Abstract

Fundo

expressão alterada de expressão miRNA contribui para carcinogênese humana. Este estudo foi desenhado para detectar expressões miRNA aberrantes como um potencial biomarcador para a detecção precoce e previsão prognóstico de câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC).

Métodos

array miRNA foi usada ao perfil diferencialmente expressa miARNs e ensaios quantitativos baseados em Taqman de RT-PCR foram utilizados para analisar os níveis de miR-29c, miR-93, e miR-429 de expressão em amostras de tecido de NSCLC, amostras de tecidos normais correspondentes, e as amostras de soro de 70 pacientes com NSCLC, bem como em amostras de soro de 48 controles saudáveis.

Resultados

Os níveis de miR-29c e miR-93 expressão foram regulados positivamente em tecidos NSCLC, enquanto os níveis séricos de miR-29c também foram regulados positivamente, mas os níveis de soro de miR-429 foram reduzidas em NSCLC. Além disso, os níveis de expressão de miR-429 em tecidos NSCLC foram associados com aqueles em amostras de soro. Receiver operating characteristic (ROC) análise da curva mostrou que, no ponto de corte ideal, as áreas sob a curva ROC para os níveis séricos de miR-29c e miR-429 foram 0,723 e 0,727, respectivamente, níveis que são mais altos do que a de carcinoma antígeno embrionárias (0,534) no diagnóstico da fase I NSCLC. Além disso, os níveis séricos de miR-429 foram associados com fraca sobrevivência global dos doentes com NSCLC. Ambas as análises uni e multivariada mostrou que o soro miR-429 de nível foi um preditor prognóstico independente para NSCLC.

Conclusões

Os resultados do estudo sugerem que a detecção de soro de miR-29c e miR- 429 expressão deve ser avaliada como um romance, biomarcador não invasivo para fase inicial NSCLC

Citation:. Zhu W, Ele J, Chen D, Zhang B, Xu L, Ma H, et al. (2014) Expressão de miR-29c, o miR-93, e miR-429 como biomarcadores potenciais para a detecção precoce da fase não-pequenas do pulmão. PLoS ONE 9 (2): e87780. doi: 10.1371 /journal.pone.0087780

editor: Canção Guo Zheng, Penn State University, Estados Unidos da América

Recebido: 12 de novembro de 2013; Aceito: 01 de janeiro de 2014; Publicação: 11 de fevereiro de 2014

Direitos de autor: © 2014 Zhu et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este estudo foi apoiado em parte por doações da Natural Science Foundation da província de Zhejiang (Y2110960), a Secretaria de Ciência e Tecnologia de Zhoushan (10137 e 2011C12039) e do Bureau Médico da Província de Zhejiang (2011KYB165). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

MicroRNAs (miRNAs) são uma classe de pequenos RNAs não-codificantes que podem funcionar como interferência de RNA endógeno para regular a expressão dos genes alvo [1] – [3]. Até à data, um total de 1048 miARNs humanos foram identificadas e relatadas na base de dados de ARN, e este número continua a aumentar. Alguns destes miARNs têm sido relatados como sendo úteis como potenciais marcadores para o diagnóstico, prognóstico e terapia personalizada de cancros humanos [1] – [6], porque a expressão alterada destes miARNs contribui para a carcinogénese humana. Por exemplo, a expressão de miARN aberrante tem sido descrita em cancro do pulmão. Um número de pesquisadores, incluindo nós, relataram o potencial aplicação clínica dos miRNAs (como miR-1254, miR-142-3p, miR-24, miR-183, miR-21, miR-221 em circulação, miR-29c, miR-486, miR-30d, o miR-1, miR-499 e miR-210) [7], [8]. Assim, uma investigação mais aprofundada de expressão miRNA aberrante poderia levar à descoberta de novos biomarcadores de miRNA para câncer de pulmão.

