Abstract
Objectivo
Para explorar genes do receptor de imunoglobulina-como-células assassinas (KIR) e do ligando de HLA e sua relação com o resultado de câncer colorretal metastático (mCRC) pacientes tratados com primeira linha 5-fluorouracil, leucovorin e irinotecan (FOLFIRI).
Métodos
Um total de 224 pacientes com CCRm foram selecionados para KIR /HLA digitação. A determinação das combinações de KIR /HLA foi com base no teor de genes e variantes. Associação genética da resposta completa (CR), tempo de progressão (TTP) e sobrevida global (OS) foram avaliados calculando probabilidades e taxas de risco. modelagem multivariada com co-variáveis de prognóstico foi também realizada.
Resultados
Para CR, a presença de KIR2DL5A, 2DS5, 2DS1, 3DS1 e KIR3DS1 /HLA-Bw4-I80 foi associado com o aumento das taxas de RC , com mediana RUP variando de 2,1 e 4.3, enquanto que a ausência de KIR2DS4 e 3DL1 foi associado com taxas CR aumentada (ou 3,1). Após a análise univariada, os pacientes submetidos à cirurgia de ressecção do tumor, a ausência de KIR2DS5 e presença de KIR3DL1 /HLA-Bw4-I80 mostraram uma melhor OS significativa (HR 1,5-2,8). A análise multivariada identificou como parâmetros de forma independente relacionadas com sistema operacional o tipo de tratamento (cirurgia; RH 2.0) e KIR3DL1 /HLA-Bw4-I80 genótipo (HR para T-I80 2,7 e para nenhum funcional interação KIR /HLA 1.8). Para TTP, não foi observada associação com genes /HLA KIR.
Conclusão
marcadores preditivos
Este estudo, pela primeira vez, evidências de que a genotipagem para pares de KIR-HLA são encontrados associado com completa resposta e melhora a previsão de sobrevida global da resposta ao tratamento FOLFIRI em câncer colorretal metastático. Estes resultados sugerem um papel do sistema de KIR /HLA em resultado do paciente e guiar novas pesquisas sobre os imunogenética de mCRC através de estudos sobre os mecanismos e validação clínica
Citation:. De Re V, Caggiari L, De Zorzi M, Talamini R, Racanelli V., Andrea MD, et ai. (2014) Diversidade genética do sistema KIR /HLA e evolução de pacientes com câncer colorretal metastático tratados com quimioterapia. PLoS ONE 9 (1): e84940. doi: 10.1371 /journal.pone.0084940
editor: Amanda Ewart Toland, Ohio State University Medical Center, Estados Unidos da América
Recebido: 02 de agosto de 2013; Aceito: 28 de novembro de 2013; Publicação: 31 de janeiro de 2014
Direitos de autor: © 2014 De Re et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados
Financiamento:. O trabalho foi apoiada pela Associação italiana de Investigação do Cancro (AIRC n.10266 e n. 12214 Programa especial Molecular Clinical Oncology, 5 × 1000). Não há organismos de financiamento teve qualquer papel na concepção do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito
CONFLITO DE INTERESSES:. Co-autor Valli De Re é um membro do Conselho Editorial da revista PLOS ONE . FI recebe direitos de autor pela utilização do teste genético UGT1A1. Os autores confirmam que não existem patentes, produtos em desenvolvimento ou produtos comercializados a declarar pertinentes a este artigo. Não há mais patentes, produtos em desenvolvimento ou produtos comercializados a declarar. Isto não altera a adesão dos autores para todas as políticas de PLoS One sobre os dados e materiais de compartilhamento.
Introdução
O sistema imune inato é a primeira linha de defesa em resposta a células tumorais. células natural killer (NK) desempenham um papel importante nesta resposta com a sua capacidade de matar células tumorais, produzir citocinas, e cross-talk com o sistema adaptativo. As interacções entre os receptores semelhantes a imunoglobulina receptores de célula assassina (KIR) e o antigénio de leucócitos humanos (HLA) -ligand regular a resposta das células AN, o que resulta em um grande número de combinações de KIR /HLA e diferentes efeitos NK. Modificação de células do tumor devido à quimioterápico-tratamento também pode contribuir para uma diferença de NK-resposta.
