Sumário

Africano americano pacientes com câncer colorretal mostram uma mortalidade mais elevada do que suas contrapartes caucasianos. Biologia pode desempenhar um papel parcial, e estudos anteriores sugerem uma maior prevalência de instabilidade de microssatélites (MSI) entre os cânceres de afro-americanos, embora doentes com cancros MSI ter melhorado a sobrevivência em relação a pacientes com câncer não-MSI, balcão para o resultado observado para Africano americano pacientes. CD8

+ infiltração de células T de cancro do cólon é postively correlacionada com tumores MSI, e também está relacionada à melhoria do resultado. Aqui, utilizamos a 503 pessoas, coorte cancro do cólon de base populacional compreendendo 45% afro-americanos para determinar, em condições cegos de todos os dados epidemiológicos, a prevalência da MSI e CD8 associado

+ infiltração de células T dentro dos cancros. Entre os cânceres caucasianos, 14% foram MSI, que os cancros afro-americanos demonstraram 7% MSI (

P

= 0,009). Clinicamente, os cancros MSI entre as raças foram semelhantes; entre os cânceres estáveis ​​microssatélites, os pacientes afro-americanos eram mais jovens, do sexo feminino, e com cancros proximais.

+ células T CD8 foram mais elevados em cancros MSI (88,0 vs 30,4 /HPF,

P Art 0,0001), mas não foi diferente entre as raças. Utilizando esta coorte de base populacional, cancros afro-americanos mostram metade da prevalência MSI dos caucasianos, sem mudança na CD8

infiltração de células T +, que podem contribuir para a sua maior mortalidade por câncer de cólon

Citation:. Carethers JM, Murali B, B Yang, Doctolero RT, Tajima A, Basa P, et ai. (2014) Influência da raça sobre a instabilidade de microssatélites e CD8

+ T infiltração de células no câncer de cólon. PLoS ONE 9 (6): e100461. doi: 10.1371 /journal.pone.0100461

editor: Hassan Brim, Howard University, Estados Unidos da América

Recebido: 20 de fevereiro de 2014; Aceito: 23 de maio de 2014; Publicação: 23 de junho de 2014

Direitos de autor: © 2014 Carethers et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este estudo foi financiado em parte pelas Parcerias Instituto Nacional do Câncer abrangente para reduzir o cancro da Saúde disparidades (CPRCHD) concede U54CA132384 e U54CA132379, e por doações R01 DK067287, U01 CA162147, e DK034987 P30. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

a mortalidade por câncer de cólon é maior em afro-americanos do que os brancos em todas as fases da doença [1], [2]. Embora a diferença de mortalidade poderia ser, em parte, relacionada com cuidados clínicos ou comorbidade, ele também poderia ter contribuições de diferenças de dentro do câncer [3]. Estudos anteriores tinham números insuficientes de afro-americanos para examinar adequadamente as diferenças raciais de características do tumor que poderiam influenciar a mortalidade [4], [5].

microssatélites instabilidade (MSI) é um biomarcador genético dos cancros do cólon hipermutável, impulsionado por inactivação do sistema de reparação de emparelhamentos incorrectos do ADN (MMR) [6], [7]. A sua presença representa um melhor resultado para os pacientes quando comparados aos pacientes mesmos-encenado cancro do cólon, sem MSI [3]. Isto pode ser devido, em parte, para neoantigénios gerados pelo quadro de leitura mutacionais dentro de regiões de codificação de genes específicos em consequência da inactivação de ADN MMR na célula epitelial do cancro do cólon, atrair células do sistema imunológico específicos que podem ajudar a conter o tumor e limitar a metástase [7], [8]. Em particular, cancros do cólon MSI são associados com aumento intraepitelial CD8

+ células T quando comparado a estabilidade de microssatélites (MSS) cânceres [8] – [10], e muitos cânceres MSI demonstrar uma “Crohn-like” “granuloma” linfóide histologicamente reacção dentro do componente epitelial do adenocarcinoma [7] – [9]. cancros MSI compreendem 15-20% de todos os cancros do cólon, têm células diplóides e estão inversamente relacionados com a alélicas perda. cancros MSI são mais propensos a ter características mucinoso e pobre diferenciação na histologia e ~ 70% estão localizados proximal à flexão do baço dentro do cólon. cancros MSI pode progredir mais rapidamente do que os cancros MSS [7], [11], e pode conduzir adenomas sessile serrilhadas em cânceres [12], [13]. Além disso, os pacientes com estágio II /III cancros MSI não melhoram a sua sobrevivência com quimioterapia baseada em 5-fluorouracil [14], [15].

