Humana
Abstract
Fundo
CHL1
gene (também conhecido como
Chamada
) em 3p26.3 codifica uma molécula de adesão celular de uma passagem trans-membrana (CAM). Anteriormente CAMs deste tipo, incluindo L1, foram mostrado para ser envolvido no crescimento e metástase do câncer.
Metodologia /Apreciação Principais
Nós usamos Clontech Cancer Profiling Arrays (19 tipos diferentes de câncer, 395 amostras) para analisar a expressão do
CHL1
gene. Os resultados foram ainda validados por RT-qPCR de mama, renal e câncer de pulmão. Câncer Profiling matrizes revelou expressão diferencial do gene: down-regulation /silenciamento na maioria dos tumores primários e a sobre-regulação associado com o crescimento invasivo /metastático. Frequente a sub-regulação ( 40% dos casos) foi detectada em 11 tipos de cancro (mama, rim, recto, cólon, tiróide, estômago, pele, intestino delgado, da bexiga, da vulva e o cancro do pâncreas) e frequente sobre-regulação ( 40% dos casos) – em 5 tipos (pulmão, ovário, útero, fígado e traqueia) de cancro. Usando PCR em tempo real quantitativa (RT-qPCR) descobrimos que
CHL1
expressão foi reduzida em 61% de câncer de mama, 60% do pulmão, 87% das células claras e 89% dos espécimes de cancro renal papilar (
P
0,03 para todos os casos). Houve uma maior frequência de
CHL1
diminuição mRNA em carcinoma de células escamosas do pulmão em comparação com adenocarcinoma (81% vs. 38%,
P
= 0,02), sem associação com a progressão do tumor.
Conclusões /Significado
os nossos resultados sugerem que o
CHL1
está envolvido no desenvolvimento de diferentes cancros humanos. Inicialmente, durante o crescimento do tumor primário
CHL1
poderia atuar como um supressor tumoral putativo e é silenciado para facilitar a
in situ crescimento
tumor para 11 tipos de câncer. Nós também sugeriu que re-expressão do gene na extremidade da massa de tumor pode promover o crescimento invasivo local e permitir a propagação metastática em células de ovário, cólon e cancro da mama. Nossos dados também apoiou o papel da
CHL1
como um potencial novo biomarcador específico na patogênese precoce de dois grandes tipos histológicos de câncer renal
Citation:. Senchenko VN, Krasnov GS, Dmitriev AA, Kudryavtseva AV, Anedchenko EA, Braga EA, et al. (2011) a expressão diferencial de Gene CHL1 durante o desenvolvimento de cancros major Humanos. PLoS ONE 6 (3): e15612. doi: 10.1371 /journal.pone.0015612
editor: Chad Creighton, Baylor College of Medicine, Estados Unidos da América
Recebido: 11 Agosto, 2010; Aceito: 17 de novembro de 2010; Publicação: 07 de março de 2011
Direitos de autor: © 2011 Senchenko et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados
Financiamento:. Este trabalho foi apoiada por doações 08-04-01577 e 10-04-01213 da Fundação Russa para Pesquisa básica; Estado Contratos 02.740.11.5227 e 16.740.11.0173 com o Ministério da Educação e Ciência da Rússia; doações da Sociedade Sueca de Câncer, do Conselho de Pesquisa sueco, do Instituto Sueco e do Instituto Karolinska e do Instituto Nacional do Câncer, Centro de Pesquisa do Câncer, Programa de Pesquisa Intramural do NCI. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito
CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes
Introdução
genes associados ao câncer dividem em duas categorias principais: os genes causadores de câncer que impulsionam a transformação maligna e manter o crescimento do tumor, e genes progressão do cancro que orquestram invasão local e a propagação de células metastáticas e crescimento de metástases distantes [1 ], [2], [3]. O
gene CHL1 viajantes – perto homólogo de L1, também conhecido como
CHAMADA – adesão celular L1-like (número de acesso GenBank NM_006614.2) codifica uma one-passe adesão celular trans-membrana molécula (CAM) capaz de ambos homotípica e heterotípica de ligação. A proteína codificada por este gene é um membro da família do gene de L1 de moléculas de adesão de células neurais. É uma molécula de reconhecimento neural que podem estar envolvidos em vias de transdução de sinal.