Semelhante a outros regimes associados em câncer colorretal metastático (mCRC), tratamentos baseados em FOLFIRI (5-fluorouracil, leucovorin e irinotecano), usado em cerca de 60% do tratamento de primeira linha na Europa [1], continuam a ser ineficazes numa percentagem significativa dos pacientes [2]. Imunoterapia destinado a melhorar a imunidade das células T antitumoral natural em pacientes afetados por doenças malignas avançadas estão actualmente a ser implementado na clínica com resultados promissores, muitas vezes mostrando um efeito sinérgico com a quimioterapia [3]. A fim de optimizar protocolos terapêuticos e monitorar a eficácia de tais terapias, o reconhecimento dos mecanismos exactos que modulam a acção da imunidade do hospedeiro, resultando em um efeito sobre o resultado dos pacientes não são totalmente claras e pode envolver receptores de células T diferentes e células do sistema imunológico. É necessário mais trabalho para preencher as lacunas em nosso conhecimento.
O estadiamento patológico é a única classificação de prognóstico utilizado na prática clínica para selecionar pacientes para quimioterapia. Gene perfil de expressão, o que, contudo, exigir amostras de tumores primários, pode contribuir para a previsão de classificação e valor prognóstico do cancro do cólon [4]. Fatores adicionais, de preferência facilmente disponível, para identificar pacientes com maior risco de recidiva (fatores prognósticos), bem como para prever aqueles com maior probabilidade de beneficiar de quimioterapia (fatores preditivos) são úteis para melhorar a seleção dos pacientes para quimioterapia adjuvante. Além disso novos Critérios de Avaliação de Resposta em Tumores Sólidos (critérios da OMS), concebidos critérios de resposta relacionados ao sistema imunológico (IRRC) para avaliar as respostas anti-tumorais aos agentes quimioterapêuticos, é cada vez mais, resultando em uma melhor avaliação dos agentes anti-tumorais [5] para uma utilização mais frequente de imunoterapia e quimioterapia-imune em doentes com cancro [6]; [7].
Diferentes tipos de infiltração de células do sistema imunológico têm efeitos diferentes sobre a progressão do tumor [8]. células NK pode afectar a progressão do tumor e pode representar um marcador substituto da resposta da imunidade do hospedeiro contra as células cancerosas, incluindo CRC [9]; [10]. infiltração de células NK in situ revelou ser mínima dentro CRC amostras cirurgicamente ressecado, em oposição aos números mais elevados de células NK na mucosa normal adjacente [11]. evidências acumuladas indicam que a sobre-expressão de HLA-E sobre as células de CRC conduz à inibição da resposta anti-tumoral mediada por células NK, envolvendo células T CD8 e subconjuntos de células NK [12].
células NK, tradicionalmente considerado parte do sistema imune inata, também foram exibidas para partilhar muitas funções com imunidade adaptativa [13]; [14]. Contribuição de KIR interação /HLA à sinalização em células NK não são completamente compreendidos [15], mas sua importância foi sublinhada por vários estudos genéticos recentes que ligaram /HLA-combinações KIR com o resultado de várias doenças, e com alguma resposta clínica para o tratamento, incluindo a uma neste estudo. células NK preferencialmente matam células alvo que expressam pouco ou nenhum moléculas de HLA de classe I na sua superfície. A atividade das células NK é regulada por um equilíbrio de sinais do transdutor através de activação e inibitórios receptores [16].
A maioria dos receptores NK parecem pertencer a uma família conhecida como KIR. Eles são expressos em células NK e em um pequeno subconjunto de linfócitos T. Os receptores KIR são ou inibitória (com L) caudas longas (isto é, KIR2DL1) ou ativar (com (S) caudas curtas, ou seja KIR2DS1). Um KIR distintos normalmente interage com um alotipo específica de uma molécula de HLA de classe I de moléculas [15]; [17]. Cada célula NK podem expressar vários receptores inibidores e /ou activadores diferentes que funcionam de forma independente um do outro. Por conseguinte, existe um nível relativamente elevado de heterogeneidade e pleiotropia de KIR em seres humanos. A expressão independente de genes KIR polimórficas e ligandos HLA altamente polimórficos determina a função da célula NK final [15]; [18].
