Sumário

Um dos principais objectivos do acompanhamento após a ressecção curativa de câncer colorretal é a detecção e tratamento de recorrência do tumor inicial. Nós já demonstraram diminuição dos níveis pré-operatórios solúveis CD26 (sCD26) no soro de pacientes com câncer colorretal. Nós agora alargado o estudo para investigar se os níveis de sCD26 no soro pós-operatória servir como marcador de recorrência da doença durante a vigilância. Solúvel sCD26 foi medida em amostras de soro pré e pós-operatórios de 43 pacientes com câncer colorretal primário. antígeno carcinoembrionário, antígeno de carboidrato 19,9 e 72,4 níveis também foram medidos durante a vigilância. O período médio de acompanhamento foi de 41,8 ± 20,8 meses. os níveis de sCD26 durante o acompanhamento mostraram padrões bem definidos em pacientes sem doença (n = 28), e em pacientes com persistência do tumor (n = 2), a recorrência local (n = 3) ou metástases à distância (n = 10). pacientes livres da doença apresentaram níveis estáveis ​​entre 460-850 ng /mL durante o seguimento, enquanto elevada (acima de 850 ng /mL) e os níveis de sCD26 instáveis ​​foram encontrados antes de recorrência foi diagnosticada. Os rácios /máximas médias mínimas sCD26 durante a fiscalização foram 1,52, 2,12 e 2,63 para pacientes sem recorrência, recorrência local e metástases, respectivamente (

p

= 0,005). A partir do corte obtido a partir de uma curva de características de operação do receptor (ROC), construído com o máximo /rácios mínimos sCD26 e os pontos de corte superior e inferior de sCD26, fomos capazes de discriminar pacientes com e sem doença recorrente. Propomos que a medição do sCD26 sérico durante o seguimento dos pacientes com diagnóstico de câncer colorretal pode ser valiosa para a detecção precoce de recorrência local e distante. Um grande, randomizado, prospectivo devem ser realizados para confirmar nossos achados

Citation:. De Chiara L, Rodríguez-Piñeiro AM, Cordero JO, Vázquez-atuns L, Ayude D, Rodríguez-Berrocal FJ, et al . (2014) Os níveis pós-operatória séricos de sCD26 de Vigilância em colorretais pacientes com câncer. PLoS ONE 9 (9): e107470. doi: 10.1371 /journal.pone.0107470

editor: Hiromu Suzuki, Sapporo Medical University, Japão

Recebido: 16 de maio de 2014; Aceito: 13 de agosto de 2014; Publicação: 11 de setembro de 2014

Direitos de autor: © 2014 De Chiara et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Data Availability:. O autores confirmam que todos os dados subjacentes às conclusões estão totalmente disponíveis sem restrições. Todos os dados relevantes estão dentro do papel e seus arquivos de suporte de informação

Financiamento:. Este trabalho foi parcialmente apoiado por Agrupación Estratégica INBIOMED (Investigación en Biomedicina) (2012/273 e 2011/024 CN), a partir DXPCTSUG (Dirección Xeral de Promoción Científica e Tecnolóxica do Sistema Universitario de Galicia) e FEDER financiamento (Fondo Europeo de Desarrollo Regional). LD é apoiada por “Fundação Científica de la Asociación Española contra el cancer” (GCB13131592CAST). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

no momento do diagnóstico, cerca de 75% dos doentes com cancro colorectal (CRC) tem o tumor confinado a uma parte do intestino ou para os linfonodos regionais, e podem ser encaminhados para ressecção curativa. Infelizmente, 30-50% dos pacientes desenvolvem recorrência, 90% durante os primeiros 5 anos após o tratamento [1], [2].

