Abstract

Fundo

A infecção por papilomavírus humano de alto risco (HPV) dos tipos tem sido reconhecida como um fator causal para o desenvolvimento de cancro do colo do útero e uma série de outras doenças malignas. Hoje em dia, as vacinas contra o HPV, altamente eficaz na prevenção da infecção persistente e lesões pré-cancerosas, estão disponíveis para a prática clínica de rotina.

Objectivos

Os dados sobre a prevalência e distribuição de HPV de tipo específico na população de cada país são cruciais para a vigilância da prevalência específica do tipo HPV no início da vacinação contra HPV.

Métodos

as mulheres que utilizaram um exame ginecológico preventivo que não tinham histórico de anormal constatação e /ou cirurgia citológico de lesões cervicais foram inscritos. Todas as amostras foram testadas para a presença do HPV de alto risco por Captura Híbrida 2 (FC HC2) e por um ensaio de mancha de linha modificado por PCR inversa com os iniciadores de largo espectro (BS-RLB).

Resultados

foram analisados ​​

esfregaços cervicais de 1393 mulheres. Em 6,5% das mulheres, achados citológicos atípicos foram detectados. No total, 28,3% (394/1393) das mulheres foram positivos para qualquer tipo de HPV por BS-RLB, 18,2% (254/1393) por HC2 HR, e 22,3% (310/1393) por BS-RLB para os tipos de HPV HR. Em mulheres com resultados atípicos a prevalência de RH e quaisquer tipos de HPV foram significativamente maiores do que em mulheres com achados citológicos normais. Em geral, 36 tipos diferentes de HPV foram detectados, com HPV 16, sendo a mais prevalente (4,8%). positividade HPV diminuiu com a idade; a maior prevalência foi de 31,5% no grupo etário dos 21-25 anos.

Conclusões

Nossos sujeitos do estudo representam a população de triagem real. A prevalência do HPV nesta população na República Checa é maior do que em outros países da Europa Oriental. Além disso, o espectro de tipos de HPV mais prevalecentes difere daqueles reportados por outros, mas é de HPV 16, concordante, o tipo mais prevalente. prevalências específicas do tipo de HPV específicos de cada país fornecer informações de base que permitirá medir o impacto da vacinação contra o HPV no futuro

Citation:. Tachezy R, Smahelova J, J Kaspirkova, Salakova M (2013) Tipo de Papilomavírus Humano Prevalência espec�ico no cancro do colo do útero Triagem população de mulheres na República Checa. PLoS ONE 8 (11): e79156. doi: 10.1371 /journal.pone.0079156

editor: Daniela Flavia Hozbor, Universidad Nacional de La Plata, Argentina

recebida:. 21 de junho de 2013; Aceito: 26 de setembro de 2013; Publicação: 12 de novembro de 2013

Direitos de autor: © 2013 Tachezy et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este trabalho foi apoiada pela subvenção NS 10 /656-3 /2009 e pela concessão NT 12372 do Ministério da Saúde da República Checa. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:. Laboratório Biopticka é uma empresa privada que presta patológica de rotina, citológico e diagnósticos genéticos moleculares de humano amostras clínicas. O co-autor, Jana Kaspirkova, é um geneticista molecular que é responsável pela coleta de amostra adequado e que contribuíram para a análise de dados. Não há nenhum conflito de interesses potencial sobre os resultados do estudo e ela confirma que isso não altera a adesão a todas as políticas de PLoS One sobre os dados e materiais de compartilhamento.

