Abstract

Fundo

O câncer de próstata é uma doença altamente heterogêneo e uma das principais causas de mortalidade nos países desenvolvidos. marcadores prognósticos e preditivos específicos para pacientes com câncer de próstata ainda são escassos. A relação causal entre andrógenos e o desenvolvimento do câncer de próstata é geralmente considerado biologicamente plausível, mas andrógenos não são a única efetoras na complexidade da carcinogênese de próstata. O objetivo deste estudo foi avaliar o valor prognóstico de receptor de progesterona no tecido tumoral de pacientes com câncer de próstata T1-3N0 submetidos à prostatectomia.

Métodos

Tissue microarrays de 535 pacientes com câncer de próstata foram construídos . núcleos em duplicado de células de tumor e tecido do estroma do tumor a partir de cada amostra ressecados foram extraídos. A imuno-histoquímica foi utilizada para avaliar a expressão in-situ do receptor de progesterona.

Resultados

Nas análises univariadas, alta densidade celular do tumor (p = 0,006) eo nível de densidade de células do estroma tumoral elevada (p = 0,045) do receptor de progesterona ambos foram significativamente associados com a progressão do tumor e falha clínica. Na análise multivariada, a expressão do receptor de progesterona em células tumorais foi um fator prognóstico negativo independente para falha clínica (HR: 2,5, IC 95%: 1,2-5,2, p = 0,012).

Conclusão

densidade do receptor de alta progesterona em células tumorais do tumor do câncer de próstata é um fator prognóstico negativo independente para falha clínica

Citation:. Grindstad T, Andersen S, Al-Saad S, Donnem T, Kiselev Y, Nordahl Melbø- jørgensen C, et ai. (2015) Expressão alta progesterona receptor no câncer de próstata é associada com insuficiência Clínica. PLoS ONE 10 (2): e0116691. doi: 10.1371 /journal.pone.0116691

Editor do Academic: Zoran Culig, Innsbruck Medical University, ÁUSTRIA

Recebido: 26 de junho de 2014; Aceito: 08 de dezembro de 2014; Publicação: 27 de fevereiro de 2015

Direitos de autor: © 2015 Grindstad et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Disponibilidade de dados: Todos os dados relevantes estão dentro do papel e seus arquivos de suporte de informação

Financiamento:. Este trabalho foi financiado pelo Departamento da Noruega Saúde (https://www.regjeringen.no/en/dep/hod.html?id=421 ), a Associação Cancer norueguês (https://kreftforeningen.no/en/main-priorities/), UIT – a Universidade do Ártico da Noruega (https://en.uit.no/startsida), Norte da Noruega Autoridade Regional de Saúde ( Helse Nord RHF) (https://www.helse-nord.no/?lang=en_US), o financiamento número 30125/30012. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

o câncer de próstata (PCA) é uma das principais causas de morte entre os homens no mundo ocidental [1]. A maioria dos CaP ocorre como uma forma indolente de que é improvável que invadem além do ambiente de tecido local. Um subgrupo de APC, no entanto, apresenta a agressividade e propriedades metastáticas. Tais cancros resultar em uma rápida progressão da doença e sobrevida específica da doença reduzida [2]. Consequentemente, o curso clínico da PCA é altamente individual e difícil de prever desde o início.

Na falta de marcadores moleculares específicos como ferramentas de diagnóstico e prognóstico, a detecção de CaP e sua estratégia de tratamento ainda está baseada principalmente na valor antígeno (PSA), pontuação de Gleason de biópsias de tumores e tumor primário (pT) específico da próstata -staging [3]. PSA não pode separar entre os diferentes padrões de progressão APC. Assim, muitos dos casos CaP detectados representam tumores clinicamente indolentes que não tratado permanecerá estável durante anos [2]. Daí, o rastreio PSA constitui um risco para excesso de diagnósticos e tratamento excessivo que está associado com um impacto negativo na qualidade de vida e custos financeiros extensas [4,5]. A identificação de novos, melhorou biomarcadores de prognóstico e de diagnóstico para o PCA é, portanto, muito necessário.