cancros do cólon de afro-americanos compartilham algumas características clínicas e epidemiológicas com cancros MSI , mas não outros. Por exemplo, os afro-americanos têm mais propensão para o cancro do cólon proximal e pólipos e progressão tumoral pode ser mais rápido, baseado na idade mais jovem para o diagnóstico de câncer [1], [2], [16]. Alguns relatórios sugerem mais recursos mucinoso anectdotally em cancros do cólon afro-americanos [1]. Esses recursos sugeriria a prevalência da MSI seria relativamente maior em cancros do cólon afro-americanos. Por outro lado, os afro-americanos tendem a apresentar-se com estágio avançado da doença, e possuem baixa sobrevida em 5 anos, em contraste com a de pacientes com cancros MSI [1]. Esses recursos sugeriria MSI seria relativamente menor nos cancros do cólon afro-americanos. Avaliação dos cancros do cólon afro-americanos para MSI foi esparso com dados de apenas dois grupos tendo publicado, um mostrando uma freqüência de MSI de 23% (7 de 31 amostras) e outro com 48% (10 de 21 amostras) entre os cânceres afro-americanos [ ,,,0],4], [5], o que sugere uma maior frequência do que a média. Ambos os grupos utilizaram amostras armazenadas com dados racial ligados; nem os estudos de dentro de uma população. No presente estudo, utilizamos uma coorte cancro do cólon de base populacional para determinar com mais precisão a freqüência de MSI em cancros do cólon afro-americanos. Nossos dados indicam que lá é metade da frequência de MSI entre os cancros do cólon afro-americanos em comparação com cancros do cólon caucasianos, o que sugere que uma vez que um americano Africano é diagnosticado com cancro do cólon, o benefício da melhora da sobrevida associado com cancros MSI é mais limitado nesta população.

Materiais e Métodos

pacientes e espécimes

os dados foram coletados como parte da Carolina do Norte Colon Cancer Study (NCCCS), um estudo de caso-controle de base populacional realizado em 33 municípios contíguos do centro e leste da Carolina do Norte, incluindo as zonas rurais e urbanas [17]. Os municípios foram selecionados para fornecer uma representação adequada por residentes americanos e rurais africanas, e para evitar de referência ou de seleção de padrões que impedem o caso de apuração e /ou de conformidade. O Conselho de Revisão Institucional da Universidade de North Carolina School of Medicine aprovou o protocolo de estudo original.

Foram identificados casos entre 1 de Outubro de 1996 e 01 de setembro de 2000 usando um sistema de apuração rápida implementado em cooperação com a Carolina do Norte Registro de Câncer Central. casos elegíveis estavam entre as idades de 40 e 80 anos, tinha confirmado patologicamente adenocarcinoma invasivo do cólon, e residia na área de 33 condados. Todos os pacientes afro-americanos elegíveis foram convidados a participar. Uma amostra aleatória de pacientes caucasianos da mesma idade (± 5 anos) e sexo foi elaborado para fornecer um número igual de casos americanos e caucasianos africanas. Controles de idade inferior a 65 anos a partir da mesma área de 33 condados foram selecionados do Departamento de Veículos Motorizados de banco de dados do Registro, e controla 65 anos e mais velhos foram selecionados a partir do banco de dados Health Care Administration Financiamento.

De 935 potenciais casos de câncer de cólon identificado (464 Africano-americanos, 471 caucasiana), os médicos recusado o acesso por 31 afro-americanos e 35 Caucuasians, o contato não foi completo em 29 afro-americanos e caucasianos, 29 e 81 afro-americanos e caucasianos 45 se recusaram a participar. A taxa global de cooperação (entrevistado /entrevistado + recusada) foi de 84%: 79% para afro-americanos, 89% para os brancos. De mais 33 doentes foram excluídos porque a qualidade da entrevista foi julgada inadequada. Consequentemente, houve 643 casos: 294 afro-americanos e 349 caucasianos. A taxa global de cooperação para controles foi de 62%: 59% para afro-americanos e 65% para os brancos; 1048 controles, 437 Africano-americanos e 611 participantes caucasianos.