CHL1
é expresso em tecidos normais, além do cérebro e é expresso numa variedade de linhas de células de cancro humanas e tecidos tumorais primários [4], [5]. Mostrou-se também que o gene está envolvido em actividades cognitivas gerais (g /IQ) [6], [7] e algumas doenças neurológicas (isto é, a esquizofrenia [8]). A supressão de uma cópia deste gene pode ser responsável por deficiências mentais em pacientes com síndrome 3p-. Recentemente, vários CAMs incluindo L1 foram mostrados para ser envolvido no crescimento e na metástase do cancro [9], [10].
CHL1
está localizado na 3p26, uma região que é mostrado para abrigar um candidato para a susceptibilidade para cancro da próstata em famílias com cancro da próstata finlandeses, embora não há mutações foram detectadas na parte codificante do gene [11]. Assim, estes relatórios sugerem que
CHL1
desempenha um papel no desenvolvimento do cancro [12], não apenas em actividades neuronais. Anteriormente, em colaboração com o Dr. Helen S. Smith, foi realizado um mapeamento eliminação do braço curto do cromossomo 3 em um painel dos cânceres de mama e delineou três regiões como abrigar genes supressores de câncer de tumor de mama candidato (TSG), ou seja, 3p24- 26, 3p21-22 e 3p12-13 [13], [14], [15], [16]. Então nós clonado o
CHL1 (CALL)
gene em 1997/1998 e analisada a sua expressão no desenvolvimento do mouse e realizou extensa análise bioinformática [5].
Aqui nós fornecemos um estudo abrangente da
CHL1
expressão de ARNm, utilizando dois métodos. A análise qualitativa foi realizada utilizando Clontech Cancer Profiling Arrays, e mais PCR em tempo real quantitativa (RT-qPCR) foi utilizado para validação dos dados de microarranjos por três principais tipos de câncer: câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC), cancro da mama (BC) e carcinomas de células renais (RCC). Nossos resultados sugerem um papel duplo do
CHL1
na tumorigênese: pode contribuir para o crescimento do tumor inicial e, em seguida, para a progressão e, finalmente tumor propagação /metástase. Os dados suportado ainda mais o papel da
CHL1
como um potencial novo biomarcador específico na patogênese precoce de dois grandes tipos histológicos de câncer renal.
O trabalho é dedicado à memória do Dr. Helen S. Smith.
resultados
In silico
análise da expressão CHL1 em tecidos normais e tumorais
Os vastos bancos de dados de expressão pública permitem detectar e quantificar a expressão da maioria, se não todos os genes conhecidos RefSeq (~20,000) em tecidos normais e tumorais. Usamos vários servidores baseados na web públicas para analisar rato e humano
CHL1
expressão [17], [18], [19], [20]. Os dados mostram que o
CHL1
é expressa em muitos adultos e fetais tecidos normais, além do cérebro e do sistema nervoso periférico [17], [19]. expressão variável foi visto em muitos tumores; foi especialmente elevada em G361 A linha celular de melanoma. De acordo com Oncomine [18] Dados preliminares com base em análise de microarray, o
CHL1
expressão varia também em vários tipos de câncer principais – renal [21], [22], cervical [23], cólon [24], [ ,,,0],25], ovário [26], do pulmão [27], [28], estômago [29] e da mama [30], [31] do cancro. O Oncomine também mostrou co-expressão de
CHL1
com outro câncer conhecido gene associado a metástase, lisil oxidase (
LOX
) [32] no melanoma metastático.
