Abstract

Antecedentes e Objectivos

fator de transcrição 3 (

TCF3

) implica via de sinalização Wnt e regula a expressão da caderina-E, que está envolvida na agressividade dos tumores. Este estudo tem como objetivo investigar o papel da

TCF3

em predizer o prognóstico de pacientes com estágio II e III do câncer colorretal (CRC).

Métodos

Real-Time PCR quantitativa foi realizada em 64 tecidos CRC frescas e 6 linhas celulares para examinar

TCF3

expressão de mRNA. TCF3 dinâmicas de expressão da proteína foram detectados por imuno-histoquímica de 118 espécimes embebidos em parafina, e o significado clínico da TCF3 foi avaliada pela correlação clínica e Kaplan-Meier. hipometilação aberrante de

TCF3

promotor também foi investigado usando seqüenciamento bissulfito e metilação PCR específico.

Resultados

O aumento da regulação do

TCF3

mRNA foi frequentemente detectada tanto em tecidos de CRC com recorrência e linhas celulares derivadas de metástases. O nível de proteína TCF3 expressão foi significativamente correlacionada com o tipo histológico (

P

= 0,038) e tempo de sobrevida livre de doença (

P

= 0,002). Maior expressão TCF3 indicaram resultados de pior prognóstico (

P Art 0,05, teste log-rank). A análise multivariada mostrou também expressão da proteína TCF3 forte e invasão perineural foram prognosticadores adversos independentes no CRC (

P

= 0,010, 0,000). Além disso, foi demonstrado que hipometilação promotor de

TCF3

está associada à sua up-expressão.

Conclusões

O estudo destaca o valor prognóstico da

TCF3

no estágio II e III CRC. O aumento da regulação do

TCF3

, que é causada principalmente por hipometilação promotor, é um dos mecanismos moleculares envolvidos no desenvolvimento e na progressão da CRC

Citation:. Li C, Cai S, Wang X, Jiang Z (2014) hipometilação-Associated-regulação da

TCF3

Expressão e recorrência na Fase II e III câncer colorretal. PLoS ONE 9 (11): e112005. doi: 10.1371 /journal.pone.0112005

editor: Anthony WI. Lo, Queen Mary Hospital, Hong Kong

Recebido: 10 Abril de 2014; Aceito: 11 de outubro de 2014; Publicação: 06 de novembro de 2014

Direitos de autor: © 2014 Li et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Data Availability:. O autores confirmam que, por razões aprovadas, algumas restrições de acesso aplicam-se aos dados subjacentes às conclusões. Os dados estão disponíveis do Comitê de Ética da Universidade Fudan Shanghai Cancer Center para os investigadores que preencham os critérios para o acesso a dados confidenciais. Os pedidos de acesso a dados podem ser enviados para Professor Sanjun Cai. (E-mail: [email protected])

Financiamento: Este estudo foi apoiado pela Pós-Doutorado Science Foundation da Província de Heilongjiang (LRB87859), Medical Foundation Scientific Research da Província de Heilongjiang (2011-144), o Projeto Abertura de chave do Laboratório de Genética médica de Instituições de Ensino Superior Heilongjiang e Natural Science Foundation da Província de Heilongjiang (H201332). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

o câncer colorretal (CRC) é uma das três principais causas de morte por câncer entre em todo o mundo [1]. Fase II e III tumores em conjunto representam aproximadamente 70% dos pacientes de CRC [2]. Regional metástases em linfonodos é um dos mais poderosos indicadores de agressividade dos CRCs e ajuda a prever o resultado clínico. No entanto, um terço dos pacientes com CCR sem evidência histológica de envolvimento ganglionar morrem dentro de cinco anos após a cirurgia de metástases à distância ou recorrência local, que sugeriu que o estado nodal pode não prever o curso clínico da CRC adequadamente [3]. Por isso, é importante identificar fatores prognósticos prevendo mau resultado e orientadores tratamento em estágios II e III CRC.

gene fator de transcrição 3 (

TCF3

) foi localizado em 19p13.3 banda cromossômica.

