Abstract

VEGF-C é considerado como um dos fatores mais eficientes na regulação lymphangiogenesis. O objetivo deste estudo foi compreender melhor o papel do VEGF-C na progressão do câncer de ovário e de avaliar o seu significado diagnóstico e prognóstico. Um total de 109 pacientes com câncer de ovário, 76 pacientes com doenças ovarianas benignas, e 50 controles saudáveis ​​foram recrutados neste estudo. Os níveis séricos de VEGF-C foram determinados pelo método de ELISA. Os resultados mostraram que os níveis séricos de VEGF-C foram significativamente maiores em pacientes com câncer de ovário do que aquelas com doenças ovarianas benignas e controles saudáveis ​​(

P Art 0,01). nível sérico de VEGF-C foi correlacionada com a fase FIGO, metástase linfonodal, ressecabilidade do tumor e sobrevida dos pacientes (

P Art 0,05). As áreas das curvas de funcionamento do receptor de VEGF-C foram maiores do que os de CA125 em diferentes grupos de rastreio. Análise pelo método de Kaplan-Meier indicou que pacientes com alta VEGF-C tinham significativamente menor tempo de sobrevida global do que aqueles com baixo VEGF-C (

P Art 0,0001). Em uma análise multivariada, juntamente com parâmetros prognósticos clínicos, soro VEGF-C foi identificado como uma variável de prognóstico adverso independente para a sobrevida global. Estes resultados indicam que o soro VEGF-C pode ser um indicador clinicamente útil para a avaliação de diagnóstico e prognóstico em pacientes com câncer de ovário

Citation:. Cheng D, Liang B, Li Y (2013) Soro Vascular Fator de Crescimento Endotelial (VEGF -C) como um marcador diagnóstico e prognóstico em pacientes com cancro do ovário. PLoS ONE 8 (2): e55309. doi: 10.1371 /journal.pone.0055309

editor: Goli Samimi, Cancer Centre Kinghorn, Garvan Institute of Medical Research, Austrália |

Recebido: 15 de outubro de 2012; Aceito: 20 de dezembro de 2012; Publicação: 01 de fevereiro de 2013

Direitos de autor: © 2013 Cheng et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este trabalho foi apoiado por uma bolsa da Natureza Fundo de Ciência Liaoning (201.102.257). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

carcinoma de ovário é um dos cancros mais comuns em mulheres e a principal causa de morte de todos os tumores ginecológicos. Apesar dos recentes avanços, o prognóstico para uma mulher diagnosticada com câncer de ovário em estágio avançado pouco mudou ao longo dos últimos trinta anos com uma sobrevida de apenas 30% de cinco anos [1], [2]. A natureza relativamente assintomática do câncer de ovário fase inicial, a rápida progressão da doença resistente à quimioterapia e à alta taxa de recorrência ganharam cancro do ovário a reputação de ser um “assassino silencioso” [3]. invasão tumoral e metástase são os passos críticos na determinação do fenótipo agressivo dos cânceres humanos e as principais causas de mortes por câncer. Apesar do cancro do ovário pode espalhar em uma variedade de formas, disseminação para os nódulos linfáticos regionais via vasos linfáticos aferentes é um passo importante para a metástase do cancro do ovário e um dos principais factores de prognóstico [4].

O factor de crescimento endotelial vascular (VEGF) família de genes, que codifica cinco factores de crescimento polipeptídicos, VEGF-a, -B, -C, -D, e da placenta como o factor de crescimento (PLGF), é particularmente importante devido às suas propriedades angiogénicas e linfangiogênicas que promovem o crescimento e a metástase de tumores . VEGF-C é considerado como o factor mais eficaz na regulação da linf [5], e tem também sido mostrado para melhorar directamente a capacidade de invasão das células cancerosas do ovário in vitro [6]. Até à data, alta expressão de VEGF-C é encontrada em câncer de mama, câncer de próstata, câncer gástrico, câncer de cólon e câncer de pulmão, e está associada com lymphangiogenesis, metástase linfonodal, e prognóstico [5], [7] – [10 ].

na progressão do câncer de ovário, fatores preditivos pode ser usado para obter insights sobre a resposta a uma terapia particular, e fatores prognósticos pode ser útil na tomada de decisões relativas a pacientes que devem receber terapia adjuvante. No entanto, o valor de diagnóstico e prognóstico do VEGF-C no soro de cancro do ovário é desconhecido. O objetivo deste estudo foi compreender melhor o papel do VEGF-C na progressão e metástase de câncer de ovário, e para avaliar o seu significado prognóstico.