Um dos objectivos do follow-up após a ressecção curativa em pacientes com CCR é melhorar o resultado de detecção e tratamento de recidiva precoce. Assim vigilância pós-operatória deve identificar as recorrências assintomáticas para a detecção precoce de tumores localmente persistentes ou metástases, de modo que ainda mais tratamento curativo pode ser iniciado e as taxas de sobrevivência melhorada. Consequentemente, estratégias de vigilância exigem meios eficazes para a identificação de doença residual ou recorrente. Em geral, meta-análises e comentários concordam que um mais intensivo acompanhamento contribui para um benefício de sobrevida global [1] – [8]

Muitos métodos diferentes têm sido propostos para o seguimento de pacientes com CCR. , o qual pode ser subdividida em três categorias: testes de laboratório, como a determinação do antigénio carcinoembrionário (CEA) níveis séricos de outros marcadores, como os antigénios de hidrato de carbono (CA), ou de enzimas do fígado; exames de imagem, como ultra-som, raios-X ou tomografia computadorizada; e endoscopias. Em comparação com outras modalidades de diagnóstico disponíveis, determinações em série CEA pareceu ser o mais sensível para a detecção precoce da doença recorrente [6] – [8]. No entanto, os marcadores de soro de corrente utilizado para detectar a recorrência do cancro (CEA, TPS, CA-19,9 e CA-72,4) não são muito precisos e, em geral, dão origem a um número considerável de falsos negativos e positivos [9] – [10 ]. Portanto testes adicionais é geralmente necessária para confirmar a recorrência, gerando inconvenientes para os pacientes e elevando os custos de cuidados de saúde, pois algumas das técnicas são dispendiosas e não foram mostrados para ser rentável [11].

A protease de CD26, ou de dipeptidil-peptidase IV (DPP-IV), EC 3.4.14.5, é uma glicoproteína de superfície celular associada, expressa em uma variedade de tipos de células, incluindo os melanócitos, as células epiteliais e linfócitos [12]. níveis significativos de sua forma solúvel (sCD26) existem em plasma /soro e outros fluidos biológicos [13], [14]. Em estudos anteriores verificou-se que pacientes com CCR primário diminuiu os níveis de sCD26 em

sérica pré-operatória, e mostrou o seu valor como marcador diagnóstico e prognóstico para CRC [15] e adenomas avançados [16]. Dois estudos independentes confirmaram que sCD26 está entre os melhores candidatos para análises de sangue futuras para o diagnóstico precoce, sozinho ou em combinação com o teste fecal imunoquímico (FIT) [17], [18].

Nós tínhamos observado em nosso trabalho anterior que o valor diagnóstico da sCD26 foi pior para pacientes estágio D Dukes ‘, mostrando níveis muito elevados em alguns indivíduos [15]. Aqui nós projetamos um estudo piloto para investigar se o nível de sCD26 medida durante o acompanhamento dos pacientes com CCR (

soros pós-operatório) é útil como marcador de recidiva ou regressão da doença durante a vigilância do câncer.

Materiais e Métodos

População

Quarenta e três pacientes com CCR primário foram estudados, incluindo 28 homens (65,1%) e 15 mulheres (34,9%), com idade média de 66,4 ± 10,4 anos (mediana = 66) (Tabela S1). Quarenta e um pacientes (95,3%) foram tratados por ressecção curativa (remoção completa do tumor

en bloc

com uma porção do intestino normal, mesentérica e linfonodos regionais), e 2 (4,7%) através de cirurgia paliativa. De acordo com o estágio de Dukes, 16,3% dos tumores foram classificados como A, 46,5% como B, 25,6%, como C, e 11,6% como D. Em relação ao grau de diferenciação, 83,3% foram moderadamente diferenciado e 14,3% eram pouco diferenciado, enquanto 2,4% foram bem diferenciada. A localização dos tumores primários foi: 4 no ceco (9,3%), um no cólon ascendente (2,3%), 7 em flexão hepática (16,2%), 2 em flexão do baço (4,7%), 2 no cólon descendente (4,7% ), 10 em Sigma (23,3%), cinco na união recto-sigma (11,6%), 10 em recto (23,3%), e tumores sincrónicas no cólon ascendente e ceco (2,3%), e no cólon transverso e ceco ( 2,3%).

Todos os pacientes foram monitorados pelo Complexo Hospitalar Universitário de Vigo (Espanha). O estudo seguiu as práticas clínicas-ético do Governo espanhol e da Declaração de Helsinki e foi aprovado pelo Comitê de Ética Galego de Investigação Clínica. O consentimento informado escrito foi obtido eo anonimato garantido. A informação clínica recolhido o estádio Dukes ‘, local do tumor primário, tipo de ressecção, a progressão do câncer e tratamento de quimioterapia.

