Abstract
Uma vez que a administração da droga regional, permite manter uma alta concentração de droga dentro de tumores, comparou-se a concentração plasmática e biodistribuição de doxorrubicina (Dox) a partir de lipossomas convencionais carregadas com fármaco por administração local ou sistémica. Os resultados demonstraram que a concentração de fármaco foi substancialmente melhorada no fígado, bem como uma diminuição no sangue e outros órgãos, por injecção baço imitando perfusão veia porta (administração regional). Para investigar adicionalmente o efeito terapêutico alvo de doxorrubicina encapsulada em lipossomas galactosilado (Dox) por administração regional, lipossomas segmentação do fígado foram preparadas através da incorporação de DPPE-galactosilado a lipossomas convencionais. captação de lipossomas e segmentação foram verificados
in vitro
e
in vivo
por microscopia de fluorescência e sistema de Xenogen IVIS imagem, respectivamente. Os resultados mostraram que a galactose lipossomas alvo apresentada uma célula de absorção específica mais forte por células de carcinoma hepatocelular humano HepG2 comparado com os lipossomas não-alvo.
In vivo
fluorescência de imagem mostraram que a deposição intra-hepática do convencional e galactosilados lipossomas através de injecção baço era mais do que isso por meio da administração veia da cauda, e galactosilados lipossomas teve maior intensidade fluorescente sobre lipossomas convencionais na administração pós baço fígado . O efeito anti-tumor de várias vias de administração de drogas para ambas as formulações de lipossomas foi avaliada utilizando um modelo de metástases do fígado de murino de cancro do cólon. Os resultados indicaram que a progressão do tumor nos nodos linfáticos mesentérico e do fígado foi significativamente suprimida por lipossomas galactosilado Dox-carregados por meio de injecção do baço, ao passo que não foi observada significância em formulações não-alvo. Nossos dados indicam que a perfusão local da doxorrubicina lipossomal galactosilados teve uma grande promessa para o tratamento de metástases hepáticas de câncer de cólon
Citation:. Zhao C, Feng Q, Z Dou, Yuan W, Sui C, Zhang X, et ai. (2013) local terapia-alvo de fígado metástase do cancro do cólon por galactosilado lipossomas encapsulados com doxorrubicina. PLoS ONE 8 (9): e73860. doi: 10.1371 /journal.pone.0073860
editor: Guillermo Velasco, da Universidade Complutense, Espanha |
Recebido: 11 de setembro de 2012; Aceito: 30 de julho de 2013; Publicação: 11 de setembro de 2013
Direitos de autor: © 2013 Zhao et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados
Financiamento:. Esta pesquisa foi apoiado pelo Programa Nacional de Pesquisa básica da China 2011CB911004, Pequim Natural Science Foundation da China 7.122.150 e Fundação para o Desenvolvimento Novel Nacional de drogas da China 2009ZX09303-008. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito
CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes
Introdução
na sequência de gânglios linfáticos, o fígado ocupa o segundo órgão com alta incidência de metástases. De acordo com estatísticas, existem mais de 70% dos pacientes que apresentam metástases hepáticas com os seus cancros primários localizados no cólon, pulmão, ossos ou cérebro [1], [2]. A metástase é considerado como um dos factores de prognóstico mais importantes para pacientes com cancro. Por exemplo, a taxa de sobrevivência de 5 anos de cancro gástrico com metástases no fígado é inferior a 10% [3], [4], [5], [6].
Apesar dos recentes melhoramentos em primeira linha quimioterapêutico estratégias para o tratamento de pacientes com metástases hepáticas de câncer primário, a ressecção hepática oferece a única oportunidade de cura [7]. No entanto, apenas cerca de 15% dos pacientes com metástases hepáticas são resectable [8], o adicional de 30% precisam de quimioterapia antes da ressecção [9], [10], [11], [12]. É, portanto, necessário desenvolver regimes mais eficazes para prolongar a sobrevida de pacientes com metástases hepáticas de cancros originais.