Os agentes citotóxicos pode ativar diferentes vias de morte celular, induzindo padrões de peptídeos distintos de HLA apresentação cruzada de antígenos lançou-tumorais para células T citotóxicas, incluindo células NK [19]. Uma maior taxa de captação de antigénio associado a tumores por células apresentadoras de antigénio mediada por HLA tem sido relatada após a administração de 5-FU [20]. Os efeitos anti-tumorais da quimioterapia pode ser ainda reforçada por as funções das células NK [21] – [25]
Devido ao papel emergente do sistema imune na biologia do tumor sólido [26], o papel potencial da. efectores imunitários na mediação da eficácia da terapêutica [3]; [25] e a falta de informação clínica sobre o papel do sistema /HLA KIR em CCRm, que teve como objetivos: 1) caracterizar o perfil genético do sistema KIR /HLA em um grupo homogêneo de pacientes com CCRm tratado com FOLFIRI e 2 ) determinar o efeito da composição genética paciente do sistema /HLA KIR em taxa de resposta e sobrevivência. Para esta finalidade, foi desenvolvido um KIR /HLA par genotipagem para caracterizar o espectro de genes imunes relacionadas com o NK em resposta CRC ao tratamento FOLFIRI em análise uni e multivariada. Discutimos aqui os estudos relacionados com interações KIR /HLA altamente polimórficos, com ênfase em como esses genes podem regular NK-função em direção a resposta do tumor e sobrevivência de-pacientes tratados.
Métodos
Pacientes e tratamento
foram utilizados dados de resultados recolhidos a partir de um estudo anterior, e os critérios de elegibilidade e tratamentos FOLFIRI foram previamente descritos em detalhes [27] Para este estudo foram selecionados pacientes com estágio IV e recorrente CRC. Os pacientes foram tratados em primeira linha com apenas FOLFIRI, e não há terapias biológicas foram autorizados. Os pacientes avaliáveis para resposta objetiva, o tempo para a progressão do tumor (TTP) e sobrevida global (OS) foram 224.
A duração média do seguimento foi de 21,73 meses (intervalo: 1,07-91,8). As taxas de resposta foram como se segue: resposta completa (CR, n = 15), resposta parcial (PR, n = 80), uma doença estável (SD, n = 62), e doença progressiva (DP, n = 67). A resposta tumoral foi avaliada utilizando os critérios da OMS como relatado anteriormente [28]. OS foi definido como o tempo desde a primeira administração do fármaco até à data da morte ou do último seguimento. Pacientes vivos no último follow-up foram censurados. TTP foi definido como o tempo desde a data da terapêutica inicial para a primeira data de progressão tumoral ou último seguimento. O OS mediana foi de 21,7 meses (variação: 1,07-91,8). O TTP mediana foi de 8,5 meses (intervalo: 0,7-41,6). As características dos pacientes são mostradas na Tabela 1.
KIR e HLA Genotipagem
O DNA foi extraído a partir do sangue utilizando o kit Qiagen EZ1 Itália como previamente descrito [29]. Os pacientes foram genotipados para a presença dos genes KIR (2DL1-4, 2DL5A e 2DL5B, 3DL1-3, 2DP1, 2DS1-3, 2DS4, 2DS5, 3DP1, 3DS1 e), utilizando uma cadeia de polimerase-sequência de reacção da reacção de iniciadores específicos multiplex, optimizado no nosso laboratório [30].
alta resolução de HLA de classe I a análise foi realizada por PCR tipagem baseada na sequência com os iniciadores específicos para os loci que a, B e C e o uso do software Atribuir SBT (versão 3.27 b) [30]. KIR e genes HLA frequências eram representativas daqueles de uma população caucasiana [31] e foram comparáveis aos encontrados em nossa série de doadores de sangue não câncer (dados não mostrados).
Análise dos genes KIR-HLA
O conteúdo gene KIR mostra um alto grau de variação, em termos de número e tipo de genes presentes. Dois grupos principais de haplótipos KIR foram descritos, com base no conteúdo do gene, e são designados por A e B [32]; [33]. Os haplótipos do grupo A têm um teor de gene simples e constante, representado por genes que codificam receptores inibitórios KIR 2DL1, 2DL3, 2DL4, 2DS4, 3DL1, 3DL2 e 3DL3. Em contraste, os haplótipos grupo B têm o conteúdo mais gene variável e maior, envolvendo os genes que codificam os receptores inibitórios distintivas e uma variedade de receptores de activação.