Investigação de expressão CHL1 com Cancer Profiling Arrays
Nós usamos Cancer Profiling Arrays I e II (Clontech) para testar a
CHL1
expressão em uma grande amostra de tumores primários humanos, incluindo mama, pulmão, rim, ovário , cólon, estômago e outros (Fig. 1). Só 395 amostras de 486, incluindo tumores metastáticos 90 e 12 metástases foram informativo. O primeiro mostrou que a mudança de
expressão CHL1
em todos os tumores estudados em comparação com os tecidos combinados não-cancerosas (normais) foi estatisticamente significativa (
P Art 0,05, teste exato de Fisher ou χ
2 critérios)
Abreviaturas utilizadas:. ADC – adenocarcinoma, ASC – carcinoma adeno, BAC – adenocarcinoma bronquíolo-alveolar, C – carcinoma, CAC – cystadenocarcinoma, CC-ADC – adenocarcinoma de células claras, EDST – tumor do seio endodérmico, ENB – nephroblastoma epitelial, ESS – endometrial sarcoma estromal, FAC – adenocarcinoma folicular, FS – fibrossarcoma, I-DC – carcinoma ductal invasor, I-IDC – infiltrando carcinoma intraductal, I-LC – infiltrando carcinoma lobular, LC – carcinoma lobular, LDC – carcinoma lobular-ductal mista, LM – leiomioma, M – melanoma maligno, MAC – adenocarcinoma mucinoso, MBC – carcinoma limítrofe mucinoso, MC – carcinoma medular, MMMT – tumor mülleriano misto maligno, NI-IDC – não infiltrante carcinoma intraductal , PAC – adenocarcinoma papilar, PC – carcinoma papilar, PSC – carcinoma seroso papilífero, PSCA – cystadenoma seroso papilífero, PSCAC – cystadenocarcinoma seroso papilífero, RCC – carcinoma de células renais, S – seminoma, SC – carcinoma seroso, SCAC – cystadenocarcinoma serosa, SCC – carcinoma de células escamosas, TAC – tubular adenocarcinoma, TC – carcinoma tubular, TCC – carcinoma de células transicionais, UBT – útero tumor benigno. Os asteriscos (*) mostram amostras com metástases. ** G361 – uma linha celular de melanoma. As amostras em caixas indicam uma correspondência normal (à esquerda) – tumor primário (canto inferior direito) par com uma amostra metastático associado (canto superior direito de uma caixa). amostras de tumores – T; N – combinado amostras de controlo normais
Down-regulação
Como demonstrado pelos dados Cancer Profiling Arrays nas Figuras 1 e 2, uma alta porcentagem de pacientes apresentou uma diminuição da regulação da..
CHL1
expressão em cancro da mama, do rim, do recto, cólon, tiróide, estômago, pele, intestino delgado, da bexiga, da vulva e o cancro do pâncreas. Os resultados da análise dos dados de microarray foram apresentados para 11 tipos de cancro na Tabela 1. No total, uma diminuição estatisticamente significativa de
CHL1
expressão foi encontrada no cancro da mama – 71% (45 de 63 casos), cólon – 48% (23 de 48), reto – 50% (14 de 28), tireóide – 69% (11 de 16), rim – 75% (21 de 28) e do intestino delgado – 67% (6 de 9) cancros . Importante, um aumento estatisticamente significativo da frequência sub-regulação foi mostrado em amostras com metástases em comparação com amostras sem metástases no cólon (83% vs 36%,
P
= 0,01) e do recto (75% vs 31 %,
P
= 0,05) cancros. A mesma tendência foi encontrada no cancro do ovário (60% vs. 19%,
P
= 0,17).
Fração de tumores com
CHL1
-regulação é mostrado com vermelho, infra-regulação – verde, mRNA de retenção de nível – amarelo. Os dados revelaram com a análise Clontech Microarray. Asteriscos (*) mostram diferenças estatisticamente significativas entre as frequências de
CHL1
expressão muda com cima e para baixo-regulação.
Up-regulação.
o
CHL1
-regulação (frequência de 20% a 100%) foi encontrada no pulmão, ovário, útero, fígado, pele, próstata, estômago, colo do útero e traqueia cancros. No entanto, o aumento da
CHL1
nível de mRNA foi estatisticamente significativa apenas no cancro do pulmão -64% (16 de 25,
P Art 0,01). A maioria dos casos (14 de 22, P 0,01) foram encontrados em diferentes histotipos de NSCLC (ADC, BAC, SCC) Na fase I. Também observou-se vários casos de
CHL1
-regulação em tumores metastáticos (estômago, do pulmão, a traqueia, ovário e útero, Tabela 1). Assim, os casos com
CHL1
-regulação poderia servir como exemplos de
CHL1
envolvimento tanto na inicial e, possivelmente, na progressão e crescimento do tumor invasivo.
desregulamentação.
no útero e ovário a frequência de cima e para baixo-regulação estava perto (41% e 30%, 46% e 27%, respectivamente). No cancro do ovário a regulação negativa era um evento predominante (52%) em amostras sem metástases, pelo contrário, o aumento da regulação foi predominante (60%) no grupo de tumores metastáticos. No câncer de estômago de uma alteração estatisticamente significativa de
CHL1
expressão (tanto para cima e para baixo-regulação) foi mostrado no grupo com metástases em relação ao grupo sem metástases (88% vs. 45%,
P
= 0,02).
as metástases.
