Abstract
Fundo
características de síndrome metabólica desempenhar um papel importante no desenvolvimento do cancro colo-rectal. Adipocinas, principais mediadores celulares a síndrome metabólica, quando anormal, pode induzir a carcinogênese.
Metodologia /Principais Achados
Para investigar se os polimorfismos de adipocinas importantes,
adiponectina
(
ADIPOQ
) e os seus receptores, por si só ou em combinação com factores ambientais, estão implicadas em cancro colo-rectal, foi conduzido um estudo de caso-controlo em duas fases. Na primeira etapa, foram avaliados 24 tag polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) tag em todo
ADIPOQ
ligando e dois
ADIPOQ
receptores (
AdipoR1
e
AdipoR2
) entre os 470 casos e 458 controlos. Um SNP com associação promissora foi então analisado na fase 2 entre os 314 casos e 355 controlos. Em nosso estudo,
ADIPOQ
rs1063538 foi consistentemente associada com o aumento do risco de câncer colorretal, com odds ratio (OR) de 1,94 (IC 95%: 1,48-2,54) para o genótipo CC em comparação com o genótipo TT. Em dois fatores analisa a interação gene-ambiente, rs1063538 apresentou interações significativas com tabagismo, história familiar de câncer e uso de álcool, com RUP (IC 95%: 2,78-7,34) 4,52, (IC 95%: 1,73-5,82) 3,18 e (IC 95%: 1,27-3,04) 1,97 para os fumantes, os indivíduos com história familiar de câncer ou bebedores com o genótipo CC em comparação com os não-fumantes, indivíduos sem história familiar de câncer ou não-bebedores com genótipo TT, respectivamente. Multifatorial análise de interações gene-ambiente revelou interações significativas entre
ADIPOQ
rs1063538,
AdipoR1
rs1539355, tabagismo e IMC. Indivíduos que transportam uma, duas e, pelo menos, três factores de risco apresentado 1,18 vezes (IC 95%: 0,89 vezes e 1,58 vezes), 1,87-vezes (95% CI: 1,38 vezes to2.54 vezes) e 4,39 vezes (IC 95%: 2,75 vezes para 7,01 vezes) maior risco de câncer colorretal em comparação com aqueles que, sem fator de risco, respectivamente (P
tendência 0,0001)
Conclusões. /Significado
Nossos resultados sugerem que as variantes em
ADIPOQ
pode contribuir para o aumento do risco de câncer colorretal em chinês e essa contribuição pode ser modificada por fatores ambientais, tais como tabagismo, histórico familiar de câncer e IMC
Citation:. Liu L, Zhong R, S Wei, Yin JY, Xiang H, Zou L, et al. (2011) Interações entre variantes genéticas no
A adiponectina
,
A adiponectina
Receptor 1 e fatores ambientais sobre o risco de câncer colorretal. PLoS ONE 6 (11): e27301. doi: 10.1371 /journal.pone.0027301
editor: Takeo Yoshikawa, Rikagaku Kenkyusho Cérebro Science Institute, Japão
Recebido: 05 de julho de 2011; Aceito: 13 de outubro de 2011; Publicação: 07 de novembro de 2011
Direitos de autor: © 2011 Liu et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados
Financiamento:. Este trabalho foi apoiada pela National Science Foundation Natural da China [NSFC-30972534 para NS, NSFC-81001275 e 81171878 para MX https://www.nsfc.gov.cn/Portal0/default124.htm] e Programa de New Century excelentes talentos em Universidade [NCET-10-0388 a MX https://www.edu.cn/]. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito
CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes
Introdução
o câncer colorretal é uma das principais causas de morbidade e mortalidade por cancro, sendo responsável por cerca de 1, 330, 000 novos casos e 608, 000 mortes por câncer em 2008 em todo o mundo [1]. O câncer colorretal tem sido prevalente em populações ocidentais e foi estimada para causar 142, 570 novos casos e 51, 370 mortes por câncer nos Estado Unite em 2010 [2]. Nas últimas décadas, a taxa de incidência de câncer colorretal aumentou notavelmente na China. Por exemplo, a área desenvolvida na China, como Xangai experimentou um aumento anual de 4,2% na incidência de câncer colorretal, que foi ainda significativamente maior do que o aumento médio de 2% em todo o mundo durante os últimos vinte anos [3].