Composto de quimioembolização percutâneo da artéria hepática (TAE) e quimioterapia veia porta, quimioterapia intervencionista tem sido considerado um tratamento promissor terapêuticos para o carcinoma metastático hepática [13], [14]. Em comparação com a quimioterapia sistémica, a administração do fármaco regionais, quer através de infusão arterial ou venosa portal permite manter uma alta concentração de fármaco e proporcionar elevados níveis de actividades citostáticas dentro do tumor [15]. É relatado que a quimioterapia intra-arterial regional, melhorou a taxa de resposta e qualidade de vida de pacientes com metástases hepáticas de câncer colorretal [16]. Isto demonstrou que o tratamento intervencionista é uma forma eficaz para estável a progressão de metástases hepáticas.
Como um dos agentes vulgarmente utilizados para a terapia de intervenção, a doxorubicina tem graves efeitos secundários sistémicos tais como a supressão da medula óssea e cardiotoxicidade, que limitam seu uso clínico. Esta deficiência pode ser superado por métodos aumentando a acumulação do fármaco no interior do tumor ou usando veículo de medicamento eficaz que possa entregar e libertar a sua carga no local alvo. Os lipossomas, o sistema de entrega de droga mais amplamente investigada, tem elevada acumulação no fígado enquanto a baixa imunogenicidade, biocompatibilidade e protecção de drogas [17]. Além disso, os lipossomas conjugados com ligandos específicos podem modificar as características farmacocinéticas e a distribuição nos tecidos de drogas perfil. Isto pode levar a aumentar a eficácia, bem como reduzidos efeitos secundários tóxicos de fármacos antitumorais. Localizado nas membranas hepatocíticas mamífero, receptor de asialoglicoproteína (ASGPr) pode mediar a ligação específica de lipossomas contendo galactósido aos hepatócitos [18], [19]. Tal lipossoma modificado com
β
D-galactose pode proporcionar benefícios terapêuticos significativos para tumores no fígado devido à segmentação ativa. Além disso, os transportadores de lipossomas podem apresentar uma maior especificidade para com os tecidos tumorais malignos, porque eles podem, teoricamente, vazar para fora dos vasos sanguíneos no tumor circundante. Este fenómeno tem sido conhecido como o efeito avançado permability retenção (EPR), segmentação passiva a.k.a. [20]. Portanto, é razoável supor que o emprego de Dox-carregado galactosilados lipossomas (passivas e activas direccionamento para tumores intra-hepática) em quimioterapia intervencionista (administração local para melhorar a concentração da droga) pode melhorar o resultado terapêutico para pacientes com metástases hepáticas e, ao mesmo tempo, diminuir os efeitos colaterais sistêmicos da droga.
neste estudo, foi proposta uma nova estratégia terapêutica que combina órgãos alvo drogas (lipossomal galactosilados Dox) com a administração regional. O objectivo era não alvo de carcinoma hepatocelular (HCC), mas o fígado, o que pode conduzir a uma ampla variedade de tratamento de metástases de tecido de origem diferente no fígado. Uma vez que existem receptor asialoglicoproteína abundante expressa em hepatócitos, galactosilados lipossoma foi seleccionado como o mediador para atingir o fígado. Embora o efeito anti-tumoral de lipossomas galactosilado carregado com a droga sobre o câncer de fígado foi demonstrado em modelos pré-clínicos adequados, têm sido relatados há estudos sobre sua aplicação em tumores hepáticos metastáticos. Como o sangue de ambos os intestinos e baço é normalmente transportado para o fígado através da veia portal, a injecção de baço foi escolhido para imitar a perfusão veia portal para avaliar as vantagens de lipossomal galactosilado Dox no tratamento de carcinoma metastático hepática. Antes da aplicação de lipossomas direccionados em administração regional, a concentração no plasma e a biodistribuição do doxorubicina de liposmes convencionais carregadas com fármaco foram determinados para avaliar a superioridade do local sobre a administração sistémica para o aumento da concentração da droga no órgão alvo. Posteriormente, o efeito anti-tumoral da nova estratégia terapêutica para o cancro do cólon com metástase hepática foi investigada usando um modelo animal de metástases hepáticas do câncer de cólon. Para nosso conhecimento, este seria, até à data, o primeiro estudo sobre essa estratégia terapêutica. Nossos resultados podem oferecer uma alternativa para pacientes com metástase hepática irressecável de tumores primários.