O processo de acompanhamento padrão consistiu em um exame médico a cada 4 meses durante o primeiro ano, e cada 6 meses depois disso. De acordo com os critérios do oncologista, os pacientes receberam quimioterapia consistindo em 5-fluorouracil, e em alguns casos irinotecan.

Coleta de amostras e preparação

amostras de sangue pré-operatórios foram coletadas de perto, mas nem todos os pacientes. amostras de sangue pós-operatórias foram coletadas em vários pontos de tempo, que não eram as mesmas para cada paciente. O sangue foi deixado coagular à temperatura ambiente e centrifugou-se a 2000

g

durante 15 minutos. Os soros foram armazenados a -85 ° C até serem usadas

Determinação dos níveis de sCD26

A concentração de sCD26 foi analisada com o CD26 solúvel humano Kit ELISA. (EBioscience, Viena, Áustria), em duplicado . Com base em nossos resultados anteriores com este kit [15], [16], [19] valores sCD26 entre 460-850 ng /mL foram considerados níveis normais. O limite inferior foi estabelecido em conformidade com a 460 ng /mL de corte sugerido para o nosso grupo de pacientes sob risco de CRC ou com patologias colorretais relacionados [16], enquanto que para o limite superior temos a hipótese de a 850 ng /mL de corte para os indivíduos patológicas (com níveis mais elevados) de nossos resultados preliminares com pacientes metastáticos CRC e pacientes ressecado-tumorais (revisto em [20]).

Determinação da CEA, CA-19,9 e os níveis de CA-72,4

CEA e CA-72.4 foram analisados ​​no soro utilizando o imunoensaio electrochemoluminescent Roche Elecsys sistema, e medido com um analisador de modular Analytics E170 (Roche Diagnostics). CA-19.9 foi determinada utilizando o rastreio BRAHMS CA 19-9 KYPTOR imunoensaio (Thermo Scientific) e medida num analisador Kryptor (CIS bio internacional). Os valores normais eram 5 ng /ml para o CEA, 7 U /mL para o CA-72,4, e 40 U /mL para o CA-19.9 [7] – [10]

A análise dos dados.

Todas as medições foram incluídos posterior para 2 meses após a cirurgia para permitir a normalização do marcador. As análises estatísticas foram realizadas com o pacote SPSS (v.19.0); testes foram em frente e verso;

p

-Valores 0,05 foram considerados significativos. Qui-quadrado ou teste exato de Fischer foram feitos com tabelas de contingência. A análise de mais de duas amostras independentes foi realizada com o teste de Kruskal-Wallis. A razão máxima /mínima concentração sCD26 foi calculada para cada paciente para medir a estabilidade título sCD26. curvas ROC e áreas sob a curva (AUC) foram calculados com esta escala utilizando MedCalc (v.12.7.0). Os dados de sCD26, CEA, CA-19.9 e CA-72.4 para todas as medições realizadas durante a vigilância são apresentados na Tabela S2.

Resultados

Evolução da coorte durante o período de acompanhamento

O período médio de acompanhamento de 43 pacientes foi de 41,8 ± 20,8 meses, com mediana de 34,1 meses e uma gama de 9.7-79.6 meses (Tabela S1). Os 2 pacientes tratados com ressecção paliativa morreram durante o estudo (média de 7,3 ± 3,4 meses). Em relação aos pacientes tratados com ressecção curativa, após o período de acompanhamento de 28 pacientes (1-28) estavam livres de doença (68,3%; seguimento médio: 44,9 ± 19,5 meses; intervalo: 17.3-81.4 meses), enquanto recorrências locais ( pacientes 29-31) foram documentados em 3 casos (7,3%; seguimento médio: 25,7 ± 3,1 meses; variação: 22.4-28.6 meses). Por outro lado, as metástases foram encontrados em 10 pacientes (24,4%; seguimento médio: 44,7 ± 22,2 meses; intervalo: 15.4-79.6 meses), classificado como 5 hepáticas (pacientes 32-36), 3 pulmonares (pacientes 37- 39), 1 peritoneal (paciente 40) e 1 em jejuno e do baço (paciente 41). Todas essas metástases foram diagnosticados dentro de 3 anos após a cirurgia, exceto por uma metástase hepática diagnosticada 4,3 anos após a cirurgia