Introdução

papilomavírus humano (HPV ) são pequenos vírus de ADN que infectam epitélio das mucosas e da pele. Atualmente, mais de 170 tipos de HPV são conhecidos, 13 classificados como de alto risco e 7 tipos de HPV de alto risco, como provavelmente. Os tipos de HPV de baixo risco (LR) causam lesões benignas enquanto os tipos de alto risco (HR) de HPV foram estabelecidos como agentes etiológicos de câncer cervical (CC) [1,2]. Além do câncer de colo do útero, HR HPV tem efeitos cancerígenos em vários outros locais anatômicos em mulheres e homens [3]. HPVs são atualmente o sexualmente viral infecção mais comum transmitida em todo o mundo, mas a distribuição de diferentes genótipos varia entre populações e regiões geográficas [4]. Em uma meta-análise de 1 milhão de mulheres com achados citológicos normais, a prevalência de HPV global estimada foi de 11,7% e havia diferenças substanciais entre continentes. No entanto, cinco tipos de HPV foram consistentemente a mais prevalente: HPV 16, 18, 52, 31, e 58, independentemente da localização geográfica. Na Europa, a maior prevalência foi encontrado em países orientais [5]. Os dados da República Checa publicados antes [6] não foram incluídos na meta-análise, porque o estudo não atender aos critérios de inclusão devido a uma seleção inadequada das mulheres com achados citológicos normais, uma vez que eles foram recrutados em um ambiente hospitalar. A prevalência de HPV neste grupo foi alta (23%), mas semelhante a outros países do Oriente. alta prevalência de HPV foi relatado para correlacionar com alta incidência de CC com duas excepções, Sul da Ásia e da Europa Oriental [5]. No entanto, na República Checa, a incidência de CC é sempre muito alto, 16,1 /100 000 mulheres (padrão europeu) em 2010, apesar do fato de que os recursos financeiros consideráveis ​​são dirigidas para a prevenção do cancro do colo do útero. As razões são principalmente a falta de coordenação e monitorização que leva ao excesso de triagem de uma minoria de mulheres, enquanto a maioria da população-alvo estão sub-selecionados ou não selecionados em tudo [7]. A idade recomendada pela ginecologia Checa e Sociedade Obstétrica para o primeiro exame de mulheres após o início da vida sexual é de 15 anos e não há nenhuma limitação em termos de idade de rastreio especificado no programa de prevenção do câncer cervical na República Checa. No entanto, as mulheres com idade entre 25 a 60 que não comparecer ao exame nos últimos dois anos deve ser convidado pela companhia de seguros de saúde [8].

detecção de HPV tem sido mostrado como um teste robusto, reprodutível e sensível para triagem de mulheres com achados citológicos anormais e para acompanhamento de mulheres tratadas por lesões cervicais. Além disso, a detecção do HPV também foi recentemente mostrado ser um teste sensível e de custo eficaz para a identificação de mulheres em risco em programas de rastreio cervical primário [9,10]. Duas vacinas de papilomavírus profiláticos, bivalente e quadrivalente, estão disponíveis para a prevenção primária de doenças associadas ao HPV [11]. A avaliação da prevalência específica do tipo de HPV na população antes do início da vacinação de rotina e a vigilância de possíveis mudanças na distribuição do tipo é importante tanto para a seleção dos testes de diagnóstico e para a estimativa do potencial impacto local de vacinas contra o HPV na prevenção de doenças associadas ao HPV em mulheres e homens.

Materiais e Métodos

População do estudo

Na República Checa, o intervalo de rastreio é de um ano. As mulheres com citologia atípica e /ou achados colposcópico estão programadas para acompanhar o exame em 3-6 intervalo de meses. detecção do HPV e tipagem foi realizado em mulheres que tiveram seu exame ginecológico anterior mais de um ano atrás, e que não tinham histórico de resultados atípicos ou patológicas sobre o colo do útero e nenhum tratamento prévio para lesões cervicais.

Ao todo, amostras de 1393 mulheres (idade média de 33,5 anos; faixa etária 14 – 79 anos) foram selecionados a partir do banco de amostras do Laboratório bioptic em Pilsen, República Checa. Estas amostras foram fornecidas por ginecologistas que tratam pacientes em 5 de 14 distritos diferentes na República Checa no período entre janeiro de 2010 e dezembro de 2011. Esses locais incluem tanto grandes cidades e áreas rurais. Amostras de Amostra de Transporte Médio (STM) (Qiagen, Hilden, Alemanha) foram enviadas para o Laboratório de Referência Nacional para papilomavírus (NRL PV), sob o número de identificação de laboratório (ID laboratório) para impedir a identificação pessoal dos sujeitos do estudo em NRL PV. O estudo foi duplo-cego. As pessoas que executam a detecção do DNA do HPV e tipagem não tinham conhecimento dos resultados de citologia e os citologistas estavam cegos para os resultados de DNA HPV. Os resultados citológicos estavam disponíveis sob o ID de laboratório para a análise final.

classificação citológica.

A classificação citológica foi feito de acordo com a Bethesda 2001 update [12]. Para o propósito deste estudo, os achados citológicos foram agrupados em quatro categorias:, menores normais (se células escamosas atípicas de células significado desconhecido /ASC-US /e /ou atípicas glandulares, não especificada /AGC-NOS /foram detectadas) , leve (se lesão intraepitelial escamosa de baixo grau /LSIL /foram detectados) ou grave (se células escamosas atípicas, não pode excluir as células de alta qualidade escamosas lesão intraepitelial /ASC-H /e /ou atípicas glandulares, favorecem neoplasia /AGC- NEO /e /lesões intra-epiteliais de alto grau ou /HSIL /) foram detectados).

declaração de Ética.