Sex hormônios esteróides, como andrógenos, estrógenos e progesterona, são efetoras potentes envolvidos na proliferação, diferenciação, bem como o desenvolvimento celular, e contribuintes conhecidos para o desenvolvimento de diferentes tipos de cancro [6]. As funções metabólicas da próstata está sob o controlo regulador de tais hormonas esteróides sexuais [7]. A relação causal entre androgénios e o desenvolvimento de PCA é, em geral, considerado biologicamente plausível [8]. Isto indica um papel crucial para o receptor de androgénio no fracasso carcinogénese da próstata e tratamento endócrino. No entanto, há evidências crescentes de que o receptor de androgénio não é o único receptor de endócrino eficaz neste processo complexo. Investigação sugerindo o envolvimento dos receptores tanto a glucocorticoid-, estrógeno e progesterona neste processo têm sido publicados [9-13].

A progesterona é uma hormona de 21 carbono sintetizados a partir de precursores de esteróides em várias partes do corpo , incluindo os testículos, glândula supra-renal, placenta e as células gliais do cérebro, para além dos ovários [14]. O receptor da progesterona (PGR) existe em duas isoformas, PGR-A e B-PGR, e ambos são transcritas a partir do mesmo gene. Ele pertence à mesma família de receptores como os receptores de estrogénio e andrógeno, que são expressos tanto em células estromais de tumor e do tecido CaP [11,13,15-18]. Atualmente, não há um acordo geral da presença PGR nas células do estroma da ACP [10,17,19-23]. Resultados relativos à presença de PGR em células de tumor, no entanto, são conflitantes [9,10,17,19-25]. Assim, a importância de PGR na próstata humana e na carcinogénese da próstata nunca foi adequadamente explicada. Como consequência, procurou-se avaliar a expressão de PGR em ambas as células de tumor derivadas do epitélio (TE) e células do estroma do tumor (TS) em espécimes de prostatectomia malignas e o nível de densidade PGR em ambos TE e TS para ser associada com a progressão CaP.

Materiais e Métodos

os pacientes, os dados clínico-histopatológicos e

671 pacientes submetidos a prostatectomia radical como tratamento inicial para adenocarcinoma 1995-2005 foram identificados retrospectivamente dos departamentos de patologia do Hospital Universitário do Norte da Noruega (n = 267), o Hospital Nordland (n = 63) e do Hospital St. Olavs (n = 341). Destes, foram excluídos de um total de 136 pacientes, devido a: (i) a radioterapia para a região pélvica antes da cirurgia (n = 1), (ii) outros tumores no prazo de 5 anos antes do diagnóstico PCA (n = 4), ( iii) inadequadas embebidos em parafina blocos de tecido (n = 130), e (iiii) ausência de dados clínicos de seguimento (n = 1). Nenhum dos pacientes tinha recebido terapia hormonal antes ou no momento da prostatectomia. Assim, 535 pacientes com dados completos de acompanhamento foram incluídos neste estudo. Tempo médio de acompanhamento foi de 89 (intervalo de 6-188) meses na última atualização paciente em novembro de 2012. Os dados demográficos e clínicos completos foram obtidos de registros médicos. Todos os tecidos analisados ​​e adicionados ao estudo foi processado de uma maneira comparável, os tumores foram classificados de acordo com o sistema de graduação de Gleason modificado [26,27], e encenado de acordo com as diretrizes da Organização Mundial de Saúde [28]. Todos os cânceres primários foram histologicamente revisto por dois patologistas (ER e LTB), e todos os dados demográficos, clínicos e histopatológicos (Tabela 1) foram registradas em um arquivo de dados SPSS, em que foram de-identificados pacientes. O Comité Regional para Médicos e de Saúde de Ética em Pesquisa (2009/1393), o Oficial de Proteção de Dados de Pesquisa (NSD) e do Conselho Nacional de Inspeção de Dados aprovou este estudo. Todos os pacientes foram anónimos com cada número julgamento. Estes números foram inicialmente ligados à identidade para um único propósito anterior; para recolher informação clínica. The Social Ciência Data Service norueguês e Escritório de Proteção de Dados do Hospital da Universidade aceitou esta solução, (2009/1393). consentimento por escrito dos pacientes foi considerada, mas como este foi um estudo retrospectivo onde a maioria do material era mais de 10 anos de idade e a maioria dos pacientes falecidos, considerou-se não for necessário. Todos os dados foram analisados ​​de forma anónima.

construção Microarray

Tissue Microarray (TMA) construção foi escolhido para high-throughput análises de patologia molecular. Para cada bloco de tecido, um patologista (ER) identificado e marcado duas áreas representativas do tecido de tumor epitelial e dois para o tecido do estroma do tumor nos correspondentes hematoxilina e eosina lâminas. Uma área com as células epiteliais normais, e um com o tecido do estroma normais, também foram cuidadosamente marcado. De cada uma destas áreas, os núcleos foram amostrados de cada bloco de doadores, a fim de construir blocos de TMA. núcleos de próstata de 20 pacientes sem história de malignidade foram utilizados como controle.