embora a causa do câncer colorretal não foi completamente esclarecido, estudos epidemiológicos descobriram que os padrões alimentares e de comportamento ocidentais, tais como alto teor de gordura, baixa ingestão de fibras e deficiência de atividade física, foram o principal motivo para o aumento da incidência de câncer colorretal em países em desenvolvimento. A síndrome metabólica, uma consequência de padrões alimentares e de comportamento ocidentais e caracterizada por obesidade, resistência à insulina e hipertensão, foi posteriormente demonstrado contribuir para o risco de câncer colorretal [4], [5], [6]. Estudos epidemiológicos têm relatado um aumento do risco de câncer colorretal em indivíduos obesos em comparação com os indivíduos com peso normal [7], [8]. Similarmente, os marcadores de resistência à insulina, tais como níveis elevados de circulação de péptido-C e o crescimento da proteína de ligação ao factor 1 semelhante à insulina (IGFBP-1), foram mostrou ser directamente associada com o risco de cancro colorectal [9], [10]. Enquanto isso, a observação de uma correlação ecológica entre os distúrbios de secreção adipocinas e traços da síndrome metabólica, tem gerado uma série de estudos epidemiológicos da associação entre as adipocinas importantes, especialmente entre a adiponectina (ADIPOQ) e seus receptores (ADIPORs) com obesidade e resistência à insulina, o que mostrou que circulam nível ADIPOQ foi significativamente negativamente, enquanto que o nível ADIPORs foi positivamente associado com traços da síndrome metabólica [11], [12].
Dada a associação entre as características da síndrome metabólica e risco de câncer colorretal e o papel fundamental da
ADIPOQ
e seus genes de receptores no desenvolvimento de obesidade e resistência à insulina, o interesse emergente foi focada no papel da
ADIPOQ
e seus genes de receptores da carcinogênese colorretal. In vitro, a ADIPOQ apresentado a tendência de inibição do crescimento e indução de apoptose em linhas celulares de cancro colorrectal [13]. In vivo, os camundongos com interrupções no ADIPOQ soro desenvolveram tumores mais intestinais [14]. Recentemente, várias linhas de evidências têm demonstrado a associação inversa entre ADIPOQ soro eo risco de câncer colorretal [15], [16], [17]. Em um estudo caso-controle prospectivo, aninhado, os homens no quintil mais alto ADIPOQ foram encontrados para ter um risco 68% menor de câncer colorretal em comparação com os homens no quintil mais baixo (risco relativo [RR], 0,42; 95% intervalo de confiança [IC ], 0,23-0,78) [18]. O papel anti-cancro de ADIPOQ foi induzida principalmente pelos seus receptores, que foram demonstrados para reprimir linhas celulares de cancro do cólon (incluindo HCT116, HT29 e LoVo) proliferação através ADIPOR1- e -R2-mediada 5′-AMP proteína quinase -activated (AMPK) . Além disso, knockdown de
ADIPORs
poderia aliviar o efeito supressor de ADIPOQ sobre o crescimento de células cancerígenas do cólon [19]. Além disso, a sobre-expressão de ADIPORs poderia activar peroxissoma do receptor-A (PPAR-a) activado por proliferador, que foi relatada para jogar um papel na inibição da FAS e a activação de crescimento epidérmico família do receptor do factor para promover a formação de cancro [20], [21 ]. Além disso, estudos epidemiológicos recentes também detectada expressão elevada de ADIPORs em carcinomas colorectais do que no tecido gastrointestinal normais [22].
Vários polimorfismos em
ADIPOQ
e seus genes de receptores têm sido demonstrados para influenciar o expressão destes genes e o subsequente risco do cancro [23], [24], [25]. Kaklamani et ai. mostrou que alguns polimorfismos do
ADIPOQ
e seus genes de receptores foram associados com o cancro da mama [26], o câncer de próstata [27] e cancro colorectal [28] de risco em caucasianos. No entanto, até à data, estes têm sido poucos os estudos que abordam o papel das variações genéticas no
ADIPOQ
e seus genes de receptores como factores de susceptibilidade ao câncer na população chinesa. Por isso, foi realizado um estudo de caso-controle de dois estágios para avaliar sistemicamente polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) de
ADIPOQ
e seus genes de receptores como um preditor de risco de câncer colorretal em população chinesa.