O estudo foi aprovado pelo comitê de ética do Instituto de Hematologia e Transfusão de Sangue. A necessidade de consentimento foi dispensada pela comissão de ética, pois as amostras foram selecionadas de forma anônima a partir do banco de amostras do Laboratório Bioptic em Pilsen, República Checa (https://www.biopticka.cz/).

disponibilidade de dados.

o estudo dados de origem serão disponibilizados a pedido, de acordo com os princípios estabelecidos pelo Conselho US National Research do National Academies (National Academies Press, 2003).

detecção de HPV e genotipagem

Captura híbrida 2 de ensaio (HC2).

a 200 uL de aliquota de cada transporte meio da amostra (STM) (Qiagen, Hilden, Alemanha) espécime foi armazenado a -20 ° C até posterior processamento (veja abaixo). Todas as amostras foram testadas usando a Captura Híbrida 2 High-Risk teste HPV DNA (HR HC2) (Digene Corporation, Gaithersburg, MD). Este ensaio permite a detecção de tipos de HPV 13 h (HPV 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, e 68). O teste foi realizado de acordo com as instruções do fabricante. O limite para designação positivo HPV era uma luz /unidade de corte relativa (RLU /CO) proporção de ≥1.0.

PCR e hibridação.

As células a partir de uma alíquota de 200 ul de cada amostra MCT foram sedimentadas por centrifugação e o ADN foi extraído utilizando o QIAamp DNA Mini Kit (Qiagen, Hilden, Alemanha) de acordo com a o protocolo do fabricante. A eluição final de ADN a partir da coluna foi feita em 100 ul de tampão de eluição.

A presença e a integridade do ADN humano foram confirmados por PCR com os iniciadores MS3 /MS10bio específicos para o gene da beta-globina [13].

A amplificação foi realizada em um termociclador de PCR (PTC 200, MJ Research Inc., Waltham, MA, EUA) com uma mistura de largo espectro BSGP5 + e os iniciadores na extremidade 5 ‘marcado com biotina BSGP6 + iniciadores que amplificam a 150 fragmento pb do gene L1 [13]. Cinquenta microlitros da mistura de PCR continha 4 uL de ADN isolado, KCl 50 mM, Tris HCl 10 mM, pH 8,3 (Roche Applied Biosystems, Mannheim, Alemanha), 200 uM de cada trifosfato de desoxinucleótido, MgCl2 3,5 mM, 1 U de ADN polimerase de AmpliTaq Gold (Applied Biosystems Roche, Mannheim, Alemanha), 10 pmol de cada um dos nove BSGP5 + iniciadores, e 20 pmol de cada um dos três BSGP6 5’-biotinilado + iniciadores (MWG-Biotech AG, Ebersberg, Alemanha). Após desnaturação inicial a 94 ° C durante 4 minutos, cada um dos 40 ciclos consistiu de uma desnaturação a 94 ° C durante 20 segundos, hibridação do iniciador a 38 ° C durante 30 segundos, e o alongamento da cadeia a 71 ° C durante 80 segundos. No final, foi efectuada a incubação a 71 ° C durante 4 minutos. Após a amplificação, 10 ul do produto de PCR foi analisado num gel de agarose horizontal a 3% (NuSieve 3: 1 agarose, FMC Bioproducts, Rockland, ME).

Para genotipagem, foi utilizada a hibridização blot linha reversa (RLB) [14]. O método RLB é capaz de identificar 37 tipos diferentes de HPV num único ensaio. Sequências de todas as sondas, exceto para aqueles redesenhado de acordo com Schmitt [15] (HPV tipos 16, 39, 59 e 82, e sondas universais U1 e U2), foram descritos antes [14]. Todas as sondas foram ligadas covalentemente com o grupo 5′-amino-terminal a uma membrana activada de ‘Biodyne C com carga negativa e hibridou-se com o produto de PCR biotinilado. Após a lavagem, a membrana foi incubada com conjugado de estreptavidina marcado com peróxido a 42 ° C durante 60 min. Para a detecção por quimioluminescência de hibridação de DNA, a membrana foi incubada em ECL detecção líquido (Amersham Biosciences, Uppsala, Suécia) e expostos a LumiFilm (Roche, Indianapolis, IN) durante 5 min.

As amostras positivas por HC2 HR, mas negativas por BS-RLB foram testados por PCR com os iniciadores de consenso MY09 /MY11 e HMB01 conforme especificado antes [16]. As amostras positivas foram tipificados por sequenciação como mostrado abaixo.

HPV sequenciação.

