Abstract
Fundo
antígeno específico da próstata no soro (PSA ) é o marcador mais utilizado para o diagnóstico de cancro da próstata (CaP). Ela carece de especificidade e valor preditivo, resultando em diagnósticos imprecisos e overtreatment da doença. O objetivo deste estudo foi avaliar a utilidade da telomerase plasma transcriptase reversa (hTERT) mRNA como uma ferramenta de diagnóstico e prognóstico para APC e sua associação com os parâmetros clínico de tumores.
principais conclusões
os níveis de ARNm da hTERT de plasma foram determinadas por qRT-PCR em 105 pacientes consecutivos com níveis elevados de PSA e em 68 voluntários saudáveis. A precisão do diagnóstico, a eficácia como fator prognóstico de recorrência bioquímica ea associação com tumor parâmetros clínico de hTERT mRNA plasma e testes de PSA no soro foram determinados usando univariada e multivariada. Os resultados mostram que o plasma hTERT mRNA é um biomarcador não invasivo para o diagnóstico CaP que mostra uma sensibilidade mais elevada (85% vs 83%), especificidade (90% vs 47%), valor preditivo positivo (83% vs 56%) e valor preditivo negativo (92% vs. 77%) do que PSA soro. hTERT mRNA plasma é significativamente associada com os parâmetros clínico pobre tumorais prognóstico e é um preditor independente significativo da PCA (p 0,0001). A análise univariada plasma identificadas mRNA hTERT (mas não PSA) como um fator prognóstico significativo de recorrência bioquímica. curvas hTERT mRNA Plasma Kaplan-Meier confirmou as diferenças significativas entre os grupos e pacientes com níveis mais elevados do que o valor de cut-off mostrou sobrevida livre de recidiva diminuída (p = 0,004), enquanto nenhuma diferença foi observada com PSA sérico (p = 0,38). A análise multivariada mostrou que o plasma mRNA hTERT (mas não PSA) e estágio foram significativamente associados com recorrência bioquímica.
Conclusões
No geral, estes resultados indicam que hTERT mRNA é um tumor não-invasivo útil marcador para o diagnóstico molecular da APC, proporcionando uma precisão de diagnóstico e prognóstico maior do que o ensaio de PSA e podem ser de relevância no seguimento da doença
Citation:. março-Villalba JA, Martínez-Jabaloyas JM , Herrero MJ, Santamaria J, Alino SF, dasi F (2012) Cell-livre circulação hTERT mRNA Plasma é um marcador útil para o diagnóstico do cancro da próstata e está associada com mau prognóstico características do tumor. PLoS ONE 7 (8): e43470. doi: 10.1371 /journal.pone.0043470
editor: Rui Medeiros, IPO, Inst Porto Oncology, Portugal |
Recebido: 30 de abril de 2012; Aceito: 20 de julho de 2012; Publicação: 20 de agosto de 2012
Direitos de autor: © Março-Villalba et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados
Financiamento:. Os autores não têm financiamento ou apoio ao relatório
Conflito de interesses:.. os autores declararam que não existem interesses conflitantes
Introdução
o câncer de próstata (PCA) é, com exceção de câncer de pele, o cancro mais frequentemente diagnosticado entre os homens em sociedades desenvolvidas e a segunda causa de morte por câncer, após o cancro do pulmão [1]. Diagnóstico de CaP aumentou dramaticamente ao longo da última década, em grande parte graças ao uso extensivo de testes antígeno específico da próstata no soro (PSA) [2]. Quando PSA sobe acima do limite de 2,5-4,0 ng /ml, o paciente é muitas vezes considerado um candidato para uma biópsia, a fim de afastar o risco de câncer. No entanto, o uso de soro PSA para rastrear PCA é controversa e não é recomendado por unanimidade pela comunidade médica internacional. Esta discrepância deve-se ao fato de que o teste de PSA tem especificidade limitada e valor preditivo, resultando em um número significativo de falsos positivos e, consequentemente, biópsias desnecessárias [3].