Casos e controles foram selecionados usando o recrutamento randomizado para alcançar uma idade, raça e razão sexual otimizado para eficiência estatística. casos afro-americanos foram sobre-amostrado para produzir um caucasiano 01:01: Africano rácio americano, e os controles foram amostrados para coincidir com a distribuição por raça, idade e sexo dos casos

As amostras de tecidos foram coletadas no momento da. cirurgia e fixados em formalina. Arquivados fixado em formol e tecidos (FFPE) parafinado foi fornecido para o isolamento de DNA e imuno-histoquímica (IHQ) nos estudos descritos aqui. Houve um total de 503 casos com tecido disponível para análise para este estudo. A Universidade da Califórnia em San Diego, San Diego State University e da Universidade de Michigan Humano Assuntos comités aprovaram a pesquisa utilizando esses espécimes patológicos existentes.

Extração de DNA e análise de microssatélites

O DNA foi extraído fixado em formol e incluído em parafina de tumor colo-rectal de cada paciente e tecido normal circundante [14]. Cada área microdissectados foi identificado pelo patologista em um hematoxilina de referência e eosina lâmina corada. fatias não coradas tecido adjacente ao diapositivo de referência foram microdissecadas de acordo com domínios identificados na corrediça de referência usando uma lâmina de bisturi cirúrgico. O espécime foi dissecado desparafinizadas em um tubo de microcentrífuga com xileno, e o ADN foi purificado com etanol e GeneReleaser (BioVentures, Murfeesboro, TN) de acordo com as recomendações do fabricante. Subsequentemente, as amostras foram tratadas com 200 ug /ml de proteinase K (Sigma, St. Louis, MO) e incubou-se a 55 ° C durante 5 horas. A proteinase K foi destruída por aquecimento da amostra a 95 ° C durante 15 minutos, e as amostras foram imediatamente congelado e armazenado para análise de reacção em cadeia da polimerase (PCR).

Para a determinação da MSI, utilizou-se o NCI- painel recomendada de 5 marcadores microssatélites (BAT25, BAT26, D5S346, D2S123, e D17S250) para classificar o tumor como MSI-alta (associado a inativação do DNA MMR) e MSI-Low ou microssatélites estável (MSS), que não estão associados a ADN inactivação MMR. MSI-alta foi definida como 2 ou mais marcadores que demonstram novos alelos comparação com o tecido não tumoral, MSI-L como um marcador com um novo alelo, e MSS como nenhum marcador com novos alelos. Devido às características semelhantes de tumores MSI-Low e MSS [7], estes dois grupos foram incluídos juntos na nossa coorte. Um iniciador de cada par marcador microssatélite estava com

32P ou fluorescente etiquetado endlabeled-rádio. A PCR foi realizada sobre o ADN molde microdissecados numa reacção contendo 0,125 pmol de cada um dos iniciadores “frios” endlabeled, e 0,25 U de Taq DNA polimerase, de 40 uM de solução de dNTP, e concentração final de 1,5 a 2,0 uM de magnésio. Os produtos de PCR foram desnaturados em formamida a 95%, e sujeito a electroforese num gel de poliacrilamida a 6% contendo 7,5 M de ureia. Os géis foram depois secos e expostos a autorradiograf ia por uma película de raios-x ou num Phosphorimager (Molecular Dynamics, Sunnyvale CA). Alternativamente, as reacções de PCR utilizando primers fluorescente-marcadas foram enviadas diretamente para a sequenciação de ADN.

As análises genéticas eram cegos e realizadas separadamente e de forma independente a partir dos dados epidemiológicos recolhidos no estudo.

A imuno-histoquímica e CD8

+ T contagens de células

para executar imunohistoquímica para CD8

células + T,, amostras embebidos em parafina fixadas em formalina foram desparafinados pela primeira vez em xilol e reidratados. peróxido de actividade endógena foi bloqueada com peróxido de hidrogénio a 3% durante 20 min. A recuperação de antígenos foi realizada no micro-ondas durante 10 minutos em citrato 10 mM (pH = 6,0) e 0,05% de Tween 20. Após arrefecimento, a proteína de ligação não específica foi bloqueada com BSA a 1% em PBS, e o anticorpo anti-CD8 humano monoclonal de murganho (DakoCytomation, clone C8 /144B, Carpinteria, CA) adicionou-se durante a noite a 4 ° C. As células foram visualizadas utilizando o kit de DakoCytomation LSAB2 System-HRP, seguindo as instruções do fabricante. As lâminas foram contrastadas com hematoxilina de Mayer, lavou-se com hidróxido de amónio, secou-se e lamínulas. As amostras foram então analisadas por microscopia de luz.