resultados
características da população do estudo
a Tabela 1 apresenta as características dos indivíduos incluídos no estudo caso-controle de dois estágios. Não houve diferenças significativas na distribuição da idade, sexo, uso de álcool e IMC entre casos e controles em qualquer estágio. A idade média era de 58 anos (intervalo interquartil, 48-67 anos) e 56 anos (intervalo interquartil, 46-67 anos de idade) nos controles na primeira e segunda fase, respectivamente, em comparação com 58 yeas de idade (intervalo interquartil , 51-67 anos de idade) e 59 yeas de idade (intervalo interquartil, 49-68 anos de idade) em casos, respectivamente. Mais fumantes foram observados nos casos do que nos controles (odds ratio [OR] CI = 1,95, 95%: 1,56-2,45 na análise combinada). Além disso, mais casos possuía história familiar de câncer em ambos os estudos de caso-controle (OR = 1,78 IC 95%: 1,34-2,38 na análise combinada).
Risco associado ao indivíduo
SNP
Desde 2 SNPs em
AdipoR1 Comprar e 1 SNP em
AdipoR2
foram falhou na concepção de iniciadores da PCR na primeira etapa, um total de 24 SNPs tag no
ADIPOQ
e os seus genes de receptores foram analisados e, por conseguinte, o ponto de corte de
P
valor foi definido como 0,002 para multi-comparador na primeira etapa. Todos os SNPs montado o equilíbrio de Hardy-Weinberg entre os controles. A frequência do alelo T foi de 0,55 e 0,54 no controlo na primeira e segunda fase, em comparação com os 0,46 e 0,46 nos casos, respectivamente. Na primeira etapa, uma associação potencial foi encontrado (
P
0,001). O
ADIPOQ
rs1063538 genótipo CC foi associado com aumento do risco de câncer colorretal, com um OR de 1,94 (IC 95%: 1,37-2,74) em comparação com o genótipo TT. No estudo de validação (fase 2), o rs1063538 também foi associado com aumento do risco de câncer colorretal, com um OR de 1,91 (IC 95%: 1,23-2,95) para CC vs. genótipo TT. análise combinada de 2 estudos mostraram que rs1063538 foi significativamente associada com o aumento do risco de câncer colorretal. Indivíduos que transportam genótipo rs1063538 CC ou alelo C apresentou 1,94 vezes (IC 95%: 1,48 vezes, para 2,54 vezes) e de 1,79-vezes (IC 95%: 1,43 vezes, para 2,25 vezes) aumento do risco do cancro colo-rectal em comparação com aqueles cujas realizada genótipo TT, respectivamente (Tabela 2). Para testar o poder estatístico do nosso tamanho da amostra, foi calculado o poder de detectar uma OR de 1,90 no primeiro erro de 0,002 no teste de dois lados usando uma prevalência de 0,55 (prevalência de T alelo rs1063538 nos controles). Os resultados foram como se segue: estudo combinado, potência = 0,99; Estágio 1, potência = 0,94; e Fase 2, potência = 0,81. Resultados para SNPs não significativos são apresentados na Tabela S1.
Two-factor de interação gene-ambiente e análises de subgrupos
Para explorar as interações potenciais entre
ADIPOQ
rs1063538 e IMC, estado, uso de álcool e história familiar de câncer de fumar, foi realizada de dois fatores interação gene-ambiente análises de regressão logística na população combinada. Os resultados são apresentados na Tabela 3. Os fumantes que transportam CC genótipo aumento significativo do risco de câncer colorretal quando comparado com os não-fumantes que transportam genótipo TT, com um OR de 4,52 (IC 95%: 2,78-7,34). Os indivíduos com história familiar de câncer abrigar CC genótipo também foi associado com aumento significativo do risco de câncer colorretal, com um OR de 3,18 (IC 95%: 1,73-5,82) em comparação com indivíduos sem história familiar de câncer levando genótipo TT. usuários de álcool com genótipo CC apresentou 1,97 vezes (IC 95%: 1,27 vezes para 3,04 vezes) maior risco de câncer colorretal em comparação com NUNCA bebedores que transportam genótipo TT. Também realizamos análises estratificadas para
ADIPOQ
rs1063538 para explorar o papel do polimorfismo em diferentes população subgrupo. Em não fumantes, CC genótipo aumentou significativamente o risco de câncer colorretal, com um OR de 1,74 (IC 95%: 1,26-2,40) em comparação com o genótipo TT. Indivíduos sem história familiar de câncer abrigar genótipo CC de rs1063538 exibiram um aumento significativo do risco de câncer colorretal, com um OR de 1,95 (IC 95%: 1,44-2,65) em comparação com o genótipo TT. Em usuários nunca álcool, CC genótipo aumentou significativamente o risco de câncer colorretal, com um OR de 1,87 (IC 95%: 1,35-2,58), quando comparado com o genótipo TT. Além disso, no subgrupo de IMC 25 kg /m
2, os indivíduos com genótipo CC de rs1063538 foi significativamente associada com o aumento do risco de câncer colorretal, com um OR de 2,05 (95% CI: 1,45-2,90) em comparação com indivíduos portadores de TT genótipo (Tabela 4).