O TMA foram montados usando um instrumento de arraying tecido (Beecher Instruments, Silver Springs, MD, EUA). Utilizou-se uma agulha de diâmetro 0,6 mm a colher núcleos das áreas de tecido marcados de cada embebidos em parafina blocos de tecido. As amostras de núcleo foram inseridos em um bloco de parafina receptor vazio em um padrão de matriz preciso. Para incluir todas as amostras de núcleo, doze blocos de matriz de tecido foram construídos. Múltiplas 4 mm seções foram cortadas com um micrótomo Micron (HM355S) aposta lâminas de vidro e seladas com parafina. A metodologia detalhada foi relatado anteriormente [29].

Imuno-histoquímica (IHQ)

Para coloração imuno-histoquímica, a Ventana Referência XT sistema coloração automática (Ventana Medical Systems, Tucson, AZ) e Ventana reagentes foram usados. TMA lâminas foram deparaffinised com xileno e re-hidratadas em concentrações decrescentes de etanol. A peroxidase endógena foi bloqueada utilizando o bloqueio da peroxidase endógena Ventana kit após uma lavagem com água destilada. Para recuperação antigênica, as lâminas foram aquecida com solução de células condicionado (CC1, Ventana), padrão, de acordo com as instruções do fabricante. A sequência de anticorpo a partir Ventana Medical (Tucson, Arizona, EUA) foi utilizado neste estudo: Confirmar anti-receptor da progesterona (1E2 clone, catálogo # 790-4296) de coelho anticorpo primário monoclonal, dirigido contra ambas as isoformas A e B da progesterona humana receptor. O anticorpo foi pré-diluído pelo fabricante. O anticorpo utilizado é produzido para IHC de diagnóstico de rotina e recebeu a aprovação da FDA (510k) para IVD (

in vitro

de diagnóstico) usar. O anticorpo PGR é actualmente aplicada na prática rotineira na avaliação do estado PGR no cancro da mama. Para validar a especificidade do anticorpo primário contra PGR, foram utilizados os lisados ​​de células HEK 293 com qualquer PGR transitoriamente sobre-expresso ou um vector vazio. Outros detalhes com respeito a validação anticorpo pode ser encontrada nos ficheiros de informação de apoio (S1 texto, S2 texto, S1 Fig.). UltraView Universal DAB foi utilizado como estojo de detecção. Finalmente, as lâminas TMA foram contrastadas com hematoxilina de visualizar os núcleos.

Scoring de IHC

O sistema de imagem Ariol (Applied Imagem Corp., San Jose, CA, EUA) foi utilizado para digitalizar e digitalizar os slides TMA IHC manchadas. Os slides foram carregados no carregador de fotos automática SL 50 e digitalizado com uma resolução baixa (1,25x) e alta resolução (20x) usando um microscópio Olympus BX61 com uma plataforma automatizada (Prior Scientific, Cambridge, UK). Imagens dos núcleos foram enviados para o Software Ariol. Todas as amostras foram de-identificados e marcados manualmente por dois patologistas (ER e SAS) independentemente um do outro e ambos foram cegos para qualquer informação ou patológica clínica. Em caso de desacordo, as lâminas foram reexaminados e os observadores chegaram a um consenso. secções de tecido viáveis ​​representativos foram marcados semi-quantitativa e o grau de expressão PRG nuclear por IHQ foi graduada de acordo com a intensidade de coloração tanto dominante e densidade tanto em TE e TS. Ambos intensidade e densidade foi atribuída uma pontuação de 0-3. A intensidade foi pontuado como se segue: 0 = negativo, 1 = fraco, 2 = moderada, 3 = forte. A densidade foi pontuada de acordo com a percentagem de células positivas no compartimento examinada utilizando o seguinte sistema: 0 = 0%, 1 = ≤ 5%, 2 = 5-50%, 3 = 50%. Para cada caso, as médias foram calculadas. Os valores médios de pontuação foram, então, ligado a informações clínicas e histopatológicas do paciente. Os valores de pontuação, em seguida, foram dicotomizados como alta e baixa intensidade ou densidade das células coradas (Fig. 1), usando valores óptimos cortado. Em ambos TE e TS, corte foi definido como o nível de densidade × 4

th quartil. A pontuação mais alta foi definida como nível de densidade ≥ 0,75 no TE, e ≥ 1,75 em TS.