Resultados
Os estudos de farmacocinética para Dox-carregado convencional lipossomas
Para avaliar o efeito de diferentes vias de administração sobre a concentração e biodistribuição de fármacos a partir de transportadores de lipossomas, foram realizados os estudos de farmacocinética para Dox-carregado convencional. doxorubicina lipossómica numa dose de carga de 6 mg /kg foi introduzido em ratinhos BALB /c-nu, quer através de injecção intravenosa ou baço injecção. Como se mostra na figura 1, o pico de concentração plasmática de Dox grupo de injecção do baço foi significativamente mais baixa do que a partir i.v. grupo injecção (P 0,01). Doze horas após a injecção, a concentração de plasma de fármaco a partir de ambos os grupos tornou-se semelhante. Além disso, a concentração de fármaco foi substancialmente aumentada no fígado dentro de 10 horas após a administração i.v. em comparação com locais injecção (P 0,01), enquanto que foi menor em coração e rim. Este perfil pharmacolinetics original pode levar a benefícios clínicos prolongados, resultando em um efeito terapêutico melhorado a tumores intra-hepáticos e um efeito secundário reduzido para outros órgãos. Estes resultados indicaram que a ideia tentativa de transportadores de lipossomas combinados com a administração local, para o tratamento de tumores metastáticos do fígado era viável. Com base neste resultado, é concebido ainda mais o novo regime de terapia neste estudo, que combinado com lipossomas direccionados injecção baço para investigar se se podia surgir melhor efeito anti-tumoral. Para alcançar este objectivo, galactosilados lipossomas foram preparadas através da incorporação de DPPE galactosilado a lipossomas convencionais.
doxorubicina lipossómica numa dose de carga de 6 mg /kg foi introduzido em ratinhos BALB /c-nu, quer através de injecção intravenosa ou baço injecção. Após a administração da droga, no sangue, fígado, coração e rins foram recolhidos a partir de ratinhos tratados. Doxorrubicina concentrações em função do tempo no plasma (A), fígado (B), do coração (C) e do rim (D) foram determinadas por HPLC.
A caracterização de galactosilado DPPE (DPPE-Gal)
Para preparar lipossomas galactosilado, um dos excipientes, galactosilados DPPE, foi produzido pela primeira vez. O esquema para a síntese de Gal-DPPE foi mostrado em informações de apoio (Figura S1). O produto intermediário 5 (indicado na Figura S1) foi identificado pela
RMN de 1H (400 MHz, CDCl
3): δ 4,97 (s largo, 1H, H-1), 4,07-4,03 (m, 2H), 3,95-3,93 (m, 1H), 3,81 (m, 1H), 3,72-3,64 (m, 3H), 3,57 (m, 1H), estes 8HS incluído o -CH- e -CH
2- em galactose (excepto H-1) e -OCH
2-, 2,79 (s, 4H, -COCH
2CH
2CO-), 2,39-2,38 (t, 2H, -CH
2COO -), 1,61-1,58 (m, 4H, -OCH
2C
H
2 e -C
H
2CH
2COO-), 1,32 (m, 8H, 4 x -CH
2-) ppm.
O produto final Gal-DPPE tem sido bem caracterizada como se segue.