Foi observada re-expressão do
CHL1
em 4 de 12 metástases (primeira coordenada), juntamente com baixo
CHL1
nível de mRNA no tumor primário (segunda coordenada): em células de ovário (24K /24L), cólon (14 ° /14P, 14V /14W) e mama (4E /4J, Fig 1, matriz I.). Além disso, também encontramos silenciamento da expressão do gene em ambos os metástases e tumores primários, por exemplo, o cancro da mama (4G /4H, 4K /4L).
A expressão CHL1 na mama, pulmão e tecidos de câncer renal estudada utilizando RT-qPCR
o
CHL1
conteúdo mRNA diminuiu na maioria das amostras de tumores estudados em comparação com amostras normais, mas em algumas amostras de tumores do
CHL1
expressão era up -regulated (Fig. 3. A, B e C).
A. A relativa
CHL1
nível de mRNA (R) no cancro da mama (BC). N
0 – sem metástases, N
1-2 – metástases em linfonodos regionais. Amostras # 1, 2 (fase I), # 3-22 (Fase II), nº 23 (Fase IV); amostras # 3-9 (grau 1), # 10-21 (grau 2). B. A relação
CHL1
nível de mRNA (R) no cancro do pulmão (NSCLC). carcinomas de células escamosas do pulmão, ADC – – SCC adenocarcinomas pulmonares, N – amostras normais de câncer livre doadores saudáveis; N
0 – sem metástases, N
1-2 – metástases em linfonodos regionais; I, II e III – Fases. C. A relação
CHL1
nível de mRNA (R) em câncer renal (CCR). CC-RCC – carcinoma de células renais claras, PRCC – carcinomas renais papilares; N
0 – sem metástases, N
1-2 – metástases em linfonodos regionais; I, II e III -. Estágios
O cancro da mama (BC)
Descobrimos que o
CHL1
nível de mRNA foi diminuída em 61% (14 de. 23,
P
0,03), o aumento em 22% (5 em 23) e não se alterou em 17% (4 de 23) de amostras. diminuição máxima da
CHL1
nível de ARNm era de 20 vezes, aumento máximo foi de 34 vezes. Não houve correlação evidente entre a mudança do
CHL1
expressão ea progressão do tumor (Fig. 3 A).
câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC).
O
CHL1
nível de mRNA foi diminuída em 60% (18 de 30, P 0,02) e foi normal em 33% (10 de 30), ou seja, menos do que as mudanças de 2 vezes. A diminuição ou aumento do nível de mRNA foi detectado nem no pulmão não-cancerosas tecidos combinados (normal) nem em tecidos de câncer livre doadores saudáveis. No entanto, para dois subtipos histológicos de NSCLC (ADC e SCC) a frequência das mudanças de mRNA foi diferente. A regulação negativa foi observada em 38% (5 em 14) de amostras ADC. O aumento da
CHL1
mRNA (7 vezes) foi detectado em apenas uma amostra de ADC. Pelo contrário, em amostras de CEC a
CHL1
expressão foi significativamente reduzida em 81% (13 de 16,
P Art 0,02).
LD
(nível de ARNm de redução) variou de 2 a 100 vezes no ADC e de 2 a 44 vezes na SCC. Houve um aumento mais significativo de
FD
(frequência de mRNA diminui) valores em SCC, em comparação com ADC (81% vs. 38%,
P
= 0,02), sem associação perceptível com tumor progressão (Fig. 3, B e Tabela 2).
carcinoma de células renais Limpar célula (CC-RCC), carcinoma da célula renal papilar (PRCC) e linhas de células de carcinoma renal.
Uma diminuição significativa (3-302 vezes) de
CHL1
ARNm foi detectada em 87% (26 de 30,
P
0,01) de amostras de RCC e CC-89% (8 de 9,
P Art 0,02). PRCC de amostras com
LD
av
(média geométrica de LD) igual a 18 e 19 vezes, respectivamente (Fig 3, C). Portanto podemos concluir que a frequência e o nível médio do CHL1
diminuição expressão foram semelhantes para dois grandes tipos histológicos de câncer renal, CC-RCC e PRCC. O
LD
av
valor foi significativa em todos os tumores RCC em todas as fases de desenvolvimento independentes da presença de metástases (Tabela 3). Em CC-RCC com ou sem metástases, o
FD
e
LD
av
valores foram semelhantes.