As amostras que não tinham hibridizado no RLB mas revelaram uma banda clara sobre o gel de agarose foram submetidas a sequenciação de nucleótidos do ADN, a fim de determinar o genótipo HPV exacta. Quarenta microlitros do produto de PCR foi cortado do gel de agarose a 2% (NuSieve GTG, FMC Bioproducts, Rockland, ME, EUA), purificado utilizando o kit MinElute Gel Extraction (Qiagene, Hilden, Alemanha), e sequenciados com o ” Big Dye Terminator Primer kit de sequenciação do ciclo “(Applied Biosystems, Foster City, CA, EUA). A análise foi realizada num sistema 3500 automatizado ABI Prism sequenciação (Applied Biosystems, Foster City, CA, EUA) e as sequências foram analisadas pelo software Cromas e avaliadas pelo software BLAST (http: //www.ncbi.nlm.nih .gov /BLAST /).

teste Linear Array HPV genotipagem (LA).

As amostras com resultados discrepantes pela HC2 RH e métodos de PCR (ver acima) foram testados com o LA (Roche). Este ensaio permite a detecção de 37 HR e tipos de HPV LR (HPV 6, 11, 16, 18, 26, 31, 33, 35, 39, 40, 42, 45, 51, 52, 53, 54, 55, 56 , 58, 59, 61, 62, 64, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73 (MM9), 81, 82 (MM4), 83 (MM7), 84 (MM8), IS39, e CP6108). O teste foi realizado de acordo com as instruções do fabricante. A partir do ADN extraído, foi utilizada a mesma quantidade que para o método BS-RLB (4 ul). analisa

Estatística

amostras Multiply infectadas foram aqueles em que foram detectados dois ou mais tipos de HPV. Estas amostras foram contadas como positivas para um tipo de HPV e também incluídos entre os resultados positivos para os outros. As prevalências de HPV de tipo específico são expressas como percentagem do total dos indivíduos testados para HPV, e, portanto, representam a prevalência de HPV tanto em infecções simples ou múltiplas. Para expressar a representação de cada tipo em infecções simples e múltiplas, cada amostra foi atribuído em frações proporcionais aos genotipos particulares, mas contado apenas uma vez [17]. A diferença na prevalência de HPV no grupo de mulheres com achados citológicos normais foram comparados com as mulheres com resultados atípicos (ASC-US /AGC-SOE, AGC-NEO /LSIL, ASC-H /HSIL) com intervalo de confiança de 95% ( CI) utilizando GraphPad InStat (versão 3.00) (GraphPad Software, San Diego, CA). Para tabelas de contingência, foram utilizados o teste do qui-quadrado padrão e o teste exato de Fisher. Todos os testes foram bicaudais eo nível de significância foi a = 0,05. A fim de excluir as diferenças na estrutura etária entre populações que usamos padronização direta (padrão mundial da OMS). A estatística Kappa foi utilizado para medir o acordo para o status de HPV positividade entre os dois testes utilizados.

Os tipos de HPV detectados foram classificados em baixo risco (LR) (HPV 6, 11, 32, 40, 42, 43, 44, 54, 61, 62, 72, 74, 81, 90 e 114), de alto risco (HR) (HPV 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, e 68), e, provavelmente, de alto risco (pHR) (HPV 26 , 53, 66, 67, 70, 73 e 82) tipos de Alpha género que contém os tipos de mucosa de HPV [18-20]. Em nossas análises, definimos (com base na proximidade filogenética) HPV 31 como intimamente relacionado com HPV 16 e HPV 45 como intimamente relacionado com HPV 18. HPV 33, 52 e 58 como mais distantemente relacionado ao HPV 16.

O laboratório é credenciado para a CSN EN ISO 15 189 e participa regularmente em programas de controle de qualidade externa organizados pelo instand (Alemanha) e Centro de Mendel de Ciências Biomédicas (Chipre). Além disso, o laboratório participou duas vezes na OMS HPV Study LabNet Proficiência de HPV DNA Typing organizado pelo Laboratório OMS HPV global de referência [21,22].

Resultados

Fora de 1393 mulheres em nosso estudo, 25,6% (357/1393) tinham menos de 25 anos e 2,2% eram mais velhos (32/1393) de 60 anos, ou seja, 72% estavam dentro da faixa etária recomendada para a seleção. A maioria das mulheres – 93,5% (1302/1393) – teve resultados citológicos normais. Ao todo, 6,5% (91/1393) das mulheres tinham achados citológicos anormais, 4,4% (61/1393) tiveram ASC-US ou AGC-NOS, 2,0% (28/1393) tiveram AGC-NEO ou LSIL e 0,1% ( 2/1393) tiveram ASC-H ou HSIL. Menos mulheres – 18,2% (254/1393) – foram positivos para HPV HR pelo método HR HC2 em comparação com BS-RLB que detectou 22,3% (310/1393) HPV HR ou HR e LR HPV positivas e 28,3% (394 /1393) foram positivos por BS-RLB para qualquer tipo de HPV. A prevalência correspondentes, para a população mundial normalizado-idade, foram 14,7%, 19,5%, e 24,6%, respectivamente. Por BS-RLB, 70,6% (278/394) dos indivíduos eram HPV positivos para um único tipo de HPV, enquanto 29,4% foram positivos para vários tipos (18,3% para dois, de 6,9% para três, de 2,8% para quatro, 1,3% por cinco , e 0,3% para os seis tipos de HPV). LR tipos de HPV, como uma única infecção, estava presente em 6,0% (84/1396) de mulheres (Tabela 1).