As associações de KIR com os seus ligandos cognatos HLA foram estabelecidas com base em previu combinações de KIR /HLA, de acordo com uma classificação padrão [34]. HLA-A, -B e -C moléculas foram colocados em 3 grupos (C1-HLA,-C2, e Bw4) com base nas sequências de aminoácidos que determinam o epitopo de ligação de KIR. Alotipos de HLA-C com a asparagina na posição 80 (HLA-C1) são ligandos para o KIR 2DL2, 2DL3, 2DS2 e; alotipos de HLA-C, com lisina na posição 80 (HLA-C2) são ligandos para o KIR e 2DL1 2DS1. No terceiro grupo, alotipos de HLA-A e -B com o epitopo Bw4 são ligandos para KIR 3DL1 e 3DS1 e distinguem-se por substituições na posição 77, 80, 81, 82 e 83 no terminal C de HLA de classe I a1 domínio ; HLA-A * 03 e * 11 são ligantes para KIR3DL2 e HLA-C * 04 é um ligando para KIR2DS4 [35].
Análise Estatística
O odds ratio (OR) e 95% de confiança intervalos (IC) foram utilizados para investigar a associação entre genes /HLA KIR e resposta tumoral (CR, PR, SD e PD). TTP e OS foram calculados usando o método de Kaplan-Meier, eo teste de log-rank foi usado para testar as diferenças entre os subgrupos. modelos de regressão de risco proporcional de Cox foram utilizados para calcular as taxas de risco (HR) e ICs de 95%. análise do teste de qui-quadrado e exacto de Fisher para tendência também foram usadas para testar o efeito de KIR e HLA em CR. A independência das associações genéticas do tumor e características clínicas foi testado pela modelagem multivariada de co-variáveis, incluindo o sexo, idade, localização do tumor (recto; cólon direito; esquerdo-e-vírgula), estádio TNM no momento do diagnóstico, a cirurgia radical (ressecção cirúrgica localmente recorrente Câncer). Os resultados foram considerados estatisticamente significativos quando p 0,05 (frente e verso). Todas as análises foram realizadas usando SAS 9.2 software de estatística (SAS Institute, Inc., Cary, NC).
Comissão de Ética Aprovação
O estudo foi coordenado e patrocinado pelo Centro di riferimento oncológico , Instituto Nacional do Câncer, Aviano, Itália, accordantly a Declaração de Helsinki Princípio. O uso de coleta de amostra de sangue foi aprovado pelo CRO, o Conselho institucional: RC linea 4. Todos os pacientes forneceram consentimento informado para análise genética antes de entrar no estudo, esse consentimento foi considerado suficiente e aprovado pelo Conselho de Revisão Institucional
Resultados
Associações de HLA /KIR com taxas de resposta completa
Presença de KIR2DL5A, 2DS5, 2DS1, 3DS1 e KIR3DS1 /HLA-Bw4-I80 foi associada com melhores taxas CR (CR contra PR + SD + DP) com RUP variando de 2,1 a 4,3 (p 0,05, Quadro 2). Por outro lado, a ausência de KIR2DS4 e 3DL1 foi associada com uma melhoria CR (OR = 3,1, IC de 95% 0,0-0,5, p 0,001, Tabela 2). análise de haplótipos KIR indicou que o haplótipo B /B, incluindo KIR2DL5A, 2DS1, 2DS5 e 3DS1, mas não KIR2DS4, foi mais frequente em pacientes com CR (33,3%) do que nos outros pacientes (4,8%) (OR 5,45, 1.5- 19,1, p 0,013). haplótipos A /A e A /B conter apenas KIR2DS4 como o único gene KIR activação, de acordo com o conceito que a ativação KIR (Akir) genes são normalmente associados apenas com o haplótipo B grupo, um número crescente de genes Akir (com o seu cognato portadora HLA) foi associada com uma melhor CR (p 0,001, Figura 1).. Nenhum dos doentes e as características tumorais listados na Tabela 1, foi associado com taxas de Cr (p 0,05, dados não apresentados).
A análise do gene de KIR mostra uma tendência (teste qui-quadrado para a tendência, p 0,001) entre um número cada vez maior de genes Akir (KIR2DS3 e KIR2DS5; ligando desconhecido) ou Akir /HLA-ligando (KIR2DS1 /HLA-C2, KIR2DS2 /HLA-C1, KIR2DS4full /HLA-Cw * 04, KIR3DS1 /HLA-Bw4) eo taxa de CR.