As estimativas da
CHL1
níveis de ARNm em sete linhas de células de cancro renal revelou forte sub-regulação deste gene: 80 vezes (Caki2, KRC /Y), cerca de 1000 vezes (TK164) e silenciamento total (TK10, KH39, HN4, Caki1, a Fig. 4).
o nível de mRNA do gene alvo foi normalizada para a referência de genes
RPN1
e
GUSB
.
Comparação de microarrays e dados RT-qPCR para mama, câncer renal e pulmonar
Os dados de microarranjos para 61 BC, 23 RCC e 25 amostras de NSCLC foram comparados com dados RT-qPCR para 23 BC, 30 CC-RCC e 30 amostras de NSCLC. Em nosso estudo array a significativa
CHL1
infra-regulação foi mostrado para a maioria das amostras de RCC; -regulação foi observada em apenas 3 casos. Nossos resultados também mostraram a regulação da
CHL1
na maioria das amostras BC independentes da presença de metástases e aumento da regulação em apenas 7 tumores. Quase os mesmos resultados foram obtidos utilizando RT-qPCR. Havia semelhanças entre matriz e dados quantitativos para o câncer renal e de mama (Tabela 4)
Cancer Profiling Arrays I e II incluem um grupo muito heterogéneo de câncer de pulmão, com diferentes subtipos histológicos:. BAC, ADC, SCC, carcinóide com estágio I e II, apenas dois tumores metastáticos e número limitado de amostras de cada subtipo. No total, houve 15 SCC e 5 ADC, que poderíamos comparar com os dados RT-qPCR. Encontramos um aumento da regulação nos 11 SCC (6 de 11 foram identificados como Fase I) e 4 ADC (3 ADC foram Estágio I também); down-regulation em 2 SCC (13%) e 1 ADC (25%, Fig. 1). Recentemente, mostrou um aumento da regulação de diversos TSG em 3p na ADC de pulmão na fase I. Estes tumores foram caracterizados com grau de diferenciação elevado [33]. Por outro lado, de acordo com a frequência de dados de RT-qPCR de expressão diminuída foi de 38% (5 de 14 casos) em ADC e 81% (13 de 16 casos, P 0,02) no CEC (ver Tabela 2). Um up-regulação foi detectada apenas em 7% (1 de 14 casos) ADC e nunca em SCC.
Discussão
CHL1
, localizado em 3p26.1, pertence para a família de moléculas de adesão celular (CAM) – proteínas de superfície celular que medeiam as interacções célula-célula e célula-matriz. As alterações na expressão de CAM (incluindo
CHL1
) e funções têm sido implicados no desenvolvimento de diferentes tipos de tumores, por exemplo, o melanoma [34], do ovário [9], [35], da próstata [11] e do cancro do cólon [36]. De acordo com [9], a avaliação de padrões LOH no cancro epitelial do ovário seroso (EOC) sugeriu que
CHL1
é um candidato supressor de tumor (TSG). Os estudos publicados por nós e outros autores (ver Introdução) sugeriu que o
CHL1
gene poderia ser um dos genes supressores de tumor putativos localizados no cromossoma humano 3 [12]. No entanto, observou superexpressão de
CHL1
em amostras EOC serosa [9]. Além disso, L1 superexpressão CAM no melanoma maligno foi mostrado para ser associado a metástases [34].
De acordo com dados preliminares Oncomine expressão microarray [17], juntamente com a prevalente
CHL1
sub-regulação vários tumores (RCC, pulmão SCC, cólon ADC), a sobre-expressão de CHL1 foi encontrado no melanoma. A expressão diferencial foi observado em ADC pulmão [26], cervical [22] e de mama [29], [30] o câncer.
Com base nestes dados, a hipótese de que CHL1 e outros receptores de reconhecimento deste tipo pode tem um papel duplo no câncer: no crescimento pré-invasiva precoce poderiam servir como TSG e são silenciadas; mais tarde na invasão e metástase fases destes genes pode ser re-expresso na borda do tumor para dirigir a invasão local e permitir a propagação metastática.
Esta hipótese foi analisado no estudo corrente, utilizando uma combinação de expressão preliminar de rastreio em 19 tipos diferentes de tumores epiteliais com microarrays comerciais (um total de 395 amostras informativos, Tabela 1) e avaliação do
CHL1
expressão de mRNA em tumores primários usando RT-qPCR. Este método é amplamente utilizado para corroborar assinaturas de expressão associado de doenças derivadas de microarrays. Além disso, esta tecnologia é bem adequado para traduzir os dados microarrays em ensaios precisos e quantitativos, clinicamente úteis [37].