TCF3

é um regulador de transcrição ubiquitously expressa e codifica dois fatores de transcrição hélice-volta-hélice (HLH), E12 e E47 [4]. Estas duas proteínas são caracterizadas por um padrão de expressão e ampla capacidade de ligar o ADN [5] – [8]. Vários estudos têm relatado o papel emergente do

TCF3

em tumores experimentais. A sobre-expressão de TCF3 foi detectado no CRC [9], o cancro da próstata [10], [11], o cancro gástrico [12] e cancro renal [13]. Como um repressor transcricional de E-caderina,

TCF3

implicada na epitelial para mesenquimal e pode ser ligado a agressividade do tumor [14]. O aumento da actividade de transcrição de

TCF /β-catenina

complexo são o evento inicial em tumores esporádicos mais colorrectais [15]. Embora os estudos consideráveis ​​tinha mostrado

TCF3

era um promotor de tumor, o seu papel na progressão do cancro permanece controverso [16], [17]. Patel

et al

. forneceu três cenários para demonstrar o potencial

TCF3

mecanismos regulamentadas ao nível molecular [11].

O objetivo deste estudo é avaliar o significado clínico da

TCF3

em CRC humana, e investigar mecanismos mediadores superexpressão de

TCF3, que auxiliam na identificação de início de uma recorrência subconjunto de alto risco dos pacientes com estágio II e III CRC.

Materiais e Métodos

pacientes e amostras de tecido

de abril de 2000 a novembro de 2004, 64 tecidos frescos CRC, 36 com recorrência e 28 sem recorrência, foram coletadas imediatamente após a operação na Universidade Fudan Shanghai Cancer Center (Xangai, China ). Características das amostras foram apresentados na Tabela 1. Total de 118 amostras embebidos em parafina, 78 com recorrência e 40 sem recorrência, foram coletados retrospectivamente a partir de material de arquivo armazenado no Departamento de Patologia da Universidade Fudan Shanghai Cancer Center (Xangai, China) entre fevereiro 1993 e março de 2004, estas amostras eram de pacientes diferentes dos utilizados para a análise de mRNA (Tabela 2).

Todos os espécimes examinados foram retiradas de núcleos vitais de histopatologicamente cancros confirmada na cirurgia primária em pacientes que não foram submetidos a qualquer tratamento local ou sistêmico antes da operação. amostras de tumor foram revisados ​​por pelo menos 2 patologistas experientes, e estágio do tumor foi atribuída com base em sistema da Internacional Cancer Union Against. No estágio II, mas todos estágio III pacientes receberam quimioterapia pós-operatória, mas nenhum paciente recebeu radioterapia.

Sobrevivência

livre de doença foi definida como o tempo decorrido entre a data do diagnóstico inicial para o aparecimento de recidiva local ou metástases à distância . consentimento informado por escrito foi obtido de todos os pacientes, e o protocolo de pesquisa foi aprovado pelo comitê de ética na Universidade Fudan Shanghai Cancer Center.

As linhas celulares

Seis linhas celulares de CRC humanos foram obtidas a partir da American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA). Três são linhas primária de tumor-derivados (SW480, Caco-2, HCT116), 2 são linhas linfonodo-metástases derivados (SW620, LoVo) e 1 é a linha abdominal hidropisia-metástases derivado (Colo205). As linhas de células LoVo e Colo205 foram cultivadas em meio RPMI-1640, ao passo que células Caco-2 e HCT116 foram cultivadas em meio essencial mínimo de Eagle e meio de McCoy 5a modificado, respectivamente. Ambos SW480 e SW620 foram cultivadas em meio L-15 de Leibovitz. Todos os meios foram suplementados com soro fetal bovino a 10% (Gibco, EUA), penicilina 100 UI /ml, e estreptomicina 100 ug /ml a 37 ° C em 5% de CO

2- atmosfera humidificada. O método de cultura de células foi descrito anteriormente [18].

análise de ARNm por qPCR

O ARN total foi isolado com um RNeasy Mini Kit (Qiagen GmbH, Hilden, Alemanha) e tratado com DNase. De acordo com as instruções do fabricante, os ADNc foram sintetizados com iniciadores oligo-dT (Promega, Madison, WI). O

TCF3

iniciadores espec�icos utilizados foram 5′-CTCGAGAAGAACAGGCCAAG-3 ‘(forword) e 5′-GGGGCAGGTACTGAACACAT-3’ (inverso). desidrogenase de gliceraldeído-3-fosfato (

GAPDH

) serviu como um controlo para a normalização da expressão do gene e foi amplificado utilizando os iniciadores 5′-GAAGGTGAAGGTCGGAGTC-3 ‘(directo) e 5′-GAAGATGGTGATGGGATTTC-3’ (inverso) . A qPCR foram realizadas utilizando o ciclo de PCR padrão sobre um sistema de detecção de sequência ABI Prism 7900HT (Applied Biosystems), e o ADNc amplificado foi detectado por corante SYBR Green I (Qiagen GmbH, Alemanha). Os dados foram analisados ​​usando o ABI Prism 7900 software SDS (Sequence Detection System 2.0; Applied Biosystems). Coeficientes de as intensidades do gene alvo e

GAPDH

sinais foram usadas como uma medida relativa do nível de expressão de genes alvo. Todos os experimentos foram repetidos três vezes.