Análise de KIR e sua HLA ligantes genotipagem, mostrou uma taxa de CR superior ao combinar KIR3DS1 com HLA-Bw4-I80 do que quando combinados, quer com HLA-Bw4-T80 ou HLA-Bw6 (não reconhecido pelo KIR3Ds) ou em caso de ausência do gene KIR3DS1, relativamente a outros pacientes (PR + SD + PD) (Tabela 2). Entre os diferentes genes KIR, da KIR3DS1 activação e o inibidor KIR3DL1 como segregar alelos do mesmo KIR3DL1 /locus de S1 e KIR3DL1 e KIR3DS1 putativamente são receptores para um mesmo subconjunto de alelos HLA-B. Dentro do ligando de HLA-Bw4-I80, as 3 combinações diferentes de KIR3DS1 e KIR3DL1 (isto é, a presença /ausência, a presença /presença, ausência /presença, respectivamente) foram sugestivos de uma tendência para o aumento da taxa de CR na presença de KIR3DS1 (p 0,016 , a Fig. 2).
o efectora de NK funções são determinados pelo sinal gerado cumulativa através da ligação de activação e receptores inibitórios das células NK com o seu ligando de HLA putativo em células alvo. Activar (KIR3DS1) e receptores inibitórios (KIR3DL1) são genes de um mesmo locus e tem especificidade para ligandos de HLA-B com semelhante, assim, um papel de equilíbrio possível na resposta NK. O receptor pode reconhecer KIR3D as moléculas de HLA-B que transportam o epítopo comum Bw4 (Bw4-I80 e Bw4-T80 variantes), mas não o motivo Bw6. A figura mostra uma maior frequência de pacientes com RC em pacientes portadores KIR3Ds com o ligante Bw4-I80 (10%) do que em pacientes com Bw4-T80 (0%) ou Bw6 /6 (4%). Entre o ligando HLA-Bw4-I80, a presença do gene KIR3DS1 está associada a uma tendência de melhoria taxa de CR (teste do qui-quadrado para tendência, p 0,016). + E – indicar a presença ou ausência do gene, respectivamente
Associações de HLA /KIR com sobrevida global e tempo de progressão
Entre as características do paciente, apenas a ressecção cirúrgica localmente recorrente. câncer melhorou as taxas de oS em comparação com os pacientes que não tiveram a ressecção cirúrgica (mediana 25,1 vs 14,4 meses, HR 2.1, p 0,001, Figura 3A, Tabela 3 e Tabela S1)
B) de Kaplan-Meier. parcelas da associação entre KIR2DS5 e oS. curvas OS de pacientes com KIR2DS5 (linha preta sólida), ou sem o gene (-, linha tracejada vermelha). A implicação deste resultado não poderia ser mais investigada como o ligando de KIR2DS5 ainda não foi identificada. C) Gráficos de Kaplan-Meier da associação entre KIR3DL1 /HLA-B e OS. curvas OS de pacientes com KIR3DL1 /HLA-Bw4-I80 (linha preta sólida), KIR3DL1 /HLA-Bw4-T80 (linha tracejada vermelha), ou sem um ou outro (- /-, linha tracejada verde). D) Gráficos de Kaplan-Meier da associação entre uma combinação de cirurgia, KIR2DS5 e KIR3DL1 /HLA e OS. Sim e n referem-se a presença ou ausência de cirurgia radical, respectivamente. – Refere-se à ausência do gene. método de Kaplan-Meier, e log-rank foram utilizados para testar as diferenças entre os subgrupos. 0,95 e 0,95 LCL UCL; inferior e superior do percentil 95, respectivamente; IC (95%); 95% de intervalo de confiança.
Entre genótipos (Tabela S1), a presença do gene KIR2DS5 (Figura 3B) e KIR3DL1 /HLA-Bw4-I80 (Figura 3C) foi associado a uma melhora OS , enquanto KIR3DL1 /HLA-Bw4-T80 (HR 2,8, p 0,001) ou a um receptor não interagindo KIR3DL1 (- /-) (HR 1,8, p 0,007) foi associada a um pior SO. OS mediana foi de 25,1 meses em pacientes KIR2DS5, 29,4 meses (22.7-43.0) em pacientes KIR3DL1 /HLA-Bw4-I80, 14,7 meses (11.7-22.3) em pacientes KIR3DL1 /HLA-Bw4-T80, e 21,6 meses (18,6-26,7 ) em pacientes sem KIR3DL1 /HLA-Bw4 (ou I80 ou T80 ou ausência de KIR3DL1).