Existem várias razões pelas quais é difícil para interpretar o teste PSA e para tomar uma decisão precisa sobre se deve ou não realizar uma biópsia. Em primeiro lugar, até 15% dos casos de cancro (alguns deles de alto grau CaP) não são diagnosticados em homens com níveis de PSA abaixo do nível de corte [4]. Em segundo lugar, apesar de altos níveis séricos de PSA estão associados com PCA, eles também podem indicar outras condições muito menos grave, como a prostatite bacteriana aguda, hiperplasia prostática benigna (BPH), cistite, ejaculação, trauma perineal ou procedimentos cirúrgicos recentes no trato urinário [2]. Dados do Estudo Europeu Randomizado do rastreio do cancro da próstata (ERSPC) mostrou que 10-20% dos homens tinham níveis de PSA anormal e, portanto, cumpriu o critério atual para uma biópsia, embora apenas cerca de 24% dos homens em questão, eventualmente, desenvolvido CaP [5].
Além disso, os resultados de ensaios clínicos randomizados demonstraram que o teste de PSA produz resultados inconsistentes e tem apenas um benefício limitado no que diz respeito à mortalidade CaP. O ERSPC e os estudos de Gotemburgo revelou uma taxa de mortalidade CaP moderadamente reduzida [5], [6], enquanto que o de próstata, pulmão, colo e Ovarian Cancer Screening (PLCO) julgamento mostrou nenhuma diminuição na referida taxa de [7]. Embora altos níveis de PSA são frequentemente associados com uma progressão mais agressiva da APC, que nem sempre se correlacionam com o comportamento biológico da doença, levando a excesso de diagnósticos e tratamento excessivo, com os riscos desnecessários de urinária, disfunção sexual e intestino que isso implica [ ,,,0],8].
neste contexto, novos biomarcadores são radicalmente necessária para detectar clinicamente relevante CaP e executar precoces e precisas diagnósticos da doença, reduzindo assim o número de biópsias ao detectar com sucesso, como muitos casos de CaP quanto possível.
Para este fim, a telomerase humana é um dos marcadores de tumores mais prometedores actualmente sob investigação. a actividade de telomerase foi encontrado para ser elevado em 85-100% dos pacientes com cancro, que é, por baixo ou não detectável, em células somáticas normais [9]. Vários investigadores relataram a detecção da telomerase transcriptase reversa (hTERT) ARNm no plasma /soro de vários tipos de cancros, incluindo CaP [10] – [17]. Em um estudo anterior de um pequeno número de pacientes, o nosso grupo detectado mRNA hTERT no plasma de pacientes APC e observou que sua quantificação constituía um método sensível e específico para identificação de pacientes APC. Além disso, quando considerada em combinação com a PSA, que era um marcador eficaz para o diagnóstico precoce CaP [16].
No entanto, nenhum destes estudos compararam a presença de ARNm da hTERT no plasma /soro de pacientes com CaP o características clínico-patológicas de tumores. Portanto, o objetivo do presente estudo foi o de: i) o estudo, em uma grande população de pacientes, a relevância clínica do mRNA plasma hTERT como um marcador da APC e, ii) analisar a distribuição dos parâmetros clínico em relação ao mRNA hTERT plasma níveis em pacientes APC.
Materiais e Métodos
pacientes e colheita de amostras
cento e cinco pacientes que foram admitidos consecutivamente ao Hospital Clínico Universitario Valencia (HCUV) foram incluídos no estudo. Os critérios de elegibilidade foram as seguintes: (1) pacientes com níveis elevados de PSA no soro (PSA cut-off ponto ≥4.0 ng /ml), (2) sem diagnóstico prévio de câncer de qualquer tipo; e (3) nenhum tratamento para CaP antes da coleta de sangue.
Todas as amostras foram analisadas prospectivamente sem conhecimento do estado clínico-patológico dos sujeitos. Os pacientes foram classificados de acordo com critérios histopatológicos e atribuídas a um dos três grupos: PCA (idade média ± DP: 65,8 ± 7,30 anos, limites: 49-80), prostatite (idade média ± DP: 65,9 ± 5,69 anos, limites: 54- 80) e BPH (idade média ± DP: 62,4 ± 8,45 anos, intervalo: 50-71) (Tabela 1). Os pacientes com PCA foram tratados com prostatectomia radical (26/46; 57%), a braquiterapia (3/46; 6%), radioterapia (13/46; 28%) e terapia de privação de andrógeno (4/46; 9%). Median tempo de seguimento foi de 10,0 anos (variação: 9,5-10,4). critérios de recorrência bioquímica são como indicado pela Associação Europeia de guias de Urologia; após a prostatectomia retropúbica radical, dois valores de PSA consecutivos de 0,2 a terapia de radiação ng /ml ou superior e, depois, um nível aumento do PSA 2 ng /mL acima do nadir do PSA [18]. De acordo com estes critérios específicos, 7 pacientes tiveram recorrência bioquímica
Sessenta e oito (idade média ± SD 50-76:: 61,0 ± 6,32 anos, intervalo) da mesma idade. Voluntários saudáveis, sem sintomas em do trato urinário inferior ou história de CaP ou qualquer outro tipo de câncer serviram como controle.