RMN de 1H (400 MHz, CD
3OD): δ 5,36-5,32 (m, 1 H, -CHOCOR), 5,30-5,18 (s largo, 1 H, H-1), 4,04-3,34 (m , 16 H, CH
2OCOR, 2 × CH
2OP-, -OCH
2, CH
2N- eo -CH- e -CH
2 no galactose excepto H-1), 2,35-2,11 (m, 6 H, 2 x -CH
2COO-, -CH
2CON-), 1,74-1,50 (m, 8 H, -C
H
2CH
2CON-, 2 × -C
H
2CH
2COO-, -C
H
2CH
2 O-), 1,44-1,24 (m, 56 H, -CH
2-), 0,93-0,86 (t, 6 H, 2 x -CH
3) ppm. Este resultado foi basicamente consistente com que, em um relatório anterior [21]. ESI-MS: m /z calculado para C
52H
100NNaO
15P (M + H)
1032,7, encontrado 1032,0
lipossomas Caracterização
. tipicamente, todas as suspensões de lipossomas extrudidos exibiu o tamanho de partícula de 100 a 140 nm, e a PDI de lipossomas caiu dentro do intervalo de 0,1 a 0,2 (Tabela 1). A distribuição do tamanho de cada lipossoma foi mostrado na informação de suporte (Figura S2). O diâmetro dos lipossomas galactosilação (Gal-lipo, 130,5 nm) era ligeiramente maior do que a de lipossomas convencionais (CL, 106,2 nm) devido à incorporação de DPPE-Gal. Ambos CL Dox-carregado (114,9 nm) e Gal-lipo (134,8 nm) apresentou valores de diâmetro ligeiramente mais elevados z-média, do que aqueles de lipossomas vazios resultantes das moléculas de doxorrubicina encapsulado. No entanto, os resultados indicaram que os lipossomas preparados neste estudo poderia entregar a droga ao fígado uma vez que o tamanho da endotelial fenestras em sinusóides do fígado mouse está sobre 140 nm [22].
lipossomas Análise Captação
O efeito da concentração de lipossoma na absorção pelas células HepG2 ASGPr +
e ASGPr
– células HCT-8 são mostrados na Fig. 2. A intensidade da fluorescência média de células após 2 horas de incubação com lipossomas foi determinado utilizando programa Image-Pro Plus tratamento de imagens (Media Cybernetics) para avaliação quantitativa. As diferenças de fluorescência entre as duas linhas de células incubadas com lipossomas respectivos não pode ser distinguido, quando a concentração de lípido foi abaixo de 100 | iM (ver Figura 2B), embora as células HepG2 tratadas com Gal-lipo apresentada ligeiramente maior intensidade de fluorescência do que os outros. Isto pode ser atribuído ao elevado nível de captação celular não específica quando a concentração de lípido foi baixa. A ligação específica, portanto, não foi o suficiente para exibir as diferenças significativas entre os grupos. Com o aumento da concentração de Gal-lipo (100 uM), as células HepG2 podem ser claramente coradas sob a microscopia de fluorescência a EX /EM de 488 nm /505 nm, mostrando a absorção celular significativamente maior em comparação com a intensidade de fluorescência apresentada por HCT-8 células tratadas com células HepG2 Gal-lipo ou Cl ou tratados com CL com a mesma concentração de lípido (p 0,001). Isto indicou que a absorção específica de Gal-lipo por ASGPr
+ células HepG2 foi elevado com o aumento da concentração de lípido a um nível de diferença significativa. A absorção celular de HepG2 e células HCT-8 incubadas com 100 uM de vários lipossomas durante 4 h também foi observada, e não foram encontradas diferenças entre os dois grupos (dados não apresentados). Isto sugeriu que a absorção não específica seria grandemente melhorada quando o tempo de incubação foi de tempo suficiente, resultando na diferença reduzida de fluorescência produzida por absorção específica. A concentração de 100 ^ M de lípido pode garantir suficientes sinais de fluorescência de modo a reflectir o efeito de absorção de lipossomas mediada pelo receptor durante 2 horas. Assim, 100 uM de concentração de lípido foi escolhido para as experiências seguintes.
