliar a capacidade de infecção às células ALDHbr. células ALDHbr e ALDHlo fixos foram infectadas com HSV1 GFP em diferentes MOI para tempos diferentes. Tal como mostrado na Figura 4C, depois de 10 horas, termo GFP tinham aparecido em ambas as subpopulações contaminados com HSV1 GFP a MOI de 0. Depois de contaminação durante 34 horas, quando a diferenciação e o crescimento de células tinha acontecido, a expressão da GFP era mais evidente em ambas as subpopulações. Além disso, a eficácia da doença GFP HSV-1 em ambas as células e ALDHlo ALDHbr foi relacionada.
Para ajudar a analisar a consequência de inibidor de cinase Syk oncolytic no 4T1 células ALDHbr, células 4T1 foram tratadas com doxorrubicina ou HSV1 hGM CSF durante 24 horas e, portanto, examinado para mudanças na proporção de células ALDHbr por citometria de fluxo. Devido à fluorescência entre o substrato aldefluor activado e expressão de GFP por citometria de fluxo, oncolítico HSV1 hGMCSF foi usada em vez disso. Houve um aumento de 3. 5-vezes na quantidade de células ALDHbr após tratamento com doxorrubicina versus o controlo correspondente. No entanto, a presença de HSV1 hGM CSF no canal não alterar um pouco a percentagem de células ALDHbr nas células 4T1 em comparação com o controlo.
A frequência de células tumorais ALDHbr foi avaliada in vivo depois de vários tratamentos, para determinar se estas células tumorais ALDHbr também apresentou resistência à quimioterapia doxorrubicina ou sensibilidade para HSV-1 hGM CSF in vivo. Inconsistente com a informação in vitro, não houve mais intensificação da frequência de células tumefação ALDHbr in vivo após o tratamento de quimioterapia por si só, que foi semelhante ou até um pouco menos do que, os dos tumores tratados com veículo.
Por outro lado, oncolítico HSV-1 hGM CSF tratamento único agente resultou numa redução substancial na informação de células tumorais ALDHbr, e o volume das células tumorais também ALDHbr foi consideravelmente diminuída em tumores tratados com doxorrubicina seguido perto pelo HSV1 hGM CSF contra o veículo ou doxorrubicina sozinho.