Abstract

Purpose

Para avaliar características clínico-patológicas e moleculares de pacientes com câncer metastático colo-rectal (mCRC) e os seus resultados em ensaios de fase precoce usando agentes de metas para a via.

pacientes e Métodos

Foram analisadas características dos 238 pacientes com mCRC que se refere aos ensaios de fase 1 unidade no MD Anderson Cancer Center.

KRAS

,

PIK3CA

e

BRAF

estatuto foram testados utilizando sequenciamento de DNA baseada em PCR.

Resultados

Cinquenta e um por cento dos pacientes abrigavam

KRAS

mutações; 15% tinham

PIK3CA

mutações. No modelo de regressão multivariada para características clínicas

KRAS

mutações foram associadas com um aumento da incidência de metástases pulmonares e dos ossos e diminuição da incidência de metástases adrenais;

PIK3CA

mutações foram marginalmente correlacionado com tumor mucinoso (p = 0,05). Na análise univariada,

KRAS Comprar e

PIK3CA

mutações foram fortemente associados. estágio Avançado Duke (p 0,0001) e

KRAS

mutações (p = 0,01) foram os únicos preditores independentes significativos de pior sobrevida (Cox riscos proporcionais modelo). Os pacientes com

PIK3CA

mutações teve uma tendência de sobrevida livre de progressão mais curto quando tratados com terapias anti-EGFR (p = 0,07). Dezoito dos 78 pacientes avaliáveis ​​(23%) tratados com inibidores do eixo PI3K /Akt /mTOR teve a doença estabilizada [SD] ≥ 6 meses ou resposta completa /resposta parcial (CR /PR), dos quais apenas um foi no subgrupo (N = 15) com a

PIK3CA

mutações, talvez porque 10 destes 15 pacientes (67%) tinha coexistindo

KRAS

mutações. Nenhum SD ≥ 6 meses /CR /PR foi observada em 10 pacientes tratados com mitogen-activação da proteína quinase (MAPK) alvejando drogas.

Conclusões

KRAS Comprar e

PIK3CA

mutações coexistem frequentemente em pacientes com cancro colo-rectal, e estão associados com características clínicas e evolução. Superar a resistência pode exigir alvo ambas as vias

Citation:. Garrido-Laguna I, Hong DS, Jankulovski F, Nguyen LM, Falchook GS, Fu S, et al. (2012) KRASness e PIK3CAness em pacientes com câncer colorretal avançado: Resultado após o tratamento com Trials Early-fase com Targeted Pathway inibidores. PLoS ONE 7 (5): e38033. doi: 10.1371 /journal.pone.0038033

editor: Rui Manuel Reis, Universidade de Minho, Portugal |

Recebido: 30 de dezembro de 2011; Aceite: 30 de abril de 2012; Publicado em: 31 de maio de 2012 |

Direitos de autor: © 2012 Garrido-Laguna et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este trabalho foi apoiada por Grant Número RR024148 do Centro Nacional de Pesquisa de Recursos, um componente do NIH Roteiro para a Investigação médica. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

Há um crescente apoio para o conceito de que mutações específicas prever as manifestações clínicas e resposta à terapia de pacientes com câncer. No cancro colorectal,

RAS

mutações receberam escrutínio de montagem. Em particular, a activação de mutações em

KRAS

conduzir a resistência a terapias anti-EGFR em pacientes com doença metastática. [1], [2] No entanto, um subconjunto de indivíduos com

KRAS

mutações (p.G13D) pode beneficiar-se de terapias anti-EGFR. [3] O papel da

PIK3CA

mutações em predizer resistência a terapias anti-EGFR tem sido debatida, com estudos iniciais que alcançam conclusões opostas. [4], [5] Recentemente, um estudo retrospectivo multicêntrico mostrou que

PIK3CA

mutações no exão 20 estavam envolvidos na resistência a terapias anti-EGFR, enquanto que mutações no exão 9 não foram. [6] Finalmente, nosso grupo demonstrou que mutações ativadoras em

PIK3CA

pode prever a resposta aos inibidores /Akt /mTOR PI3K. [7]

Aqui, discutimos as características clínicas e moleculares de pacientes com câncer colorretal metastático (mCRC) que foram encaminhados para a nossa unidade de ensaios clínicos. O objetivo do estudo foi identificar as características clínicas associadas a

KRAS Comprar e

PIK3CA

mutações, e resultados sobre os ensaios clínicos iniciais de PI3K /Akt /mTOR e inibidores de MAPK.

