Abstract

Introdução

Vários agentes anti-angiogénicos são actualmente desenvolvida para limitar o crescimento de tumores e metástases. Embora estas drogas oferecem esperança para pacientes com câncer, o seu efeito transitório na vasculatura do tumor é difícil avaliar em ambientes clínicos. endomicroscopy confocal a laser (LEC) é uma nova tecnologia de imagem endoscópica que permite o exame histológico da mucosa gastrointestinal. O objetivo do presente estudo foi avaliar a viabilidade do uso de CLE para a imagem da rede vascular em biópsias frescas de tecido colorectal humano. Para este efeito, temos fotografada amostras de tecido biópsia normais e malignas e comparou os parâmetros de rede vasculares obtidos com CLE com técnicas de histopatologia estabelecidos.

Materiais e Métodos

amostras de biópsia não-fixos frescas de ambos os normais e mucosa colorrectal maligno foram coradas com anticorpos anti-CD31 marcados com fluorescência e fotografada por CLE usando um sistema endomicroscopy dedicado. Correspondentes amostras de biópsia foram submetidos a coloração imuno-histoquímica para CD31, avaliar a densidade microvascular (MVD) e áreas vasculares para comparação com os dados de CLE, que foram medidos off-line utilizando software específico.

Resultados

Os vasos foram fotografadas por CLE em ambas as amostras normais e tumorais. O diâmetro médio de vasos normais foi de 8,5 ± 0,9 uM enquanto que em amostras de tumores foi de 13,5 ± 0,7 uM (p = 0,0049). densidade vascular foi 188,7 ± 24,9 vasos /mm

2 no tecido normal vs. 242,4 ± 16,1 vasos /mm

2 nas amostras de câncer colorretal (p = 0,1201). Nas amostras de imunohistoquímica, o MVD foi 211,2 ± 42,9 /mm

2 e 351,3 ± 39,6 /mm

2 para mucosa normal e maligno, respectivamente. A área vascular foi de 2,9 ± 0,5% da área de tecido total para a mucosa normal e 8,5 ± 2,1% para o tecido de câncer colorretal primário.

Conclusão

imagem seletiva dos vasos sanguíneos com CLE é viável em tecido normal e de tumor colo-rectal, utilizando anticorpos marcados com fluorescência dirigidas contra um marcador endotelial. O método poderia ser traduzida para a definição clínica para monitorização da terapêutica anti-angiogênico

Citation:. Cartañá T, Săftoiu A, Gruionu LG, Gheonea DI, Pirici D, Georgescu CV, et al. (2012) Confocal Laser Endomicroscopy de Avaliação morfométrica de microvasos no câncer colorretal humano utilizando Targeted Anti-CD31 Os anticorpos. PLoS ONE 7 (12): e52815. doi: 10.1371 /journal.pone.0052815

editor: Anthony Federação das Índias Ocidentais Lo, da Universidade Chinesa de Hong Kong, Hong Kong

Recebido: 10 Setembro, 2012; Aceito: 21 de novembro de 2012; Publicação: 28 de dezembro de 2012

Direitos de autor: © 2012 Cartañá et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este trabalho foi apoiada a partir da concessão de pesquisa intitulado “Clinical and biomatemático Modeling of Vascular mudanças após Anti-angiogénicos terapia avançada de carcinoma colorectal”, financiado pelo Conselho Nacional de pesquisa (CNCS), Roménia, número do contrato PN-II-ID-PCE-2011- 3-0664. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

terapia

Anti-angiogênico aumentou recentemente um interesse crescente devido às possíveis implicações relacionadas com o tratamento direcionado e estratificação de prognóstico para uma variedade de tumores sólidos [1]. Contudo, o advento de novos agentes anti-angiogénicos para a prática clínica oncológica tem gerado a necessidade de métodos melhorados para imagiologia de avaliação da rede microvascular durante o tratamento.

A angiogénese tem sido tradicionalmente avaliada através da medição da densidade de microvasos (MVD ) em tecido fixado imunocoradas para uma variedade de marcadores de células endoteliais, incluindo o factor VIII, CD31, CD34 [2] e estudos anteriores identificaram a densidade microvascular (MVD) como um potencial factor de prognóstico para um número de tumores sólidos. CD31, também conhecido como plaquetas de adesão celular endotelial molécula-1 (PECAM-1) é um marcador pan-endotelial em ambas as pequenas e grandes vasos [2]. Entre as suas muitas funções CD31 também tem sido relacionada com o crescimento ea propagação metastática de tumores, estar envolvido nos processos de angiogênese e permeabilidade vascular [3].