A quimioterapia foi dado a 29 pacientes:. 17 livres da doença, 2 com recidiva local e 10 com metástases

níveis de marcadores tumorais em amostras de sangue pré-operatórios

amostras de soro pré-operatórios estavam disponíveis para 41 pacientes (Tabela S1), 51,2% dos quais apresentaram níveis sCD26 abaixo da mL ponto 460 ng /cut-off (21 casos). As características clínicas e epidemiológicas destes pacientes foram analisados ​​de acordo com dois grupos com base nos níveis normais descritos na seção anterior: pacientes com positiva (≤460 ng /mL ou 850 ng /mL) e negativo (460-850 ng /mL) sCD26 pré-operatórios. Não houve diferenças significativas no sexo, idade no momento do diagnóstico, o estágio Dukes ‘, grau histológico, localização do tumor, o estado da doença ou

exitus

entre estes grupos (Tabela 1).

No que diz respeito outros marcadores pré-operatórios, a CEA foi determinada em 33 pacientes, com 10 casos (30,3%) registam níveis acima do cut-off; CA-19.9 foi analisada em 21 casos, resultando sobre o cut-off em 3 casos (14,3%); e CA-72,4 apareceu alterado em 3 de 18 casos (16,7%). As características clínicas e epidemiológicas foram também estudados de acordo com a positividade para cada um desses marcadores clínicos (dados não mostrados), e só o CA-72,4 eo grau histológico do tumor mostraram diferenças significativas (

p = 0,022

).

níveis de marcadores tumorais em amostras de sangue pós-operatórias

os níveis de sCD26 e os marcadores CRC clínicos foram avaliados nos exames médicos a participação de cada paciente durante a sua vigilância. A razão máxima /mínima concentração sCD26 está incluído na Tabela S1. A análise destas medições revelaram tendências, o que nos permitiu discriminar quatro grupos de pacientes:

pacientes livres da doença no final da supervisão

A tendência geral seguido de pacientes livres da doença foi. a recuperação de níveis normais quando pré-operatória sCD26 foi baixa e estáveis ​​títulos acima de 460 ng /ml, mas inferior a 850 ng /mL. A Figura 1 mostra os níveis de sCD26 durante o follow-up de um paciente representante (paciente 25). Esta tendência foi observada em 22 dos 28 pacientes livres da doença (78,6%). Além disso, o grupo apresentaram títulos estáveis ​​sem variações importantes, resultando numa proporção /média máxima mínima sCD26 de 1,52. A Figura 1 mostra também os valores de CEA, CA-19.9 e CA-72,4 durante o follow-up do indivíduo representativo. Todos os pacientes livres da doença apresentaram níveis normais de CEA no soro pré-operatório e durante todo o tempo de vigilância. CA-19.9 e CA-72.4 não foram medidos em 11 destes pacientes, mas os dados disponíveis mostram que os níveis também tendem a ser estáveis ​​e abaixo dos respectivos pontos de corte, com apenas um indivíduo (paciente 25), mostrando aumento da CA-72.4 níveis.

setas pretas indicam o começo e final de ciclos de quimioterapia.

os pacientes com persistência de tumor tratados com cirurgia paliativa.

o período de acompanhamento para os dois pacientes não ultrapassou 10 meses, devido à sua

exitus

. Baixos níveis de sCD26 foram uma característica desse grupo, mantendo-se relativamente constante. Na Figura 2 (doente 42), os níveis de sCD26 aumentaram ligeiramente acima do limite de 460 ng /mL mas voltou a diminuir para valores baixos na seguinte medição. A relação sCD26 máximo /mínimo resultou em 1,17 para este paciente. Embora o outro paciente também mostrou diminuição dos níveis de sCD26, apenas uma medição foi feita posterior a 2 meses após a cirurgia; portanto, a razão máxima /mínima não pode ser calculado.

Os shows de setas tracejadas

exitus

.

Por outro lado, CEA, CA-19,9 e CA-72,4 medições estavam disponíveis para um paciente (Figura 2). Durante seguimento este indivíduo mostraram aumento da CEA, enquanto o CA-19.9 e CA-72,4 exibido valores normais.

Pacientes com tumores recorrentes.

