Sumário
é bem conhecido que a B-1 B células são o tipo de célula principal, que é responsável pela produção de imunoglobulinas naturais M (IgM) e pode responder à infecção por aumentar a secreção de IgM. No entanto, se inesperadamente que algumas células epiteliais também pode expressar IgM transcrição rearranjado que tem características IgM naturais, tais como padrões de linha germinal e codificado por rearranjo restrito. Aqui estudámos a expressão de IgM em células não-B humanas e descobriram que IgM foi frequentemente expressa por muitas células cancerosas epiteliais humanas, bem como células epiteliais não-cancerosas. Além disso, CD79a e CD79b, duas moléculas que são fisicamente ligados à IgM membranosa na superfície das células B para formar o complexo receptor de antigénio de células B, também foram expressas na superfície da célula de células cancerosas epiteliais e co-localizado com IgM. Tal como a IgM natural, a IgM derivada de células epiteliais do cancro reconhecida uma série de antigénios microbianos, tal como o ADN de cadeia simples, ADN de cadeia dupla, lipopolissacarídeos, e o antigénio de células HEp-2. Mais importante, a estimulação do receptor? Toll-like? 9 (TLR9), que imita a infecção bacteriana, aumentou substancialmente a secreção de IgM em células de cancro epiteliais humanas. Estas descobertas indicam que as células cancerosas epiteliais humanas, bem como células epiteliais não-cancerosas podem produzir espontaneamente IgM com actividade de anticorpos naturais
citação:. Hu M, Zhang L, Zheng J, Zhao G, Huang J, W Shao , et ai. (2012) A produção espontânea de imunoglobulina M em células de cancro epitelial humano. PLoS ONE 7 (12): e51423. doi: 10.1371 /journal.pone.0051423
editor: Jonas Fuxe, Instituto Karolinska, na Suécia
Recebido: 27 de agosto de 2011; Aceito: 07 de novembro de 2012; Publicação: 12 de dezembro de 2012
Direitos de autor: © 2012 Hu et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados
Financiamento:. Este trabalho foi apoiada por doações 30973389 e 30772470 da National Science Foundation Natural da China. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito
CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes
Introdução
é bem sabido que à medida que uma molécula de imunidade clássico, a imunoglobulina (Ig) desempenha um papel essencial no sistema imune [1]. É possível anexar a substâncias estranhas, tais como bactérias e ajudam a destruí-los [2]. Ig foi previamente pensado para ser produzido somente pelos linfócitos B e células plasmáticas. Durante a última década, no entanto, este conceito tem sido desafiada por uma série de estudos [3], [4], [5], [6],. Em 2003, relatada pela primeira vez a expressão IgG em células cancerosas epiteliais humanas [3]. Desde então, o nosso grupo e outros confirmaram que muitas células cancerosas não-B humana e de algumas células normais podem produzir Ig, particularmente IgG ou IgA [4], [5], [6], [7], [8], [ ,,,0],9], [10], [11], [12], [13], [14], [15], [16], [17]. Além disso, estes derivados de células de cancro não-B de IgG ou IgA está envolvido na sobrevivência e proliferação de células cancerosas [3], [4], [18]. No entanto, a expressão de IgM em células não-B humanas é raramente estudadas [8]. Recentemente, verificou-se que o gene com um repertório diferente da cadeia pesada de IgM (Ig μ) foi transcrito em células cancerosas epiteliais humanas [8], o que sugere que a IgM pode também ser expresso em células da linhagem estes epiteliais.
Existem dois classes de IgM, naturais e imunes. IgM natural tem sido pensado para ser produzido apenas em 1 de B-células B inata similares, na ausência de encontros de agentes patogénicos, e IgM imunológica é produzida por ambas as células inata do tipo B-1 B e adaptativa B-2 B células seguintes um antigénio ou encontro patógeno. Natural IgM constitui a maior parte do total de IgM circulante. A maior parte da IgM natural é de linha germinal codificado e polirreactivo, e liga-se com baixa afinidade para um número de diferentes antigénios, tais como agentes patogénicos microbianos, que contribui para a imunidade início antes do início da resposta humoral adaptativa e desempenhando um papel fundamental na antimicrobiana precoce imunidade [19]. No entanto, recentes estudos realizados por Zhou et al. mostrou que nem todas as células B polirreactivos naturais IgM produtoras de ligação ao antígeno expressar B-1 marcadores de superfície celular B (por exemplo, IgM
oi, IgD
lo, B220
lo, Mac-1
oi , CD23
lo e CD5
oi) [20], o que sugere que, para além de B-1 B células, outros tipos de células podem também estar envolvidas na produção de IgM naturais.