Imuno-histoquímica imagens microscópicas de tecido micro matriz representando expressão diferente da coloração PGR nas seções CaP A-B. (A) de alta densidade de PGR em células tumorais (TE), incluindo ampliação. (B) A baixa densidade da PGR em TE, incluindo ampliação. x100 aumento original e x400.

Métodos estatísticos

Todas as análises estatísticas foram realizadas utilizando o pacote estatístico IBM SPSS, versão 21 (SPSS Inc., Chicago, IL, EUA). Os valores de pontuação IHC de cada patologista foram comparados para a confiabilidade inter-observador pelo uso de um modelo de efeito aleatório de duas vias com a definição concordância absoluta. Um teste de Wilcoxon foi utilizado para avaliar se houve diferenças estatisticamente significativas na intensidade da PGR e densidade entre os diferentes compartimentos dos espécimes APC. Nós empregamos o coeficiente de correlação de Spearman para avaliar a associação entre a expressão PGR e variáveis ​​clinopathological. O método de Kaplan-Meier foi utilizado para a análise de sobrevida univariada e teste log-rank para avaliar a significância estatística entre as curvas de sobrevivência do modelo. curvas univariada de Kaplan-Meier foram construídas para os seguintes os pontos finais: 1) falha bioquímica (BF), 2) A falência clínica (CF) e 3) a morte PCA (PCD). BF foi determinada como uma recidiva ≥ PSA 0,4 ng /ml em um mínimo de duas amostras de sangue pós-operatório diferentes [30]. CF foi definida como verificada a progressão local sintomático além da cura e /ou achados de metástase para os ossos, órgãos viscerais ou gânglios linfáticos pela CT, MR, cintilografia óssea ou ultra-sonografia. PCD foi definida como morte causada por resistente à castração progressiva e disseminada CaP incontrolável por terapia. Todas as variáveis ​​significativas da análise univariada foram inseridas na análise multivariada, utilizando um modelo de regressão Cox backward com uma probabilidade para a remoção de entrada gradual em 0,05 e 0,1, respectivamente. Foi considerado um valor de p 0,05 como estatisticamente significante para todas as análises.

Resultados

As características dos pacientes

A prostatectomia radical foi retropubic em 435 casos e perineal em 100 casos. A idade dos pacientes no momento da cirurgia variou de 47 a 76 anos, com uma idade média de 62 anos. Mais pormenores relativos a coorte estão publicados anteriormente [31]. Uma visão geral das características demográficas, clínicas e histopatológicas é apresentado na Tabela 1. pontuação combinada Gleason variou de 6 a 10 e tumor fase de T2a para T3b. No último follow-up 170 (32%) BF experientes, 36 (7%) apresentaram CF e 15 (3%) morreram devido a CaP.

expressão progesterona e correlação com variáveis ​​clínico-patológicas

Houve uma boa concordância de pontuação entre os dois patologistas investigando. O coeficiente de correlação intra-classe (coeficiente de confiabilidade, r) para o marcador PGR foi de 0,78 (p 0,001). PGR foi expressa no núcleo de ambas as células normais e em TE e TS (Fig. 1). densidade alta PGR em TE (≥ 0,75) foi encontrada em 109 (20%) dos 535 pacientes que, uma densidade PGR elevada (x 1,75) em TS foi encontrada em 120 (23%) dos pacientes. Não houve diferença significativa no nível de densidade de PGR no epitélio de controlo em comparação com TE (p = 0,429), embora a pontuação média densidade foi de 0,37 em epitélios de controlo e 0,52 em TE. Além disso, 61,9% dos controles não expressou PGR, enquanto apenas 28,3% do TE estavam sem expressão PGR. No entanto, houve um nível de densidade de PGR significativamente maior em comparação com TS controlar estroma (p 0,001). Além disso, um significativamente maior nível de intensidade de expressão e densidade de PGR foi encontrada em TS quando comparado com TE (ambos p 0,001).

os níveis de elevada densidade de PGR em TE foram correlacionados com uma margem apical positiva (P = 0,025) e infiltração perineural (PNI) (p 0,01). Não foram identificadas correlações com outras variáveis ​​clinopathological.