Os 3 pacientes com tumores recorrentes teve um tempo de recidiva da 10,7, 25,4 e 26,6 meses, respectivamente (pacientes 29-31). A evolução dos níveis de sCD26 é apresentado na Figura 3 para um indivíduo representativo (doente 31). Neste caso, durante o follow-up e antes de recorrência foi diagnosticada, os doentes recuperaram níveis normais (quando baixa no início). No entanto, imediatamente antes de recorrência foi confirmada, os três pacientes tinham um aumento significativo (acima de 850 ng /mL em 2 de 3 casos), seguido por um ou dois diminuições consecutivas e agudos (não necessariamente inferior a 460 ng /mL). Portanto, a instabilidade nos níveis de sCD26 precedeu o aparecimento de recorrência. Em relação ao índice de sCD26 máximo /mínimo, aumentou para 2,12.

A seta para cima representa o diagnóstico de recidiva, ea tracejada arrow momento da

exitus

.

em relação aos marcadores clínicos, CEA foi encontrada uma elevada em um dos 3 casos, CA-19,9 também em um dos casos (Figura 3) e CA-72,4 em nenhum dos pacientes.

pacientes com doença metastática.

O grupo de pacientes com metástase mostraram uma outra tendência diferente. No caso de metástases hepáticas (Figura 4A; paciente 34), independentemente da concentração de sCD26 no pré-operatório, durante a níveis de seguimento atingido ou excedido amplamente 850 ng /mL limite superior da normalidade (em 4 de 5 pacientes; 80,0%). No outro paciente, não tínhamos amostras de dois anos antes do diagnóstico de metástase, mas a última amostra apresentou um valor próximo de seu limite e a mesma tendência para valores mais altos. Portanto, o rácio de sCD26 máximo /mínimo para este sub-grupo correspondeu a 2,17, semelhante ao usado para pacientes com recidiva local do tumor.

setas pretas indicam o começo e fim dos ciclos de quimioterapia para cima e a seta indica o diagnóstico de metástases .

Em relação aos pacientes com metástases pulmonares (Figura 4B; paciente 39) um aumento importante acima de 850 ng limite superior /mL foi detectado antes das metástases foram diagnosticados, seguido por uma diminuição, sugerindo níveis de sCD26 instáveis. Neste sub-grupo, a relação de sCD26 máximo /mínimo correspondia a 2,86, mais elevada do que as proporções anteriores. Esta tendência também foi encontrada em pacientes com peritoneal ou jejuno e metástase do baço, com níveis elevados de sCD26 durante o acompanhamento, e um rácio máximo /mínimo sCD26 de 1,48 (paciente 40) e 5,34 (paciente 41), respectivamente.

em resumo, a tendência geral observada em pacientes com metástase era uma concentração sCD26 sobre o superior de 850 ng /mL de corte, e um rácio global média máxima /mínima sCD26 de 2,63 para o grupo. Tomar nota, todos estes pacientes tiveram ciclos de quimioterapia, que pareciam baixos níveis de sCD26 transitoriamente.

O comportamento dos marcadores clínicos em pacientes com metástase é também mostrado nas Figuras 4A e 4B para os pacientes representativas. Apesar do diagnóstico de metástase, CEA, CA-19.9 e CA-72,4 níveis permaneceram normais e estável durante o acompanhamento em 5/10, 4/10 e 7/10 pacientes, respectivamente.

análise de curva ROC para sCD26 sérico pós-operatórias

foram observadas diferenças estatisticamente significativas na relação sCD26 máxima /mínima entre pacientes livres da doença, os pacientes com recidiva local e aqueles com metástases (

p

= 0,005). Estas diferenças foram ainda estudadas usando análise da curva ROC (gerado com os rácios de sCD26 máximas /mínimas). Somente os pacientes tratados com cirurgia curativa foram incluídos, classificado como livre de doença (n = 28) ou com a recorrência local ou à distância (n = 13). Uma AUC de 0,835 (IC 95% 0,702-0,968;

P

0,0001) (Figura 5) foi obtido, mostrando uma precisão óptima para a separação de doentes com a doença recorrente. sensibilidade de 100%, foi obtida com um rácio de sCD26 de corte mínima /máxima de 1,43 (46,4% de especificidade). Especificidade pode ser melhorada tendo em conta que a maioria dos pacientes positivos falsos livre de doença não ultrapassar os 850 ng /mL de corte. No entanto, foi observada uma maior especificidade (92,9%) para o 1.98 de corte (sensibilidade 61,5%).

A AUC correspondente é fornecida no texto.