Materiais e Métodos

Os pacientes

o estudo incluiu 109 pacientes com câncer ovariano consecutivos (idade: 61,5 ± 10,2 anos), que foram recolhidos antes da cirurgia do Departamento de Ginecologia, No. 202 Hospital, entre julho de 1999 e setembro de 2001. as características clínicas dos pacientes eram apresentados na Tabela 1. Todos os pacientes foram cirurgicamente encenado de acordo com a Federação Internacional de Ginecologia e Obstetrícia (FIGO critérios). Os pacientes que se submeteram à quimioterapia pré-operatória e radioterapia foram excluídos. Além disso, amostras de 76 pacientes da mesma idade (idade: 54,1 ± 13,5 anos) foram analisados ​​com lesões benignas. Das lesões benignas, 23 foram classificados como cystadenomas mucinoso, 7 teratomas ovarianos como benignos, 11 cistos dermóides de ovário, 3 tumorais como esclerosante, 8 Cystadenomas como serosa, 16 como fibroma, e 8 como cisto do corpo lúteo. Um total de 50 controles saudáveis ​​(idade: 58,6 ± 12,3 anos) não tinham história de patologia ovariana ou outra doença sistêmica. Os pacientes com cancro do ovário foram monitorizados para a sobrevivência durante um período médio de 49 meses (variação: 1-108 meses). informações de acompanhamento estava disponível para 106 pacientes de cancro do ovário.

O consentimento informado foi obtido de todos os participantes, eo estudo foi aprovado pelo Comitê de China Medical University Ética [2009] No.48.

Recolha de amostras

As amostras de soro a partir de todos os pacientes foram recolhidas presurgically, antes do início da terapia, e armazenado a -80 ° C até à avaliação dos níveis de VEGF-C. Soro de VEGF-C foi determinado com a técnica de imunoensaio enzimático de sanduíche (Quantikine, R D systems, China). Em primeiro lugar, as amostras de soro foram descongeladas a 4 ° C e, em seguida, 5 vezes diluída com soro animal. Um total de 100 uL tamponada base de proteína e 50 ul de amostra de soro foram adicionados aos poços de uma placa de microtitulação revestida com anticorpo monoclonal de ratinho anti-VEGF-C e incubou-se durante 2 horas à temperatura ambiente num agitador orbital de microplacas horizontal. O processo foi repetido 3 vezes e lavaram-se 4 vezes. Em segundo lugar, 200 mL de VEGF-C de conjugado foi adicionada a cada poço, e incubou-se durante 2 horas à temperatura ambiente no agitador. Em terceiro lugar, 200? L de solução de substrato foi adicionado a cada poço e incubar durante 30 minutos à temperatura ambiente no escuro. Finalmente, o desenvolvimento de cor foi determinada dentro de 30 minutos a 450 nm utilizando um leitor de placas de microtitulação após a adição de 50 uL de solução de paragem. nível CA125 no soro foi medida por kits de electroquimioluminescência de acordo com as instruções do fabricante e usando seus reagentes e equipamentos (Roche Diagnostics, Pequim, China). Todos os ensaios foram realizados em duplicado.