amostras de sangue venoso periférico foram obtidas a partir de pacientes (antes da biópsia da próstata guiada por ultra-sonografia transretal) e voluntários saudáveis em 8 ml de sangue tubos de colheita contendo sódio gel de citrato e um meio de gradiente de densidade (Vacutainer CPT 362.761; Beckton Dickinson). células mononucleares do sangue e plasma foram separadas por centrifugação de acordo com as instruções do fabricante.
Este estudo foi aprovado pelo comitê de ética em pesquisa da HCUV, e todos os sujeitos participantes deram consentimento informado por escrito antes de sua inclusão no estudo.
Isolamento de ARN de plasma e Quantificação de ARNm da hTERT
O ARN foi isolado a partir de 250 ul de plasma com o tratamento com DNase I, conforme descrito anteriormente [11], [16]. a síntese de cDNA e quantitativa PCR em tempo real (qPCR) foram relatados anteriormente [16]. Em resumo, o ARN purificado (200 ng) foi transcrito reversamente com hexâmeros aleatórios utilizando o Transcrição Reversa TaqMan reagentes do kit (Applied Biosystems) de acordo com as instruções do fabricante. Cinco jil da reacção de RT foram misturados com 45 ul de TaqMan Universal PCR Master Mix (Applied Biosystems), contendo 250 nM de iniciadores directo e inverso e 125 nM da sonda TaqMan. Os iniciadores e sondas TaqMan para condições de hTERT e 18S rRNA e de PCR foram descritos noutro local [17]. hTERT ARNm plasma foi normalizado contra rRNA 18S de plasma ARNm. Uma curva padrão foi gerada utilizando a linha celular de carcinoma do cólon HT-29 (ATCC HTB-38). O limiar de ciclo (Ct) de cada amostra foi medida utilizando o sistema de detecção de sequência ABI 7700 e transformado em ng de HT-29 de hTERT e HT-29 18S rRNA usando as curvas padrão geradas na mesma experiência. A relação entre ng de hTERT e ng de rRNA 18S representa o hTERT normalizada para cada amostra
valores de PSA no soro pré-operatória foram medidos por meio da técnica padrão utilizada na HCUV. (Ensaio de PSA total Elecsys; Roche Diagnostics) .
clinico-patológica Parâmetros
Quando os resultados de um teste PSA apontou para APC, o paciente foi submetido a uma biópsia da próstata guiada por ultra-som. Os resultados de todas as biópsias foram examinadas por experientes uro-patologistas e, se considerado positivo, o paciente em questão foi tratada de acordo com o procedimento padrão seguido na Unidade de Urologia da HCUV em casos de CaP. foram determinados tumores fatores prognósticos como a pontuação de Gleason, porcentagem de biópsias de próstata positivas (calculado como o número de biópsias positivas dividido pelo número total de biópsias realizadas), invasão perineural e invasão linfática. O estadiamento clínico foi realizado por exame retal digital (DRE), ultra-sonografia transretal (USTR) e ressonância magnética.