O cancro do pulmão é a principal causa de mortes relacionadas ao câncer em todo o mundo [9]. Apesar dos avanços na detecção precoce e melhorias nas opções de tratamento, os pacientes com doença avançada ainda freqüentemente desenvolvem a doença recorrente após ressecções radicais estendidos, ea taxa de sobrevida global em 5 anos ainda é de apenas 5%. Assim, novas abordagens para gerir eficazmente esta doença ao nível molecular poderá identificar os pacientes que têm um maior ou menor risco de recaída após a cirurgia e fornecer biomarcadores para a predição de sobrevida do paciente. A este respeito, a utilização de soro miARNs como potenciais marcadores para o diagnóstico e avaliação do prognóstico de cancros do pulmão tem sido relatado [7], [10]. De fato, vários estudos identificaram as assinaturas de miRNA que diferem entre os tecidos normais e cancerosos para a classificação dos tipos de câncer e para o diagnóstico do tumor eo prognóstico. Também pode ser possível utilizar a expressão miARN como um biomarcador para monitorizar a eficácia do tratamento ou prever a progressão do cancro [11] – [12]. No entanto, até à data, a maioria dos estudos têm-se centrado sobre o tecido tumoral e alterações nos níveis circulantes de miRNAs séricos e a relação entre essas mudanças e o tecido no início da doença permanecem controversos [7]. Além disso, a utilidade de muitos miARNs circulantes tem sido demonstrada no diagnóstico de NSCLC, mas alguns miARNs circulantes mostrou um valor de diagnóstico para a fase inicial NSCLC [13], [14]. No entanto, é necessária uma verificação mais aprofundada em diferentes populações. Assim, neste estudo, foram analisados ​​os níveis de três miRNAs (miR-29C, miR-93 e miR-429) em câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC) tecidos e comparou-os aos de amostras de soro de pacientes com NSCLC e saudável controlos, em particular, os seus níveis de expressão em pacientes com NSCLC fase precoce. Enquanto isso, analisou-se os dados por comparação com o carcinoma antigénio embrionário (CEA), que é um marcador amplamente utilizado no diagnóstico de NSCLC [15]. Em seguida, investigou as associações entre a sua expressão e os dados clínico-patológicos e de sobrevivência de pacientes com NSCLC.

Materiais e Métodos

Ética Declaração

Este estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Revisão de Zhoushan Prefeitura Municipal de China, e todas as amostras biológicas foram obtidas com consentimento informado por escrito dos pacientes.

As amostras dos pacientes

neste estudo, foram recrutados 70 pacientes com NSCLC cirurgicamente ressecados e combinados tecidos não cancerosos distantes Zhoushan Hospital, Zhejiang, China entre janeiro de 2008 e maio de 2009. Havia 56 masculinos e 14 pacientes do sexo feminino com NSCLC, incluindo 34 pacientes com menos de 60 anos e 36 com mais de 60 anos. Enquanto isso, os soros de todos os pacientes com NSCLC e 48 voluntários saudáveis ​​pareados por sexo e idade, também foram coletadas. Nenhum dos pacientes incluídos no estudo tinham recebido qualquer quimioterapia ou radioterapia antes da cirurgia. Para a recolha da amostra de tecido, mediante a remoção dos espécimes cirúrgicos, os tecidos foram imediatamente transportadas para o laboratório de patologia e as amostras foram colocadas num frasco de congelação, congelados instantaneamente em azoto líquido durante 30 min, e armazenado a -80 ° C até à sua utilização . Todas as amostras de tecido foram analisados ​​por dois patologistas, eo diagnóstico foi feito de acordo com os critérios da National Comprehensive Cancer Network (NCCN). Havia 34 adenocarcinomas do pulmão e 36 de pulmão carcinomas de células escamosas, e 46 tumores foram moderadamente a altamente diferenciados, ao passo que 24 eram pouco diferenciado. Além disso, 18 pacientes com NSCLC tinha um tumor menos de 3 cm de tamanho, enquanto que 52 pacientes com um tumor maior que 3 cm. Metástase linfática foi encontrada em 32 pacientes, e 36 pacientes tiveram fase I NSCLC e 34 pacientes tiveram a fase II, III ou IV NSCLC (Tabela 1). Além disso, os níveis séricos de CEA foram medidos através de quimiluminescência como parte de testes clínicos de rotina e valor de referência foi adquirida a partir da base de dados clínica em Zhoushan Hospital.