Ainda assim, usando imunohistoquímica e MVD para estimar a angiogênese no contexto de ensaios clínicos tem criado algumas preocupações éticas e práticas relacionados com a colheita repetida de biópsias de pacientes [4]. imagiologia funcional da vascularização do tumor é uma alternativa promissora, mas a maioria das técnicas de imagem clinicamente disponíveis não têm a resolução microscópica necessária para aplicações clínicas [5]. Recentemente, endomicroscopy confocal a laser (CLE) foi desenvolvido para o tempo real

in vivo

análise histológica da mucosa do intestino. secções ópticas de alta resolução no plano horizontal da tela tecido alvo detalhes celulares e subcelulares durante a endoscopia em curso [6]. Uma variedade de aplicações clínicas da técnica já foram descritos em lesões tanto do tracto superior e inferior gastrointestinal, com particular interesse em neoplasia, onde CLE gera em tempo real diagnóstico histológico e orientadas biópsias das áreas relevantes para um rendimento mais elevado de diagnóstico do que aleatório biópsias [7], [8], [9], [10], [11], [12]. Em lesões colorretais, CLE apresentou alta precisão na detecção de neoplasia intra-epitelial com base no padrão da rede e cripta arquitetura vascular [7].

agentes de contraste atualmente aprovado para exames endomicroscopy clínicos incluem corantes com propriedades de coloração inespecíficos como fluoresceína, acriflavina ou violeta de cresilo [13]. No entanto, estudos recentes têm sido realizados em modelos animais e amostras de tecidos humanos, utilizando anticorpos marcados com fluorescência que permitiu imagiologia endomicroscopic específico de receptor do factor de crescimento epidérmico (EGFR) e o factor de crescimento endotelial vascular (VEGF) [14], [15], [16] . Ao utilizar anticorpos marcados com isotiocianato de fluoresceína, CLE foi capaz de diferenciar os níveis de expressão de EGFR em tumores de xenoenxerto de murinos e permitiu distinção de neoplásica humana e tecido colorectal não-neoplásicas com base nos seus padrões de expressão de EGFR [14]. O mesmo grupo mostrou que imagiologia molecular do VEGF é viável em diferentes modelos de roedores de cânceres gastrointestinais. As diferenças entre a força de fluorescência do sinal VEGF de amostras de tecidos humanos normais e malignas foram também demonstradas [15]. A imagem molecular de EGFR e survivina, uma proteína inibidora da apoptose, também foi conseguida com o sistema LEC à base de sonda esofágica e em mucosa gástrica de modelos de suíno [16].

O objectivo do presente estudo foi avaliar a viabilidade do sistema LEC para imagiologia da rede vascular das amostras de tecidos colo-rectais humanos tanto de mucosa normal e maligno utilizando anticorpos anti-CD31 marcados com fluorescência. Desde Actualmente não há CD-31 marcadores aprovados para uso humano, temos utilizado a técnica de imagem CLE em amostras de biópsia frescos não-fixos humanos coradas com anticorpos anti-CD31 para testar a hipótese de que o sistema CLE oferece resolução adequada para a imagiologia do tumor vasculatura e coleta parâmetros vasculares semelhantes às técnicas de histopatologia atualmente aceitos.

Materiais e Métodos

os pacientes

O estudo de viabilidade presente foi realizada em biópsias endoscópicas obtidos a partir de quatro doentes com doença avançada adenocarcinomas colorretais, que foram diagnosticados durante os procedimentos de colonoscopia de rotina. Os pacientes foram sujeitos a amostragem convencional pinça de biópsia de áreas emparelhadas de mucosa de cólon normal (tomadas, pelo menos, 10 cm a partir do tumor) e da massa colorrectal. O estudo foi aprovado pelo Comitê da Universidade de Medicina e Farmácia de Craiova de Ética. Todos os pacientes desde que o seu consentimento informado por escrito depois de receber um formulário padrão para a coleta de biópsia através de colonoscopia, que afirmou que as amostras de biópsia foram ainda analisados ​​por técnicas de imuno-histoquímica e utilizados para fins de investigação. As biópsias foram analisados ​​de acordo com um protocolo de coloração comum (abaixo) para exame histopatológico convencional e por exames CLE após coloração com anticorpos específicos.