Resultados

características do paciente

paciente e do tumor características clínico-patológicas para os pacientes do estudo 238 estão listadas na Tabela 1. Cinquenta e quatro por cento dos pacientes eram homens. Setenta e um por cento dos pacientes tinham mais de cinqüenta anos de idade. A maioria dos pacientes (69%) eram caucasianos. Os locais mais comuns de metástases são o fígado, nodos linfáticos e do pulmão, encontrado em 83%, 75%, e 72% dos pacientes, respectivamente. Todos os 238 pacientes foram testados para a

KRAS

. Cento e vinte e dois pacientes (51%) tiveram

KRAS

mutações. Dos 168 pacientes testados para

PIK3CA

mutações, 25 (15%) tinham uma mutação. Dos 173 pacientes testados para

BRAF

mutações, 11 (6%) tinham uma mutação.

Frequência de

KRAS

Mutation subtipos

em seguida, avaliou-se a incidência de diferentes tipos de

KRAS

mutações. A localização do

KRAS

mutações estava disponível em 108 de 122 pacientes. O mais frequente

KRAS

mutação foi p.G12D (31 pacientes [29%]), seguido por p.G12V (23 pacientes [21%]), p.G12A (14 pacientes [13%]) e p.G13D (13 pacientes [12%]). Outras mutações ocorreram nas seguintes incidências baixas: p.G12C (11 pacientes [10%]), p.G12S (8 pacientes [7%]), p.Q61H (5 pacientes [5%]) e p.G12R, p .G13C e p.G12F, um paciente cada (1%).

Avaliação da “KRASness”

Características clínicas.

Os pacientes com

KRAS

mutações (N = 122) tiveram uma maior incidência de câncer de pulmão (79% [96/122] vs. 66% [76/116], P = 0.03) e metástases ósseas (20% [24/122] vs. 9% [ ,,,0],11/116], p = 0,03) em comparação com aqueles com o tipo selvagem

KRAS

(N = 116).

para avaliar ainda mais a associação entre

KRAS

mutações e diferentes características clínicas em pacientes com câncer colorretal, nós equipado modelos de regressão logística uni e multivariada. Os modelos univariados sugerido que pacientes com

KRAS

mutações tinham uma probabilidade maior de ter pulmonar (p = 0,02) e metástases ósseas (p = 0,03) (Tabela 2). Nós montado um modelo multivariado incluindo as variáveis ​​com valores p 0,5 no modelo completo. Após a selecção do modelo para trás, o modelo multivariada mostrou que o aumento metástases pulmonares e ósseas e diminuiu metástases adrenais estão significativamente associados com

KRAS

mutações (Tabela 2)

características moleculares.

cento-e-sessenta e oito pacientes tiveram testes tanto para

KRAS Comprar e

PIK3CA

mutações. Metade dos pacientes testados (N = 84) tinha um

KRAS

mutação e meio (N = 84) não o fez. Comparado ao

KRAS

pacientes do tipo selvagem, os pacientes abrigando

KRAS

mutações mais frequentemente tinha

PIK3CA

mutações (21% [18/84] vs. 8% [7 /84], p = 0,03). Como relatado anteriormente,

BRAF

e

KRAS

mutações eram mutuamente exclusivas (173 pacientes testados para ambos) (Tabela 1). [6]

PIK3CA

mutações foram significativamente associados com

KRAS

mutações em modelos univariados (p = 0,03). De interesse, quando introduzimos características moleculares para o modelo multivariado clínica (isto é,

PIK3CA

status), a única variável associada com

KRAS

mutações foi

PIK3CA

(não dados mostrados).

