Abstract
Fundo
A angiogênese é essencial para o crescimento e metástase de câncer. Embora os agentes anti-angiogénicos, em particular inibidores vasculares factor de crescimento endotelial (VEGF), exibiram actividade de agente único, existe um interesse considerável em combinar estes novos medicamentos com reagentes convencionais de quimioterapia para atingir uma eficácia clínica óptima. O objetivo deste estudo foi avaliar os benefícios da terapia de combinação de vascular armadilha fator de crescimento endotelial (VEGF-Trap) com gemcitabina em um modelo de tumor de pulmão.
Métodos
A luciferase-expressando modelo de Lewis carcinoma do pulmão (LLC) foi criada em C57BL /6J e ratos portadores de tumores foram randomizados em controle, VEGF-trap, gemcitabina e VEGF-trap /grupos de combinação gemcitabina. O crescimento do tumor e a sobrevivência dos animais foram monitorados. Tumor de densidade de microvasos e a proliferação das células foram avaliadas por CD31 e Ki-67 análise imuno-histoquímica. ensaio TUNEL foi realizado para detectar células apoptóticas. Os níveis de proteína de Ciclina D1, pro-caspase-3, Bcl-2, MMP2 e MMP9 em extractos de tumor foram examinadas por western blot.
Resultados
VEGF-Trap em combinação com gemcitabina mostrou aumentou significativamente a inibição do crescimento do tumor e a sobrevivência prolongada em comparação com o rato o VEGF-trap ou monoterapia com gemcitabina. A terapia de combinação de VEGF-Trap /gemcitabina não só inibiu potentemente a angiogénese de tumores e a proliferação celular, mas também um aumento da apoptose celular dentro dos tecidos tumorais. Além disso, o tratamento de combinação acentuadamente regulada para baixo a expressão da proliferação, anti-apoptose e proteínas relacionadas invasão.
Conclusão
A terapia de combinação utilizando VEGF-Trap e gemcitabina resultou na melhoria da antitumoral eficácia em um modelo de cancro do pulmão e VEGF-trap /combinação gemcitabina pode representar uma estratégia promissora no tratamento de câncer de pulmão humano
Citation:. Zhou S, Yang Y, Yang Y, Tao H, Li D, Zhang J, et ai. (2013) Terapia combinada de VEGF-Trap e gemcitabina resulta na melhoria da eficácia antitumoral em um modelo de cancro do mouse pulmão. PLoS ONE 8 (7): e68589. doi: 10.1371 /journal.pone.0068589
editor: Subhash Gautam, Henry Ford Health System, Estados Unidos da América
Recebido: 15 Março, 2013; Aceito: 06 de junho de 2013; Publicação: 09 de julho de 2013
Direitos de autor: © 2013 Zhou et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados
Financiamento:. Este estudo foi apoiado por Shanghai “Ciência e Tecnologia Plano de Acção para a Inovação” projeto de pesquisa experimental animal (No. 10140900400), National Natural Science Foundation da China (No. 31.000.527), Xangai Fund Research Bureau de Saúde para o jovem investigador (o Dr. Shuang Zhou) e programa Scholar Hong Kong (No. XJ2011025). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito
Conflito de interesses:. Os autores têm as seguintes participações. Junli Zhang é empregado por Yantai Rongchang Biotechnologies, Ltd. Eli Lilly and Company Shanghai fornecida gemcitabina (Gemzar) para este estudo. Não há mais patentes, produtos em desenvolvimento ou produtos comercializados a declarar. Isto não altera a adesão dos autores para todas as políticas de PLoS One sobre os dados e materiais de compartilhamento, como detalhado em linha no guia para os autores.
Introdução
A angiogênese é o processo de novos vasos sanguíneos formação de vasculatura existente. É um processo importante no desenvolvimento de tumores malignos como lesões neoplásicas necessitam de estabelecer o seu próprio fornecimento de sangue a crescer para além de 1-2 mm de diâmetro [1]. O regulador predominante de angiogénese tumoral é o factor de crescimento endotelial vascular (VEGF) [2], [3], que é o factor angiogénico chave conhecida por estar presente em todo o ciclo de vida tumoral inteira [4]. A sua expressão contínua, juntamente com a estabilidade genética de receptores de VEGF em células endoteliais, faz com que a supressão directa e constante de VEGF sinalizar uma importante estratégia anti-tumoral [3], [4]. Com o papel da angiogênese no crescimento e progressão tumoral firmemente estabelecida, os agentes anti-angiogénicos têm recebido atenção muito generalizada, mas estratégias clínicas para a sua utilização optimizada ainda estão sendo desenvolvidos [5].