O (ASGPR- células) e células HepG2 (ASGPr +) foram incubadas ou com lipossomas convencionais (CL) ou lipossomas galactosilação (8 HCT-Gal- lipo) durante 2 horas a concentração de lípidos diferentes que variam de 10 pM a 100 uM. a absorção celular de lipossomas foi visualizado por microscopia de fluorescência, devido à incorporação de 25-NBD-colesterol em lipossomas. A intensidade de fluorescência média apresentada pelas células foi determinada usando o Image-Pro Plus software de imagem (Media Cybernetics). A) imagem de fluorescência de absorção celular de lipossomas. B) A análise quantitativa da intensidade de fluorescência média. “*” Indica diferença significativa (p 0,001). CL: lipossomas convencionais; Gal: galactosilados lipossomas
Para a avaliação da absorção de célula específica, as células HCT-8 e HepG2 foram incubadas com CL /Gal-lipo para a duração de tempo diferente, respectivamente.. Basicamente, a incubação de NBD-colesterol incorporada lipossomas com as células a 37 ° C resultou numa captação dependente do tempo (Fig. 3). As células HepG2 tratadas com Gal-lipo apresentou uma absorção menor dentro de 15 min de incubação, enquanto nenhuma fluorescência verde foi observado quando as células HepG2 incubadas com CL. Tal tornou-se a fluorescência de montagem a 30 min e 1 h de incubação. A intensidade de fluorescência média de células HepG2 foram incubadas com Gal-lipo durante 1 h foi marcadamente mais fortes do que aqueles de outros grupos de tratamento (p 0,001), indicando a absorção da célula superior. Pelo contrário, as células HCT-8 incubadas ou com Cl ou Gl-lipo dificilmente induzir qualquer absorção celular em todos os período de tempo de incubação. No ponto 2 horas de incubação, não foi observada significativamente aumentada intensidade da fluorescência nas células Gl-lipo tratados em comparação com a de 1 hora de incubação (dados não apresentados). Portanto, 1 h de incubação foi considerada suficiente para reflectir a absorção celular específico. Este resultado bem demonstrado que os lipossomas galactosilado poderia ligar rapidamente para ASGPr
+ células através do receptor, mas não a ASGPr
-. Células, o que é uma forma mais eficaz para a absorção de lipossomas alvo-galactose que pinocytosis
O (ASGPR- células) e células HepG2 (ASGPr +) 8-HCT foram incubadas com lipossomas convencionais (CL) ou lipossomas galactosilação (Gal-lipo) a 37 ° C durante a duração de tempo diferente. a absorção celular de lipossomas marcados por 25-NBD-colesterol foi visualizado por microscopia de fluorescência. A intensidade média de fluorescência representando captação durg foi determinada utilizando software mais imagem imaging-Pro. A) imagem de fluorescência de absorção celular de lipossomas. B) A análise quantitativa da intensidade de fluorescência média para o tratamento de 1 hr de incubação. “*” Indica diferença significativa (p 0,001). CL: lipossomas convencionais; Gal:. Galactosilados lipossomas
A internalização inespecífica de lipossomas pelas células através de endocitose pode ser reduzida devido à fluidez da fraco de membrana, o que pode ser causado pelas alterações da rigidez da bicamada lipídica, a sua funcionalidade e /ou o nível de energia celular sob baixa temperatura [23]. No entanto, mediadas pelo receptor de ligação entre as células alvo e lipossomas ligando-conjugado pode ocorrer em ambos a 4 ° C e 37 ° C [24]. Isto sugeriu que a endocitose mediada por receptores seria a principal via para a absorção celular de lipossomas sob uma condição de baixa temperatura. Portanto, o direcionamento de lipossomas galactosilado foi ainda investigado em ASGPr
+/- células à temperatura de incubação diferente. Como ilustrado na Fig. 4, ambos Cl e Gal-lipo falhou para o transporte de fluorescência de células HCT-8 após 1 h de incubação a 4 ° C sob microscopia de fluorescência. As células HepG2, no entanto, mostraram relativamente fraca mas fluorescência verde visível após a incubação com Gal-lipo durante 1 hora a 4 ° C. Além disso, a média da intensidade de fluorescência a partir de Gal-lipo células HepG2 tratadas era significativamente mais forte do que a de células tratadas Cl ou células HepG2 tratadas Gal-lipo (p 0,001). Isto indicou que a Gal-lipo poderia ter como alvo as células HepG2 e endocitose mediada por receptores contribui para o aumento da absorção celular, obviamente, de lipossomas direccionados. Após a elevação da temperatura até 37 ° C, pode ser observada fluorencence fraco de todas as células do grupo de controle. Além disso, as células HepG2 foram incubadas com Gal-lipo representam mais forte do que a intensidade de fluorescência a 4 ° C. Estes dados sugerem a absorção celular de lipossomas não específica poderia ocorrer à temperatura do corpo.