Nós mostramos aqui que a expressão de
CHL1
foi desregulamentado nos principais doenças malignas epiteliais ( 76%,
P Art 0,01, incluindo 54% dos casos a infra-regulação de acordo com dados microarray). Estatisticamente significativa
valores FD
foram mostrados para a mama, cólon, recto, tiróide, rim e câncer do intestino delgado (Tabela 1). Durante três tipos /significativas sociais importantes de câncer – dados da mama, rim e pulmão microarray foram validados por RT-qPCR. Houve uma boa concordância entre os dados de dois métodos de rim e câncer de mama. De acordo com dados de microarranjos Oncomine a diminuição significativa da
CHL1
nível de expressão em amostras CC-RCC foi mostrado também.
Clontech Microarray (superexpressão em amostras de câncer de pulmão 64%) e RT-qPCR ( a regulação negativa em 38% dos ADC e em 81% das amostras de CEC) não estavam em concordância porque diferentes subtipos de câncer estavam presentes em amostras de microarray estudados. A divergência entre as matrizes e os dados de RT-qPCR para NSCLC também pode resultar a partir de amostras que não são homogéneos com diferente conteúdo de células normais, bem como o número limitado de amostras e pode ser estatisticamente não significativa. . Embora estes dados não são estatisticamente válidos que poderia refletir as tendências e associações importantes
No entanto, houve uma vez uma boa concordância entre os resultados quantitativos para o câncer de pulmão e de dados Oncomine [17] por duas grandes histotipos câncer de pulmão – ADC e SCC.
é importante notar que explora Oncomine microarrays baseados na plataforma completamente diferente do que Clontech Cancer Profiling Arrays. microarrays tradicionais (Affymetrix, Agilent) contêm um número de diferentes sondas de genes imobilizadas em lâminas de vidro. Apenas uma amostra de ADNc pode ser hibridada com a corrediça. Pelo contrário, Clontech cancro Profiling matrizes contêm um número de amostras de cDNA imobilizadas a partir de vários tecidos tumorais e normais. Oncomine inclui microarrays tradicionais dados possibilitando a análise de todo o genoma de um número limitado de amostras e matrizes Cancer Profiling permitir a análise de um gene em muitos tumores em um experimento.
De acordo com os dados Clontech Microarray, o aumento do nível de mRNA foi observado para vários tipos de tumores – útero, ovário, cólon, estômago, tiróide, pulmão, rim, e traqueia – principalmente para tumores não-metastáticas. No entanto, também houve casos frequentes do
CHL1
aumento do nível de mRNA em tumores metastáticos, por exemplo, no estômago e câncer de pulmão.
Além disso, em quatro metástases (4a, 14o, 14V, 24K ), de 12 disponível para casos de análise (ou seja, quando um tumor primário e metástases para o mesmo paciente eram acessíveis) que detectou um aumento da
CHL1
expressão em metástases em relação ao tumor primário (ovário, cólon e mama). Resultados semelhantes foram recentemente relatados para a oxidase associada a metástases lisil gene (
LOX
), cuja expressão foi associada tanto com a supressão do tumor e a progressão do tumor em função do estado de transformação [32]. A sobre-expressão de um outro gene de L1 a molécula de adesão celular foi associada com metástases no melanoma maligno [34].
O cancro é uma doença fatal, em que o crescimento local invasivo do tumor e espalhamento metastático para os órgãos vitais distantes resultando em dormentes e /ou activa crescimento e morte de pacientes inevitável. Ao contrário do que os modelos anteriores novas evidências sugerem que as células metastáticas pode ser já criado durante o crescimento inicial de um tumor local primário. Essas células, em seguida, ter sucesso na migração de células /invasão, a embolização, a sobrevivência na circulação, parada num leito capilar distantes, e extravasamento para dentro e multiplicação dentro do parênquima órgão distante. A falha em qualquer um destes passos pode bloquear todo o processo metastático e pode conduzir a “células cancerígenas latentes e micrometástases latentes”. A remoção cirúrgica do tumor primário pode, em seguida, conduzir a um crescimento activo [38]. Porque disseminação do tumor é responsável pela maioria das mortes de doentes com cancro, o desenvolvimento de agentes terapêuticos que inibem a metástase tumoral é de primordial importância [39], [40], [41], [42], [43], [44] , [45], [46], [47].