A análise univariada

As associações entre o nível de densidade da PGR e CFFS (sobrevida livre de falha clínica) são apresentados na Tabela 2 e Fig. 2. As seguintes variáveis ​​clinopathological eram todos os factores de prognóstico importantes para CF: PT-fase (p 0,001), Pn-fase (p 0,001), grau de Gleason (p 0,001), o tamanho do tumor (p = 0,019) , infiltração perineural (p = 0,001), a margem cirúrgica positiva (p = 0,038), a margem não-apical cirúrgica (p 0,001) e infiltração linfática (p 0,001) (Tabela 1)

curvas de Kaplan-Meier de doentes que exibem proporção Caner próstata (n = 535) com CFFS acordo com o nível de alta e baixa densidade de receptor de progesterona (PGR), em diferentes tipos de células AD. (A) As células tumor estromal (TS), células (B) de tumor (TE), (C) e TE TS combinadas e (D) de TE, em pacientes com uma pontuação de Gleason alta (≥ 7). Um nível de densidade alta PGR é significativamente associada com uma redução no CFFS. Em ambos TE e TS, corte foi definido como o nível de densidade × 4

th quartil. A pontuação mais alta foi definida como nível de densidade ≥ 0,75 no TE, e ≥ 1,75 em TS. testes de log-rank foram utilizados para avaliar a significância estatística entre as curvas de sobrevivência do modelo. Tempo médio de acompanhamento foi de 89 (6-188 intervalo) meses. Um valor de p 0,05 foi considerado estatisticamente significativo.

O aumento dos níveis de densidade PGR tanto em TE (p = 0,006) e TS (p = 0,045) foram significativamente associados com CF (Fig. 2, painel A e B). CFFS Ao mesclar níveis de densidade PGR em TE e TS, os pacientes com (alta /alta), os níveis de alta densidade PGR tinha reduziu significativamente (p = 0,019) em comparação com aqueles com níveis de baixa densidade (baixa /alta, alta /baixa e baixa /baixa) (Fig. 2, painel C). Dez CFFS ano foram 76,8% vs. 91,6%, respectivamente, para pacientes com altos (alta /alta) vs. níveis de densidade baixa (baixa /alta, alta /baixa e baixa /baixa) (Tabela 2).

High níveis PGR em TE mostrou uma tendência semelhante para aumentar a BF, mas esta não foi estatisticamente significativa (p = 0,144). Para TS ou TS e TE combinados, não houve associações com BF ou PCD.

Um alto nível de densidade de PGR no TE foi significativamente associada com CF no subgrupo de pacientes com escore de Gleason ≥ 7 (p = 0,002 , a Fig. 2, painel D) em comparação com o subgrupo de pacientes com a classificação de Gleason 6 (p = 0,914). Dez CFFS anos para pacientes com níveis de alta densidade PGR eram 72,2% vs. 97,2%, respectivamente para os pacientes com escore de Gleason ≥ 7 vs. Gleason score 6.

Análise multivariada

Na análise multivariada ( tabela 3), de expressão elevada de PGR em TE foi um preditor independente para a FC (FC: Cl 2,5, 95%: 1,2-5,2, p = 0,012), para além de Gleason de grau (p = 0,001) e margem cirúrgica não-apical ( p = 0,006). expressão PGR em TS tendem a, mas não alcançou significância estatística (HR: 2,1; IC: 1,0-4,3, p = 0,060). Há fatores prognósticos independentes foram encontrados para BF e PCD.

Discussão

Para nosso conhecimento, este é o primeiro estudo em grande escala a investigar o papel prognóstico do PGR em TE e TS em CaP. Na análise univariada, um alto nível de densidade do PGR, tanto TE e TS foi associada com CF. Alto nível de densidade de PGR no TE foi um fator prognóstico independente para CF.