na análise multivariada, incluindo a única característica clínica associada a oS (cirurgia radical) e KIR genótipos /HLA, cirurgia e KIR3DL1 /HLA-Bw4-I80 manteve um efeito independente no OS (HR 2.0, p 0,001 e HR 2,7-1,8, p ,001-,006, respectivamente) (Tabela 3). O efeito dos pacientes compostos que tiveram (ou não) a cirurgia radical, que tinham (ou não) gene KIR2DS5 que está parcialmente em desequilíbrio de ligação com KIR3DL1 (https://www.allelefrequencies.net/kir6010a.asp. Acessado 2012 utubro 17) , e KIR3DL1 /pares de HLA-B sobre o sistema operacional é ilustrado na Figura 3D. OS mediana foi de 43,0 meses em pacientes tratados com cirurgia, sem KIR2DS5 mas KIR3DL1 /Bw4-I80 + genótipo e 13,7 meses em doentes sem tratamento de cirurgia e ter um genótipo incluindo KIR2DS5 mas não KIR3DL1 /HLA-Bw4-I80 genes par.
Para a análise do TTP, nem genes KIR individuais nem combinações de genes /HLA KIR foram significativamente associados com TTP (p 0,05, dados não mostrados)
Discussão
o estudo,. pela primeira vez, investigou a relevância clínica de combinações de genes /HLA KIR em pacientes com CCRm e tratamento FOLFIRI. Dependendo da combinação /HLA KIR, a resposta do tumor e OS diferiu entre os pacientes que tiveram características clínicas e tumorais semelhantes. Apenas dois estudos investigaram a distribuição de genes KIR e HLA em amostras de CRC [36]; [37], mas estes estudos analisados apenas KIR /frequências HLA em pacientes com câncer em comparação com indivíduos de controlo normais, com o objectivo de testar o impacto do estado KIR /HLA na suscetibilidade do indivíduo à CRC.
Os avanços foram feitos em os últimos anos em tratamentos contra o cancro colorectal metastático, com a introdução de novos agentes direcionados molecularmente como anticorpos contra o VEGF ou os objectivos de EGFR; no entanto taxa de longos sobreviventes são baixos. As células NK fornecer defesa de primeira linha contra células malignamente transformadas [38]; [39] e evidência recente da utilização de anticorpos que bloqueiam o receptor de morte celular programada imunossupressor um (DP-1) via destacou o papel central de reindução de sistema imune do hospedeiro e de potenciar a citotoxicidade mediada por células NK em vários prognóstico de tumores [40 ]; [41], incluindo CRC [3]. Além disso, alguns dos anticorpos terapêuticos clinicamente aprovados para o tratamento do cancro, tal como cetuximab e rituximab, são considerados para funcionar parcialmente através desencadear a actividade de ADCC mediada por células NK [42]. Em geral, apesar do papel central das células NK em respostas imunitárias do hospedeiro e o facto de o sistema de KIR /gene HLA é o sistema receptor de princípio capaz de modular a função da célula NK, os genótipos KIR /HLA sobre os resultados clínicos em CCRm tem sido essencialmente inexplorado .
a análise do KIR /HLA composição genética dos pacientes com CCRm propõe que a presença de KIR 2DL5A, 2DS5, 2DS1 e 3DS1 /HLA-Bw4 par ligando e ausência do KIR2DS4 e 3DL1 (Tabela 2, Figuras 1-2) pode influenciar a probabilidade de alcançar uma resposta radiológica após a quimioterapia. Assim, nos nossos pacientes série mostrando um haplótipo mais activador (por exemplo haplótipo B /B), e células NK especialmente KIR3DS1 /HLA-Bw4-positivas na ausência do seu gene do receptor KIR3DL1 inibidor de neutralização, deve ser mais propenso a actividade citolítica e do Cr . outros pacientes
o estado da arte para KIR genótipos /HLA indicam que combinações KIR /HLA inibir as células NK com intensidades diferentes [43]; [44] e que as células NK-se torne activado quando a inibição é removida, de modo que deve envolver a activação de receptores estimuladores [45]. Além disso, a tendência de declínio para a actividade citolítico NK foi encontrado contra células alvo receptores, que possuem o HLA-C2 (forte), HLA-C1 (modesta), HLA-Bw4 (fraca actividade citolítico), e em seguida, sem ter em falta-auto ligando [ ,,,0],46]; [47]. Portanto, as células NK possuindo receptores KIR inibidores com uma avidez inferior a HLA-ligando (por conseguinte, tendo uma função de diminuição da relação inibidora para outro KIR) e com muitos receptores KIR activador pode mostrar um aumento de citólise NK mediada por células alvo. Por exemplo, a presença da forte KIR2DS1 receptor de activação com o seu cognato ligando HLA-C2 foram mais propensos a matar HLA-C2 + células [48] e este foi associado com o aumento da sobrevivência livre de progressão (SLP) em pacientes com leucemia linfocítica crónica [49 ]. Além disso, o bloco de inibidor interação KIR /HLA tem sido mostrada para diminuir a progressão leucêmica em um