interações Multifactor gene-ambiente, por Classificação e Regressão árvores
Foram utilizados os dados na primeira fase, amplamente explorar o potencial gene-ambiente interações, utilizando classificação e Árvores de Regressão (CART). Na análise CART, a divisão inicial do nó raiz estava fumando status, e nunca fumantes tiveram prevalência de câncer muito maior do que nunca fumaram (
P Art 0,05), sugerindo que tabagismo foi o fator mais forte na colorectal suscetibilidade ao câncer. Uma inspecção mais aprofundada da estrutura de árvore de classificação indicado consistentemente
ADIPOQ
rs1063538 foi o desdobramento mais forte, independentemente de tabagismo. A combinação de nunca fumar e do genótipo rs1063538 CC apresentou o maior risco de câncer colorretal, com uma taxa de paciente de 82,4%, enquanto a combinação de nunca ter fumado e alelo rs1063538 T apresentou o menor risco de câncer colorretal, com uma taxa de paciente de 41,4%. Em todos os tempos fumantes portadores do alelo rs1063538 T,
AdipoR1
rs1539355 foi o mais forte efeito associado fator, ea combinação de nunca fumar, alelo rs1063538 T e alelo rs1539355 G exibiu um segundo mais alto risco de câncer colorretal, com um 66,7% taxa de paciente. Na nunca fumantes que transportam
ADIPOQ
rs1063538 genótipo CC, o IMC foi o efeito mais forte fator associado, ea combinação de nunca ter fumado, genótipo rs1063538 CC e não excesso de peso apresentou uma taxa de paciente de 52,4% (Figura 1). (Curva receiver operating characteristic [ROC] em um 10 vezes validação cruzada para a análise CART é fornecido como Figura S1 Área sob a curva foi de 0,62, 95% IC:. 0,59-0,66,
P . 0.001)
nós terminais mostrar número de participantes na Fase 1. status da doença foi classificada como casos (1) e controles (0)
efeito combinado de fatores de risco
para aumentar o poder estatístico, os dados de análise combinada foram usados para detectar o efeito combinado de factores de risco identificados pelo carrinho. Desde
AdipoR1
rs1539355 genotipagem interações apresentados com outros fatores, embora o principal efeito desse polimorfismo não foi detectado na primeira fase, ainda conduzida para este SNP na Fase 2 (Tabela S2), que iria ajudar a fornecer de dados para análise do efeito do factor de dosagem na população combinada. Para avaliar o efeito combinado de multifatorial associada ao risco de câncer colorretal, que resumiu o número de fatores de risco do tabagismo,
ADIPOQ
rs1063538, IMC e
AdipoR1
rs1539355 em cada indivíduo e analisou o resultado o risco de câncer colorretal. Para os fatores ambientais, tabagismo e BMI≥25 kg /m
2 foram escolhidos como fatores de risco. Os genótipos de
ADIPOQ
rs1063538 e
AdipoR1
rs1539355 foram categorizados como variáveis binárias de acordo com os resultados parciais de CART, CC ou seja, rs1063538 e rs1539355 AG ou genótipo GG eram vistos como fatores de risco. A divisão da população total em quatro subgrupos, com base no número de factores de risco. Encontramos uma associação significativa efeito de dosagem para o aumento do risco de câncer colorretal, com um número crescente de fatores de risco (
P Compra de tendência 0,0001). Em comparação com indivíduos sem fator de risco, os indivíduos com 1, 2 e pelo menos 3 fatores de risco apresentaram um gradiente de aumento do risco de câncer colorretal com RUP de 1,18 (95% CI: 0.89-1.58), (IC 95%: 1,38-2,54) 1,87 e (IC 95%: 2,75-7,01) 4,39., respectivamente (Tabela 5)
Discussão
Este estudo avaliou sistematicamente a associação entre um conjunto de polimorfismos no
ADIPOQ
e seus genes de receptores e câncer colorretal. A maior descoberta foi a associação significativa de um polimorfismo no
ADIPOQ
(rs1063538) com o aumento do risco de câncer colorretal. Além disso, o papel carcinogênese colorretal de
ADIPOQ
rs1063538 foi modificado por fatores ambientais, como tabagismo, histórico familiar de câncer, uso de álcool e IMC, e o efeito combinado de vários fatores potenciais, incluindo o tabagismo,
ADIPOQ
rs1063538, IMC e
AdipoR1
rs1539355, mostrou um efeito dose significativa em uma abordagem de interação gene-ambiente.