Um primeiro passo para compreender a ação PGR no PCA é para definir a expressão do receptor no tecido da próstata. publicações anteriores sobre a expressão PGR em APC, especialmente aqueles usando IHC, têm apresentado resultados contraditórios e apenas a alguns relatórios têm abordado o papel da PGR na carcinogênese de próstata. O nosso estudo de grande porte demonstra uma ampla distribuição de PGR no estroma e células epiteliais do tecido da próstata ambos benignos e malignos. Atualmente, parece haver um acordo geral da presença PGR nas células do estroma da ACP [10,17,19-23]. De acordo com os nossos achados, vários também relataram uma expressão alta PGR em TE do CaP [9,10,23,25]. Em contraste, outros demonstraram uma ausência total de expressão PGR em TE [17,19,20,22]. resultados conflitantes Mesmo estudos experimentais utilizando linhas celulares foram relatados [17,24,25,32]. Essa discrepância pode ser explicada por vários factores. Isso inclui o uso de anticorpos diferentes, processamento de tecidos, métodos de recuperação antigênica, o número de amostras de tecido e diferentes sistemas de pontuação, e pode refletir uma falta de padronização metodológica. O 1E2 anticorpo monoclonal utilizado em nosso estudo foi otimizado para uso clínico e é utilizado na prática de rotina na avaliação do estado PGR no cancro da mama. Este é também o caso para o anticorpo NCL-PGR1A6 aplicado nos artigos por Bonkhoff et ai. [10] e Hiramatsu et al. [23], o que confirma a presença de PGR em TE. Vários dos estudos de IHC contradizendo constatação do presente estudo foram realizadas antes do desenvolvimento de novos métodos aumentando a precisão metodológica [17,19,20]. Tais métodos incluem o uso de anticorpos monoclonais novas, altamente específicos contra PGR, o método de irradiação de microondas e o método de processamento de tecido de tempo eficiente TMA [33], o que tem sido relatado como uma ferramenta valiosa para a avaliação de material de paciente e um bom substituto para o conjunto análise seção [34].

Yu et al. recentemente investigou o local eo papel de ambos PGR isoformas em APC e relatar resultados contraditórios ao nosso. Isto pode ser explicado pela sua investigação de PGR que se encontravam a ser expresso exclusivamente num subconjunto de células do estroma dos 27 espécimes de prostatectomia radical [22]. Isto está em contraste com o nosso trabalho foram a expressão de PGR em ambos TE e TS foi claramente detectada. Em nossa coorte 129 (28,3%) pacientes não tiveram expressão PGR em TE, em contraste com apenas 8 pacientes (1,7%) com coloração PGR negativos em TS. No entanto, aqueles com um nível de alta densidade de PGR no TE foi significativamente associada com CF. A diferença no tamanho coorte poderia explicar algumas das discrepâncias entre os achados. Além disso, ambos os métodos de anticorpo e tecido de processamento escolhidas diferem.

Em outro estudo usando ensaio de proliferação celular, Yu et al. encontrado PGR deve ser regular negativamente a proliferação de células do estroma

in vitro

[32]. No nosso trabalho de análise univariada demonstrou uma expressão elevada PGR no TS para ser associada com falha clínica em pacientes com CaP. Até agora, ainda não demonstraram o mecanismo subjacente a esta associação.

Os hormônios esteróides regulam a progressão da célula através do ciclo celular por ligação aos seus respectivos receptores. Estes receptores são moléculas de transdução de sinal e podem regular a proliferação de duas maneiras diferentes, as acções de ADN genómico ou não genómicos em redes de sinalização complexas [6]. Várias acções proliferativas não genómicos de progesterona têm sido propostos em células de tumor de outros órgãos, incluindo da mama [35-37], astrocitoma [38] e [39] osteossarcoma linhas celulares. No entanto, tais resultados são contrariadas por sugestões de ações anti-proliferativa de progesterona no câncer endometrial [40]. Isto pode indicar que as acções de progesterona são de tecido específico. Descobrimos que o alto nível de densidade PGR em TE foi associado a CF em pacientes com escore de Gleason ≥ 7, sugerindo um aumento da regulação do PGR em progredir CaP. Isto é, em consistência com publicações anteriores. Bonkhoff et ai. sugeriram emergência progressiva da PGR durante a progressão da APC e das metástases [10]. Apoiando estes resultados, Latil e colaboradores encontraram uma expressão PGR diminuiu em tumores clinicamente localizados e aumento da expressão PGR em tumores hormônio-refratário, quando comparado com o tecido normal da próstata [9].