achados citológicos

Todos

normais

ASC-US /AGC-SOE

AGC-NEO /LSIL

ASC-H /HSIL

p

N [%] N [%] N [%] N [%] N [%] HR HC2254 (18,2) 203 (15,6) 23 (37,7) 27 ( 96,4) 1 (50,0) 0.0001PCR, HR HPV * 310 (22,3) 256 (19,7) 27 (44,3) 26 (92,9) 1 (50,0) 0.0001PCR, qualquer HPV394 (28,3) 333 (25,6) 33 ( 54,1) 27 (96,4) 1 (50,0) 0.0001PCR, LR HPV ** 84 (6,0) 77 (5,9) 6 (9,8) 1 (3,6) 0 (0,0) 0.4912HPV 6/11

*** 20 (1,4) 19 (1,5) 0 (0,0) 1 (3,6) 0 (0,0) 0.7503HPV 16/18

# 104 (7,5) 86 (6,6) 9 (14,8) 9 (32,1) 0 (0,0) 0.0001HPV 31/45

*** 43 (3,1) 37 (2,8) 3 (4,9) 3 (10,7) 0 (0,0) 0.0565HPV 33/52/58

48 (3.4) 38 (2,9) 6 (9,8) 3 (10,7) 1 (50,0) 0.0007Table 1. A prevalência do HPV pelos achados citológicos e pelo método de detecção do DNA do HPV

p-valor para a comparação de prevalência de HPV em paciente com normais e atípicas (ASC-US /AGC-SOE, AGC-neo /LSIL, ASC-H /HSIL) achados citológicos, HR HC2 = híbrido teste HR Capture, PCR = cadeia da polimerase reação, ASC-US = células escamosas atípicas de significado desconhecido, AGC-NOS = células glandulares atípicas, não especificado de outra forma, AGC-NEO = células glandulares atípicas, favorecem neoplasia, LSIL = baixo grau escamosas lesão intraepitelial, ASC-H = atípica células escamosas, não se pode excluir de alto grau de lesão intraepitelial escamosa (HSIL), HSIL = alto grau escamosas lesão intraepitelial * presença de HPV HR e também HPV HR na infecção múltipla com tipos LR HPV, ** presença de tipos LR HPV somente, em infecções simples ou múltiplos com outros tipos LR *** amostras que não contêm HPV 16 e /ou 18,

# amostras HPV 16 e /ou 18 positivo,

As amostras que não contêm HPV 16 e /ou 18 e /ou 31 e /ou 45 CSV Baixar CSV

mulheres com citologia normal foram positivos para HPV tipos de RH em 15,6% (203/1302) pelo teste HC2. Usando BS-RLB, 19,7% (256/1302) das mulheres citologicamente normais foram positivas para os tipos de HPV de AR, e de 25,6% (333/1302) para qualquer tipo de HPV (Tabela 1). As respectivas prevalências, a população mundial padronizada por idade, foram 12,5%, 16,3% e 21,4%. Das mulheres do estudo, 5,9% (77/1393) foram infectadas com HPV tipos LR.

A prevalência da infecção múltipla aumentou com a gravidade dos achados citológicos (P = 0,0003) (Tabela 2). infecção múltipla foi mais comum na idade mais jovem e estava ausente em mulheres com mais de 55 anos (Figura 1).

HPV DNA de prevalência (%)

etária

N

HR HC2

PCR HR HPV

PCR QUALQUER HPV

PCR LR HPV

HPV 6/11

HPV 16/18

≤2015334 (22,2) 43 (28,1) 54 (35,3) 11 (7,2) 4 (1,3) 13 (9,2) 21-2521367 (31,5) 73 (34,3) 87 (40,8) 14 (6,6) 7 (3,3) 26 (12,2) 26-3020229 (14,4) 43 (21,3) 56 (27,7) 13 (6,4) 4 (2,0) 18 (8,9) 31-3521634 (15,7) 42 (19,4 ) 54 (25,0) 12 (5,6) 3 (1,4) 12 (5,6) 36-4019218 (9,4) 24 (12,5) 36 (18,8) 12 (6,3) 2 (1,0) 6 (3,1) 41-4511410 (8,8) 13 (11,4) 17 (14,9) 4 (3,5) 0 (0,0) 3 (2,6) 46-50905 (5,6) 9 (10,0) 17 (18,9) 8 (8,9) 0 (0,0) 7 (7,8) 51-55555 (9,1 ) 4 (7,3) 5 (9,1) 1 (1,8) 0 (0,0) 3 (3,6) 56-60371 (2,7) 3 (8,1) 4 (10,8) 1 (2,7) 0 (0,0) 0 (0,0) 61-65210 (0.0) 2 (9,5) 3 (14,3) 1 (4,8) 1 (4,8) 0 (0,0) 6590 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) Tabela a prevalência do HPV específicos 2. Idade pelo método de detecção do DNA do HPV em mulheres com achados citológicos normais.