Discussão

Numerosos estudos, revisões sistemáticas e meta-análises, bem como as sociedades de câncer americanos e europeus, concluir que a melhor maneira de realizar o diagnóstico precoce de recorrência e melhorar a sobrevivência é através de uma vigilância intensiva. No entanto, o consenso não foi alcançado sobre o protocolo para acompanhamento intensivo (combinação de testes e frequência) [1] – [8].

Na verdade, os marcadores clínicos atualmente utilizados [9], [10 ], incluindo CA-19.9 e CA-72,4, nem recomendado para a vigilância após a ressecção curativa, nem para o prognóstico [5] – [8]. Em suas diretrizes, tanto o EGMT e grupos ASCO recomendar a medição da CEA em pacientes com CCR em estágio II ou III a cada 2-3 meses [6] ou a cada 3 meses [8] durante pelo menos 3 anos após o diagnóstico. No entanto, existe um debate permanente em torno de CEA, principalmente devido a sua falta de especificidade. Alguns autores concluíram que um aumento na concentração de antígeno é um preditor pobre de recorrência local, e até mesmo em pacientes com metástases hepáticas uma concentração crescente é um fenômeno relativamente tardia [21], [22]; consequentemente, CEA no soro deve ser abandonado no seguimento de rotina [6]. Os resultados deste estudo concordam com esta recomendação

Em nossos estudos anteriores, os níveis de sCD26 séricos baixos foram observados em pacientes com CCR de diferentes coortes:. Uma coorte de caso-controle [15] e uma coorte principalmente sintomático que foram submetidos a colonoscopia [16]. No primeiro estudo, os diferentes níveis de sCD26 pré-operatória pode ser associada a um risco aumentado de desenvolver uma doença recorrente [15]. Adicionalmente, bem como outros observaram que alguns pacientes de CRC metastáticos revelaram concentrações elevadas sCD26 [16], [20]. Neste estudo piloto, medidos tanto o pré-operatório e pós-operatório os níveis de sCD26 para avaliar a sua capacidade para prever e antecipar o diagnóstico de uma doença recorrente local ou em um órgão distante. Como 80% de todas as recorrências são diagnosticados nos primeiros dois anos após a cirurgia [8], [22], que realizou um follow-up durante pelo menos este período.

As características clínicas e epidemiológicas dos pacientes ( sexo, idade, estágio, diferenciação Dukes ‘ou localização do tumor) analisados ​​de acordo com os níveis de sCD26 pré-operatórios prestados nenhuma associação, corroborando os nossos achados anteriores [15]. Embora os pacientes estágio D apresentaram níveis mais elevados em comparação com as fases de tumor menos invasivos, como observado anteriormente [15], não foram encontradas diferenças estatisticamente significativas para o estado da doença ou a presença /ausência de recidiva em relação à sCD26 positividade baseada no 460/850 ng /mL de corte.

em relação ao desempenho sCD26 considerando amostras pré-operatórios, encontramos uma sensibilidade reduzida para o diagnóstico da CRC nesta coorte (51,2%), em comparação com o de 81,8% observado anteriormente [16] ou por outros [17], [18]. As diferenças podem ser atribuídas a estudar configurações desde nesta coorte apenas os doentes já diagnosticados de CRC foram incluídos, enquanto que no outro estudo indivíduos sintomáticos principalmente diagnosticados de diversas patologias colorrectais foram incluídos. Alternativamente, razões técnicas relacionadas com a especificidade dos anticorpos utilizados no ELISA para detecção de sCD26 também pode explicar as diferenças [14]. Em relação a isto, e tal como discutido noutro local [20], a sCD26 de corte foi alterada de 410 no nosso primeiro estudo [15] para a 460 ng /mL [16] utilizado aqui. Assim, com base em nossos resultados anteriores com este kit [15], [16], [19] valores sCD26 entre 460-850 ng /mL foram considerados normais. Nós escolhemos preliminarmente o limite superior de 850 ng /mL para este estudo porque nos níveis anteriores funciona sCD26 foram encontrados dentro desta gama em indivíduos não-patológicos (revisto em [20]). Além disso, a quantidade de inibidor de DPP-IV antigénio /CD26 encontrado no soro normal é consistente com os valores esperados com base na actividade específica do soro purificada de DPP-IV [23] e geralmente há correlação entre a actividade de DPP-IV e os níveis de sCD26 em patológica condições [21].