isolamento do RNA e RT-PCR quantitativo

o ARN celular total foi isolado a partir de 100 mg do tecido pulmonar ou 600 ul de amostras de soro utilizando um kit de isolamento de miARN ou miRvana PARIS kit de isolamento de ARN (Applied Biosystems, Foster City, CA, EUA) de acordo com o protocolo do fabricante. A concentração de RNA foi determinada utilizando um espectrofotómetro NanoDrop ND-1000 (NanoDrop Technologies, Wilmington, DE, EUA), e a qualidade de ARN foi medida usando um gel desnaturante de poliacrilamida a 15%. A reacção de transcrição reversa foi realizada utilizando o kit TaqMan MicroRNA Transcrição Reversa (Applied Biosystems) de acordo com as instruções do fabricante, num volume total de reacção de 7,5 ul. qPCR foi realizado em triplicado utilizando TaqMan 2 × Universal PCR Master Mix sem AmpErase UNG (Applied Biosystems) em um tempo real do sistema ABI 7500 PCR (Applied Biosystems) com as seguintes condições: 95 ° C durante 10 min, seguido de 40 ciclos de 95 ° C durante 15 s e 60 ° C durante 1 min. Os valores limite de ciclo (Ct) foram calculados utilizando SDS 2.0.1 software (Applied Biosystems). controles free-modelo tanto para RT e PCR foram incluídos em cada experiência para garantir a amplificação específica do destino.

Os níveis médios de expressão miRNA em tecidos e soros foram normalizados em relação aos valores médios de U6 snRNA e U48 snRNA usando o

-ΔΔCt método 2 [16] – [17]. Os valores médios para estas cinco Ct miARNs foram calculados excluindo valores aberrantes (isto é, com valores de Ct replica se afasta mais do que um ciclo da mediana). Além disso, se CtU6, av e CtU48, AVE cada não ocorrer dentro de 32 ciclos, o ensaio foi repetido. As amostras com níveis U48 snRNA U6 baixo ou não foram excluídos da análise de dados.

A análise estatística

Todas as análises estatísticas foram realizadas utilizando GraphPad Prism 5.0 software (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, EUA). Os dados foram analisados ​​utilizando a homogeneidade da variância. ANOVA one-way ou Wilcoxon testes de duas amostragens foram usadas para testar a associação entre os níveis de expressão de miRNA e características clinicopatológicas dos pacientes. Uma amostra de teste t pareado foi usado para comparar as diferenças na expressão de miARN entre o tecido do pulmão e as amostras de soro. operating characteristic (ROC) do receptor foram gerados para avaliar a precisão do diagnóstico de cada parâmetro. sobrevida do paciente foi estimada pelo método de Kaplan-Meier, eo teste de log-rank foi utilizado para comparar a sobrevivência entre os grupos. O modelo de regressão de risco de Cox foi usado para analisar os fatores de risco para NSCLC. Todos os testes estatísticos foram em frente e verso, e uma

P valor

de 0,05 foi considerado estatisticamente significativo.

Resultados

A expressão diferencial de três miRNAs no tecido e paciente soros NSCLC

com base em nossa matriz de miRNA (Agilent) e dados de validação, foram selecionados três miRNAs (miR-29C, miR-93 e miR-429) para um estudo mais aprofundado em amostras de NSCLC. Foram realizadas análises de qRT-PCR para estes três miRNAs em 70 pares de NSCLC e tecidos do pulmão não cancerosos correspondentes. Os nossos dados mostraram que os níveis de miR-29c e miR-93 foram regulados positivamente a expressão em tecidos NSCLC em comparação com os tecidos do pulmão não cancerosos correspondentes (

P = 0,0408

e

P

= 0,0444, respectivamente), Considerando que miR-429 níveis não foram significativamente diferentes entre NSCLC e tecidos do pulmão não cancerosos (

P

= 0,3903, Figura 1A).

a, detecção de qRT-PCR de três miRNAs em 70 tumores NSCLC e os correspondentes tecidos normais do pulmão.

P

-Valores para miR-29c, miR-93 e miR-429 foram 0,0408, 0,0444 e 0,3903, respectivamente, utilizando uma amostra emparelhada

t

-teste. B, análise de qRT-PCR de níveis de miARN no soro em amostras de soro de 70 pacientes com NSCLC versus 48 controlos saudáveis.