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Independentemente do método utilizado para a detecção de HPV, a prevalência de HPV FC aumentou com a gravidade da achados citológicos enquanto que a prevalência de tipos de HPV LR na infecção simples ou múltipla mantém-se mais ou menos estável (Tabela 1). Em nosso estudo, apenas duas mulheres foram detectados com achados citológicos graves, um com HSIL foi positivo em ambos HC2 RH e BS-RLB (HPV 33) e um paciente com ASC-H foi negativo em ambos os métodos.

A prevalência de HPV HR foi dependente da idade. Observou-se maior prevalência de HPV HR no grupo etário dos 21-25 anos, tanto por HC2 RH e BS-RLB, 34,2% (78/228) e 36,8% (84/228), respectivamente, e diminui rapidamente em mulheres mais velhas . Na categoria de idade de 61-65 anos, BS-RLB detectado 9,1% (2/22) de positivos de HPV RH e RH HC2 deram resultados negativos (Figura 2).

Em mulheres com achados citológicos normais, a prevalência de HPV HR foi ligeiramente inferior em comparação com toda a coorte, atingindo o máximo de 31,5% (67/213) e 34,3% (73/213) com a idade de 21-25 anos, tal como avaliado por HR HC2 e BS-RLB, respectivamente (Tabela 2).

A detecção de DNA HR HPV por HR HC2 e BS-RLB produziu resultados concordantes em 91,4% (1273/1393) das amostras. A correlação foi substancial (Kappa = 0,7339).

Fora de 120 amostras discrepantes, 88 foram BS-RLB positivo, mas HR HC2 negativo para HPV HR. Destes, 76,1% (67/88) continha tipos de HPV de RH que são visados ​​pelo conjunto HR HC2. Em 32,8% (22/67) das amostras, foi detectado infecção múltipla HPV. Os tipos de HPV vacinal RH 16 e /ou 18 foram detectados em 31,8% (28/88) das amostras: em 60,7% (17/28) como uma única infecção e em 39,3% (11/28) como parte de um múltiplo infecção. Três desses 28 pacientes (10,7%) com infecção múltipla tinha achados citológicos suspeitos (ASC-US), enquanto os restantes 89,3% dos indivíduos apresentaram citologia normal.

Houve 32 amostras positivas em HC2 HR, mas negativos para o HPV HR pela BS-RLB. Em 56,3% (18/32) das amostras, BS-RLB detectado tipos de HPV LR somente (HPV 6, 32, 42, 43, 44, 54, 61, 62, 74 e 81); o restante 43,8% (14/32) das amostras foram BS-RLB negativo para qualquer tipo de HPV. O valor médio do RLU /CO nesses 14 amostras foi bastante baixa (12,3 RLU /CO), que é igual a fronteira para positividade fraca de amostra sobre HC2 HR. Em 10/18 amostras, positivas por BS-RLB para os tipos de HPV LR somente, LA também detectou tipos de HPV HR, principalmente como parte de infecção múltipla. Em 6/14 amostras negativas por BS-RLB para qualquer tipo, LA também detectado RH tipos de HPV (Tabela 3).

HPV TIPO DE AMOSTRA

achados citológicos

HR HC2 [RLU /CO]

BS-RLB

LA

1Normal8.144242,662Normal1.2342423ASC-US14.334242,514Normal3.2005Normal1.742426LSIL35.944,81*31,62,81,52**7Normal1.2008Normal14.34435*9Normal132.70010Normal1.60011Normal1.10012ASC-US2.5424213Normal11.960014Normal6.2740**15Normal1.984242,66,8416Normal2.27616117Normal4.70018Normal1.8035,5919Normal5.9003120Normal1.4344,54*0**21Normal6.1754*31,5422Normal1.470*54,6223Normal1.46425924***Normal5.22623125Normal1.213283,84**26Normal1.8703527Normal10.126161,8128Normal1.1405229Normal5.244359**30Normal3.9005231Normal1.50059,8132Normal23.7766,31Table 3. Resultados da detecção específica do tipo de HPV por meio de Linear Array (LA) em amostras negativas para HPV HR no BS-RLB, mas positivas em HC2 HR.