Para contagem de células, cada lâmina foi avaliada a baixa potência (50X) para as áreas que tinham a maior concentração de células coradas. Três campos de alta potência (hpf = 100X) foram fotografados e intra-epitelial CD8

células + T foram contadas de forma independente em cada HPF por dois observadores. Se a contagem mostrou discrepâncias 10%, os dois observadores avaliaram a fotografia em conjunto e, em seguida, re-contado de forma independente. Os resultados dos dois observadores foram em média

Análise Estatística

As análises foram conduzidas utilizando SAS (versão 9.1; SAS Institute, Inc., Cary, NC). E com base em 2-sided

P valores

. A análise estatística dos valores descritivos foram as seguintes: para as variáveis ​​contínuas, o t-teste; para valores categóricas e patológicos, teste exato de Fisher. Foram calculados índices ajustados odds (OR) e intervalos de confiança de 95% (IC 95%), utilizando modelos de regressão logística incondicional (usando o módulo Proc Logistic do SAS). As seguintes co-variáveis ​​foram consideradas para inclusão nos modelos multivariados para a associação com cânceres MSI: idade (contínua), sexo (masculino, feminino), estágio do câncer (classificados no momento da cirurgia), raça (Africano Americano, Europeu), tumor mucinoso ( sim, não), a diferenciação do tumor, infiltrado inflamatório, e localização do câncer no cólon (do lado direito definido como proximal à flexão do baço). interação significativa foi observada entre raça e local do tumor, e houve fraca interacção associação entre o estado MSI e idade. Modelos mostram construída ambas as interações

Os dados sobre CD8

+ contagem de células T /HPF no total das amostras analisadas não seguem uma distribuição normal, Gaussian.; Portanto, os testes estatísticos não-paramétricos foram solicitados para avaliar a importância de qualquer diferença entre dois grupos em cada uma das análises. O Mann-Whitney

U

teste foi realizado para determinar se os dois conjuntos de amostras independentes tinham distribuições de dados que diferiam significativamente. Análise estatística para CD8

+ contagem de células T foram realizadas utilizando

IBM SPSS Statistics

, versão 21.0.0.0 (IBM Corporation, 2012)

P

valores 0,05 foram considerados estatisticamente significativos.

resultados

Nós utilizamos a 503 pessoas, a verdadeira coorte cancro do cólon de base populacional com coleta prospectiva de dados a partir de 33 condados da Carolina do Norte, que foi projetado para oversample Africano americanos na coorte (os dois pontos Carolina do Norte Cancer Study, NCCCS) [17]. É importante notar que as análises foram MSI cego e realizado separadamente e de forma independente a partir dos dados epidemiológicos recolhidos no estudo. Entre os 503 cancros do cólon, 227 (45%) eram de afro-americanos, e 276 (55%) eram da raça branca. No geral, 54 (11%) cancros demonstrado MSI. No entanto, a prevalência da MSI nos cancros diferiu entre afro-americanos e caucasianos. Havia 39/276 (14%) caucasianos com cancros MSI, em comparação com 15/227 (7%) afro-americanos com câncer MSI (Tabela 1 e Figura S1). Em comparação com cancros MSS, cancros MSI foram associados com pacientes caucasianos (

P

= 0,009), a histologia mucinoso (

P

= 0,0004), falta de diferenciação (

P

= 0,03), um “Crohn-like” linfóide e reação linfocítica intraepitheilial (

P

= 0,0001), ea localização no cólon proximal (

P Art 0,0001) (Tabela 1). Não houve diferença na idade, sexo, ou o estágio do câncer entre os pacientes dos grupos MSI e MSS. Exceto para a diferença racial, os resultados associados a tumores MSI foram previamente conhecidas e servem para validar nossos dados. Foi realizada regressão passo a passo avaliar todas as associações clínico-patológicos e raça, infiltrado inflamatório e local do tumor permaneceu no modelo final. Houve interação significativa entre raça e local do tumor. Os doentes com cancros MSI tem uma razão de chances (OR) de 3,21 para a presença de Crohn como histologia, e são menos propensos a ser afro-americanos (tanto com cancros proximais, OR = 0,26, ou cânceres distais, OR = 0,16) ou caucasianos com cancros distais (OR = 0,12) (Tabela 2). Adição de idade, que foi fracamente relacionada com a MSI, mas não correr, não alterou significativamente estas odds ratio no modelo de regressão.

