proteína

metilação Protein é uma modificação pós-tradução que ocorre principalmente em resíduos de arginina e lisina. Quando metiltransferases são nocauteado em ratos, que pode resultar em letalidade embrionária ou morte prematura, indicando o papel biológico vital este grupo de enzimas. O recorde de número de peptídeo metilado identificado em um único experimento é de 249 sites de metilação de arginina.

Aqui, nós desenvolvemos anticorpos altamente específicos contra arginina e metilação de lisina. Após o enriquecimento de imunoafinidade e análise de espectrometria de massa, foram identificados mais de 1000 sites de arginina de metilação em tecidos de linhas celulares e mouse humanos, e 160 sítios de metilação de lisina em linha celular humana HCT116.

Em primeiro lugar, nós desenvolvemos anticorpos contra lisina metilado, usando uma biblioteca de péptidos que tinham um único lisina modificado numa biblioteca de péptidos contendo aminoácidos nas posições vizinhas.

em seguida, puxar para baixo o péptido e análise los com LC /MS /MS metilado. E então, temos classificou a arginina metilação formulário padrão cerebral do rato e do embrião.

Por fim, chamaram a proteína total com dimetilação in vitro. Utilizar esta amostra artificial, foram identificadas mais de milhares de péptido metilado, no entanto, a amostra normal tem menos de 100 sítios de lisina de metilação, o que sugere que esta modificação é restringido a um pequeno subconjunto de proteínas.

A metilação de arginina e resíduos de proteínas lisina tem sido conhecida por muitos anos, o desafio para o campo é falta de ferramentas e métodos de estudo dessas modificações. Este estudo fornecem ferramentas poderosas para obter uma visão sobre o campo de metilação de proteínas.

MC4R é um receptor acoplado G-proteína que se liga? -melanocyte Hormônio estimulante (MSH). Em modelos murinos receptores MC4 foram encontrados para ser envolvido no comportamento, a regulação do metabolismo, comportamento sexual e função eréctil masculina alimentação. Tanto em roedores e seres humanos, de melanocortina-4 receptores (MC4Rs) suprimir o apetite e prevenir a obesidade. Ativação de melanocortina-4 receptores (MC4Rs) restringe a alimentação e previne a obesidade.

Nós eliminado e MC4Rs expressa-re de neurônios que expressam CRE e observado o fenótipo. Como os neurônios-chave que expressam MC4R são glutamatérgica, é quase uma certeza que eles liberam glutamato e excitar seus neurônios-alvo a jusante.

A seguir, mostramos que MC4Rs sobre glutamatérgica neurônios são necessárias para prevenir hiperfagia e obesidade. Em seguida, temos reconstruir MC4Rs apenas em neurónios SIM1 salvado? 60% da obesidade e 100% do dos ratos hiperfagia MC4R-nulo. Este resultado indica que MC4Rs sobre os neurônios SIM1 regulam a alimentação. Uma vez que o factor de transcrição SIM1 é necessária para o desenvolvimento de PVH.

Para resumo, foi demonstrado que os neurónios que expressam MC4R regulam alimentação são SIM1 +, localizado no PVH, glutamatérgica e não GABAérgica, e não expressam oxitocina, corticotrofina pelo hormônio liberador e vasopressina. Identificamos projeções jusante destes neurónios glutamatérgicos ao núcleo parabraquial lateral, o que poderia mediar o apetite efeitos suprimindo.