Análise Estatística

As análises estatísticas foram realizadas utilizando SPSS15.0 (SPSS, Chicago, IL). As distribuições de valores de VEGF-C no soro eram assimétricas; portanto, foram aplicadas análises não paramétricas. A não paramétrico de Mann-Whitney soma rank U e Kruskal-Wallis (

x

2) teste foram utilizados para a comparação das variáveis ​​em grupos. As associações entre o VEGF-C e as variáveis ​​clínico-patológicas (histologia, estágio do tumor, grau tumoral, tamanho do tumor residual, metástases em linfonodos, a sobrevida dos pacientes, e resectablity de tumores) foram avaliados pelo teste do qui-quadrado. A sensibilidade e especificidade do VEGF-C foram determinados por (ROC) que operam características do receptor, e as áreas sob a curva foram calculados [11]. O tempo de sobrevida foi medido a partir da data do diagnóstico até a data de morte por cancro do ovário ou a data do último follow-up. Usando mediana do nível de VEGF-C como um cut-off, o impacto prognóstico do VEGF-C foi avaliado pelo método de Kaplan-Meier eo teste de log-rank. Além disso, o impacto do nível sérico de VEGF-C na sobrevida global paciente foi avaliado e calculado por ambos os modelos de regressão de riscos proporcionais de Cox univariada e multivariada. A

P valor

de . 0,05 foi considerado significativo

Resultados

Os níveis de VEGF-C e CA125 no soro de pacientes com câncer ovariano e doenças ovário benignos, , bem como em controlos saudáveis ​​foram apresentados na Tabela 2. os níveis séricos de VEGF-C e CA125 foram significativamente mais elevados nos pacientes com cancro do ovário do que em doenças ovárico e controlos saudáveis ​​(

P

0,01) . Não houve diferenças entre as doenças ovário benignos e controles saudáveis ​​para os níveis séricos de VEGF-C e CA125 (

P Restaurant 0,05).

A Tabela 3 apresenta os níveis de VEGF C e CA125 no soro de pacientes com câncer de ovário em relação às variáveis ​​clínico-patológico. Os níveis séricos de VEGF-C revelou correlação significativa com o estágio FIGO, e foram as mais altas no subgrupo IV (

P

= 0,040). Em pacientes com metástase ganglionar, os níveis séricos de VEGF-C foram aumentados em comparação com os pacientes sem metástase ganglionar (

P

= 0,010). Além disso, os níveis séricos de VEGF-C aumentou nos pacientes que morreram de câncer durante o período de observação (

P

= 0,017). observação semelhante para o VEGF-C foi feito em pacientes com cancro do ovário com tumores não operáveis ​​em comparação com aqueles com os operados (

P

= 0,013).

Como se mostra na Figura 1 (a) , área sob a curva de funcionamento do receptor (AUROC) análise avaliar soro VEGF-C como uma ferramenta de diagnóstico para discriminar o cancro do ovário de doenças ovário benignos e controles saudáveis ​​foi de 0,826 (IC 95%, 0,773-0,879) em comparação com CI 0.760 (95%, 0,697 -0,822) para CA125. Além disso, a Figura 1 (b), mostrou que AUROC do VEGF-C para a diferenciação de cancro do ovário a partir de controlos de saúde foi 0,862 (Cl 95%, ,794-,931), que foi superior a 0,853 (95% CI, 0,773-0,933) de CA125. A Figura 1 (c) apresentaram que o AUROC aproximado para o cancro do ovário contra doenças benignas do ovário foi 0,802 (Cl 95%, 0,736-0,868) e 0,681 (IC de 95%, ,604-,758) para o VEGF-C e CA125, respectivamente. AUROC de VEGF-C foi maior do que CA125 em diferentes grupos de triagem.

(a-b) análise ROC incluiu pacientes com doenças benignas do ovário e controles saudáveis ​​como um grupo negativo e pacientes com câncer de ovário como um grupo positivo. (C-d) doentes com cancro do ovário e

vs

controles saudáveis; (E-f) doentes com cancro do ovário e

vs doenças ovário benignos

. AUROC:. Área sob a curva operacional receptor

Análise utilizando o método de Kaplan-Meier mostrou que pacientes com alto nível de VEGF-C (≥10200 pg /ml) tiveram sobrevida global significativamente menor do que aqueles com baixa nível de VEGF-C ( 10200 pg /mL), como mostrado na Figura 2 (

P

0,0001). A curva indicada esse nível elevado de VEGF-C é significativamente associados com um risco aumentado de morte. Para avaliar factores que afectaram a sobrevivência global, os cinco factores clínicos e nível de VEGF-C enumerados na Tabela 4 foram incluídas na análise. A análise univariada revelou que o estágio do tumor (III e IV) (