Foi avaliado se havia alguma diferença entre raças dentro MSI ou grupos de câncer de MSS. Nós não encontramos nenhuma diferença entre Africano-americanos e caucasianos pacientes com cancros MSI, embora tenha havido uma tendência para os cancros do afro-americano a ser de pacientes mais jovens e do sexo feminino (Tabela 1). Entre os cânceres MSS, pacientes afro-americanos eram significativamente mais jovens (62,6 vs 64,8 anos, a

P

= 0,02), mais provavelmente do sexo feminino (56% vs. 43%,

P

= 0,008), e mais probabilidade de ter um tumor de cólon proximal (54% vs. 44%,

P

= 0,04) (Tabela 1). Nossos dados sobre cânceres americana MSS Africano é consistente com as fêmeas afro-americanos possuindo pólipos adenomatosos mais avançados [18], e os dados do SEER e da American Cancer Society consistentemente mostrando idade mais precoce e maior prevalência de cancros do cólon proximal em pacientes afro-americanos em comparação com pacientes caucasianos [1 ], [2].

Nós fomos capazes de determinar o número de intraepitelial CD8

+ T células dentro de 475 tipos de câncer de discernir qualquer diferença entre raças, como números mais elevados têm sido associados com cancros MSI [9] e melhora da sobrevida [3], [19]. cancros MSI teve maior média de CD8

+ contagem de células T quando comparado ao câncer MSS (88,0 vs. 30,4 /HPF,

P Art 0,0001) (Figura 1), e esta diferença foi presente entre MSI e cancros MSS de pacientes afro-americanos (76,8 vs 32,2 /HPF,

P

= 0,0057) e de pacientes caucasianos (95,5 vs. 29,5 /HPF,

P Art 0,0001) (Figura 2) . Entre os cânceres MSI, não houve diferença na média CD8

+ T infiltração de células intra-epitelial entre afro-americanos e caucasianos; Da mesma forma, não houve diferença entre raças entre cancros MSS (Figura 1). Nossos dados são consistentes com uma associação entre CD8

+ T infiltração intra-epitelial de células e cancro do MSI. Enquanto observamos nenhuma diferença para a média geral CD8

+ T contagens de células entre as raças (Figura 2), a média CD8

+ contagem de células T foi consistentemente menor em afro-americanos em comparação com os caucasianos (exceto para os cancros MSS), com pouca ou nenhuma representação no quartil superior de CD8

+ contagem de células T (Figura 2A e Figura 1BC). Assim, cancros com muito alto infiltração de CD8

+ células T eram mais frequentemente e em algumas comparações quase exclusivamente de pacientes caucasianos.

(A) Imunohistoquímica de CD8

+ células T dentro de glândulas do epitélio malignas de um câncer de cólon. Observe a presença de intraepitelial CD8

+ células T (

inserir

). (B) CD8

+ contagem de células T entre cânceres MSI e MSS. (C) CD8

+ contagem de células T de cânceres MSI entre as raças. (D) CD8

+ contagem de células T de cânceres MSS entre as raças. Observe que não há diferença entre os afro-americanos e caucasianos, comparando cancros MSI ou MSS. O número acima de cada dot blot são meios; a barra horizontal representa o número médio entre os tipos de câncer. contagens

(A) CD8

+ de células T entre as raças, independentemente da instabilidade de microssatélites. (B) CD8

+ contagem de células T entre cânceres MSI e MSS de afro-americanos. (C) CD8

contagem de células + T entre cânceres MSI e MSS de caucasianos. O número acima de cada dot blot são meios; a barra horizontal representa o número médio entre os tipos de câncer.