Imunohistoquímica

hematoxilina de arquivo e lâminas coradas-eosina foram analisadas por 2 patologistas experientes em accordence com a classificação da Organização Mundial da Saúde 2000. Um sistema de graduação histológica de 3 camadas foi aplicado. O estágio TNM foi avaliada de acordo com a União Internacional de 2002 contra a classificação do Câncer.

Um coelho policlonal anti-humano

TCF3

anticorpo (diluição 1:400) foi obtido a partir Abcam (Cambridge, UK). No estudo, as secções de 4 ^ m a partir de blocos de parafina foram desparafinizadas arquivamento e aquecido duas vezes durante 10 minutos cada em um forno de microondas (500 W) antes da exposição ao primeiro anticorpo. coloração com imunoperoxidase foi realizada utilizando o método EnVision 2-passo (DAKO, Glostrup, Dinamarca) de acordo com as instruções do fabricante e visualizados com 3,3′-diaminobenzidina tetracloreto (Sigma, St Louis, MO).

Citoplasma e coloração nuclear foram medidos para este anticorpo. As células positivas foram contadas por 2 patologistas que estavam cegos para o resultado clínico. Para correlação clínico-patológico, foi utilizado um sistema de pontuação 4-tiered (negativo para 3+), que levou em conta a percentagem de células positivas e intensidade de coloração como descrito anteriormente [18]. A abordagem detalhada foi utilizada para gerar uma pontuação para cada núcleo tecido como se segue: sem coloração ou coloração em 10% de células tumorais (score 0), coloração parcial fraca /escassamente perceptível em 10% de células tumorais (pontuação 1 +), coloração fraca a moderada em 10% de células tumorais (pontuação 2+), e a forte coloração em 10% de células tumorais (classificação 3+). Interpretamos separadamente TCF3 – e 1+ como ‘baixa expressão’ e

TCF3

2+ e 3+ como “forte expressão ‘

sequenciamento genômico Bissulfito (BGS)

. o ADN genómico foi isolado a partir de tecidos usando o kit DNeasy (Qiagen, Hilden, Alemanha) e armazenado a -20 ° C antes da utilização. DNA foi modificado com EZ DNA metilação-Gold KitTM (Zymo, Orange, CA) de acordo com as instruções do fabricante. Geralmente, 1 ul de DNA modificado foi usado em reacções de PCR subsequentes. Os iniciadores para BGS são 5′-GTATAAGGTTGAAAATTTGGGT-3 ‘(directo) e 5′-CTCCCTAAAATCCTAAAAATCTTA-3’ (inverso). As condições de PCR foram de 1 ciclo a termociclagem a 95 ° C durante 15 minutos; 30 ciclos a 94 ° C durante 30 segundos, 52 ° C durante 30 segundos, e 72 ° C durante 30 segundos e extensão final a 72 ° C durante 7 minutos. Os produtos de PCR foram purificados com o kit de extracção de Gel (Qiagen), clonado no vector pMD20-T (Promega, Madison, WI, EUA), e, em seguida, transformado em

Escherichia coli DH10B

estirpe. 10-15 colónias foram seleccionados para confirmar a presença e tamanho do inserto clonado. Cinco clones positivos para cada amostra foram seleccionados e amplificados utilizando os iniciadores do vector P2 universais, 5′-GTAAAACGACGGCCAGT-3 ‘, P4, 5′-AGAGGATAACAATTTCACACAGGA-3’. Após purificação, o produto de PCR de sequência é analisada utilizando ABI 3730 sequenciador de ADN (Applied Biosystems).