Imunomarcação Protocolo CLE

Uma amostra pareada de biópsias humanas frescas de cerca de 2-3 mm de diâmetro foi colhida durante procedimentos endoscópicos mais baixos a partir de mucosa colorrectal normal e neoplásico de cada paciente e imersos em solução salina fisiológica. As biópsias frescas foram incubadas no escuro com um anticorpo monoclonal de murganho (IgG1, clone MEM-05, diluição 1:10) dirigido contra CD31 humano /PECAM-1 (Exbio, Praga, República Checa) e marcadas com Alexa-Fluor 488 durante 1 hora a 37 ° C, e enxaguou-se com solução salina fisiológica para remover qualquer reagente não ligado. As amostras foram colocadas em lâminas de vidro e imediatamente fotografadas por CLE para estruturas vasculares. Para optimizar a técnica, diferentes diluições de anticorpos em 1% de albumina de soro bovino em PBS (BSA, Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, EUA), variando 1:05 – 1:30, foram previamente testado em fresco, não- amostras de tecido fixo e fotografada com um microscópio de fluorescência automatizada (90i Nikon, Tokyo, Japão). Um período de tempo de aproximadamente 60 minutos, que permite a ligação dos anticorpos para o seu alvo e imagem da amostra sem degradação do tecido também foi estabelecida.

CLE imagem

Neste estudo, foi utilizado o sistema CLE, que integra um microscópio confocal em miniatura na extremidade distal de um endoscópio flexível convencional (CE-3870 CIFK, Pentax, Tóquio, Japão). A lente confocal na ponta distal é ligeiramente avançada no exterior do endoscópio, permitindo a digitalização das estruturas alvo. Durante o varrimento, o laser emite um comprimento de onda de excitação de 488 nm com uma potência máxima de saída do laser de ≤1 mW na superfície do tecido, que é controlada pelo utilizador durante o exame de contraste para imagiologia óptima. A profundidade máxima de imagem é de 250 um a partir da superfície da mucosa. As secções ópticas resultantes têm uma resolução lateral de 0,7 um para um (eixo z) de 7 um de espessura da fatia e um campo de vista de 475 × 475 uM.

O endomicroscope foi montada numa armação fixa e as biópsias foram colocadas em lâminas de histologia de vidro, em contacto directo e suave com a ponta distal do endomicroscope confocal a laser. As imagens foram capturadas pressionando um pedal de chave de pé e foram digitalmente armazenados no disco rígido do sistema como imagens em escala de cinza (150-250 para cada amostra de biópsia) para download e processamento posterior.

Medidas Vascular Rede

Foram analisadas as imagens CLE usando uma imagem J (National Institutes of Health, Bethesda, Maryland, EUA). Cinco imagens com a maior intensidade de sinal fluorescente e uma boa visualização da rede vascular foram escolhidos a partir de cada amostra de tecido para análise das estruturas vasculares. Para uma distinção mais clara dos vasos, uma sobreposição de cores foi adicionada para combinar com o agente de contraste fluorescente (Figura 1). A ferramenta de linha reta foi utilizado para medir manualmente o diâmetro de cada segmento vascular entre qualquer dois pontos de ramificação ou um ponto de ramificação e uma ponta solta. Cada segmento vascular foi rotulado e contou para a densidade vascular. Os resultados foram exportados em um arquivo do Excel e relatadas como as ± erro padrão da média (SE) para cada imagem escolhida e caso individual. As medições do diâmetro e densidade vascular foram realizadas independentemente por dois operadores diferentes que foram cegados aos resultados de cada um e com o relatório da patologia. Os resultados foram relatados como a média das duas medições

Na mucosa normal, os vasos são organizados numa rede hexagonal (A).; a área correspondente no tumor mostra, de forma irregular navios mais dilatadas, com diferentes diâmetros ao longo do seu comprimento (B); as mesmas secções ópticas são mostrados com Adicionado sobreposição de cores (C, D). * Barra de escala é de 50 mm.