O endotelial vascular agente anti-angiogênico factor de crescimento de armadilha (VEGF-trap ou aflibercept) é uma proteína quimérica manipulado contendo o domínio extracelular 2 do VEGF receptor-1 (VEGFR-1, Flt-1) e domínio extracelular 3 de VEGFR-2 (KDR) fundido com a porção Fe da imunoglobulina G1 humana. VEGF-Trap potente bloqueia todas as isoformas de VEGF-A e PlGF de ambas as origens humanas e de rato [6]. VEGF-Trap exerce os seus efeitos anti-angiogénicos por meio de regressão de vascularização tumoral [7], [8], normalização de sobreviver vasculatura, e inibição de novos vasos do tumor sprouting [9], [10]. Estes resultados promissores conduzido para o avanço deste agente em estudos clínicos [11], e tem sido recentemente aprovadas pela FDA para o cancro colorectal EUA [12]. No entanto, é pouco provável que as terapias anti-angiogénicas são curativos sobre a sua própria porque os agentes anti-angiogénicos em si não pode matar células tumorais directamente. Em vez disso, o seu maior potencial pode ser realizado quando usado em conjunto com terapias anti-cancro convencionais, por exemplo, quimioterapia [13], [14]. normalização induzida por anti-angiogénese de vasculatura tumoral pode melhorar a perfusão do tumor e levar a quimioterapia a entrega melhorada [15] – [18]
O cancro do pulmão é a principal causa de morte por cancro em todo o mundo.. A gemcitabina é um análogo da desoxicitidina que tem demonstrado eficácia no tratamento de muitos tumores sólidos. A gemcitabina foi comummente prescrito no tratamento de doentes com cancro do pulmão de células não pequenas, (NSCLC) [19], [20], no entanto, os benefícios são limitados devido a uma baixa taxa de resposta ou a resistência adquirida do tumor.
no presente estudo, buscou-se avaliar a eficácia da terapia de combinação utilizando VEGF-trap e gemcitabina em um LLC modelo de cancro do pulmão do rato, e investigar a possível mecanismo responsável pela eficácia aumentada anti-tumor.
Materiais e Métodos
ratos e Reagentes
C57BL /6J fêmeas foram adquiridos a partir da Academia chinesa de Ciências e alojados no Centro de Manutenção animal da Universidade de Tongji durante pelo menos 1 semana antes usar. Os protocolos foram aprovados pelo Comitê de Ética Animal da Universidade de Tongji. Todos os experimentos com animais foram realizados sob condições específicas isentos de agentes patogénicos, de acordo com as diretrizes institucionais. VEGF-Trap foi construído de acordo com Holash e colaboradores [8], e expressa em ovário de hamster chinês (CHO) células após a transfecção estável. O VEGF-Trap recombinante foi purificado por meio de uma proteína de cromatografia de troca iónica e de afinidade e reconstituídos em PBS estéril. A qualidade do VEGF-Trap foi determinada por SDS-PAGE redutor. A actividade de ligação de VEGF-Trap recombinante de VEGF de ratinho foi confirmada por um ensaio de ligação directa de ELISA-base. A proteína foi armazenada a -20 ° C até à sua utilização para a administração subcutânea (SC) a 1 g /kg. Gemcitabina (Gemzar) foi gentilmente fornecido por Eli Lilly (Indianapolis, Ind., EUA) e armazenadas a 4 ° C. De acordo com os estudos anteriores [21], gemcitabina foi dissolvida em PBS estéril para injecção intraperitoneal (ip) a uma dose de 60 mg /kg.
Construção de luciferase-expressando linha de tumor celular
LLC células de adenocarcinoma de rato pulmonares (CRL-1642) foram da American Type Culture Collection (ATCC), que foram propagadas em DMEM suplementado com soro a 10% inactivado pelo calor fetal de vitelo (GIBCO-BRL), 1