As células HCT-8 e as células HepG2 foram incubadas com lipossomas convencionais (CL) ou lipossomas galactosilação (Gal-lipo) a 4 ° C durante 1 h, e, em seguida, aquecida a 37 ° C com a incubação continuou durante mais 1 h. a absorção celular de lipossomas marcados por 25-NBD-colesterol foi visualizado por microscopia de fluorescência. A intensidade média de fluorescência foi determinada quantitativamente utilizando software mais imagem imaging-Pro. A) imagem de fluorescência de absorção celular de lipossomas. B) A análise quantitativa da intensidade de fluorescência média. “*” Indica diferença significativa (p 0,001). CL: lipossomas convencionais; Gal:. Galactosilados lipossomas
Perfil de Distribuição de CL e Gal-lipo
Para investigar a capacidade de segmentação de Gal-lipo, ambos os lipossomas foram marcadas por uma fluorescente lipofílico tingir Dir e introduziu em ratos por IV e baço de injecção, respectivamente. O
in vivo
biodistribuição e tráfico em tempo real de CL e Gal-lipo foram visualizadas utilizando vivendo tecnologia de imagem de fluorescência. Como custaria vários minutos para terminar a injecção de baço, apenas um rato foi incluído em cada grupo. No entanto, esta experiência foi realizada por três vezes, e um resultado representativo foi demonstrado na Fig. 5. Verificou-se que os lipossomas foram depositados predominantemente no fígado e no baço, independentemente da composição lipossómica e da via de administração (Fig. 5A). A intensidade de fluorescência intra-hepática foi gradualmente aumentada em todos os ratinhos tratados e o pico foi atingido em 2 horas após a administração de lipossomas, seguido por um declínio de uma forma dependente do tempo (Fig. 5B). A fluorescência vermelha no fígado a partir de lipossomas galactosilação não apresentaram o domínio no primeiro ponto de tempo de observação (30 min após a injecção). Por outro lado, era menor do que a de lipossomas convencionais, tanto através de injecções na veia da cauda e do baço. No entanto, a intensidade de fluorescência intra-hepática da Gal-lipo foi rapidamente aumentada em 1 hora e excedeu o de CL para ambas as vias de administração, indicando que os lipossomas mais galactosilado foram acumuladas no fígado do que o CL. Além disso, as intensidades de fluorescência de ambos os lipossomas por via de injecção do baço foram mantidas a níveis mais elevados do que aqueles através de injecção na veia da cauda, o que indica que a deposição intra-hepática de lipossoma pode ser melhorada por um método de injecção do baço. Além disso, a fluorescência mais forte foi observada no rato injectado com Gal-lipo através de baço em 2 horas após a injecção, o que sugere que ambos órgão segmentação do transportador e via de administração regional pode aumentar a acumulação de sistema de administração de fármaco (lipossoma) no fígado, o que pode efetivamente melhorar a concentração da droga no órgão-alvo.
os lipossomas convencionais (CL) e galactosilados lipossomas (Gal-lipo) foram marcadas pelo DIR. Cada lipossoma contém um total de 200 ug de lípido foi ininjected em ratinhos /c-nu Balb cauda, quer através de administração intravenosa ou baço. O
in vivo
biodistribuição foi monitorado por um sistema de imagem animal vivo com Ex /Em de 745 nm /820 nm em diversas épocas, injecção ponto post. A radiação de fotões sobre a superfície do fígado de um animal foi expressa como fótons por segundo por centímetro quadrado por esferorradiano (p /seg /cm
2 /SR). As imagens são fotos de compostos gerados pelo Living software de imagem. A) in vivo a monitorização longitudinal de ambos os lipossomas. B) A análise das imagens de fluorescência usando Viver software de imagem.
In Vivo
Estudos
O objetivo deste estudo é desenvolver um novo esquema terapêutico para o tratamento intervenção do câncer hepático metastático. A estratégia é o órgão alvo-o fígado, mas não as células cancerosas. Portanto, um modelo metastático de fígado artificial de câncer de cólon foi criada usando HCT-8 de células cancerígenas do cólon humano. Como as células HCT-8 têm alta magnitude de malignidade, o tumor inoculado no fígado pode ainda metástase para mesentérica linfonodo. A progressão do tumor foi avaliada por dois pontos: 1) como o tumor no fígado apresentou forma irregular, que é difícil medir com precisão o tamanho do tumor. O peso do tumor no fígado por este meio foi utilizado para avaliar a progressão do tumor hepático; 2) o peso de carcinoma no nódulo linfático mesentérico. A metástase em linfonodo mesentérica poderia ser encontrado em 2 semanas de inoculação de células pós intra-hepática. Em seguida, a metástase espalhou-se rapidamente dentro de 3-4 dias e conduzir à morte dos animais sem tratamento se procedeu. Portanto, todos os ratinhos neste experimento receberam tratamento usando lipossomas carregados com drogas /free Dox no dia 8 inoculação de células pós e sacrificados no dia 10 após a administração de medicamentos. A dose de droga de 6 mg /kg foi selecionado para
tratamento in vivo
.