Discussão

Este estudo de base populacional demonstra o romance descobrindo que cancros do cólon de pacientes afro-americanos têm a metade da frequência de MSI comparação com os caucasianos, sem aparente mudança na extensão da intraepitelial CD8

infiltração de células T +. Este resultado está em contraste com dois outros estudos [4] [5], que não eram de base populacional e que utilizou armazenadas amostras com os dados raciais ligados, e acreditamos que essa diferença desenho do estudo é a razão para os resultados contrastantes entre os estudos. Como MSI é um bom marcador prognóstico quando comparados aos pacientes mesmos-encenado com tumores MSS [3], a menor frequência de MSI entre os cancros do cólon afro-americanos sugere que este pode, em parte, contribuir para a maior mortlity de câncer de cólon observado nesse grupo racial [1], [2], [20].

a quase ausência de muito alto CD8

+ T contagens de células entre os tipos de câncer afro-americanos poderia sugerir uma alteração na função imunológica, e este terá de ser explorada. No entanto, identificamos nenhuma diferença quando se compara o CD8 média

+ T contagens de infiltração de células entre as raças para cânceres MSI ou cancros MSS, sugerindo que a raça

per se

não é um determinante de CD8

+ T infiltração de células. Nossos dados confirmam a forte associação entre CD8

+ infiltração de células T e o estado MSI de um câncer de cólon, consistente com a noção de que neoantigénios impulsionado por deficiência de DNA MMR e subsequente mutação frameshift de genes alvo é operativa [8], bem como CD8

+ células T estão associados a uma melhor sobrevida de câncer de cólon [19]. A forte ligação entre o estado MSI e CD8

+ infiltração de células T poderia sugerir que as células T CD8 + são a razão para a melhoria do resultado observado para tumores MSI. Por exemplo, pacientes com cancros do cólon MSI não se beneficiam do 5-FU quimioterapia em vários estudos e tratamento de 5-FU pode até diminuir a sobrevida destes pacientes [14], [15]. Pode ser que as células de adenocarcinoma com função ADN MMR defeituoso são resistentes a 5-FU, mas que a CD8

células + T são sensíveis ao 5-FU, com 5-FU tratamento matar o efeito benéfico da CD8

+ infiltração da célula T [13]. A ausência de muito alto CD8

+ T células entre os tipos de câncer afro-americanos pode simular um efeito semelhante como teorizado por tratamento com 5-FU de pacientes com cancros da MSI.

Outra biomarcador de defeituoso DNA MMR em cânceres colorretais esporádicos é elevada alterações de microssatélites em repetições tetranucelotide seleccionados, ou EMAST, encontrada em até 60% dos cancros colorectal e causada por inactivação somática de hMSH3 [21], [22]. EMAST está associado a metástases e mau prognóstico [23], [24] e parece ser duas vezes mais comum entre os cancros rectais de afro-americanos em comparação com caucasianos [24]. Assim, a contribuição de EMAST, um pobre prognosticator para pacientes com câncer de cólon, juntamente com prevalência reduzida da MSI, um bom prognosticador, juntos formam dois processos biológicos envolvidos na inflamação e defeitos de DNA MMR que podem piorar o resultado de pacientes afro-americanos com câncer de cólon.

Nossos dados demonstram também a natureza proximal predominante de cancro do cólon em afro-americanos que não é devido a MSI. Ou dados são consistentes com SEER prévia e dados da American Cancer Society [1], mas destacam a natureza do lado direito de cancros na ausência de tumores MSI. Por que há mais cancros do cólon proximal em pacientes afro-americanos não é conhecido. No entanto, isso tem implicações para o tratamento de rastreio do cancro do cólon nesta população.

Em conclusão, encontramos metade da prevalência da MSI entre os pacientes afro-americanas com câncer de cólon, em comparação com pacientes causcasian sem mudança na CD8

+ infiltração de células T. Esta descoberta pode contribuir para a maior mortalidade afro-americanos ‘de câncer de cólon.

Informações de Apoio

Figura S1.

Distribuição de tumores MSI e MSS entre os pacientes americanos e caucasianos africanas na NCCCS

doi:. 10.1371 /journal.pone.0100461.s001

(TIFF)

Reconhecimentos

Os autores agradecem Vianca Villegas, Reyna Melendez, Angelique Hill, e Fortunate Ene para assistência com imunocoloração e enumeração dos números de células.