Métodos Estatísticos
mRNA hTERT Plasma níveis e níveis séricos de PSA foram comparados com os parâmetros clínico usando Mann-Whitney e Kruskal-Wallis testes não-paramétricos, uma vez que um teste de Kolmogorov-Smirnov revelou que nem hTERT mRNA nem PSA soro foi distribuído normalmente. A precisão dos ensaios de PSA de soro e de mRNA hTERT plasma no diagnóstico de CaP foi determinada por Receiver Operating Characteristic (ROC), a área correspondente sob a curva (AUC ROC) e razão de verossimilhança (LR). A sensibilidade e especificidade do ARNm da hTERT e PSA do soro pré-operatória foi calculada usando o melhor valor de cut-off de a curva ROC, o qual foi determinado de acordo com o ponto mais alto no eixo vertical e o mais à esquerda no eixo horizontal. A associação entre o plasma hTERT mRNA, PSA sérico e os parâmetros clínico foi analisada utilizando análise univariada. A regressão logística foi realizada para determinar os preditores de pré-tratamento independentes significativos de diagnóstico CaP. A eficácia de plasma hTERT mRNA e soro PSA como preditores de recorrência bioquímica foi avaliada por análise uni e multivariada. Foram relatadas as odds ratio (OR) calculado por regressão logística e intervalos de confiança de 95% (IC 95%). Todos os valores p calculados foram bicaudais, e valores de probabilidade de menos de 0,05 foram considerados estatisticamente significativos.
Resultados
hTERT mRNA Plasma é um biomarcador não invasivo útil para CaP Diagnóstico
os níveis de ARNm da hTERT de plasma foram medidos em 105 pacientes consecutivos com níveis elevados de PSA (≥4.0 ng /ml) e 68 voluntários saudáveis. idade do paciente, PSA pré-operatório e os níveis plasmáticos de mRNA hTERT são apresentados na Tabela 1. Não foram observadas diferenças de idade entre os diferentes grupos (ANOVA; p = 0,350).
CaP rastreio utilizando PSA como o único indicador para biópsia da próstata revelou que quarenta e seis dos 105 pacientes foram diagnosticados com CaP (43,8%), 47 tinha prostatite (44,8%) e 12 sofria de BPH (11,4%) (Figura 1). Distribuição dos níveis plasmáticos de ARNm da hTERT em pacientes com CaP, prostatite ou BPH e em controlos é mostrado na Figura 2A. valores medianos hTERT mRNA de plasma foram significativamente maiores (p 0,001) entre os pacientes CaP (mediana; intervalo interquartil: 1,6; 0,7-4,08) do que no controle (0,07; 0,02-0,10), prostatite (0,13; 0,03-0,31) e BPH (0,03; 0.01-0.13) grupos. PSA sérico pré-operatório foi significativamente maior (p 0,001) nos pacientes do que nos controles, embora não foram detectadas diferenças significativas entre o grupo de APC e os grupos de prostatite ou BPH (Figura 2B)
Cento e cinco pacientes consecutivos. com níveis elevados de PSA foram submetidos a biópsia de próstata. Quarenta e seis dos 105 pacientes (44%) foram diagnosticados com CaP, e cinquenta e nove pacientes (56%) não mostraram nenhuma evidência de câncer. PCA: Prostate Cancer BPH:. Hiperplasia Prostática Benigna
Os dados são expressos como mediana e intervalo interquartil. A) Quantificação de plasma níveis de mRNA hTERT discriminar os pacientes APC e indivíduos saudáveis (p 0,001). B) Embora os níveis de PSA foram significativamente maiores em pacientes CaP do que nos controles (p 0,001), quantificação de PSA no soro foi incapaz de discriminar entre APC, BPH e prostatite pacientes. BPH = hiperplasia prostática benigna.
Todos os pacientes e amostras de controlo mostrou 18S rRNA amplificação indicando a integridade do RNA isolado (dados não mostrados).
hTERT mRNA Plasma Mostra precisão diagnóstica Superior além do soro PSA em CaP Diagnóstico
curvas ROC e o melhor valor de corte foram usados para determinar a sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo (VPP) e valor preditivo negativo (VPN) de cada ensaio. A sensibilidade e especificidade do ensaio mRNA hTERT plasma no que diz respeito à detecção de CaP foram 91% e 85%, respectivamente (melhor valor de corte de 0,45), (melhor valor de corte de 0,45, com uma curva AUC ROC de 0,932 ± 0,027) , enquanto que o ensaio de PSA apresentou uma sensibilidade de 83% e uma especificidade de 47% (melhor valor de corte de 7,2 ng /ml, (melhor valor de corte de 7,2 ng /ml, com uma AUC ROC de 0,651 ± 0,054 (Figura 3 .) a comparação entre pares de curvas de ARNm da hTERT e PSA ROC confirmou diferenças significativas (p .. 0.001) (Figura 3) de PPV e NPV foram maiores para o ensaio de ARNm da hTERT que para o ensaio de PSA positivo e negativo LR foram 5,99 e 0,10, respectivamente, para o teste de hTERT e 1,57 e 0,37, respectivamente, para o ensaio de PSA (Tabela 2). para testar ainda mais a precisão do diagnóstico de ambos os ensaios do diagnóstico CaP, nós escolhemos uma alta sensibilidade (98%) para ambos os testes e calculou-se a especificidade e razão de probabilidade associada. neste sensibilidade, o ensaio hTERT plasma apresentou uma maior especificidade (78% vs. 10%) e maior proporção de verossimilhança positiva (4,44 vs 1,10) do que o teste de PSA.