Embora o método de injecção na veia portal em ratos tem sido relatada [25], que continua a ser uma cirurgia complicada e difícil de ser eficazmente realizada num grande número de animais. O baço é um órgão linfóide primário que é conhecido para transmitir para o fígado através das veias portal esplénicas e [26]. Portanto, injecção de baço foi escolhido para imitar a perfusão da veia porta. Este método tinha sido provado ser eficaz para a entrega de lipossoma para o fígado em nossos estudos anteriores [27].
Como revelado pelo estudo farmacodinâmica (Fig. 6), o tratamento de livre Dox não teve efeitos terapêuticos sobre hepática do tumor em comparação com o controlo de PBS, independentemente da via de administração do fármaco. O peso do tumor hepático médio de livre Dox grupos tratados via intravenosa (0,27 ± 0,14) e injecção de baço (0,29 ± 0,1) era comparável ao do grupo de PBS (0,24 ± 0,06). Da mesma forma, CL-Dox resultou na inibição marginal sobre a progressão do tumor hepático. A administração do medicamento por tanto i.v. (0,23 ± 0,08) e injecção de baço (0,27 ± 0,12) não conseguiu reduzir eficazmente o peso do tumor no fígado em comparação com o grupo PBS. No entanto, com carga de droga de Gal-lipo através de administração do baço, tal como se esperava, mostrou um efeito significativo em termos de a supressão da progressão do tumor no fígado (0,15 ± 0,06, p
Gal /baço vs PBS = 0,015), embora tal formulação liposómica por meio de IV desempenhado um papel muito pequeno na inibição da progressão do tumor hepático (0,22 ± 0,16). Além disso, uma inibição marcada do tumor pode ser observada no grupo tratado com carregadas com droga Gal-lipo através do baço sobre que com livre Dox (p
Gal vs Dox /baço = 0,0011) ou Cl-Dox (p
Gal vs CL /baço = 0,043). Isto sugere que a resposta anti-tumoral foi aumentada por lipossomas direccionados e administração local.
Três formulações (Dox sozinho, CL-Dox e Gal-Dox) foram introduzidos em ratinhos portadores de tumores no dia 7 a inoculação das células através de pós duas vias de administração, por injecção na veia da cauda e de injecção baço. A dose da droga administrada foi de 6 mg /kg. A) A progressão tumoral no fígado foi avaliada pelo valor médio de peso de tumor hepático. B) metástases em linfonodos mesentérica foi avaliado pelo peso médio de carcinoma metastático do nó de linfa mesentérica. Os resultados representam a média ± SE. “*” Indicam diferença significativa (p 0,05).