in vivo
modelo animal [50]. Em pacientes tratados com transplante de células-tronco hematopoiéticas autólogas para o alto risco para o neuroblastoma, a ausência da combinação de KIR /HLA inibição funcional foi associada com um menor risco de morte e progressão [51]. Um aumento da actividade citotica mediada por culas NK obtidas através do bloqueio do receptor inibitório de DP-1 upexpressed em células NK de pacientes com vários tumores sólidos, incluindo CRC [52], também foi associado com a regressão do cancro durável [3]. Os nossos resultados são assim consistentes com a hipótese de que a presença de KIR activador (isto é, elevado número de aKIRs e a presença de KIR3DS1 /HLA-Bw4-I80, a Fig. 1 e 2) tem um efeito benéfico na resposta do tumor. Sabe-se que a quimioterapia pode induzir padrões distintos de HLA cruzada apresentação de antigénios libertados-tumorais para células T citotóxicas [20]; [53], e que os efeitos anti-tumorais da quimioterapia pode ser modificado por células NK [21]; [22]; [25]. A sub-regulação da apresentação de antigénio pelas máquinas de HLA e uma redução no número de células T que se infiltram no local do tumor, têm sido associados com o pior prognóstico [54]; [55]. Além disso, as contagens de células NK em leitos tumorais [11]; [12]; [53]; [56] demonstraram ser prognosticadores favoráveis, também no CRC. Os nossos dados parecem complementar estas observações, sugerindo que, em função de um fenótipo de célula NK mais sensíveis (número de aKIRs) e /inibidoras pares /HLA específicas activatory KIR (por exemplo KIR3D /HLA-Bw4), a resposta do tumor pode ser mais ou menos eficazes , levando a um diferente grau de redução do tamanho dos tumores primários. Ao nível celular, estes efeitos podem ser mediados por um aumento da acumulação de activadores receptores KIR em células NK e HLA-ligandos eficazes em células tumorais aumentar a imunidade de tumor NK mediada. Por analogia com os resultados, em outras situações, o resultado de citólise pode ser mais eficaz quando uma dose baixa de células alvo está presente, mas não é suficientemente eficaz no caso de alta dose de células alvo em que a resposta imune inata é provável esmagada [57]. Da mesma maneira, é plausível que algumas péptidos (novas ou só é mais abundante), pode ser apresentado por HLA para KIR no decurso do crescimento do cancro, ou mesmo suprimidas devido ao tratamento CCRm, e, portanto, que os complexos de péptidos /HLA podem influenciar o NK a função celular no local do tumor [58]; [59] – [64]
Entre as características dos pacientes, apenas a cirurgia ups OS.. Os dados de KIR e KIR genótipo /HLA por meio de análise univariada identificou dois KIR associados à sobrevida previamente encontrada associada a CR; o KIR2DS5 e KIR3DL1. Após a comparação multivariada com a cirurgia, apenas o KIR3DL1 /HLA-Bw4-I80 permanecem estatisticamente significativa, o que indica que KIR3DL1 /HLA-Bw4-I80 genótipo foi fortemente preditivo de sobrevivência, independentemente da cirurgia (Tabela 3). Desde i) os dias de hoje o ligante de KIR2DS5 é desconhecida, ii). KIR2DS5 está em desequilíbrio de ligação positiva com o gene KIR3DL1 (LD 30), iii) KIR3DL1 e 3DS1 são genes de um mesmo locus, iv) KIR3D genótipo e cirurgia são factores independentes (Tabela 3), foram avaliados os seus efeitos por genes KIR compósitos em parcelas OS Kaplan Meier de pacientes previamente tratados com cirurgia e quimioterapia combinada ou tratados apenas com quimioterapia, porque a cirurgia não foi indicada. Os resultados mostraram pacientes com melhor OS das demais (OS mediana 79,4 para 22,9 meses); o melhor aumento OS foi encontrado quando ambos KIR3DL1 e 3DS1 de genes no mesmo locus estavam na presença dos seus homólogos de HLA Bw4-I80 (OS mediana 79,4 meses); pacientes