P Art 0,0001), metástases em linfonodos (

P Art 0,001), e altos níveis de VEGF-C (

P

= 0,001) foram significativamente associados com a sobrevida dos pacientes com câncer de ovário. Destes, estágio do tumor (III e IV) (

P

= 0,006), metástases em linfonodos (

P

= 0,021), e altos níveis de VEGF-C (

P

= 0,01) permaneceu significativa na análise multivariada. Entre os fatores estudados, o nível de VEGF-C foi um preditor independente de sobrevivência pobre paciente.

Discussão

A propagação metastática de células tumorais é responsável pela maioria de câncer mortes. Linfangiogênese e angiogênese sustentada são passos importantes para a progressão do tumor. Semelhante a angiogênese, um tumor pode induzir a sua própria rede de vasos linfáticos que se conectam com os vasos linfáticos circundantes. Até à data, os resultados clínicos e patológicos indicam que a metástase de células tumorais pelo sistema linfático é a via mais comum de difusão inicial para muitos carcinomas. Linfangiogênese foi relatada a desempenhar um papel na progressão do câncer de ovário clínica e em modelos experimentais [12], [13].

Como um membro da família VEGF, VEGF-C é demonstrado pela primeira vez para induzir lymphangiogenesis e promover metástases em estudos em animais, e também é expresso numa variedade de tecidos humanos adultos, tais como coração, placenta, músculo, ovário e intestino delgado [14], [15]. Estudos anteriores demonstraram que o sistema de sinalização de VEGF-C /VEGFR3 é considerada como a via mais eficaz na regulação da linfangiogénese. VEGF-C segregado pelas células tumorais podem actuar especificamente no receptor VEGFR-3 na superfície de células endoteliais linfáticas, activando assim o sistema de sinalização para a linfangiogénese tumor. Correlações clínico-patológicas mostraram que há uma forte correlação entre o VEGF-C /VEGFR3 de sinalização e metástases em linfonodos em vários cancros humanos [16], [17]. Nakazato T,

et al

. relataram que a expressão de VEGF-C no carcinoma epidermóide de boca desencadeia lymphangiogenesis, o que pode resultar em um alto risco de metástases em linfonodos cervicais [18]. Schietroma C

et ai, demonstrou que o VEGF-C Densidade linfático positivo é aumentada em torno de melanoma maligno e associada com células tumorais invasão do linfonodo [19]. Estudos recentes identificaram VEGF-C como um fatores prognósticos para o mau prognóstico em adenocarcinoma gástrico [20], cholangiocarcinoma [21], o cancro da mama [22], e cancro do pulmão [23]

.

angiogênese neoplásica e linfangiogênese são essenciais para o crescimento de tecido de tumor em ambos os locais primários e metastáticos. Isto implica que a detecção de factores angiogénicos e linfangiogênicas pode indicar a presença de tumor maligno numa fase precoce. Dados focando lymphangiogenesis no câncer de ovário são escassos. No entanto, Sinn BV,

et al

, demonstraram que VEGF-C mRNA está associada ao comportamento agressivo tumor no cancro do ovário [24]. Embora, foi observado um aumento no ARNm de VEGF-C, a relação entre os níveis séricos de VEGF-C e o comportamento do tumor não foi ainda determinada por um método quantitativo in vivo. Em nosso estudo, foram analisados ​​os níveis séricos de VEGF-C em um grande número de amostras de cancro do ovário usando o método ELISA e incidindo sobre diferentes subtipos, adenocarcinoma seroso papilar, adenocarcinoma mucinoso, tumor endometrióide, tumor ovariano de células claras e outros, que diferem substancialmente na uma série de recursos genéticos, biológicos, patológicos e clínicos. Os resultados mostraram que os níveis de VEGF-C foram elevados em pacientes de cancro do ovário, quando comparada com doenças ovárico e controlos saudáveis. Por conseguinte, a fim de avaliar ainda o valor clínico do VEGF-C, determinou-se e comparou a utilidade de diagnóstico de VEGF-C e CA125 em diferentes grupos de rastreio. Os níveis séricos de VEGF-C distingue pacientes com câncer ovariano de indivíduos normais e /ou pacientes com doença de ovário benignos muito confiável. Serum VEGF-C foi significativamente melhor preditor de câncer de ovário do que o CA125 nesta população estudada.