Uma das indicações clínicas neste modelo de tumor é a metástase de nódulo linfático mesentérico, e, portanto, é um indicador importante para avaliar a progressão do tumor. O peso médio de metástase de carcinoma de mesentérica linfonodo de grupos tratados pelo livre Dox via intravenosa (0,86 ± 0,57 g) de injecção ou baço (0,77 ± 0,56 g) mostrou nenhuma diferença significativa em relação ao grupo de PBS (1,34 ± 0,54 g). Encapsulamento de Dox em CL mostrou uma metástase ainda mais graves do que aqueles tratados por Dox. Isto pode ser atribuído ao retardamento da libertação do fármaco a partir dos lipossomas resultantes da concentração do fármaco livre reduzida no local alvo. No entanto, o peso do carcinoma metastático significar a partir de animais injectados com CL-Dox através do baço foi significativamente mais baixa do que a via i.v. (P
CL /baço vs i.v. = 0,0059). Isto indicou que a via de injecção baço poderia melhorar o efeito anti-tumoral. Encorajador, carregado de drogas Gal-lipo via tanto i.v. (0,41 ± 0,27, p
Gal /IV vs PBS = 0,0005) e a administração do baço (0,3 ± 0,5, p
Gal /baço vs PBS = 0,0028) mostrou um efeito consideravelmente mais forte em termos de a supressão da progressão tumoral em nódulos linfáticos mesentéricos em comparação com o grupo de controlo. Além disso, foram encontradas diferenças significativas entre os animais tratados com Gal-Dox e CL-Dox, quer através de injecção do baço (p
Gal vs CL /baço 0,001) ou intravenosa (P
Gal vs CL /i.v. = 0,007) na inibição da metástase do nodo da linfa mesentério. Estes resultados demonstraram que o efeito terapêutico sobre a metástase do fígado poderia ser grandemente melhorada por meio da administração de lipossomas galactosilado baço imitando perfusão veia porta.
Uma das razões mais importantes que limitam a aplicação clínica da doxorrubicina é os seus efeitos secundários sistémicos. Tal toxicidade sistemática pode ser reduzida por administração regional de drogas. Uma vez que a estratégia terapêutica é alvejar o órgão de fígado, lesões hepáticas potencialmente causada pela concentração de fármaco melhorada resultante da administração local da droga e veículo de fármaco alvo (Gal-lipo) devem ser consideradas. Portanto, tecidos normais do fígado de cada portadores de tumor do rato, após o tratamento com várias formulações de fármaco por via de injecção do baço foram recolhidos e fixados com formalina a 10% durante 24 horas, e H E foi realizada a coloração. A partir de H E os resultados da coloração (Figura 7), não há lesões graves no fígado pode ser observada entre as amostras a partir de grupos tratados com Dox livre, CL-Dox e Gal-Dox através de injecção do baço em comparação com o grupo controlo PBS. ligeiras lesões hepáticas semelhantes foram apresentados nestas amostras, que podem ser atribuídas à inoculação das células de tumor no fígado. Além disso, foram observadas diferenças entre CL-Dox e grupo Gal-Dox. Este resultado indicou que o esquema de segmentação do órgão não faria com que as lesões de tecidos normais, mas melhorar o efeito anti-tumoral, embora a concentração da droga dentro do fígado foi aumentado por órgão alvo lipossoma e a administração do fármaco regional.
O normais tecidos do fígado a partir de grupos tratados com as três formulações de fármaco por via de injecção do baço e grupos PBS foram recolhidos e fixados com formalina a 10% durante 24 horas à ambiente, e depois hematoxilina e eosina (H e de coloração) foi levada a cabo. Ampliação = 400 ×.
Discussão
Cancro continua a ser uma das principais causas de morte mais comuns. O desenvolvimento de estratégias terapêuticas eficazes é o destaque da pesquisa biomédica. À medida que a malignidade do cancro está associado com a sua capacidade para formar metástases, o desenvolvimento de novos métodos para controlar a metástase pode ser uma alternativa para melhorar o resultado do tratamento. Para atingir este objetivo, acreditamos, dois aspectos devem ser considerados. Uma é o de aumentar a concentração eficaz de fármacos anti-cancro para destruir microambiente do tumor metastático e prolongar o tempo de residência de medicamentos. A outra é a de diminuir os efeitos secundários das drogas em tecidos normais. Sem dúvida, os lipossomas têm sido provado ser uma transportadora de drogas ideal que tem um forte impacto sobre a farmacocinética e distribuição do tecido de drogas incorporadas, resultando em maior eficácia, bem como muito reduzida toxicidade sistemática de drogas. Além disso, a quimioterapia, tais como a perfusão regional de veia porta gera uma alta concentração de droga no local-alvo e, simultaneamente, uma baixa concentração de droga na circulação sistémica e em outros tecidos. Para avaliar o potencial de aplicação de formulações lipossómicas com a administração local na terapia de tumor metastático hepática, determinou-se em primeiro lugar a concentração de plasma e a biodistribuição do doxorubicina a partir de lipossomas convencionais carregadas com fármaco.