que receberam um tratamento cirúrgico ou tiveram um gene HLA-Bw4-T80 (2 fatores independentes) tinham todos um pior OS (OS mediana 14,4 meses, a Figura 4). Tendo em mente que CR foi encontrado associado com um mais activatory fenótipos das células NK e que CR foi associada a um aumento no OS, a nossa hipótese de trabalho é que KIR3DL1 inibitória /HLA-Bw4-I80 ea ausência de genótipos KIR2DS5 encontrada associada a um aumento OS foram determinantes de subconjunto de células NK que tem um potencial funcional para um fenótipo inibitória que é necessário para manter o controle da doença e prolongar a sobrevivência. Esta observação é semelhante aos encontrados durante a infecção virai aguda; Com efeito, durante, por exemplo, da imunodeficiência humana aguda tipo de vírus da infecção 1, a expansão de células NK pode ser primeiro associado com uma expansão não específico de activação KIR-expressando células NK, que no entanto é seguido pela ocorrência de um KIR3DL1 protectora + células NK que expressam , mas apenas na presença do seu ligando de HLA-Bw4-I80 putativa [65]. No entanto, inibidores pares KIR HLA foram demonstrou desempenhar um papel crítico na modulação da função das células NK durante o desenvolvimento NK, na verdade é necessário a expressão e acoplamento de receptores inibitórios pelo seu ligando para a transição de CD56
células NK brilhantes para terminalmente diferenciadas e mais potente citotóxicos células CD56
dimNK [16]; [66] e, além disso, a expressão de KIR inibidor, com um papel proeminente de KIR3DL1 /Bw4, tornem indispensável reconhecer auto HLA durante a sua maturação de células totalmente funcionais com competência citotóxica e citotoxicidade dependente de anticorpos de células (ADCC) [66]. Recentemente, os resultados de KIR /HLA genotipagem como preditore de suporte da hepatite C relacionadas com o vírus do carcinoma hepatocelular um papel central das células NK citotóxicas possuindo uma KIR2DL2 inibitória /2DL3-HLA-C1 + fenótipo em pacientes mostrando um resultado favorável [67], bem como naqueles com resolução espontânea infecção pelo HCV aguda [68]. Nós supomos que em casos de HLA-Bw4-I80 pode fornecer sinais críticos para células KIR3DL1 + NK que lhes permite desenvolver em assassinos altamente funcionais que são capazes de reagir de forma agressiva às células alvo, resultando, assim, em populações de células NK mais potentes [65]; [69]; [70]. Nossos dados de um aumento da RC em pacientes com KIR3DS1 e, em seguida, SO, em pacientes com KIR3DS1 e /ou KIR3DS1 mais genes KIR3DL1 que interagem com o seu apoio ligando HLA-Bw4-I80 esta hipótese (Figura 4).
curvas de sobrevida oS Kaplan-Meier (truncada em 80 meses) de pacientes estratificados em pacientes com os melhores (factores a) identificados e os piores (fatores B) combinação prognóstico de genes e tratamento cirúrgico.
Além disso, uma corpo de evidências a partir de estudos de associação genética suporta o significado biológico não só da interacção de KIR3DL1 a HLA-Bw4 mas também a variação funcional diferente visto com KIR3DL1 e KIR3DS1 alotipos de HLA e (revisto em [71]). Neste concurso de activação (KIR3DS1) e receptores inibitórios (KIR3DL1) podem reconhecer um conjunto diferente de moléculas de HLA (HLA-Bw4-I80, HLA-Bw4-T80) e /ou de ligação diferente complexo HLA-peptídeo [36]; [59]. A dramática redução de molécula de HLA-T80, que é conhecido por ter uma menor afinidade para os receptores KIR3D, em resultado do paciente na nossa série, é mostrado nas figuras 3C.
Finalmente, conduzindo a uma redução na número de células alvo, de acordo com descobertas anteriores de que os receptores KIR e HLA-ligandos podem ser mais eficazes quando a resposta imune inata não é provável esmagada [57], a cirurgia mostra um efeito independente de KIR /HLA para genótipo oS de pacientes. KIR3DL1 /BW4-I80 genótipo leva ao aumento OS do paciente quando uma cirurgia radical tinha sido realizada, enquanto que a presença de uma grande massa de células de tumor não tratado por cirurgia achata o efeito benéfico do genótipo KIR /HLA para OS.
Esta é a nosso conhecimento o primeiro estudo sobre a relevância da KIR genótipo sobre o prognóstico de mCRC tratado com FOLFIRI regimento.