KRAS

Mutações foram associados com uma Shorter OS

Foi realizada uma análise univariada de sobrevivência para diferentes características dos pacientes, incluindo idade, sexo, raça, tipo de tumor (vs. mucinoso não), estágio de Duke no momento do diagnóstico, local do tumor primário,

KRAS

,

BRAF Comprar e

PIK3CA

mutações. Na análise multivariada, a etapa de Duke no momento do diagnóstico e

KRAS

estatuto foram preditores significativos de sobrevivência (

KRAS

HR 1,71; IC 95% 1,11-2,62) (Tabela 3). O OS mediano desde o diagnóstico de pacientes com

KRAS

mutações foi de 57,5 ​​meses (95% CI: 50.0-64.8 meses), enquanto que para

KRAS

pacientes do tipo selvagem, o OS mediana foi de 89,5 meses (IC 95% 63.5-120.1 meses) (log-rank p = 0,007) (Figura 1).

Os pacientes com

KRAS

mCRC do tipo selvagem tinha mais OS comparação com

KRAS

pacientes mutantes (marcas de escala representam pacientes ainda vivos no momento do último follow up).

Nós também avaliou se os diferentes tipos de

KRAS

mutações eram associada com a sobrevivência. Não foram encontradas diferenças de OS em diferentes tipos de

KRAS

mutações. Por exemplo, o OS mediana para pacientes com uma mutação códon 12 foi de 57,5 ​​meses (IC 95% 50-62.2 meses) ea sobrevida média para pacientes com uma mutação códon 13 foi de 56,8 meses (IC 95% 28.8- não estimável) (log -rank p-valor = 0,52). Nós ainda avaliado SO, tal como definido pelo tipo específico de aminoácido envolvidos nas diferentes mutações. Para esta análise mantivemos apenas subgrupos com pelo menos 10 observações (Tabela S1). Não houve diferença no OS. No entanto, o número de pacientes em cada grupo subtipo era pequeno, variando de 11 a 31, o que impede conclusões definitivas.

Avaliação da “PIK3CAness”

Características Clínicas.

Para avaliar a associação entre

PIK3CA

mutações e diferentes características clínicas em pacientes com câncer colorretal, tentamos encaixar modelos de regressão logística simples e múltipla. O modelo univariado sugerido que pacientes com

PIK3CA

mutações mais frequentemente tinham tumores mucinosos (p = 0,04). Eles também tinham uma tendência a ter metástases hepáticas menos freqüentes em comparação com pacientes com

PIK3CA

do tipo selvagem tumores (OR 0,40, p = 0,07) (Tabela 4). Na análise multivariada, tumor mucinoso foram marginalmente significante (p = 0,05), com pacientes com tumor mucinoso mais frequentemente ter

PIK3CA

mutações (OR 2,61; IC 95% 0,99-6,87). Além disso, a idade mostrou uma tendência de semana (valor-p = 0,15), com pacientes mais velhos com menos frequência com

PIK3CA

mutações (OR 0,52; IC 95% 0,22-1,26). Como mencionado anteriormente,

PIK3CA

status não era uma sobrevivência previsão variável independente na análise multivariada.

características moleculares.

168 (71%) pacientes foram testados para

PIK3CA

mutações. Dos 143 pacientes com o tipo selvagem

PIK3CA

, 66 (46%) tiveram

KRAS

mutações. Dos 25 (15%) pacientes com

PIK3CA

mutações, 18 (72%) tiveram

KRAS

mutações (p = 0,03) (Tabela 1). Dos 147 pacientes testados para ambos

PIK3CA Comprar e

BRAF

, um paciente (0,7%) tiveram ambas as mutações. Um relatório recente mostrou que

PIK3CA

mutações no exon 20 foram envolvidos na resistência a terapias anti-EGFR, enquanto que mutações no exon 9 não foram. [6] Além disso, embora

KRAS

mutações são acreditados para prever a resistência ao tratamento inibidor EGFR, um subconjunto de indivíduos com

KRAS

mutações p.G13D pode ainda beneficiar das terapias anti-EGFR. [3] Nós, portanto, analisou coexistentes

PIK3CA

mutações (exão 9 e 20) em pacientes com

KRAS

mutações. Descobrimos que pacientes com

KRAS

mutações p.G13D teve a menor incidência de

PIK3CA

mutações (10%) em comparação com pacientes com

KRAS

p.G12A (36% tinha

PI3KCA

mutações), p.G12C (33%), p.G12D (22%) e p.G12V (12%). Além disso, nenhum dos nove pacientes com

KRAS

mutações p.G13D teve um

PIK3CA

mutação no exão 20, enquanto que

PIK3CA

mutações no exon 20 foram encontrados em todos os outros tipos de

KRAS

mutações (Tabela S2). No entanto, o pequeno número de pacientes impede de tirar conclusões estatisticamente significativas.