de tipo Toll receptores (TLR) constituem uma classe de proteínas que desempenham um papel fundamental no sistema imune inato. Eles reconhecem “padrões moleculares associados a agentes patogénicos”, que são moléculas estruturalmente conservados derivados de micróbios e são distinguíveis de moléculas hospedeiras, e activar as respostas imunes inatas [21]. Mais de 13 membros da família TLR foram identificados em mamíferos. TLR9 reconhece especificamente sequências de CpG não metiladas no ADN microbiano [21], [22]. oligodesoxinucleótidos sintéticos (ODN) CpG não metilados com motivos, que podem imitar os efeitos de ADN microbiano, também são reconhecidos por TLR9 [23], [24], [25], [26]. Uma vez ativado, TLR9 e os adaptadores associados, tais como antigénio de diferenciação mielóide 88 (MyD88) [27], [28], recrutar mediadores de sinalização intracelular e induzir a ativação do fator nuclear-kB (NF-kB) e MAP quinase vias, resultando na produção de citocinas e de Ig, principalmente IgM [29].
em humanos, TLR9 é expresso, preferencialmente, em células B, células dendríticas plasmocitoides, monócitos, e células assassinas naturais [22]. Funcional TLR9 também foram encontrados em muitas células cancerosas epiteliais humanas, como câncer de pulmão, câncer de mama e câncer de próstata [30], [31], [32], [33], [34]. Mais importante, o ODN de CpG, e ainda não CpG ODN, pode activar TLR9 expresso em linhas celulares de cancro da mama e linhas celulares de cancro da próstata, resultando em aumento da invasão celular [32], [33], [34]. Quando activado por CpG não metilado, TLR9 induz a secreção de várias citocinas, tais como interleucina (IL) -1α, IL-6 e IL-8 [31], [35]. Ainda não está claro se TLR9 em células epiteliais cancerosas podem mediar a produção e secreção de IgM.
Neste estudo, avaliamos a expressão IgM em células não-B humanos, e mostrou que as células cancerosas epiteliais humanas, bem como não- células epiteliais cancerosas podem espontaneamente IgM natural. agonistas de TLR9 estimulou a secreção de IgM em células de cancro epiteliais humanas. Tal como a IgM naturais derivadas de células B-1 B, a IgM derivada de células epiteliais do cancro reconhecida uma série de antigénios microbianos e alguns auto-antigénio. Estes resultados indicam que as células cancerosas epiteliais humanas, bem como células epiteliais não-cancerosas podem espontaneamente IgM com actividade de anticorpo natural.
Materiais e Métodos
linhas celulares e Cultura
a linha celular de cancro cervical humano HeLa MR, um
o
6-metilguanina-DNA derivado metiltransferase-deficiente de HeLa S3 [36], [37], [38], [39], [40 ], [41], foi um presente do Dr. Shouping Ji (Academia de Ciências Médicas militares, Beijing, China). Todas as outras linhas celulares, incluindo linha de células de cancro cervical humano HeLa, linhas de células de cancro do cólon HT-29 e SW480, linha de células de cancro hepático HepG2, linha celular de osteossarcoma U-2 OS, linhagens de células embrionárias de rim 293 e 293T e células de leucemia B linfocítica A linha Raji foram obtidos de American Type Culture Collection (Manassas, VA, EUA). HeLa MR, HT-29, SW480, HepG2, U-2 OS, 293 e 293T foram cultivadas em meio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) suplementado com 10% de soro fetal de bovino (FBS) e 1% de antibióticos, enquanto HeLa e Raji foram cultivadas em meio RPMI 1640 suplementado com 10% de FBS e 1% de antibióticos, a 37 ° C numa atmosfera humidificada contendo 5% de CO
2. As células em fase logarítmica de crescimento foram utilizados para os experimentos.
Amostras de Tecido
microarrays de tecido foram comprados do Departamento de Patologia, Beijing Friendship Hospital. Foram estudados um total de 202 amostras, que incluiu 26 tipos diferentes de tumores, 19 amostras de contrapartida de doença benigna e tecidos normais. Nós cortadas secções de 4