PCR específica de metilação (MSP)

Os iniciadores para a sequência de gene metilado TCF3 eram 5′- AATTTTATAGGAAAAAGGCGC-3 ‘(para a frente) e 5′-AACCTCGAACGCACATACTA-3′ (reverso). Para sequência não metilado eram 5’-TGGAATTTTATAGGAAAAAGCTGT-3 ‘(directo) e 5′-AAAAACCTCAAACACACATACTA-3’ (inverso). Qiagen HotStarTaq ADN polimerase foi utilizada para a PCR. termociclagem condições utilizadas foram de 1 ciclo a 95 ° C durante 15 min; 30 ciclos a 94 ° C durante 30 s, 53 ° C (para M conjunto iniciador) ou 51 ° C (para U conjunto de iniciadores) durante 30 s, e 72 ° C durante 30 s; e extensão final a 72 ° C durante 7 min. Os produtos de PCR foram carregados 2 géis% de agarose seguido de coloração com brometo de etídio e directamente visualizados sob iluminação UV. Uma amostra foi classificada como hipermetilado quando o produto de amplificação foi observada metilação sozinho, parcialmente metilado quando os produtos de amplificação tanto metilados e não metilados foram vistos, e não metilado quando se mostrou produtos de amplificação não metiladas por si só, ou nenhum dos dois produtos de amplificação foram encontrados. Para a análise estatística, as amostras hipermetilado e parcialmente metilados foram consideradas como o grupo metilado (M) e em comparação com o grupo não metilado (U) [19].

A análise estatística

análises estatísticas foram realizado com Stata (versão SE /10; StataCorp, College Station, TX). A associação entre os dados categóricos foi analisada por meio do teste de χ2. As curvas de sobrevivência foram gerados pelo método de Kaplan-Meier, e distribuições de sobrevivência univariadas foram comparados com a utilização do teste de log-rank. A Cox modelo de risco proporcional multivariada foi utilizada para a detecção de prognosticador independente. A 2 de cauda

valor P Compra de significância foi estabelecido em 0,05.

Resultados

TCF3

expressão foi regulada nos tecidos recorrentes CRC e CRC – linhas celulares derivadas de metástases

em 64 amostras frescas,

TCF3

expressão de mRNA foi significativamente maior nos tecidos recorrentes CRC do que naqueles sem recorrência (

P

= 0,026; Figura 1a). curva de receptor-operador de análise (ROC) mostrou que o melhor valor de corte para distinguir entre recorrentes e CRCs não recorrentes foi de 0,0041. As áreas sob as curvas ROC foi 0,668 (IC 95% 0,534-0,803) (Figura 1b). quantidades relativas de

TCF3

ARNm em linhas de células de CRC foram expressos como a diferença N-vezes em relação a células Caco-2 e normalizada para o

GAPDH como gene de referência. O

TCF3

expressão de mRNA em SW620, LoVo e Colo205 foram aumentados 3.4-, 1.8- e 6,9 ​​vezes, respectivamente, em comparação com a de Caco-2. Considerando

TCF3

níveis de mRNA de SW480 e HCT116 foram reduzidos de 0,5 e 0,4 vezes, respectivamente (Figura 1C). Para 118 amostras de positividade, a expressão da proteína TCF3 foi significativamente associada com recorrência (Tabela 3).

(a) Em CRC recorrente,

TCF3

níveis de mRNA foram significativamente aumentados comared ao CRC sem recorrência ( teste de Wilcoxon,

P Art 0,05). (B) curva ROC mostrando o desempenho de

TCF3

na previsão de recorrência de CRC. Área sob a curva (AUC) = 0,668 (IC 95% 0,534-0,803),

valor P

= 0,012. (C)

TCF3

níveis de mRNA foram medidos com qPCR em 6 linhas celulares de CRC.

GAPDH

sinais foram usadas como uma medida relativa do nível de expressão de genes alvo. Os resultados representativos, realizadas em triplicata, são apresentados como média ± SD.

Correlação entre

TCF3

expressão da proteína e as características clinicopatológicas

A coloração positiva foi observado primariamente no citoplasma e nucleares das células cancerosas. Análise de expressão TCF3 nos 118 tecidos CRC revelou que 37% das amostras demonstrando forte (2+ e 3+) intensidades e 63% de baixa (- e +) intensidades. A imunocoloração da proteína TCF3 é ilustrada na Figura 2.

Exemplos de imunocoloração de TCF3 a expressão forte (a, b) e baixa expressão (c, d) níveis (ampliação de × 400).

Não foram observadas diferenças significativas em relação à idade, sexo, tamanho, lymphvascular e invasão perineural. No entanto, a taxa de sobrevida livre de doença foi significativamente menor nos pacientes com expressão de proteína de alta TCF3 do que naqueles com baixa expressão (

P

= 0,002), e expressão TCF3 foi significativamente associada com o tipo histológico de câncer (

P

= 0,038). Tabela 2 mostrou as relações entre características clínicas e expressão da proteína TCF3 in118 amostras.