* BS-RLB não detecta o HPV 62, ** LA faz não detectar o HPV 32, 43, 44, 74; *** 66 de HPV detectado por meio de MY09 /11 PCR e sequenciação CSV Transferir CSV

No total, foram detectadas 35 tipos diferentes de HPV: 20 HR e tipos de HPV phr e 15 tipos de HPV LR. A prevalência por tipo de HPV e achado citológico são mostrados na Tabela 4. Os tipos mais predominantes foram RH HPV 16 (5,4%), seguido de HPV 56, 39, 53, e 18, enquanto que os tipos de HPV 42, LR, 54, 44 , 6, e 61 foram detectados com maior freqüência. A prevalência de tipos de HPV vacinais, intimamente e distantemente relacionados em todas as mulheres, assim como em mulheres com citologia normal eram praticamente idênticos e estão resumidos na Tabela 1. HPV 6 e /ou 11 foi encontrada apenas em 1,4% (20/1393) de enquanto as amostras de HPV 16 e /ou 18, em 7,5% (104/1393) de amostras. tipos estreitamente relacionados HPV 31 e /ou 45 estavam presentes em 3,1% (42/1393) e parente distante tipos de HPV 33 e /ou 52 e /ou 58 em 3,4% (48/1393) de amostras.

CITOLÓGICAS ACHADOS

TIPOS

ALL

NORMAL

ASC-US /AGC-SOE

AGC-NEO /LSIL

ASC-H /HSIL

N

%

N

%

N

%

N

%

N

%

1393100.0130293.5614.4282.020.1N+%N+%N+%N+%N+%HPV ALL39428.333325.63354.12796.4150.0HR HPV31022.325619.72744.32692.9150.0HPV single27870.624774.21751.51348.11100.0HPV multiple11629.48625.81648.51451.900.06201.4191.500.013.600.01120.120.200.000.000.016755.4634.8711.5517.900.018322.3241.846.6414.300.02610.110.100.000.000.031221.6161.234.9310.700.03210.110.100.000.000.033191.4171.311.600.0150.03550.450.400.000.000.039332.4262.023.3517.900.04050.450.400.000.000.042433.1362.846.6310.700.04330.220.211.600.000.044191.4161.211.627.100.045292.1262.034.900.000.051312.2211.646.6621.400.052241.7171.334.9414.300.053332.4251.9711.513.600.054271.9201.569.813.600.056392.8312.446.6414.300.058141.0110.834.900.000.059130.990.734.913.600.06190.690.700.000.000.06220.120.200.000.000.06670.560.500.013.600.06730.230.200.000.000.068201.4161.211.6310.700.070130.9120.900.013.600.07210.100.000.013.600.07370.570.500.000.000.07450.440.311.600.000.08160.440.311.613.600.082120.990.711.627.100.09020.120.200.000.000.011410.110.100.000.000.0Table 4. A prevalência dos tipos de HPV na população rastreamento de mulheres tchecas por achados citológicos como revelado pela BS-RLB.

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Discussão

Este estudo fornece informações básicas sobre o de tipo HPV prevalência específica na República Checa antes do início da vacinação de rotina e permite ainda a vigilância das mudanças na prevalência de um número de genótipos de HPV. A prevalência foi estudada na população rastreamento de mulheres na República Checa. Foram utilizados dois métodos para a detecção de HPV. A fim de fornecer dados internacionalmente comparáveis, o comercialmente disponível HC2 conjunto de RH mais utilizado foi selecionado. O segundo método, por outro lado, permite uma detecção muito sensível de um amplo espectro de tipos de HPV e também de múltiplas infecções. Os dois métodos deram resultados concordantes em 91% das amostras. HPV e HPV HR são altamente prevalentes na população Checa. A maior prevalência foi observada na faixa etária de 21-25 anos. Em mulheres com mais de 55 anos, foram detectados nenhuma infecção múltipla e quase nenhum tipo LR. A maioria das mulheres tinham achados citológicos normais, apenas 6,5% das mulheres tinham achados citológicos anormais. Isto está de acordo com os dados anuais no maior laboratório citológico Checa, que realiza cerca de 600 000 exames citológicos de triagem de citologia por ano. Aproximadamente 7,5% das mulheres da população de triagem foram infectadas com os tipos de RH vacinais e 6,5% por tipos de RH de perto e de longe relacionadas enquanto LR tipos vacinais eram muito menos frequentes (1,4%). À semelhança de outros países, o tipo de RH mais prevalente foi o HPV 16, mas outros tipos de HPV HR (HPV 56, 39/45, 18 e 51), que foram os mais comumente detectada na população Checa foram diferentes daqueles relatados para os países europeus por Bruni et al. (HPV 16, 31, 18, 39, 33, e 66) [5].