PFS em tratamento anti-EGFR.

Foram analisados ​​PFS nos doentes tratados com terapias anti-EGFR (cetuximab ou panitumumab). Os pacientes com

KRAS mutante

mCRC tratados com terapias anti-EGFR (N = 24) tiveram PFS mais curtos em comparação com pacientes com o tipo selvagem

KRAS

(N = 98) (15 vs. 22 semanas , p = 0,01). Dentro do grupo de pacientes testados para

PIK3CA

mutações que receberam terapias anti-EGFR, pacientes com

PIK3CA

mutações (N = 9) tiveram uma tendência para uma PFS mais curtas do que

PIK3CA

pacientes do tipo selvagem (N = 82) (17 vs 22 semanas, p = 0,07) (Figura S1)

resposta a PI3K /Akt /mTOR inibidores ou MAP Kinase Pathway Inibidores:. impacto da coexistência de

PIK3CA

e

KRAS

mutações

Oitenta pacientes foram tratados em 1 protocolos fase contendo inibidores /mTOR PI3K /Akt (NCT00454090, NCT00554268, NCT00610493, NCT00687622, ​​NCT00726583, NCT00731263 , NCT00756847, NCT00761644, NCT00770731, NCT00880321, NCT00920257, NCT00940381, NCT00972686, NCT01054313, NCT01072175, NCT01087554, NCT01087983, NCT01138085, NCT01155453, NCT01263145) (www.clinicaltrials.gov). Setenta e oito pacientes foram avaliáveis ​​para resposta por RECIST (Figura 2). Destes 78 pacientes, 43 tinham um

KRAS

mutação nos seus tumores e 35 foram

KRAS

de tipo selvagem. Dos 43 pacientes com

KRAS

doença -mutant, 9 (21%) atingiram SD ≥6 meses /CR /PR; dos 33 pacientes com

KRAS

do tipo selvagem, 9 (27%) tiveram SD ≥ 6 meses /CR /PR (teste exato de Fisher p = 0,59).

Quinze pacientes com

PIK3CA

mutações foram tratados com inibidores de PI3K /Akt /mTOR, e um (7%) tiveram SD ≥ 6 meses /CR /PR; 10 desses pacientes (67%) tiveram uma concomitante

KRAS

mutação e nenhum teve um

BRAF

mutação. Sessenta e três pacientes com o tipo selvagem ou desconhecida

PIK3CA

estatuto foram tratados com inibidores de PI3K /Akt /mTOR, e 17 (27%) tiveram SD ≥ 6 meses /CR /PR (teste exato de Fisher para SD ≥ 6 meses /CR /PR em

PIK3CA

mutante vs. do tipo selvagem p = 0,17); 33 destes pacientes (52%) tinha um

KRAS

mutação.

Um total de 10 pacientes foram tratados com inibidores da via MAPK (geralmente inibidores BRAF ou MEK). Desses pacientes, quatro tiveram

BRAF Comprar e cinco tiveram

KRAS

mutações. Nenhum deles tinha

PIK3CA

mutações. Nenhum destes pacientes tinha SD ≥ 6 meses /CR /PR (figura 2).

Discussão

Em 238 pacientes com câncer colorretal referido nossa unidade de ensaios clínicos, verificou-se que 122 (51 %) tiveram

KRAS

mutações. O mais frequente

KRAS

subtipos de mutação foram p.G12D (31 pacientes [25%]), seguido por p.G12V (23 pacientes [19%]), p.G12A (14 pacientes [11%]) e p.G13D (13 pacientes [11%]). Esta incidência de

KRAS

subtipos foi consistente com o relatado no Catálogo de Somatic Mutações em Câncer (COSMIC) de banco de dados (www.sanger.ac.uk/genetics/CGP/cosmic/accessed em 17 de Junho

th, 2011). Na análise multivariada das características clínicas,

KRAS

mutações foram associados com o aumento da incidência de pulmão e metástases ósseas (p = 0,05 para cada variável) e diminuição da incidência de metástases adrenais (p = 0,04) em comparação com