TCF3

tempo de sobrevivência expressão de proteínas e livre de doença

A análise univariada por gráficos de Kaplan-Meier revelou que a forte expressão TCF3 foi significativamente associada com resultados de sobrevida livre de doença desfavoráveis ​​(

P

= 0,0001). As curvas de Kaplan-Meier não demonstrou qualquer diferença na sobrevida no CRC de acordo com outros parâmetros, incluindo sexo, idade, localização do tumor e invasão lymphvascular (

P Art 0,05). No entanto, as distribuições de sobrevivência foram significativamente diferentes nos CRC com e sem invasão perineural. parcelas de características de expressão e TCF3 perineural são mostrados na Figura 3. TCF3 expressão forte foi associada com recorrência (Tabela 3). A análise multivariada Cox indicou que a invasão perineural, a expressão da proteína TCF3, e quimioterapia foram variáveis ​​independentes (

P

= 0,00, 0,01 e 0,01) (Tabela 4).

(a) Pacientes com alta expressão TCF3 (n = 44) mostrou uma prognisis significativamente mais pobres do que aqueles com baixa expressão TCF3 (n = 74;

P Art 0,05; teste log-rank). (B) Pacientes com invasão perineural (n = 17) mostrou prognisis significativamente mais pobres do que aqueles sem tal invasão (n = 101;

P Art 0,05; teste log-rank).

gene Up-expressão de

TCF3

está associada com o seu promotor CpG hipometilação ilha

Uma ilha CpG abrangendo cerca de 2,3 kb foi encontrado no humano TCF3

região promotora (Figura 4c). Para entender o mecanismo de

TCF3

regulação no CRC, o estado de metilação na região promotora de

TCF3

foi testado. Nós amplificado e sequenciado a região promotora de

TCF3

ADN genómico tratado com bissulfito utilizando de sódio preparada a partir de tecidos de CRC. Mais densamente locais CpG metilados (90,7% vs. 44,3%) foram detectados em tecidos não-recorrentes CRC neste estudo (Figura 4d, 4e e 4f). Para validar ainda mais os resultados de sequenciação, a região do promotor de MSP foi caracterizado por metilação usando iniciadores específicos ou unmethylation-47 em amostras de CRC. Metilação do

TCF3

foi detectada em 23 dos (95,8%) de 24 espécimes de CRC não recorrentes. Em contraste, a frequência de metilação era visivelmente menor em amostras de CRC recorrentes (16/23, 69,6%;

P

= 0,023, Figura 5a, 5b). Além disso, foi demonstrado que o

TCF3

expressão é significativamente associada com o estado de metilação, indicando a inactivação epigenetical pode desempenhar um papel importante na regulação da

TCF3

expressão (

P

= 0,001, Figura 5c).

Localização do

gene TCF3

dentro cromossomo humano 19 (ch19p13.3). (A) a estrutura Exon do

gene TCF3

humano. (B) Estrutura da extremidade 5 ‘do

gene TCF3

. Gráfico da percentagem de guanina (G) e citosina (C) os nucleótidos em toda esta região, a localização dos dinucleótidos CpG nesta região, e os limites da ilha CpG (região sombreada). (C) Os exemplos representativos de cromatogramas de sites CpG obtidos a partir de seqüenciamento bissulfito do

TCF3

fragmento no CRC sem recorrência (d) e com a recidiva (e, f).

H, alelo metilado; L, alelo não metilado. (C) correlação inversa entre a

TCF3

nível de expressão de status metilação do promotor e do gene por análise qPCR de

expressão TCF3

nos 47 tecidos CRC. A barra representa a proporção de

TCF3 Comprar e

níveis de GAPDH

mRNA expressão.

TCF3

níveis de expressão correlacionada com o estado de metilação do gene (

P

= 0,001, teste de Mann-Whitney U).

Discussão

Nosso estudo investiga a correlação entre a expressão TCF3 e as características clínico-patológicas em pacientes com estágio II e III CRC. A expressão TCF3 em tecidos CRC recorrentes foi encontrada significativamente maior do que naqueles sem recorrência. A análise de sobrevivência mostrou que a expressão da proteína TCF3 forte e invasão perineural foram fatores prognósticos negativamente independentes, e quimioterapia foi um fator de proteção independente. Para eliminar o preconceito tratamento causados ​​pela quimioterapia adjuvante, foi analisada a correlação entre a expressão TCF3 e tempo de sobrevivência na fase II e III pacientes, respectivamente. A quimioterapia não influenciou a associação entre a expressão TCF3 e prognóstico (Figura S1).