P

-Valores de soro de miR-29c, miR-93 e miR-429 foram 0,0012, 0,9291 e 0,0001, respectivamente, utilizando um teste t de amostra não pareado. C, D, E, associação destes níveis de miARN entre NSCLC tecido e amostras de soro. teste de correlação de Pearson mostraram que a expressão de miR-429 no soro foi significativamente associada com isso em tecidos NSCLC (r = 0,3578,

P

= 0,0024), enquanto que os níveis séricos de miR-29c e miR-93 não foram associados com aqueles em tecidos NSCLC (r = -0,07877,

P

= 0.5169 e r = 0.1515,

P

= 0.2105, respectivamente). *

P Art 0,05 entre os grupos

Em seguida, investigou se estas diferenças na expressão miRNA estavam presentes em amostras de soro de pacientes.. Descobrimos que a expressão soro miR-93 não foi diferente entre pacientes com NSCLC e controles saudáveis ​​(

P

= 0.3530). No entanto, a expressão de miR-29c foi significativamente aumentada no soro de doentes com NSCLC (

P

= 0.0012), e miR-429 de expressão foi significativamente diminuída (

P

= 0,0001, Figura 1B). O nível sérico de expressão de miR-429 foi significativamente correlacionada com isso em tecidos NSCLC (r = 0,3578,

P

= 0,0024, Figura 1E), enquanto que os níveis séricos de miR-29c e miR-93 expressão não foram associados com os de tecidos NSCLC (r = -0,07877,

P

= 0,5169 e r = 0,1515,

P

= 0,2105, respectivamente, Figura 1C e D).

Associações entre a expressão de miRNA alterado e características clínicas de NSCLC

a seguir, investigou as associações entre os níveis alterados de miRNA expressão (miR-29c e miR-93 em NSCLC e miR-29c e miR-429 no soro) com as características clinicopatológicas dos doentes com NSCLC. Nós descobrimos que o aumento da expressão de miR-93 foi fortemente associada com NSCLC histologia (

P

= 0,031, Tabela 2), enquanto que a expressão de miR-29c soro foi associado com níveis de CEA anormais (

P

= 0,030, Tabela 2). Em contraste, não há outras associações foram detectados entre os níveis de expressão destes miARNs. Além disso, nós plotados dados de expressão de miR-29c e miR-429 utilizando curvas ROC para identificar um valor de corte que pode distinguir pacientes com câncer de pulmão de controles saudáveis. análise da curva ROC mostrou que o ideal de corte, os níveis séricos de miR-29c tinha uma sensibilidade de 65,7% e uma especificidade de 74,1% para distinguir pacientes com NSCLC de controles saudáveis, com uma área sob a curva (AUC) de 0,676 (

P

= 0,0004, 95% intervalo de confiança [CI]: 0,584-,759, Figura 2A). Além disso, os níveis séricos de miR-429 teve uma sensibilidade de 54,3% e uma especificidade de 81,2% para distinguir pacientes com NSCLC de controles saudáveis, com uma AUC de 0,713 (

P Art CI 0,0001, 95%: 0,623 -0,793, Figura 2B). Como o teste CEA sangue é um marcador amplamente utilizado para NSCLC, comparamos os resultados do CEA com os níveis de expressão de miRNA e descobriu que CEA teve uma AUC de 0,576 (

P

= 0,1493, 95% CI: ,482-,666, Figura 2C). No entanto, para a combinação de expressão de miR-29c e CEA, os dados mostraram uma AUC de 0,712 (

P

0,0001, 95% CI: 0,622-0,792); para a combinação de expressão de miR-429 e CEA, a AUC foi 0,707 (

P

= 0,0007, IC 95%: 0,616-0,787); e para a combinação de expressão de miR-29c e miR-429 com o CEA, a AUC foi 0,797 (

P Art 0,0001, IC 95%: 0,713-0,865).

A, miR -29c; B, miR-429; C, CEA mostrou curvas ROC e uma AUC com poder diagnóstico para distinguir pacientes com NSCLC de controles saudáveis. D, miR-29c; E, o miR-429; F, CEA mostrou curvas ROC e um AUC com poder diagnóstico para distinguir a fase I NSCLC pacientes de controles saudáveis.

Além disso, também descobrimos que os níveis séricos de miR-29c tinha uma sensibilidade de 50,0% e uma especificidade de 95,8% para o estágio distintivo I NSCLC de controles saudáveis, com uma AUC de 0,727 (

P

= 0,0001, 95% CI 0,619-,818, Figura 2D). miR-429 teve uma sensibilidade de 94,4% e uma especificidade de 41,7% para o estágio distintivo I NSCLC pacientes de controles saudáveis, com uma AUC de 0,723 (

P

= 0.0001,95% CI 0,615-0,815, Figura 2E) . CEA apresentou uma sensibilidade de 66,7% e uma especificidade de 52,1% para distinguir a fase I NSCLC pacientes de controles saudáveis, com uma AUC de 0,534 (