Os níveis de VEGF-C no soro de 109 pacientes com câncer ovariano foram avaliados em relação às características clinicopatológicas de tumor, tais como estágio FIGO, classificação, localização do tumor, metástase linfonodal, ressecabilidade do tumor e sobrevida dos pacientes. Além disso, soro de VEGF-C aumentou significativamente com o estágio FIOGO, metástase ganglionar, a sobrevivência dos pacientes, e resectablility tumor. Nossos resultados estão de acordo com as conclusões de Huang KJ,

et al

[25], que revelaram diferença significativa de VEGF-C em linfonodo metástases. Tal como descrito acima, que sugere que os níveis elevados de VEGF-C pode reflectir o papel desta proteína como um estimulador de células linf angiogénese e metástase tumor na progressão do cancro do ovário.

Finalmente, a análise de sobrevivência dos pacientes com cancro do ovário foi avaliado neste estudo com base nos níveis de VEGF-C. Um estudo anterior ilustrou a utilidade potencial do VEGF-C como um marcador de prognóstico em pacientes com câncer de mama [26]. Em nosso estudo, a taxa de sobrevivência de pacientes com alto nível de VEGF-C foi significativamente menor do que os pacientes com baixo nível de VEGF-C (

P Art 0,0001). De nota, os níveis pré-operatórios de CA125 nestes doentes não se correlacionou com um mau resultado (dados não mostrados). Além do preditor prognóstico já estabelecida, como FIGO palco e metástase ganglionar, soro VEGF-C foi independentemente associada com o prognóstico em todos os pacientes com câncer de ovário. Assim, o soro VEGF-C pode identificar pacientes em início de carreira que estão de morte relacionada com a doença. Isto poderia também influenciam as decisões de tratamento.

Os nossos resultados sugerem que o VEGF-C podem estar envolvidos na progressão de cancro do ovário, e que a concentração elevada de VEGF-C no soro pode ser relacionado com a linfangiogénese do tumor, bem como a invasão dos vasos linfáticos no câncer de ovário. Como um marcador não invasivo, o VEGF-C tem o potencial para acelerar o diagnóstico clínico de cancro do ovário e para auxiliar na detecção de linfonodo metástases em mulheres para as quais não é útil CA125. No geral, a adição de VEGF-C para a ferramenta de diagnóstico em casos com suspeita de câncer de ovário generalizada pode contribuir para a precisão do diagnóstico, poupando pesquisa endoscópica intensivo para focos disseminados. Ele também poderia ser usado para o seguimento desses pacientes, e prever o resultado dos pacientes.

A nossa descoberta tem diversas limitações. Em primeiro lugar, a validação da importância preditiva de VEGF-C requer estudos de larga escala sobre as populações homogêneas. É improvável que subgrupos clinicopatológicas de tamanho adequado podem ser agrupados dentro de uma única instituição. Em segundo lugar, o VEGF-C não é específico para o cancro do ovário e que estão implicados na linf angiogénese tanto tumor-e induzida por inflamação. Em terceiro lugar, quanto à capacidade de VEGF-C de discriminar entre câncer precoce de ovário e doenças benignas, tipos histológicos menos comuns, e casos em que CA125 é baixo, precisamos de recrutar mais casos clínicos e fazer uma análise de diferença de profundidade. Finalmente, a metodologia óptima para a avaliação de soro de VEGF-C ainda não foi padronizado e os níveis “normais” são desconhecidos. Mais validações são necessários grandes estudos para melhor investigar as implicações clínicas do nível de VEGF-C de soro e para determinar se o soro VEGF-C pode fornecer informações mais úteis a respeito da presença de câncer de início do estágio de ovário, metástases à distância e valor prognóstico de câncer de ovário .