A hipometilação do promotor CpG ilhas de oncogene é capaz de ativar esses genes. Para determinar se a supra-regulação de TCF3 foi associada a metilação aberrante, investigou-se a frequência de metilação em 47 de CRC tecidos por MSP. O alelo metilado foi detectada em 39 dos 47 (83%) tumores testados. A frequência de metilação foi significativamente menor em amostras de CRC recorrentes comparados aos tumores sem recidiva (

P

= 0,023). O

expressão TCF3

em 39 tumores com metilação do promotor foi significativamente menor do que em 8 casos, sem a metilação do promotor (

P

= 0,001), indicando que o promotor hipometilação foi o principal mecanismo de regulação positiva de

TCF3

. Aumento

sinalização

TCF /β-catenina é uma das marcas do CRC [20]. Nós, aqui, apresentar as provas mostrando metilação do

TCF3

é um evento comum em tumores colorretais. Estes dados sugerem que

TCF3

inactivação metilação é necessária para o potencial oncogénico inibidor da

TCF /β-catenina

sinalização. Pelo contrário, aberrantes aumentos hipometilação

expressão TCF3

, que está associada com a recorrência da fase II e III CRC.

Os membros do

TCF

ligam família para β- não fosforilada catenin [21] – [24] e regulam a transcrição de genes alvo, tais como

TCF

si e os oncogenes

ciclina D1

e

c-myc

[25], [26]. A desregulação da via de sinalização é um acontecimento importante no desenvolvimento de várias doenças malignas, tais como cancro do cólon, melanoma e cancro da próstata. Além desregulação da via

TCF /β-catenina em células tumorais, tem sido conhecido que o mau funcionamento de caderina-E permite que as células tumorais para invadir os tecidos circundantes [27]. A expressão da E-caderina é também reduzida ou ausente, em muitos cancros epiteliais, incluindo gástrico e cancro da mama [28] – [30]. Como um repressor da transcrição, o papel de

TCF3

é regulação negativa da E-caderina durante a progressão tumoral [31], [32].

TCF3

liga os elementos de E-box no local do promotor proximal da E-caderina que conduz à inactivação transciption de E-caderina, e a regulação negativa da E-caderina desempenha um papel importante na redução sistemas de adesão célula-célula e promove metástase [33].

Tendo em conta os dados completos apresentados neste estudo, propomos que a sobre-expressão de TCF3 no estágio II e III pacientes CRC foi significativamente associada com mau prognóstico e baixa taxa de sobrevida livre de doença (Figura 3), o que contribui para identificar aqueles pacientes de alto risco de CRC. Alguns estágios II e todos os casos de CRC fase III poderiam ser considerados para terapia adjuvante [34]. No entanto, o papel da quimioterapia adjuvante em doentes com tumores da fase II ainda não é claro [35], [36]. Para selecionar de alto risco doença em estágio II e maximizar os benefícios da terapia adjuvante, um marcador de prognóstico independente pode ser útil na identificação de fenótipos agressivos dentro estágio II CRC. Nós identificamos GAS1 como um fator para selecionar pacientes com alto risco de recorrência em nosso trabalho anterior [18], e alguns genes candidatos interessantes como fatores prognósticos para essas amostras também está validando em nosso laboratório (dados não publicados). Neste estudo, nós mostramos que a forte

TCF3

expressão pode identificar um subgrupo de pacientes com alto risco de recorrência e estes doentes podem beneficiar de um tratamento mais agressivo.

Em conclusão, nossos dados destaca o papel crucial da

TCF3

hipometilação no CRC desenvolvimento recorrente. Estes resultados sublinham o potencial valor prognóstico da

TCF3

como um biomarcador para a escolha de terapia adjuvante para pacientes com alto risco de um mau resultado.

Informações de Apoio

Figura S1.

Kaplan-Meier estimou as taxas de sobrevivência de acordo com a expressão TCF3. Pacientes com alta expressão TCF3 mostrou prognisis significativamente mais pobres do que aqueles com baixa expressão TCF3 no estágio II (a) e III pacientes (b) (

P Art 0,05, teste log-rank)

doi.: 10.1371 /journal.pone.0112005.s001

(TIF)