Convencional imuno coloração

amostras Correspondente da biópsia de tumores colorretais foram colocados em formalina a 4% tamponada neutra para fixação e inclusão em parafina. diagnóstico de patologia convencional foi baseado em H E de coloração, enquanto que a coloração imuno-histoquímica de secções para CD31 foi feita de acordo com as indicações do fabricante (Dako, Glostrup, Dinamarca). Resumidamente, após a recuperação de antigénio mediada por tampão citrato, as secções foram arrefecidos até à temperatura ambiente e incubadas durante 30 minutos em peróxido de hidrogénio a 1%. As secções foram depois lavadas em PBS, seguido por um passo de bloqueio de 30 minutos em leite desnatado a 1%. O anticorpo primário anti-CD31 (IgG1, clone JC70A, de ratinho anti-humano, Dako, Glostrup, Dinamarca) diluído foi adicionado como 1:100, e as lâminas foram incubadas durante a noite a 4 ° C. No dia seguinte, as lâminas foram lavadas, o sinal foi amplificado utilizando um sistema de detecção secundária peroxidase EnVision à base de polímeros específicas de espécies, (Dako, Glostrup, Dinamarca), e, em seguida, detectados com 3,3′-diaminobenzidina (DAB, Dako, Glostrup , Dinamarca). Todos os passos de lavagem foram realizadas em PBS a 0,1 M, pH 7,2, e o anticorpo primário foi diluído em PBS com 1% de BSA. Todos os tempos de incubação foram mantidas constantes para todas as lâminas incluídas no presente estudo. Finalmente, as lâminas foram coversliped após a coloração com hematoxilina.

Densidade de microvasos (MVD) Medição

Todos análise de imagem microscópica foi realizada com um microscópio Nikon Eclipse 55i acoplado a uma câmara 5 Pf CCD a cores ( Nikon, Tokyo, Japão) e uma estação de análise de imagens com base na imagem software ProPlus AMS7 (Media Cybernetics, Bethesda, Maryland, EUA). A fim de avaliar as MVDs no CD-31 manchado tumor e secções de tecidos não tumorais correspondentes, o método de ponto de acesso foi utilizada como anteriormente descrito [17]. No tecido tumoral, o operador utilizados os objectivos 10x e 20x para identificar os “pontos quentes”, isto é, as áreas com a mais alta densidade vascular. Nessas áreas, três a quatro imagens aleatórias foram capturados sob a objetiva de 40x. No tecido normal de três a quatro imagens aleatórias foram capturados sob a objetiva de 40x, excluindo áreas abundante em células não-mucosas /inflamatórias.

As áreas de coloração CD31 relacionados com vasculares (região de interesse, ROI) foram marcados diretamente para as imagens por dois operadores independentes e os navios incluídos com um lúmen identificáveis, bem como única ou aglomerados de células endoteliais não-luminais. Foram excluídos células inflamatórias, tendo-se a mancha (ou seja plasmócitos) e células vermelhas do sangue sem coloração em torno deles. Um comando de macro em Image ProPlus foi desenvolvido para contar o número e medir as áreas de ROI em cada imagem e os dados foi relatada em um arquivo do Excel como MVD e área vascular, respectivamente. Para efeito de comparação com outros dados publicados, tanto a densidade de vasos CLE eo MVD determinada a partir de imuno-histoquímica foram normalizados para um mm

2 área.

Análise Estatística

A análise estatística foi realizada no Microsoft Office Excel® (Microsoft, Redmond, Washington, EUA). Os resultados foram expressos como médias ± EP da média. Para a avaliação morfométrica, foi feita a comparação entre a vascularização normal e tumoral. Para determinar a significância das diferenças entre as medidas vasculares, um teste t de duas caudas foi realizada com significância estatística alcançado ao valor de p . 0,05

Resultados

Patterns microvascular CLE

Um sinal fluorescente específico foi identificado com o âmbito CLE em todas as biópsias em amostras de tecidos normais e neoplásicos. Os vasos em biópsias normais formado um padrão hexagonal com distribuição homogénea de diâmetros característicos de uma mucosa normal, conforme descrito pela coloração CD31 seletiva (Figura 1A e 1C). Em amostras de tumor dos vasos dilatados e apareceu de forma irregular em comparação com a mucosa normal, com diâmetros variáveis ​​ao longo do seu comprimento (Figura 1B e 1D).

Morphometric Análise de microvasos

Os vasos foram contados e os seus diâmetros medidos entre dois cruzamentos vasculares, para todo o campo de visão (figura 2). O diâmetro médio navio em amostras de tumores foi de 13,5 ± 0,7 uM, significativamente maior do que o diâmetro do vaso em mucosa colorrectal normal (8,5 ± 0,9 um, p = 0,0049). A densidade vascular foi 242,4 ± 16,1 vasos /mm

2 em amostras de tecidos tumorais e 188,7 ± 24,9 vasos /mm

2 no tecido normal (p = 0,1201).