KRAS

pacientes do tipo selvagem. Estudos anteriores descobriram uma maior probabilidade de metástases pulmonares em doentes com mCRC com

KRAS

mutações. [8], [9] No nível molecular, os pacientes abrigando

KRAS

mutações mais frequentemente tinha concomitante

PIK3CA

mutações em comparação com indivíduos com o tipo selvagem

KRAS

(21 % vs. 8%, [p = 0,03]). Além disso, 72% dos pacientes com

PIK3CA

mutações também tinha um

KRAS

mutação enquanto apenas 46% dos pacientes com o tipo selvagem

PIK3CA

teve um

KRAS

mutação (p = 0,03).

PIK3CA

mutações foram significativamente associados com

KRAS

mutações em ambos os modelos uni e multivariada.

O sistema operacional médio desde o momento do diagnóstico para pacientes com

KRAS

mutações foi mais curto do que para aqueles com o tipo selvagem

KRAS

(57,5 vs 89,5 meses, p = 0,007) (Figura 1). Além disso, na análise multivariada, a etapa de Duke no momento do diagnóstico e

KRAS

estatuto foram preditores independentes significativos de sobrevivência.

BRAF

mutações foram recentemente encontrados para ser prognóstico para mais curto OS em pacientes com mCRC. [10], [11] No entanto, o papel da

KRAS

status como um preditor de OS é controversa. Um estudo retrospectivo anterior, incluindo 3.439 pacientes em uma análise de sobrevida multivariada constatou que apenas as mutações p.G12V foram preditivos de sobrevida. Curiosamente, a incidência de mutações p.G12V em que o estudo foi consideravelmente inferior do que a relatada no banco de dados cósmica (8% vs. 23%). Um estudo recente mostrou aumento OS em pacientes com

KRAS

do tipo selvagem mCRC tratado com melhores cuidados de suporte em comparação com pacientes com

KRAS

-mutant mCRC. [1] No entanto, após a progredir em cuidados de suporte, os pacientes com

KRAS

do tipo selvagem foram autorizados a atravessar para panitumumab; portanto, o efeito do tratamento não pode ser completamente descartada. Não está claro por que diferentes estudos mostram dados conflitantes sobre o efeito prognóstico da

KRAS

, embora seja possível que isto está relacionado com a terapia dada e /ou outros factores de selecção.

Na análise univariada, pacientes com

PIK3CA

mutações mais frequentemente tinham tumores mucinosos (p = 0,04), e tendem a ter menos frequência metástases hepáticas em comparação com pacientes com

PIK3CA

tumores do tipo selvagem. Apenas a associação com tumor mucinoso foi (marginalmente) significativo na análise multivariada (p = 0,05).

PIK3CA

status não era uma sobrevivência previsão variável independente na análise multivariada. No nível molecular, 72% dos pacientes com

PIK3CA

mutações tinham coexistindo

KRAS

mutações. De possível interesse, os pacientes com mutação

PIK3CA

tinha uma tendência a um PFS mais curtos quando tratados com terapias anti-EGFR do que aqueles com o tipo selvagem

PIK3CA

(mediana = 22 semanas contra 17 semanas , p = 0,07). Outros relatórios sugerem também que os pacientes com

PIK3CA

mutações são menos sensíveis a terapias anti-EGFR. [4] No entanto, uma análise multicêntrico recentemente descobriu que apenas

PIK3CA

mutações no exon 20 foram associados a um pior prognóstico após o tratamento com cetuximab. [6] Apesar de várias linhas de evidências indicam que os pacientes com câncer colorretal e

KRAS

mutações fazem mal com inibidores de EGFR, dados recentes sugerem que os indivíduos com

KRAS

p.G13D mutação pode beneficiar inibidores de EGFR. [3] Nós, portanto, analisou pacientes com p.G13D

KRAS

mutações para exão 20

PIK3CA

mutações e não encontrou nenhuma, considerando que estas mutações foram encontradas em outro

KRAS

subtipos mutantes. No entanto, o pequeno número de pacientes avaliados impede conclusões definitivas. Pode ser o caso de avaliar, em estudos prospectivos, com ou sem co-existência do exão 20 mutado

PIK3CA

em certos subtipos de

KRAS

doença mutante poderia contribuir para a resistência aos inibidores EGFR.