ROC curvas mostram que o plasma hTERT mRNA, mas não PSA no soro, em discriminar os pacientes APC e indivíduos saudáveis ou pacientes com prostatite ou BPH. hTERT ARNm plasma mostra uma sensibilidade mais elevada (85% vs 83%), especificidade (90% vs 47%), VPP (83% vs 56%), NPV (92% vs 77%) e a AUC ROC (0,932 vs 0,651) do que a PSA no que diz respeito ao diagnóstico de CaP. comparação de pares de curvas de mRNA hTERT e PSA ROC apresentaram diferenças significativas (p 0,001).
Combinação de plasma hTERT mRNA e soro PSA no diagnóstico de CaP resultou em uma sensibilidade de 98%, uma especificidade de 42%, VPP de 57%, um NPV de 96%, um LR + de 1,69 e um LR de 0,05 (Tabela 2).
Curiosamente, 5 dos 47 pacientes prostatite que desenvolveu CaP ao longo de um período de cinco anos apresentou maior média de valores de mRNA hTERT no momento do diagnóstico do que o resto do grupo prostatite (1,08 ± 0,80 vs 0,45 ± 1,00), embora as diferenças não foram estatisticamente significantes (p = 0,26), provavelmente devido ao pequeno número dos casos analisados.
hTERT mRNA Plasma está associada com mau prognóstico tumor clinico-patológica parâmetros
a análise univariada mostrou que os níveis plasmáticos de mRNA hTERT foram significativamente associados com os parâmetros clínico pobre tumorais prognóstico como a pontuação de Gleason (p = 0,01), por cento biópsia com positividade (p = 0,002), perineural (p = 0,002), invasão linfovascular (p 0,001) e estágio clínico (p = 0,004). Não houve associação estatisticamente significativa foi encontrada entre níveis séricos de PSA pré-operatório e escore de Gleason (p = 0,10), por cento núcleo biópsia positividade (p = 0,34), invasão perineural (p = 0,35) ou vascular /invasão linfática (p = 0,15). No entanto, os valores de PSA significativamente mais elevados foram observados em pacientes em estágio clínico avançado (p 0,01) (Tabela 3)
A Tabela 4 mostra os resultados da análise de regressão logística de preditores de pré-tratamento de CaP.: idade (p = 0,04) e plasma mRNA hTERT (p 0,0001) foram preditores independentes significativos de APC, enquanto PSA ao diagnóstico (p = 0,94), DRE (p = 0,43) e TRUS (p = 0,85) não foram preditores independentes .