em nossa análise principal efeito, o
ADIPOQ
rs1063538 foi o único SNP apresentou associação estatisticamente significativa com o aumento do risco de câncer colorretal. Esta associação é biologicamente plausível. Em primeiro lugar, o
ADIPOQ
e seus genes de receptores foram recentemente encontrada para desempenhar um papel na carcinogénese especialmente em doenças malignas associadas à obesidade. Tem sido demonstrado que ADIPOQ poderia suprimir o crescimento de algumas células malignas através da regulação da AMPK ou via-β-catenina Wnt, ambos os quais exerceu efeito na carcinogénese [29]. ADIPOQ pode também contribuir para anticancro através da promoção de apoptose. níveis ADIPOQ têm sido associados com a activação de enzimas apoptóticas na cascata das caspases, que conduziu à morte celular, a modulação da expressão de vários genes relacionados com a apoptose em células mielomonocíticas, e redução de neovascularização de tumores [30]. exposição ADIPOQ alto nível tem sido comprovada para inibir a proliferação de linhas celulares de cancro colorrectal [13], ao passo que, knockout de
ADIPOQ
poderia promover o crescimento do tumor em ratos, reduzindo infiltração de macrófagos [31]. Além disso, estudos epidemiológicos têm encontrado subexpressão de ADIPOQ existente em uma ampla variedade de cânceres humanos, que apoiaram fortemente a importância da ADIPOQ na supressão da iniciação do câncer e desenvolvimento [32]. Em segundo lugar, os SNP rs1063538 está localizada dentro da região 3 ‘UTR de
ADIPOQ
e estudos anteriores demonstraram que os polimorfismos em 3’UTR apresentou impacto significativo no nível ADIPOQ. Por exemplo, rs6773957 e rs3774261 foram encontrados para ser os SNPs mais fortemente associados em americano em um genoma escala ligação e de associação scans de nível ADIPOQ, e ambos dos quais estão localizados na 3’UTR deste gene e capturado por rs1063538 [33 ]. Dado o importante papel de ADIPOQ na regulação da proliferação celular e apoptose [34], [35], e o papel da 3’UTR na regulação da expressão do gene, inferiu-se que polimorfismos em 3’UTR de
ADIPOQ
pode desempenhar um papel na carcinogénese colorrectal, o que foi documentado por Kaklamani et ai. [26]. Posteriormente, podemos inferir que rs1063538 poderia influenciar o risco de câncer colorretal pelo seu desequilíbrio de ligação com outros SNPs no 3’UTR para regular a expressão de
ADIPOQ
, no entanto, manteve-se a ser confirmada. Além disso, é também provável que este é meramente um SNP SNP etiqueta que está em desequilíbrio de ligação com o SNP causal real. O SNP causal real pode estar localizado na região de codificação e afetar a função das proteínas ao nível pós-tradução [36].