Oitenta pacientes foram tratados em protocolos contendo inibidores PI3K /AKT /mTOR, dos quais 78 (98%) foram avaliável. 23% SD alcançado ≥6 meses /CR /PR. Não houve diferença significativa na taxa de SD ≥ 6 meses /CR /PR entre aqueles com o tipo selvagem ou mutante

KRAS

. De interesse, apenas 1 paciente com um

PIK3CA

mutação alcançado SD ≥6 meses /CR /PR quando tratados com uma PI3K /Akt /inibidor da mTOR. A maioria destes doentes (67%) tinham co-existente

KRAS

mutações, o que pode explicar a sua resistência. De facto, a activação da via de MAPK foi recentemente proposta como um mecanismo de resistência a inibidores de PI3K. [12] Mesmo assim, pode ser de interesse que, entre os 13 pacientes que tiveram algum tipo de redução tumoral, 7 tinham

KRAS

mutação. Este último sugere que, embora as taxas de SD ≥ 6 meses /CR /PR foram baixos, e os pacientes com co-existente

KRAS Comprar e

PIK3CA

mutações não respondeu, a presença de um

KRAS

mutação por si só não é um indicador absoluto de resistência completa à terapia PI3K /Akt /mTOR à base de inibidor. Nós informou recentemente que a coexistência de

PIK3CA

e

KRAS

mutações não foi preditivo de resistência ao PI3K /Akt /mTOR em pacientes com câncer de ovário. [13] Certamente, o contexto do tipo de doença tem um papel e as mutações adicionais não incluídos nesta análise podem afetar a resposta a estas terapias. Um trabalho recente mostrou que a ativação de uma rede complexa de loops de feedback pode, por exemplo explicar a resistência aos inibidores de BRAF em pacientes com câncer colorretal com

BRAF

mutações. [14]

Inesperadamente, 27% dos pacientes com o tipo selvagem ou desconhecida

PIK3CA

estatuto tratada com uma PI3K /Akt /mTOR inibidor SD atingido ≥6 meses /CR /PR (p = 0,09). É possível que uma aberração molecular na via PI3K /Akt /mTOR existia nestes pacientes, mas não foi reconhecido, e que tal aberração não pode ter a mesma propensão para co-existir com o

KRAS ou

BRAF

mutações. Com efeito, a perda de expressão de PTEN, que geralmente indica um

PTEN

mutação, tem sido relatada em 40% dos pacientes com cancro colorrectal metastático. [15]

Um total de 10 pacientes (nove dos quais tinham

KRAS

ou

BRAF

mutações e nenhum dos quais tinha

PIK3CA

mutações) foram tratados com inibidores da via de MAPK (geralmente inibidores BRAF ou MEK). Embora o número de pacientes são pequenos, nenhum alcançou SD ≥6 meses /CR /PR.

O nosso trabalho tem várias limitações. Em primeiro lugar, este é um estudo retrospectivo em uma única instituição com um número relativamente pequeno de pacientes. Em segundo lugar, não pôde validar taxa de resposta às terapias anti-EGFR como esta informação não estava disponível para muitos dos pacientes que foram tratados em outros animais que MD Anderson instituições antes de ser referido nossa unidade; portanto, o único resultado clínicas disponíveis para estes pacientes foi PFS. Em terceiro lugar, todas as análises mutacionais não pôde ser concluída para todos os pacientes incluídos no estudo por causa de quantidades limitadas de tecido disponível.

Em conclusão, mostramos que

KRAS Comprar e

PIK3CA

mutações são frequentemente associadas em pacientes com câncer colorretal. No contexto dos ensaios clínicos iniciais, as drogas que alvejam da via PI3K /Akt /mTOR teve atividade limitada nesses pacientes, mesmo na presença de

PIK3CA

mutações, possivelmente devido a coexistência frequente de mutações ativadoras na MAPK pathway.

