Para garantir a ZAK siRNA não se desenvolveu fora consequências alvo, utilizou-se ainda uma outra coleção de siRNA dirigido a partir do 5 percentagem de mRNA ZAK. SiRNAmediated knock-down de ZAK usando a corda 2 também suprimiu a fosforilação doxorrubicina induzida de p38 e JNK MAPK. Além disso, siRNA mediada knockdown de ZAK aplicação de sequência 2 suprimiu a doxorrubicina causou clivagem de PARP, embora não tão eficazmente quanto sequência 1. Por esta razão, nós empregue uma sequência em experiências subsequentes.
Uma característica invariável de causas ribotoxic é a sua capacidade para inibir a tradução da proteína. Para determinar se a doxorrubicina inibe a síntese proteica, foram expostas células HaCaT à doxorrubicina durante vários tempos, em que as células foram expostas ao vezes leucina durante 30 min. análise contínua de células por microscopia comprovada descolamento Mobile Minor, até 24 h após a adição de doxorrubicina. blocos Emetina mapa de activação E depois de ter uma alta dose de doxorrubicina. Transdução por estressores ribotoxic de sinais que levam à activação de SAPKs requer que os ribossomas estar envolvidos na síntese de proteínas no momento em que as células são submetidas ao stressor. Syk oral, inibidor
O bloqueio da síntese de proteínas por inibidores de acção rápida, tais como emetina, antes da exposição das células a ribotoxic gatilhos, pára de transdução do sinal que conduzem à activação de p38 MAPK e JNK. mostraram que a síntese de proteínas emetina bloqueada em menos de um minuto a seguir à adição às células. Para saber se o tratamento prévio de células HaCaT com emetina pode impedir a activação de p38 MAPK e JNK, as células foram expostas a emetina ou veículo antes da adição de doxorrubicina. Aplicou-se uma maior concentração de doxorrubicina para encorajar a rápida fosforilação de p38 MAPK e JNK. Suplemento de emetina antes da exposição à doxorrubicina totalmente bloqueada a fosforilação de JNK e p38 MAPK.
Doxorrubicina suprimiu a incorporação de leucina por 50% completa e a 1 h a 2 h. Foi realizado um teste semelhante usando CdCl, que não é realmente um ribotoxic resultados stressorand na ativação de p38 e JNK MAPK através de diferentes elementos. Em contraste com a doxorrubicina, a fosforilação da p38 e JNK MAPK não foi suprimida por emetina. Inibidores de ZAK bloco doxorrubicina apoptose induzida e inicial MAP K em células HaCaT. Uma meta importante na quimioterapia do cancro seria reduzir os danos colaterais em tecidos e órgãos normais. A administração de doses eficientes de doxorrubicina para pacientes com câncer é frequentemente ligada ao potencial de crescimento da cardiotoxicidade e outras respostas adversas.
ID de agentes que possam suprimir selectivamente a destruição de tecido normal por doxorubicina pode permitir a administração de maiores ou mais frequentes doses de doxorrubicina para pacientes com cancro. Estudos anteriores demonstraram que a inibição da ZAK por um inibidor de molécula pequena experimental reduz estressor ribotoxic morte celular induzida. No entanto, DHP 2 não é mais criado pela Eli Lilly e não está disponível.
Em um trabalho abrangente para reconhecer o alvo de 38 inibidores da quinase de moléculas pequenas, Karaman et al. determinadas as constantes de dissociação de uma célula de 287 proteínas quinases específicas, incluindo ZAK. Sorafenib, um inibidor da quinase variável que tem sido utilizada no tratamento de carcinoma de células renais e carcinoma hepatocelular, verificou-se possuir uma afinidade de ligação muito alta para ZAK.