Em vários estudos experimentais por meio de cheque et al., ratinhos com PCA foram tratados com um antagonista de PGR, mifepristona, e em comparação com os controlos. Eles encontraram uma maior mortalidade em indivíduos não tratados. Além disso, havia menos complicações CaP no grupo tratado [41,42]. Achados semelhantes de atividade anti-progesterona de mifepristone em ambas as linhas sensíveis e não sensíveis andrógenos de células CaP

in vitro

e

in vivo

, têm sido relatados [43,44]. Nossos resultados fornecem apoio adicional a estes resultados, indicando que PGR desempenha um papel na patogênese da CaP. Para investigar se a atividade PGR aberrante é um mecanismo de desenvolvimento resistente ao cancro da próstata castração, uma fase I /II de ensaios clínicos apenas foi iniciado para testar o efeito do anti-progestina, onapristona, em pacientes com esta condição (http: //clinicaltrials .gov /show /NCT02049190).

o mecanismo por trás da PGR-regulação no CaP ainda não foi elucidado. Neste estudo, Ki67 e PGR em TE foram correlacionados com CF (S3 texto), indicando uma associação entre PGR e da atividade proliferativa. Arora et. ai. [12] relataram que a sobre-regulação do receptor de glucocorticóides re-activa a expressão de um subconjunto de genes regulados pelo receptor de androgénio e, assim, induz castrar CaP resistente. O PGR é, como o receptor de glucocorticóides, semelhante ao receptor de androgénio com 88% de homologia de sequência no domínio de ligação do ligando [45]. Em conformidade com esta constatação, a progesterona expressão induzida de genes regulados pelo receptor de androgénio pode ser um mecanismo potencial que contribui para o desenvolvimento de castração resistente CaP. No entanto, novas pesquisas investigar este é garantido por tal hipótese a ser confirmada.

A possibilidade de diferentes papéis por dois PGR isoformas no tecido da próstata normal e APC, como é sugerido para os receptores de estrógeno [13], deve também ser tido em conta. Sabemos agora que a interferência entre TE e TS é essencial para o desenvolvimento do CaP. Num estudo realizado por Memarzadeh et al., Factores de crescimento de fibroblastos associados ao cancro causou um aumento da regulação do receptor de androgénio epitelial [46]. Isto pode indicar que a diafonia epitélio-estromal é o mecanismo por detrás da indução de expressão PGR em TE e é, assim, promover a progressão CaP. No entanto, aumento da regulação do PGR pode não ser o mecanismo direto para trás aumento da proliferação, mas sim uma consequência de outros processos subjacentes. Assim, o papel respectivo epitelial contra estromal PGR na carcinogênese da próstata e um potencial papel individual das isoformas PGR ainda não foram determinados.

Conclusão

Aqui, descobrimos que um alto nível de densidade de PGR em TE é um fator prognóstico independente para progressão para CF em CaP. Além disso, níveis elevados de densidade PGR são significativos para a progressão para a CF em pacientes com Gleason ≥ 7. A progesterona /PGR podem, por estas razões, ser útil como uma ferramenta de prognóstico, mas também como um alvo para novas estratégias de tratamento de CaP. estudos funcionais adicionais que investigam o papel da PGR em ambos os epiteliais e estromais compartimentos da ACP são ainda necessários para concluir a melhor forma de aplicar esse conhecimento em diagnóstico e tratamento CaP.

Informações de Apoio

S1 Dataset. SPSS APC e conjunto de dados PGR

doi:. 10.1371 /journal.pone.0116691.s001

(SAV)

S2 Dataset. SPSS APC e conjunto de dados Ki67

doi:. 10.1371 /journal.pone.0116691.s002

(SAV)

S1 Fig. Os lisados ​​de células HEK 293 com quer um vector vazio (A) ou uma construção de sobreexpressão PGR (B) foram correu num gel de SDS-PAGE e transferidos para uma membrana de nitrocelulose. A membrana foi

sondadas primeiro com o Ventana anti-PGR de anticorpos (painel superior), e, em seguida, com o anticorpo anti-actina para controlar carga (painel inferior)

doi:. 10.1371 /journal.pone.0116691.s003

(TIFF)

S1 texto. validação de especificidade do anticorpo

doi:. 10.1371 /journal.pone.0116691.s004

(DOCX)

S2 texto. catálogo de produtos Ventana, confirme anti-progesterona receptor (PR) (1E2) Rabbit Anticorpo Monoclonal primária

doi:. 10.1371 /journal.pone.0116691.s005

(PDF)

S3 texto. . Ki67 imunocoloração

doi: 10.1371 /journal.pone.0116691.s006

(DOCX)

Reconhecimentos

Queremos agradecer Magnus Persson, (Departamento de Patologia Clínica, Universidade Hospital do Norte da Noruega) e Mona Pedersen (UIT University O Ártico da Noruega) para o seu trabalho muito cuidadoso laboratório.