Um de nós previu anteriormente [5] que o fim citoplasmática de proteína CHL1 pode interagir com o citoesqueleto e pode induzir /regular a formação de filopódios condução migração de células tumorais e invasão [41], [45], [46].
CHL1
comportamento no cancro é, portanto, muito semelhante ao
L1
[10], [40] e
LOX
que tanto o trabalho através da rede de actina.
Este estudo sugere que
CHL1
pode contribuir para o crescimento invasivo do câncer e metástase. Ele pode actuar quer como um supressor de tumores (crescimento precoce) ou oncogene (crescimento invasivo e metastático, a Fig. 1, Tabela 1).
CHL1
, portanto, poderia pertencer à nova categoria de rápido crescimento de genes de câncer que pode funcionar tanto como ETG ou oncogenes [32], [41], [43], [46], [47], [48] . Durante o crescimento inicial
CHL1
não é expresso (silenciado) nas células tumorais para facilitar a
in situ
crescimento do tumor. Re-expressão de
CHL1
na borda da massa do tumor e ao redor de vasos tumorais poderia promover a migração e crescimento invasivo local e, além disso, permite iniciar o processo metastático. Assim, nossos resultados, juntamente com as conclusões de que
CHL1
era um gene candidato câncer associado mutado no cancro do cólon [1] sugeriu que este tipo de receptores de reconhecimento pode de fato ter um papel duplo na carcinogénese. As mutações descobertas na parte extra-celular de
CHL1
podia pagar um anticorpo terapêutico para tratar seletivamente pacientes [1]. Isso valida
CHL1
como um novo alvo para a intervenção imunológico personalizado em cancros que expressam mutante
CHL1
. Novos pequenos inibidores terapêuticas dirigidas a
CHL1
poderia ser eficaz na contenção nova formação do tumor de micrometástases dormentes.
Os nossos resultados indicam que o
CHL1
gene pode ser importante para o desenvolvimento dos principais cancros humanos, e também permitiu sugerir uma hipótese sobre um provável papel duplo de
CHL1
, embora apenas por três tipos de câncer (de ovário, cólon e da mama) foram até agora obtidos dados de suporte. Uma diminuição frequente de um nível de expressão foi prevalente em 11 de 19 tipos de tumores e estatisticamente significativo para a mama, cólon, recto, tiróide, rim e câncer do intestino delgado.
Nossos dados também apoiou o papel da
CHL1
como um biomarcador potencialmente romance na patogênese precoce de dois grandes tipos histológicos de câncer renal tanto CC-RCC e PRCC. Os resultados obtidos com 7 linhas de células RCC sugeriu-los como um potencial sistema modelo para o estudo do papel da metilação em
CHL1
silenciamento.
profiling Materiais e Métodos
Cancro análise de matrizes
Cancer Profiling Arrays I e II (154 e 241 amostras respectivamente, em geral 19 tipos diferentes de câncer, ou seja, mama, rim, recto, cólon, estômago, pele, tireóide, intestino delgado, bexiga, vulva, pâncreas, próstata, colo do útero, testículo, pulmão, ovário, útero, fígado, traqueia) adquirido a partir de BD Biosciences Clontech (Palo Alto, CA), foram utilizados para analisar a expressão do
CHL1
gene em tecidos normais e tumorais. informações de amostra completa para matriz I e II é apresentada em Clontech Catálogo: No. 7841-1 e No. 631.777, respectivamente (ver “Arrays Informação S1”)
Foram analisados apenas amostras informativas com relação clara de normalidade. tumor acaba intensidade. A informação para as amostras da matriz do cancro Profiling I é apresentada a seguir.
1. Mama. A maioria dos tumores são ductal infiltrante (DC), intraductal (IC) e carcinomas lobulares (LC). Estágio I: 2T, 2R, 2S, 2T, 2U, 4S, 4D, 4F. Fase II: 2W, 4E, 4L, 4N. Fase III: 4A, 4B, 4H, 4J, 4M. Coordenadas de 18 metastático (M) são tumores 2B, 2C, 2D, 2E, 2H, 2I, 2J, 2M, 2N, 2P, 4H, 4J, 4L, 4O, 4P, 4R, 4S, 4U. Coordenadas de metástases são 4G, 4E, 4K.