Meta-análises, bem como uma análise conjunta de prevalência específicas do tipo de HPV em mulheres com achados citológicos normais em todo o mundo têm sido conduzidas [4,5,23], mas os dados publicados anteriormente da República Checa [6] não foram incluídos devido à sua inaptidão. Os dados sobre a prevalência específica do tipo de HPV na população de triagem da Europa de Leste ainda são limitadas. Nenhum dos países da Europa de Leste foi incluído nas primeiras análises combinadas [23]. Na meta-análise de de Sanjosé et al. apenas os dados provenientes da Rússia foram analisados ​​enquanto Bruni et al. incluídos também os dados provenientes da Polónia, Hungria, Bielorrússia e Letónia [4,4,5]. No entanto, para alguns países, por exemplo, Hungria, somente a prevalência total de RH e tipos LR foi avaliada, para os outros países, um número limitado de tipos de HPV foram analisadas ou apenas uma parte das amostras positivas de HPV foram digitados. Recentemente, dados da Eslovénia também foram publicados [24].

A prevalência de HPV em todo o mundo em mulheres com citologia normal na análise agrupada foi de 10,4%, a prevalência de HPV na Europa foi de 8,1%, ea distribuição variaram substancialmente entre os continentes. Europa Oriental foi representada por apenas um estudo da Rússia com 309 mulheres inscritas. A prevalência do HPV no estudo foi muito maior do que em outras regiões da Europa (29,1%). HPV 16 foi o tipo mais prevalente em todo o mundo (2,5%), bem como na Europa Oriental (7,4%), mas esse resultado deve ser considerado com cautela, pois foram positivos somente 100 HPV foram digitados no estudo russo. A prevalência de HPV 16 em outras regiões europeias foi muito menor (1,6% para 3,0%) [4].

A meta-análise de um milhão de mulheres com achados citológicos normais [5] encontraram uma prevalência geral de HPV de 11,7%, comparativamente a nível mundial. Esta meta-análise incluiu dados de cinco países da Europa de Leste e confirmou uma substancialmente maior prevalência de HPV nesses cinco países, em comparação com outras regiões da Europa (21,4% vs. 8,8% -10%). Em nosso estudo, a prevalência de qualquer tipo de HPV em mulheres com achados citológicos normais foi de 25,6% e foi maior do que na Polónia (16,6%). A prevalência de tipos HR HPV em mulheres com achados citológicos normais foram menores na Polónia e na Eslovénia (9,6% e 10,7%, respectivamente) do que na República Checa (19,7% e. 15,6% em BS-RLB e HR HC2, respectivamente). Na população de triagem da Rússia, Bielorrússia e Letónia, a prevalência dos tipos de HPV HR foi de 27,2%. Desde nos quatro estudos, as mulheres da população de triagem foram inscritos, as diferenças na prevalência pode refletir as diferenças reais entre as populações dos quatro países da Europa de Leste ou pode ser atribuído ao fato de que diferentes métodos foram utilizados para a detecção de HPV, como mostrado antes [5]. O estudo polaco utilizado o sistema de + /6 + PCR GP5 que é menos sensível do que o sistema modificado utilizado em nosso estudo. sistema semelhante ao nosso foi aplicada por Schmitt et al. [25] para a população rastreamento de mulheres belgas e a prevalência obtida em seu estudo foram comparáveis ​​aos nossos dados. No estudo Esloveno, um sistema que tem como alvo menos tipos de HPV foi utilizado. No entanto, no estudo de Kulmala et ai. [26], um sistema que detecta apenas nove tipos de HPV de RH foi utilizado e a prevalência relatada foi comparativamente elevada do que na população Checa. Outra fonte de variabilidade é a distinção entre o RH e tipos LR HPV. Nas análises, incluímos tanto o RH e tipos de HPV PHR como tipos de RH (ver materiais e métodos). Se usássemos a mesma definição de tipos de RH como o estudo polaco [27], as prevalências de RH HPV na população Checa seria ainda muito maior, de 20,4% para toda a coorte e 17,9% para as mulheres com achados citológicos normais. Nossos dados confirmam a excepcionalmente elevada prevalência de HPV na população triagem dos países da Europa de Leste, e também são comparáveis ​​com os resultados de numerosos outros estudos realizados em todo o mundo com o HC2 conjunto mais amplamente utilizada (para revisão ver 5).

Na população rastreio das mulheres Checa, a maior prevalência de HPV foi encontrada no grupo etário dos 21-25 anos. A maior prevalência na mesma categoria de idade foi encontrado em ambos os países menos e mais desenvolvidos. Nos países da Europa de Leste, o pico foi observada na faixa etária de 25-34 anos [5].