Além do principal efeito modesto de
ADIPOQ
rs1063538, também observamos efeito significativo das interações gene-ambiente, que eram capazes de amplificar o efeito modesto da única variante genética, e aumentar o poder preditivo. Em dois fatores analisa a interação gene-ambiente e análises estratificadas, descobrimos que indivíduos transportando
ADIPOQ
rs1063538 CC genótipo apresentaram risco de câncer colorretal diferente em diferentes status tabagismo, história familiar de categorias de câncer, o uso de álcool e IMC. Consistentemente, foi também detectada uma interação significativa entre os
ADIPOQ
rs1063538,
AdipoR1
rs1539355, tabagismo e IMC na análise CART. Embora interações estatísticas não implicam necessariamente interações biológicas, várias linhas de evidência sugerem que nossos achados podem ser biologicamente plausível. Como um dos principais adipocitoquinas, ADIPOQ actua por ligação cruzada com os seus receptores, e AdipoR1 AdipoR2 [32]. Anteriormente estudos documentaram que ADIPOQ reprimido linhas de células de cancro do cólon (incluindo HCT116, HT29 e LoVo) proliferação através ADIPOR1- AMPK e -R2-mediada, enquanto que, de knockdown ADIPORs tais como AdipoR1 aliviado o efeito supressor de ADIPOQ sobre o crescimento de células cancerosas [19]. Embora o
AdipoR1
rs1539355 não foi identificada SNP funcional, esse polimorfismo também foi encontrado para ser associado com a redução da resistência à insulina, sugerindo que pode haver alguma ligação entre este polimorfismo e expressão de genes ou função [37]. Além disso, os
AdipoR1
rs1539355 poderia destacar o papel da
ADIPOQ
SNPs na obesidade genótipo [38]. Uma vez que tanto a resistência à insulina e obesidade genótipos foram demonstrados associado com o risco de câncer colorretal, era razoável acreditar as interações entre as variantes do
ADIPOQ
e seus genes de receptores desempenhado um papel na carcinogênese do câncer colorretal [39]. Além das interações dentro
ADIPOQ
via de sinal, a função de
ADIPOQ
e seus genes de receptores também foi modificado por alguns fatores ambientais de risco de câncer colorretal associados, tais como tabagismo e IMC. Estudos anteriores têm demonstrado que a obesidade pode potencialmente influenciar a activação de
ADIPOQ
e seus genes de receptores e o risco de cancro posterior [40], [41]. Por exemplo, Tang et al. indicou que uma associação positiva de variantes genéticas de
ADIPOQ
com câncer de próstata foi limitada a pessoas que estavam com excesso de peso [42] e Petridou et al. mostrou que as mulheres com IMC elevado e baixa ADIPOQ plasma tiveram 6,5 vezes maior risco de cancro do endométrio em comparação com as mulheres com IMC normal e concentrações mais elevadas ADIPOQ [43]. exposição à fumaça também foi demonstrado para inibir a expressão de mRNA de
ADIPOQ
nos adipócitos. Quando comparado com nenhum, a exposição à fumaça ambiental do tabaco de mais de 10 cigarros por dia foi associado com nível ADIPOQ baixo [44]. Por outro lado, cessação de fumar foi encontrado para ser associado com o aumento do nível de plasma ADIPOQ [45], [46]. A história familiar de câncer e uso de álcool também foram estabelecidos os fatores de risco para o câncer colorretal, no entanto, os estudos para a influência desses dois fatores na expressão de
ADIPOQ
e seus genes receptores eram limitadas. Embora não haja ainda algum mecanismo deve ser abordada foi, as interações podem revelar uma promoção biológica desses fatores.
Há algumas limitações em nosso estudo. Em primeiro lugar, este estudo de caso-controle de dois estágios é do hospital-based e viés de seleção pode existir, uma vez que os controles eram de uma população exame de saúde que não podem ser representantes ideais de população geograficamente combinados em exposição ambiental similar. No entanto, os controles vieram da mesma região, com casos e foram amostrados aleatoriamente, o que pode reduzir o efeito do viés de seleção. Em segundo lugar, a informação de IMC dos pacientes é obtido no primeiro diagnóstico de cancro colorrectal. Desde carcinogênese é um consumos complexos e crónicas, a recente IMC pode trazer algum viés para a associação de obesidade e risco de câncer colorretal. No entanto, um estudo recente grande caso-controle publicado no Journal of the National Cancer Institute indicou que o IMC com base em medidas recentes auto-relatados relataram resultado semelhante com o IMC a partir de estudos prospectivos em risco de cancro colorectal [47], [48], [49] . Portanto, nós pensamos recente IMC em nosso estudo não trará viés substancial para os resultados do nosso estudo. Em terceiro lugar, existem alguns dados que faltam em exposição ambiental em ambos os estudos de caso-controle, tais como história familiar de câncer, já que os participantes não poderia dar informações precisas sobre itens relacionados durante a entrevista. Portanto, concluímos analisa a interação gene-ambiente na população total, o que pode trazer mais poder estatístico para os resultados e reduzir o viés causado por falta de dados. Em quarto lugar, o tamanho da amostra não é grande o suficiente para uma análise estatística, especialmente para algumas análises de subgrupo, o que pode trazer algum impacto para a estabilidade e fiabilidade dos resultados. Assim, mais estudos com mais tamanho da amostra, mais SNPs e explorar funcionais são necessários para identificar o papel de
ADIPOQ
interações familiares gene e gene-ambiente na carcinogênese colorretal.