hTERT mRNA Plasma é um prognóstico fator de bioquímica recorrência
hTERT mRNA Plasma mostrou ser um fator significativo de recorrência bioquímica. O valor de corte mRNA hTERT plasma para otimizar a sensibilidade e especificidade na previsão de recorrência bioquímica foi de 3,15. Neste valor de cut-off, sensibilidade e a especificidade foram de 71,4% e 91,8%, respectivamente, e a curva AUC ROC foi 0,932 ± 0,02 (Figura 4). A Figura 5A mostra as curvas de Kaplan-Meier para os dois grupos definidos pelo valor da hTERT de corte (3,15). O tempo de sobrevida livre de recorrência foi significativamente maior (p = 0,004, teste de Qui-quadrado) em pacientes com hTERT mRNA 3,15 (média ± SD; 10,44 ± 0,26 anos; 95% CI: 9,92-10,96) do que em pacientes com valores ≥3.15 (média ± SD; 8,28 ± 0,60 anos; 95% CI: 7,10-9,41). Por outro lado, a PSA do soro pré-operatória não é um indicador de recorrência bioquímica. O valor ideal de corte para predizer recorrência bioquímica foi de 14,5. A sensibilidade e a especificidade foram de 100% e 87,7%, respectivamente, e a curva AUC ROC foi 0,658 ± 0,05 (Figura 4). As curvas de Kaplan-Meier para os dois grupos definidos pelo valor de cut-off de PSA são apresentados na Figura 5B. Não foram observadas diferenças na sobrevida livre de recidiva (p = 0,38) entre os pacientes com PSA 14,5 (média ± SD; 10,00 ± 0,34 anos; 95% CI: 9,34-10,68) e pacientes com valores de PSA ≥14.5 (média ± SD ; 9,09 ± 0,68 anos; 95% CI: 7.77-10.42). comparativos emparelhados de curvas ROC mostrou diferenças significativas (p 0,001). (Figura 4)
curvas
ROC mostram que o plasma hTERT mRNA, mas não PSA no soro, é um preditor significativo de recorrência bioquímica. hTERT mRNA Plasma apresenta maior especificidade (91,8% vs 87,7%) e a curva AUC ROC (0,932 vs 0,658) do que PSA em relação à recorrência bioquímica. O ensaio de PSA mostra maior sensibilidade (71,4% vs 100%) do que mRNA hTERT na previsão de recorrência bioquímica. comparação de pares de curvas de mRNA hTERT e PSA ROC apresentaram diferenças significativas (p 0,001).
curvas de Kaplan-Meier indicam que existem diferenças significativas na sobrevida livre de recorrência entre os grupos de alta e baixa hTERT (A ), mas não entre os grupos PSA de soro de alta e baixa (B).
Preditores de recorrência bioquímica foram analisados com a análise de regressão de Cox (Tabela 5). A análise multivariada mostrou que mRNA hTERT (OR: 1,55; IC 95%: 0,99-2,43; p = 0,04) e fase (OR: 0,13; IC 95%: 0,01-1,30; p = 0,08) estão significativamente associados com recorrência bioquímica, enquanto nenhum dos outros fatores analisados mostraram associação significativa com recorrência bioquímica.
Discussão
o soro PSA tem sido amplamente utilizada na última década no diagnóstico e acompanhamento de CaP. Os principais problemas levantados por esta abordagem é a falta de especificidade para o cancro e de baixo valor preditivo de PSA, que resultam num número de biópsias da próstata desnecessárias e /ou falha para diagnosticar a doença em homens com níveis de PSA abaixo do valor de corte. Embora altos níveis de PSA são frequentemente associados com tumores mais agressivos, PSA nem sempre se correlacionam com o comportamento biológico da doença, o que leva a overtreatment e as suas consequências (aumento de custos, efeitos colaterais e ansiedade do paciente). O desafio para os clínicos é distinguir entre estas diferentes condições e evitar basear as decisões puramente em medições de PSA. Como consequência, novas ferramentas de diagnóstico são necessários para detectar CaP mais cedo e mais exacta possível, a fim de reduzir o número de biópsias ao detectar com êxito como muitos casos de CaP quanto possível.
Neste estudo, 105 pacientes com valores de PSA acima de 4,0 ng /ml foram submetidos a uma biópsia da próstata para descartar a presença de CaP. Apenas 46 desses pacientes (44%) foram finalmente diagnosticados com CaP, enquanto que 47 (45%) e 12 (11%) foram diagnosticados com prostatite e hiperplasia prostática benigna, respectivamente. Estes resultados mostram que a triagem CaP baseada em PSA como o único indicador para uma biópsia da próstata carece de especificidade e leva a um grande número (59/105; 56%) de intervenções desnecessárias. Embora diferentes estratégias têm sido desenvolvidas em uma tentativa de aumentar a especificidade do PSA, incluindo medição de velocidade do PSA, os níveis de relação PSA livre /total e o uso de valores de corte específico para a idade do paciente e grupo étnico, a sua fiabilidade clínica não tem foi confirmada [2], [19]. O nosso grupo tem demonstrado previamente, num pequeno número de pacientes, que a quantificação de hTERT ARNm de plasma é um método bastante sensível e específico para a identificação de APC e que, quando usado em combinação com o PSA do soro, é um método eficaz de diagnóstico CaP [16 ]. Além disso, em