com base na faixa normal sCD26 proposto nas medidas pós-operatórias, fomos capazes de definir diferentes tendências característicos para o estado da doença. Estes foram ainda confirmados com uma curva ROC com base na relação sCD26 máxima /mínima que medido sCD26 título estabilidade durante a vigilância. Esta análise mostrou uma precisão óptima para distinguir pacientes livres da doença daqueles com doença recorrente local ou distante. De acordo com o acima, na maioria dos pacientes livres da doença níveis de sCD26 estável (460-850 ng /mL; máximo /rácio mínimo 1,52) foram encontrados. Os aumentos mais de 850 ng /mL foram detectados em 6 pacientes livres da doença (2 casos registrados aumentos no final do período de vigilância e não há nenhuma informação sobre as mudanças no status da doença poderiam ser obtidos; 2 casos foram diagnosticados de lesões ocupando espaço no fígado, sem evidência de metástase hepática, enquanto nenhuma explicação para níveis elevados foram encontrados nos outros 2 casos)

em relação aos pacientes com recidiva local ou à distância, na maioria dos casos (10/13. ; 76,92%) os níveis de sCD26 ultrapassou a 850 ng /mL e foram instável (máximas /rácio mínimo 2,49). Especificamente, os aumentos repentinos acima de 850 ng /mL seguido por decréscimos consecutivos e agudas poderia prever recorrência pelo menos 2-3 meses antes do diagnóstico clínico nos 3 pacientes com recidiva local. Isto se traduziria em um tratamento oncológico mais cedo e ressecção cirúrgica, com um aumento da taxa de sobrevivência [3] – [5].

No caso de recorrências distantes, fígado e pulmão foram os órgãos mais frequentes afetados em nossa coorte , consistente com 35-55% de metástases hepáticas e 10% de metástases de pulmão relatado para pacientes de CRC [24] – [25]. metástases hepáticas no diagnóstico inicial foram detectados em 3 pacientes e durante o acompanhamento em 2 pacientes. Em uma das últimas concentrações, altas sCD26 (atingindo 3.200 ng /mL) foram observados a partir de 2 meses após a cirurgia e durante todo o follow-up, indicando em um estágio muito precoce (mais de 49 meses à frente) a suspeita de metástase. Pelo contrário, no outro paciente, níveis abaixo do 460 ng /mL de corte foram encontrados 11 meses antes da confirmação de metástase, indicando também a presença de recorrência. Em dois dos pacientes com metástase pulmonar, aumentos de sCD26 mais de 850 ng /mL foram registrados 3,8 e 29,1 meses, respectivamente, antes do diagnóstico de metástase; no outro caso, níveis elevados (2,900 ng /mL) coincidiu com o diagnóstico. Mais uma vez, o nosso teste teria antecipado o diagnóstico de metástase.

Nossas descobertas sugerem que a medição periódica dos níveis séricos de sCD26 a cada 3 meses poderia servir como guia para oncológico de tomada de decisão, alertando sobre o aparecimento de recorrência baseados na relação de sCD26 máximo /mínimo e os níveis de sCD26 durante a vigilância. O comportamento do sCD26 de acordo com o estado da doença é resumido na Figura S1. No entanto, estes resultados devem ser considerados preliminares e deve ser alargado a um conjunto de dados maior em estudos prospectivos e retrospectivos. No entanto, a implementação deste teste para a prática clínica poderia ser viável uma vez que uma extração de sangue é feito regularmente durante o seguimento dos pacientes CRC eo teste consiste em um ensaio típico Elisa.

No que diz respeito ao significado biológico dos nossos resultados, nós analisamos que, os níveis de sCD26 fisiopatológicos, baixas ocorrem simultaneamente com um estatuto imunitário deficiente, incluindo alguns hematológicas e sólidos malignas, enquanto que o aumento dos níveis ocorrem em doenças inflamatórias e infecciosas, outros tumores hematológicos e doenças do fígado, como carcinoma hepatocelular [14]. A sCD26 solúvel encontrado no soro é presumivelmente derramado por clivagem proteolítica da transmembrana CD26 [14], [26]. Além do endotélio capilar clássica, tecidos hepáticos e imunes do que sCD26 poderia originar [13], [14], [26], recentemente, o tecido adiposo [27] e do músculo [28] podem também ser incluídos.