P

= 0,6040, IC 95% 0,422-0,644, Figura 2F). Além disso, a combinação de expressão de miR-29c e CEA tinha uma AUC de 0,757 (

P

0,0001, 95% CI: 0,651-0,844), a combinação de miR-429 e expressão de CEA tinha uma AUC de 0,659 (

P CI

= 0,0128, 95%: ,547-,759), ea combinação de expressão de miR-29c, miR-429 expressão, e CEA teve uma AUC de 0,833 (

P

0,0001, IC 95%: 0,736-0,906)

Associação entre soro miR-429 nível e sobrevivência das NSCLC pacientes

Porque a expressão dos três miRNAs testados foi alterada em NSCLC amostras de tecido e soro, nós ainda avaliou se a detecção dos seus níveis poderia predizer o prognóstico em pacientes com NSCLC. Nós descobrimos que o nível sérico de expressão de miR-429 foi associado com a sobrevida global dos pacientes com NSCLC (

P

= 0,0030 usando um teste Log-rank, Figura 3). No entanto, a expressão de miR-29c, o miR-93, e miR-429 em tecidos NSCLC e os níveis séricos de miR-29c e miR-93 não estavam associados com a sobrevivência global dos doentes com NSCLC. A análise de regressão de risco Cox univariada demonstrou que os níveis séricos de miR-429 era um indicador de prognóstico significativo de NSCLC (CI razão de risco ajustada = 6.458, 95%: 1,409-29,593,

P

= 0,016). A análise de regressão de risco multivariada Cox proporcional mostraram que os níveis séricos de miR-429 foram um preditor independente de prognóstico para pacientes com NSCLC (taxa de risco = 12.875, 95% CI: 2,295-72,230,

P

= 0,004, Tabela 3) .

P

-valor para a sobrevivência de pacientes com altos e baixos níveis de expressão miRNA foi calculada pelo teste de log-rank. *

P

. 0,05 entre os grupos

Discussão

Neste estudo, foi analisada a expressão de três miRNAs, selecionados com base em nosso anterior dados de matriz e validação de miRNA, em amostras de tecido e soro NSCLC de associação com os dados clínico-patológicos e sobrevida dos pacientes. Descobrimos que o miR-29c e miR-93 de expressão foi regulado positivamente em tecidos NSCLC em comparação com os tecidos do pulmão não cancerosos correspondentes. Além disso, os níveis séricos de miR-29C foram significativamente aumentada e níveis séricos de miR-429 foram significativamente diminuída na fase I NSCLC em comparação com os níveis em 48 controlos saudáveis. Além disso, descobrimos que o menor níveis séricos de miR-429 foram associados com pior sobrevida global dos pacientes com NSCLC. As análises uni e multivariada mostrou que o nível sérico de miR-429 foi um preditor independente da sobrevida global dos pacientes com NSCLC. Os nossos dados actuais indicam que a detecção de soro de miR-29c e expressão de miR-429 deve ser avaliada como um biomarcador não invasivo novo para a fase inicial do NSCLC.

De facto, até à data, um grande número de estudos têm demonstraram que a expressão alterada de miARNs específicos desempenha um importante papel na tumorigénese humana devido às funções destes miARNs como supressores de oncogenes ou genes [17] – [19]. Assim, a detecção de níveis de expressão de miARN aberrantes pode ser utilizado para o diagnóstico precoce de cancros ou previsão do prognóstico humanos porque miARNs são mais estáveis ​​e resistentes a ARNase A digestão e outras condições adversas que são marcadores tradicionais de proteínas [7], [10], [ ,,,0],17], [20]. Por exemplo, Chen

et al

[10] mostrou que miRNAs são estáveis ​​no soro circulante e pode servir marcadores de diagnóstico como potenciais para o câncer de pulmão. Hu