um relatório recente que mostraram que o plasma hTERT mRNA discrimina entre doença clinicamente localizada e localmente avançado e é um preditor de recorrência em pacientes CaP [20]. Temos agora avaliada a precisão de hTERT mRNA plasma como uma ferramenta de diagnóstico para CaP em um maior número de pacientes e têm explorado a sua associação com as características clínico-patológicas de tumores. Nós também têm explorado a utilidade de hTERT mRNA plasma como um fator de prognóstico da recorrência bioquímica. Os resultados confirmam e ampliam as de um relatório anterior, em que indicam que o plasma hTERT mRNA é um marcador não-invasivo de tumores que podem ser utilizados para o diagnóstico CaP, mostrando uma sensibilidade mais elevada (85% vs 83%), especificidade (90% vs . 47%), VPP (83% vs. 56%), NPV (92% vs 77%) e rácios LR do que o ensaio de PSA. indicando que o ensaio de mRNA hTERT plasma tem um alto poder discriminatório e, portanto grande utilidade potencial como teste de diagnóstico no diagnóstico CaP. Algumas associações de médicos recomendam a redução do ponto de corte PSA de 4,0 ng /ml a 2,5 ng /ml, a fim de aumentar a sua sensibilidade e, portanto, detectar mais cancros numa fase mais precoce. Para explorar ainda mais a precisão do diagnóstico do ensaio PSA, escolhemos dois valores de PSA actualmente utilizados na prática clínica (PSA ≥4.0 ng /ml e ≥2.5 ng /ml) e calculada a sua sensibilidade, especificidade, VPP e VPN e LR positivo e negativo . Temos observado como a redução do ponto de corte PSA aumenta a sensibilidade, mas reduz especificidade e PPV. Nesses pontos de corte para PSA, o ensaio hTERT plasma mostra muito maior especificidade (85% vs. 8% e 5%), PPV (83% vs. 47% e 46%) e LR positivo (5,99 vs 1,09 e 1,05), mas sensibilidade semelhante (91% vs 100%), NPV (92% vs 100%) e negativo LR (0,10 vs 0,00) (Tabela 3). Combinação de plasma hTERT mRNA e PSA não melhora a precisão do diagnóstico. Um aumento na sensibilidade limitada (91% para hTERT vs. 98% para a combinação de hTERT /PSA) resulta em uma redução considerável na especificidade (85% vs. 42%), VPP (83% vs 57%) e a LR + (5,99 vs. 1,69).
análise identificou multivariada idade e hTERT mRNA plasma no momento do diagnóstico preditores independentes como significativos da APC, enquanto PSA no diagnóstico, DRE e TRUS não foram preditores a este respeito.
Tomados em conjunto, estes resultados indicam que o ensaio de ARNm da hTERT de plasma tem um alto poder discriminatório e é, por conseguinte, potencialmente úteis para o diagnóstico de CaP.
Curiosamente, 5 dos 47 pacientes que desenvolveram prostatite CaP mais de um de cinco anos período apresentaram valores de mRNA hTERT médios mais elevados do que o resto do seu grupo. Esta descoberta fornece mais apoio para a ideia de que o plasma hTERT mRNA tem implicações para o seguimento e detecção residual mínima da doença, embora o número de pacientes em nosso estudo era pequena demais para tirar conclusões definitivas. Outros autores publicaram resultados semelhantes, relatando que o ARN de telomerase pode ser útil para o diagnóstico de CaP avançado e monitorização de pacientes para a detecção de doença residual mínima [15]. Deve salientar-se que o ARN de hTERT foi avaliada a partir de amostras de plasma, assim, a transcrição de hTERT a partir de fontes que não de tumor, tais como linfócitos activados, não podia ser excluído. Além disso, a presença de hTERT ARNm de plasma acima do nível de corte pode indicar a presença de células tumorais em circulação, apoiando ainda mais a ideia de que a análise quantitativa de ARN livre circulante-poderia ser útil para o diagnóstico e a monitorização de pacientes com CaP e podem ter implicações na mínima detecção de doença residual.
o mecanismo pelo qual o RNA circulante isento de células é libertado para a corrente sanguínea é desconhecida, como é a fonte de ARN de circulação. Uma origem hematopoiética de ARN circulante tem sido sugerido, embora a correlação de mutações, alterações de microssatélites, metilação do promotor no tumor e no plasma emparelhado /amostras de soro sugere que o RNA de circulação podem ser originários de tecido tumoral [21]. os níveis circulantes de ARN livre de células mais elevadas foram encontradas em pacientes com lesões malignas do que em pacientes sem tumores. No entanto, os níveis elevados de RNA de circulação não são específicos de cancro e níveis aumentados têm sido encontradas em pacientes com processos inflamatórios e lesões benignas. Relatórios recentes têm correlacionado os níveis de vários marcadores tumorais no plasma /soro com características clínicas e patológicas da doença, sugerindo que RNA de circulação livre de células pode fornecer biomarcadores para o diagnóstico de câncer, o acompanhamento dos pacientes após a cirurgia e acompanhamento da eficácia do tratamento [22 ].