é agora claro que os mecanismos relacionados ao sistema imunológico são as habilidades que as células cancerosas devem adquirir em seu caminho para dar origem a um tumor, incluindo a capacidade de prosperar em um microambiente cronicamente inflamado, a capacidade de iludir o reconhecimento imunológico e a capacidade de suprimir a reatividade imune . Estes três capacidades foram recentemente reconhecidos como as características imunológicas do cancro [29]. Assim, por CRC que têm a hipótese de [14], o sistema imune como a fonte dos níveis deficientes principalmente porque a CD26 não é expresso diferencialmente em tumores primários do cólon e de tecidos normais [30], [31]. Além disso, muitos

in vivo

estudos encontraram uma correlação entre mudanças na atividade do soro DPP-IV e os números de PBL, linfócitos T, células CD26 + T e da quantidade de CD26 nas membranas plasmáticas de linfócitos T (revisto em [ ,,,0],14]). Portanto, pode ser possível que o desenvolvimento do tumor pode ser imunossupressoras uma população sCD26-gerador ou para baixo da regulação da produção de sCD26 que circula através de TGF-β [32].

Curiosamente, as concentrações elevadas sCD26 encontrados em Dukes D pacientes com CCR com metástase [15] e neste trabalho pode estar relacionado com as recentes descobertas de Pang e colegas [31]. Eles relataram a expressão diferencial de CD26 entre os tumores primários e metástases. Estes autores identificaram as células que expressam CD26 como as células-tronco cancerosas (CSC), associados à invasão aumentada e chemoresistance. Quando isolado e injectados em ratinhos estas células CD26 + levaram ao desenvolvimento de metástases distantes [31]. Se estas células estão a produzir níveis elevados de sCD26 que pode estar relacionada com a expansão rápida da população ou talvez devido a um metabolismo aumentado de expressão de CD26 e derramamento. Esta ideia concorda e complementa nossas descobertas de níveis elevados sCD26 em pacientes metastáticos. De acordo com o relatório anterior, um trabalho recentemente publicado a partir de Lam e seus colegas [33] relataram níveis de expressão significativamente maior CD26 tumor em pacientes com CCR com metástases à distância em comparação com pacientes não-metastáticos. Adicionalmente,

in vitro

experiências com estes CSC estão em andamento em nosso laboratório para analisar sua capacidade de produzir sCD26, o que provavelmente poderia explicar as concentrações sCD26 elevadas encontradas em pacientes metastáticos.

Sem dúvida, essas alterações ter consequências importantes em processos oncogênicos. Os dados atuais suporta três papéis potenciais de sCD26 em: (i) activação-desactivação de quimiocinas em processos inflamatórios; (Ii) activação-inactivação de outros substratos de sangue biologicamente activas, factores de crescimento ou hormonas; e (iii) capacidade de adesão celular, migração e invasão [12] -. [14], [31], [34], [35]

Conclusão

Os níveis séricos de sCD26 mostrou bem padrões -definida durante o acompanhamento dos pacientes com CCR. concentrações sCD26 estáveis ​​foram uma característica em pacientes livres da doença; enquanto os pacientes com doença recorrente local ou à distância apresentaram níveis sCD26 elevadas com quedas bruscas, resultando em instabilidade. A medição do sCD26 pode ajudar a realizar uma detecção precoce da doença CRC recorrente após cirurgia, mesmo em pacientes sob quimioterapia. Uma vez confirmada em um estudo prospectivo maior, sCD26 poderia ser um marcador valioso para vigilância pós-operatória.

Informações de Apoio

Figura S1.

Representação esquemática do comportamento de sCD26 durante o seguimento dos pacientes de CRC de acordo com o estatuto da doença

doi:. 10.1371 /journal.pone.0107470.s001

(TIF)

Tabela S1.

características clínicas da coorte acompanhou no estudo

doi:. 10.1371 /journal.pone.0107470.s002

(DOCX)

Tabela S2. níveis

séricos de sCD26, CEA, CA-19.9 e CA-72,4 por pré-operatórios e pós-operatórios medições

DOI: 10.1371 /. journal.pone.0107470.s003

(XLS)

Agradecimentos