2. Útero. A maioria dos tumores são adenocarcinomas (ADC). Estágio I: 8C, 8F, 8H, 8I, 8J, 8K, 8L, 8M, 8N, 8O, 8P, 8Q, 8R, 8S, 8U, 8X, 8Y, 8BB, 8cc, 8DD, 8EE, 8FF, 10A, 10B , 10C. Fase II: T8. Coordenadas de tumores metastáticos 8W e 8AA, Fase III. Coordenadas de metástases são 8V, 8Z.
3. Cólon. Todos os tumores são ADC. Estágio I: 14L. Fase II: 14M, 14P, 14q, 14AA. Fase III: 14S, 14U, 14V, 14Y, 14BB. Outras amostras não temos informação sobre o Palco. Coordenadas de 9 tumores metastáticos são 14E, 14N, 14P, 14U, 14W, 14Y, 14CC, 16A, 16C. Coordenadas de metástases são 14o, 14T, 14V, 14X.
4. Estômago. A maioria dos tumores são ADC. Não há informações sobre a Stage. Coordenadas de 11 tumores metastáticos são 20A, 20B, 20E, 20F, 20H, 20I, 20K, 20, 20T, 20V, 20X.
5. Ovário. Estágio I: 24B, 24D, 24E. Fase II: 24F. Fase III: 24A, 24G, 24H, 24J, 24L. A maioria dos tumores são ADC. Coordenadas de tumores metastáticos são 24J, 24L, 24M, 24N. Coordenadas de metástases são 24I, 24K.
6. Colo do útero. 24X (carcinoma adeno).
7. Pulmão. Estágio I: 28E (carcinoma de células escamosas, SCC), 28F (carcinóide), 28H (SCC), 28I (ADC), 28J (ADC), 28K (SCC), 28L (adenocarcinoma bronquíolo-alveolar, BAC), 28M (SCC ), 28N (ADC). Stage desconhecido: 28A (SCC), 28B (BAC), 28C (SCC), 28D (SCC), 28G (SCC), 28º (m, ADC), 28P (m, BAC), 28Q (SCC), 28R (carcinóide ), 28S (ASC), 28T (SCC), 28U (SCC).
8. Rim. Fase III: 32D (carcinóide). Stage desconhecido: 32A (carcinoma de células renais de células claras, CC-RCC), 32B (RCC), 32C (RCC), 32E (RCC), 32F (carcinoma de células transicionais), 32G (RCC), 32H (m, RCC), 32I (oncocitoma), 32J (RCC), 32K (RCC), 32L (m, RCC), 32M (RCC), 32N (m, RCC), 32O (RCC), 32P (RCC), 32Q (RCC), 32R (RCC), 32S (RCC), 32T (RCC).
9. Reto. Todos os tumores são ADC. Estágio I: 36G. Fase II: 36J, 36F. Fase III: 36C, 36H, 36I, 36L. Coordenadas de 6 tumores metastáticos são 36B, 36E, 36L, 36M, 36q, 36R. Coordenar de metástase é 36K.
10. Intestino delgado. 36Y (m, ADC), 36Z (ADC).
11. glândula tireóide. Todos os tumores são papilar ADC, Estágio II: 40D. Fase III:. 40C, 40E
12. Próstata. Todos os tumores são ADC. Estágio I:. 40M
13. Pâncreas. Stage desconhecido:. 40U (ADC)
As informações de amostras da matriz Cancer Profiling II é mostrado abaixo
1.. Mama. Fase I: 6E (DC), 6G (ADC mucinoso), 6M (DC). Fase II: 6I (DC), 6K (m, DC), 6L (DC), 6N (DC). Fase III:. 6F (m, DC), 6H (m, DC), 6J (m, LC)
2. Útero. Estágio I: T6 (ADC), 6Z (SCC), 6BB (ADC). Fase II: 6X (SCC), 6AA (ADC). Stage desconhecido:. 6V (SCC)
3. Ovário. Estágio I: 10E (papilar cystadenoma serosa), 10K (cistoadenocarcinomas). Fase II: 10I (ADC), 10J (leiomioma). Fase III: 10G (ADC), 10H (CC-ADC), 10M (carcinoma papilar superfície serosa), 10N (papilar cystadenoma serosa). Estágio IV: 10L (ADC). Stage desconhecido:. 10F (leiomioma)
4. Colo do útero. Estágio I: 10Z (ADC), 10AA (SCC), 10BB (SCC). Fase II: 10V (SCC). Fase III:. 10S (m, SCC)
5. Cólon. Estágio I: 14E (adenoma tubuloviloso, outros tumores são ADC), 14F. Fase II: 14L. .