Métodos

os pacientes

foram analisados ​​retrospectivamente as características clínico-patológicas e resultados clínicos de 238 pacientes consecutivos com mCRC que foram vistos na Fase 1 clínica (Clinical Center para Targeted Therapy) da Universidade do Texas MD Anderson Cancer Center a partir de outubro de 2008, e para os quais

KRAS

estatuto era conhecido. Os dados foram coletados a partir de notas transcritas e relatórios de radiologia do banco de dados eletrônico desses pacientes. Os locais de doença metastática foram coletadas a partir do último relatório de radiologia disponível para cada paciente. Patologia foi analisado por um patologista MD Anderson em todos os casos. O Cancer Center Institutional Review Board MD Anderson aprovou o estudo. consentimento por escrito foi dado pelos pacientes para a sua informação a ser armazenada no banco de dados do hospital e usado para a pesquisa.

KRAS, BRAF, PIK3CA

Teste de Mutação

testes de mutação foi feito no Laboratório de diagnóstico Molecular Laboratory Improvement Emenda certificado clínico dentro da Divisão de Patologia e Medicina laboratorial no MD Anderson. DNA foi extraído de tumor embebido em parafina dissecados-micro e analisados ​​por uma reação em cadeia da polimerase (PCR) baseada método de sequenciamento de DNA para examinar códons 12, 13 e 61 da

KRAS

proto-oncogene. A sensibilidade de detecção deste ensaio é de, aproximadamente, 1 em 10 células portadoras da mutação na região microdissecados. Sempre que possível, a análise foi feita para

PIK3CA

mutações nos códons [c] 532-554 do exão 9 (domínio helicoidal) e c1011-1062 do exão 20 (domínio quinase) e

BRAF

C595 -600 mutações do exão 15 por pyrosequencing como anteriormente descrito. [16]

Métodos Estatísticos

A análise estatística foi realizada e validada pelo nosso estatístico (XW). As características dos pacientes estão resumidos meio de estatísticas descritivas. A associação entre o

KRAS

ou

PIK3CA

estado de mutação e características do paciente foi avaliada por meio do teste exato de Fisher. A sobrevivência global (OS) é definido como o intervalo de tempo entre a data do diagnóstico e da morte. Os pacientes que estavam vivos foram censurados na última data de follow-up. sobrevivência livre de progressão (SLP) foi definido como o tempo desde o início do tratamento para a detecção de doença progressiva ou morte. Os pacientes que não progrediu durante o tratamento foram censurados na última data de acompanhamento. As probabilidades de OS e PFS foram estimadas utilizando o método de Kaplan e Meier e comparadas entre os subgrupos de pacientes utilizando o teste de log-rank. [17], [18] modelos de regressão de riscos proporcionais de Cox estavam aptos para avaliar a associação entre o sistema operacional e as características do paciente e

KRAS

estado de mutação. [19] modelos de regressão logística simples e múltipla estavam aptos para avaliar a associação entre o

KRAS Comprar e

PIK3CA

mutação e as características clínicas dos pacientes. Inicialmente, modelos de regressão logística univariadas estavam aptos e variáveis ​​com valores p inferiores a 0,5 foram incluídos no modelo de regressão logística múltipla. Nós, então, realizada seleção de modelos para trás e mantidas apenas as variáveis ​​com valores de p inferior a 0,05. Todas as análises estatísticas foram realizadas utilizando o software SAS (version9.2) e Splus (versão 8.0).

Informações de Apoio

Figura S1.

Kaplan-Meier da sobrevivência livre de progressão (PFS) e

PIK3CA

status em pacientes com mCRC tratados com regimes incluindo terapias anti-EGFR. Os pacientes com mCRC /

PIK3CA

mutante tinha uma tendência para uma PFS mais curtos em comparação com

PIK3CA

pacientes do tipo selvagem

doi:. 10.1371 /journal.pone.0038033.s001

(TIF)

Tabela S1.

Median sobrevida global (OS) para cada grupo de

KRAS

mutações.

doi: 10.1371 /journal.pone.0038033.s002

(DOCX)

Tabela S2.

Tipo de

PIK3CA

mutações encontradas em pacientes com

KRAS

mutações *.

doi: 10.1371 /journal.pone.0038033.s003

(DOCX)

Reconhecimentos

Joann Aaron, MA, para a edição científica

.