A embarcação foi contado e seu diâmetro foi medido para cada segmento vascular entre dois pontos de ramificação ou um ponto de ramificação e uma ponta solta. densidade vascular foi relatado por mm

2. Tanto o diâmetro do vaso e densidade vascular foram aumentados no tecido tumoral (B) em comparação com a mucosa normal (A). * Barra de escala é de 50 mm.

Imunohistoquímica

correspondentes biópsias de tecido adjacente ao biópsias CLE foram preparadas para o estudo imuno-histoquímica com um anticorpo anti-CD31 em ambas as amostras normais e de cancro colorectal . Na mucosa normal, a MVD era 211,2 ± 42,9, enquanto no tecido maligno foi 351,3 ± 39,6 /mm

2 (p = 0,0637). A área vascular, calculado como a percentagem da ROI ao longo de toda a área da imagem, foi mais elevada nas amostras de tumor (8,5 ± 2,1%) em comparação com o tecido normal colorretal (2,9 ± 0,5%), p = 0,0735 (Figura 3). O resumo dos parâmetros vasculares medidos no câncer colorretal primário e da mucosa normal correspondente, a partir de amostras de imunohistoquímica e CLE, é apresentada na Tabela 1.

imagens de campo claro da fixados em formalina e embebidos em parafina biópsias de normal e câncer de cólon primário coradas para exibição CD31: vasos sanguíneos distribuídos regularmente entre as glândulas intestinais na mucosa do cólon normal (a); múltiplos vasos irregulares no estroma intratumoral, em amostras de carcinoma (B); as mesmas imagens com áreas vasculares marcado para contagem automatizada (C, D). * Barra de escala é de 50 mm.

Discussão

Uma vez que a hipótese inicial do papel da angiogénese na progressão do tumor formulado por Judah Folkman quatro décadas atrás [18], a nossa compreensão fundamental deste processo tem avançado e várias drogas anti-angiogénicos ou são actualmente em uso clínico ou sob investigação clínica [4]. No entanto, ainda há muitas preocupações relacionadas com a selecção da dosagem ideal e calendário, previsão e monitoramento da resposta dos pacientes que limitam o uso da terapia anti-angiogênico para pacientes oncológicos. No presente estudo, nós usamos uma CLE endoscópio para a imagem do padrão vascular de biópsias frescas de tecido colorectal normal e maligno e comparou os resultados com técnicas histopatológicas tradicionais.

Para o nosso conhecimento, este é o primeiro relatório sobre imagiologia histológico dos vasos obtidos com LEC através da aplicação de anticorpos marcados com fluorescência dirigido contra um marcador endotelial (CD31). Este método dá origem a resultados semelhantes, como a imuno-histoquímica tradicional, mas sobre o tecido não fixa fresco. Assim, qualquer artefacto processamento das biópsias é evitada e imagiologia do tecido é realizada na sua forma natural dentro de um curto espaço de tempo após a recolha da biópsia, que acelera consideravelmente o processo de diagnóstico. Nós escolhemos como um alvo molecular um marcador pan-endotelial para rotulagem de ambos os vasos sanguíneos normais e tumorais, a fim de se obter uma avaliação morfométrica diferencial. Por exame visual, as secções ópticas confocal mostrou diferenças entre os padrões vasculares de tecido normal e tumoral. Os vasos sanguíneos malignas parecia mais dilatado e tortuoso em comparação com a aparência regular dos vasos normais. É um fato conhecido que os vasos sanguíneos do tumor são anormais na sua estrutura e função. Isto foi também demonstrado por CLE classificações anteriores de neoplasia após a administração intravenosa de fluoresceína [7], [19]. No entanto, este agente de contraste não específico tende a difundir excessivamente para o espaço intersticial devido ao aumento da permeabilidade dos vasos patológicos. Como resultado fronteiras vasculares são escondidos e suas avaliações quantitativas torna-se um desafio. Na presente abordagem, coloração seletiva dos vasos com um marcador endotelial tem superado este inconveniente.