Uma das descobertas mais importantes do presente estudo é a associação entre plasmáticos elevados valores de mRNA hTERT e os parâmetros clínico de tumores. Para conhecimento dos autores, este é o primeiro relatório que mostra que o plasma mRNA hTERT está significativamente associado a um mau prognóstico características do tumor APC, tais como pontuação de Gleason (p = 0,01), estágio do tumor (p = 0,004) e vascular (p 0,001 ) e invasão perineural (p . 0.001)
Embora o número de pacientes que apresentam recorrência bioquímica é limitada (apenas sete pacientes), nossos resultados também indicam que o plasma hTERT mRNA é um fator prognóstico significativo de reincidência. curvas de sobrevida de Kaplan-Meier confirmou as diferenças significativas entre os grupos para que os pacientes com níveis de mRNA hTERT plasma acima do valor de corte mostraram sobrevida livre de recidiva significativamente diminuída do que pacientes com níveis abaixo do valor de corte. Por outro lado, a PSA no soro não é um preditor de recorrência bioquímica e não foram observadas diferenças significativas no tempo livre de recidiva entre os pacientes acima e abaixo do valor de corte. A análise multivariada confirmou que o plasma hTERT mRNA é (juntamente com estágio) um preditor independente de recorrência bioquímica enquanto que nenhum dos outros fatores analisados (incluindo PSA) mostrou associação significativa com recorrência bioquímica.
Vários autores relataram resultados semelhantes em outros tipos de câncer, indicando que o plasma hTERT mRNA pode ter implicações de prognóstico [12] – [13], [23] – [24]. Miura et al. medido mRNA hTERT e Fator de Crescimento Epidérmico Receptor (EGFR) mRNA no soro de pacientes com câncer de pulmão e mostrou que hTERT mRNA foi independentemente associada com o tamanho do tumor, número de tumor, presença de metástases, recidiva e tabagismo. EGFR mRNA correlacionada com passos clínicos avançados e ambos os marcadores diminuiu significativamente após a cirurgia [12]. Os mesmos autores demonstraram que o soro de ARNm da hTERT é útil para o diagnóstico de cancros ginecológicos. Estes pacientes apresentam mRNA hTERT soro maior do que aqueles pacientes com doenças benignas e indivíduos saudáveis. Serum hTERT mRNA independentemente correlacionada com o estágio clínico, CA125 e parâmetros histológicos em câncer de ovário [22]. Terrin et ai. mostrou que o plasma hTERT mRNA é um marcador útil para a detecção e acompanhamento de carcinoma colorectal [17].
Além atividade da telomerase, as células cancerosas humanas também pode usar um mecanismo independente de telomerase chamada alongamento alternativo dos telômeros (ALT). Embora o mecanismo ALT é relativamente comum em sarcomas e astrocitomas, nunca foi relatada em CaP. Heaphy et ai. avaliaram 1.176 tecidos CaP (incluindo ambos os adenocarcinomas e carcinomas de células pequenas) e não encontrou um único tumor ALT-positivos [25], indicando que o mecanismo de ALT não é usado pelas células CaP para manter seus telômeros. Consequentemente, o ensaio de mRNA hTERT plasma deve detectar todos os casos APC.
Vários novos biomarcadores presentes nos fluidos biológicos estão atualmente sob avaliação para determinar o seu potencial na detecção precoce e prognóstico de CaP. Altimari et ai. mostrou que hTERT DNA circulante livre no plasma é maior em pacientes com PCA do que nos indivíduos controle e se correlaciona com o estágio do tumor. Os autores concluem que hTERT DNA livre no plasma é um promissor biomarcador para o diagnóstico precoce e acompanhamento de CaP [26].