et al

[7] relatou que quatro miRNAs são preditores independentes de sobrevida global em pacientes com câncer de pulmão. Le e colegas [20] mostraram que os níveis séricos de miRNAs são diferentes em amostras pré e pós-operatório de câncer de pulmão e que esses miRNAs podem potencialmente ser usados ​​como biomarcadores para a recorrência da doença após a cirurgia. No entanto, poucos estudos têm-se centrado sobre o papel de diagnóstico de miRNAs na fase inicial NSCLC [13], [14]. No presente estudo, analisamos a expressão de três miRNAs em tecidos NSCLC e amostras de soro para o seu valor potencial no diagnóstico precoce e prognóstico de pacientes com NSCLC. Os nossos dados mostraram que os níveis de miR-29c e miR-93 foram regulados positivamente a expressão em tecidos NSCLC em comparação com os tecidos do pulmão não cancerosos correspondentes. Além disso, os dados ROC mostrou que as AUCs para miR-29c e miR-429 foram 0,723 e 0,727, respectivamente, e estes valores foram significativamente mais elevados do que para CEA (0,534), na fase I NSCLC pacientes, sugerindo que estes miARN pode ser utilizado para diagnóstico precoce do NSCLC. CEA é um biomarcador amplamente utilizado no diagnóstico de NSCLC e foi escolhido como um controlo positivo [15]. Na verdade, Heegaard

et al

[8] mostraram que a expressão de miR-29c foi significativamente aumentada em 220 pacientes com NSCLC em estágio inicial em comparação com 220 controles pareados. Em outros estudos, o miR-93 foi encontrada expressão para promover a angiogénese de tumores e metástases, suprimindo grande supressor de tumor homologia dois expressão [21] – [22]. No entanto, o miR-429 é um membro da família de miR-200 que foi mostrado anteriormente para inibir a transição epitelial-mesenquimal-a através do controlo de E-caderina, ZEB1, e expressão SIP1 [23] – [25]. Nenhum estudo revelou ainda o seu papel no diagnóstico e prognóstico das NSCLC. No presente estudo, nós, pela primeira vez mostraram que a expressão de miR-429 em soro foi regulada negativamente em doentes com NSCLC em comparação com controlos saudáveis ​​e que a menor expressão de miR-429 foi associada com fraca sobrevivência global dos doentes com NSCLC, sugerindo o miR-429 expressão é um indicador prognóstico independente para NSCLC. Além disso, descobrimos que os níveis séricos de miR-429 foram significativamente associados com a expressão de miR-429 em tecidos NSCLC, o que levou à hipótese de que as células tumorais podem utilizar miARNs para transportar a informação genética para as células circundantes ou distantes, promovendo assim o crescimento de tumores e progressão [26]. Em nosso estudo anterior, informamos que os níveis séricos e tumorais de miR-96 foram associados [18], apoiando a noção de que alguns miRNAs poderia ser secretada a partir de tecido tumoral e promover a progressão do câncer, que também é consistente com os relatórios de Mitchell

et al

[17] e Hu

et al

[7].

Vários estudos têm demonstrado que a detecção de miRNAs soro poderia ser particularmente útil para o diagnóstico precoce dos cancros clinicamente assintomáticos [ ,,,0],27] – [29]. Por exemplo, em estudos de câncer de pulmão anteriores, os níveis de miR-1254, miR-574-5p, miR-486, miR-30d, miR-1 e miR-499 expressão foram significativamente desregulado no câncer de pulmão em estágio inicial [7] , [30]. Chen

et al

[31] demonstraram através de perfis que 10 miRNAs soro pode servir como novos biomarcadores não invasivos para diagnóstico de câncer de pulmão. Keller

et al

[32] também sugeriu que desenvolver câncer de pulmão pode ser anos detectáveis ​​antes do diagnóstico através de uma assinatura miRNA específico e que esta assinatura alterações durante o desenvolvimento do tumor. Parcialmente consistente com os resultados destes estudos, os resultados do nosso estudo demonstram a utilidade dos três miARNs ensaiados, que eram mais sensíveis do que o CEA para detectar a fase I NSCLC. No entanto, nossos dados atuais são a prova de princípio, e ainda um estudo prospectivo com uma amostra maior será verificar se a detecção destes miRNAs é útil para o diagnóstico precoce da fase I NSCLC e previsão de sobrevida em pacientes com NSCLC.

Foram encontradas diferenças na expressão de três miRNAs entre tecidos NSCLC e tecidos do pulmão não cancerosos correspondentes. Importante, identificou-miR-29c e miR-429 como desregulado na circulação de amostras de soro de doentes com NSCLC fase inicial, e a expressão destes miARNs foi mais sensível do que os níveis de soro de CEA em pacientes com NSCLC distinguir dos controlos saudáveis. Além disso, nós também identificou diminuição soro expressão de miR-429 como um biomarcador prognóstico independente para NSCLC. O valor clínico dos três miRNAs testados no diagnóstico e prognóstico de mandados de NSCLC uma análise mais aprofundada em coortes maiores.