Com coloração imuno-histoquímica tradicional protocolos que o tecido é normalmente dividido em 4 mm fatias grossas que captam apenas crossections de vasos sanguíneos em diferentes ângulos. O método de imagiologia CLE proposto permite a exibição de segmentos vasculares inteiras na mesma imagem. Estávamos, portanto, capaz de realizar uma análise morfométrica nos troços confocal ópticos que vieram para validar as diferenças qualitativas já observado entre os dois leitos vasculares. Descobrimos que os vasos sanguíneos do tumor têm um diâmetro médio significativamente maior do que vasos normais (13,5 mm

vs.

8,5 mm, p = 0,0049). Em amostras de tecido das regiões de câncer colorretal, houve um aumento de 28,5% na densidade vascular em comparação com a mucosa normal (242,4

vs

. 188,7 vasos /mm

2). Apenas um parâmetro (diâmetro do vaso) alcançou significância estatística em nosso estudo. Isto poderia ser explicado pelo pequeno número de amostras incluídos na nossa análise. São necessários estudos futuros sobre uma amostra maior de pacientes para confirmar as descobertas para além do presente estudo de prova de conceito.

Os parâmetros vasculares obtidos com CLE são comparáveis ​​com os métodos tradicionais e da literatura publicada [20], [21] , [22]. Os resultados CLE foram validados por uma técnica de imuno-histoquímica clássica que revelou um sinal positivo para CD31 em ambas as amostras malignas controle e. Houve uma tendência semelhante de aumento MVD e área vascular nas amostras do câncer colorretal primário em comparação com a mucosa normal. Anteriormente relatados resultados na morfometria vascular colorectal humano variam entre os diferentes estudos, devido a diferenças de metodologia e técnicas de processamento [20], [21] mas no geral concordam com os nossos resultados. Num estudo da microcirculação no cólon normal corrosão moldando um diâmetro de 10 um foi relatado para arteríolas pré-capilares do plexo mucosa [22]. Por coloração imuno-histoquímica para CD34, também um marcador pan-endotelial, o diâmetro vascular média para a mucosa do cólon normal foi de 7,6 ± 1,5 mm [21].

A nossa prova de conceito resultados demonstram a viabilidade da técnica e poderia preparar o terreno para futuras pesquisas. Embora este estudo utilizou um marcador pan-endotelial, futuros estudos semelhantes poderiam ter como alvo outros marcadores para o endotélio proliferante, como VEGFR2, que são relevantes para a angiogênese induzida por tumor. O curto espaço de tempo (uma hora entre a recolha da biópsia e imagiologia do CD31 marcado tecido com CLE) e o uso de um protocolo de coloração padrão para amostras frescas biópsias torna a técnica CLE alvo compatível com o ambiente clínico, desde que o equipamento está disponível.

Nossos resultados atuais e os relatórios anteriores sobre abordagens semelhantes sugerem que a CLE tem o potencial para a neovascularização de imagem

in situ

durante procedimentos ao vivo. Desde que as drogas anti-angiogénicos tendem a normalizar a vasculatura do tumor durante um curto período de tempo de vários dias a algumas semanas, é desejável encontrar uma maneira de controlar a remodelação rede vascular durante esta janela de oportunidade, quando o tumor ainda se torna mais sensível às quimioterapia e /ou radioterapia [23]. CLE, sozinho ou em combinação com outros biomarcadores moleculares e celulares, pode ser utilizado para este fim em particular, pendente na descoberta de novos agentes de contraste alvo. Como mencionado, os relatórios recentes mostram bons dados preliminares com anticorpos fluorescente etiquetado alvejando EGFR ou VEGF, o que sugere a viabilidade de tais abordagens immunoendoscopy. No entanto, o desenvolvimento de marcadores de uso humano alvo pan-endotelial tais anticorpos anti-CD31 marcados com fluorescência como pode representar uma alternativa válida em tempo real para a análise convencional MVD de amostras de biopsia fixos.

Em conclusão, mostrámos que selectivo imagiologia de vasos sanguíneos é possível com CLE, utilizando anticorpos marcados com fluorescência de segmentação um marcador endotelial específico em biópsias frescas. análises morfométricas off-line das imagens confocal com software de processamento adicional demonstrou padrões significativamente diferentes entre as redes vasculares normais e malignas. No futuro, esta abordagem poderia ser usada para uma melhor seleção de pacientes para ensaios clínicos e um acompanhamento mais sensível dos efeitos vasculares de agentes anti-angiogénicos em terapias adaptadas individualmente.