Em resumo, este é o primeiro estudo para avaliar sistematicamente o impacto das variantes genéticas da linha germinal em
ADIPOQ
e seus genes de receptores e interações gene-ambiente sobre o risco de câncer colorretal em chinês. Encontramos um SNP em
ADIPOQ
(rs1063538) foi associado com aumento do risco de câncer colorretal e as potenciais interações gene-ambiente pode desempenhar papel mais importante na regulação do risco de câncer colorretal. A identificação de novos marcadores genéticos de susceptibilidade de etiologia do câncer colorretal não só nos ajudará a entender a biologia da carcinogênese colorretal, mas também pode ser integrado com o conhecimento clínico, epidemiológico e genético conhecido para nos ajudar a melhorar a previsão risco de câncer colorretal.
Materiais e Métodos
Ética declaração
o estudo foi consentimento informado obtido de todos os participantes finais e aprovados pelo conselho de revisão de Tongji Medical College da Universidade Huazhong da Ciência e Tecnologia.
Os participantes do estudo
Um projeto de estudo de caso-controle de dois estágios foi utilizado nesta investigação. O primeiro estudo de caso-controle foi usado para avaliar a
ADIPOQ
e seus genes de receptores de polimorfismos em relação ao risco de câncer colorretal, e depois para validar as associações promissores na segunda população independente. Na primeira etapa, os casos foram recentemente diagnosticados com câncer colorretal entre 1 de Janeiro de 2007 e 31 de novembro de 2009 na Oitava Hospital, em Wuhan, sem um diagnóstico de câncer anterior, e vivo no momento da entrevista. Recrutamento para a Fase 2 ocorreu entre 1 de Janeiro de 2009 e 31 de agosto de 2010 em Taihe Hospital em Shiyan, e os incluindo critérios foram mesmo com os casos recrutados na fase 1. Os controles foram selecionados a partir da população exame de saúde no mesmo hospital durante o mesmo período e muitas vezes combinados com casos por idade (± 5 anos) e sexo em cada fase. Nenhum dos controles tinha qualquer história pessoal de câncer, doenças digestivas, hipertensão ou diabetes no momento da doação de sangue, que foi verificado com um questionário preenchido por cada controle saudável. amostra de sangue e informações pessoais em relação ao sexo, ano de nascimento, tabagismo, uso de álcool, peso recente, altura e histórico familiar de câncer foram coletadas de cada participante, e informações adicionais sobre a idade no momento do diagnóstico do cancro colo-rectal e características clínicas foi gravado a partir de casos. De participantes elegíveis, 470 casos (94,0%) e 458 controles (91,6%), e 314 casos (87,22%) e 355 controles (98,61%) completaram entrevistas pessoais e doaram amostras de sangue em primeira e segunda fases, respectivamente.
SNP selecção
um total de 100 marcadores SNP com uma frequência menor alelo (MAF) ≥0.1 de
ADIPOQ
e seus genes de receptores foram transferência a partir HapMap (http: //www.hapmap.org/) usando fase 1 e fase 2 Data Release 24 (Build 36.3) para a população chinesa (Han chinesa de Pequim-CHB). Tag SNPs foram escolhidos para cada gene usando Tagger em Haploview (https://www.broadinstitute.org/haploview/haploview). Utilizou-se o modo de pares e selecionou um conjunto mínimo de marcadores, de modo a que todos os alelos a serem capturados seriam correlacionadas em um r
2≥0.8 com um marcador nesse conjunto. O
ADIPOQ
,
AdipoR1
e
AdipoR2
rendeu 10, 9 e 8 tag SNPs, respectivamente. (Informações detalhadas são apresentados na Tabela S1).
Polimorfismo análise
O DNA genômico a partir de amostras de sangue periférico foi isolado utilizando o kit de purificação Genomic DNA Blood (Tiangen Biotech, Beijing, China) seguindo o protocolo do fabricante . A genotipagem foi realizada em duas fases.
Na primeira fase, foi usado o plataforma Sequenom MassARRAY (Sequenom San Diego, CA, EUA) para genotipagem elevado rendimento e de criação de ensaio [50]. A genotipagem foi realizada utilizando química em Iplex uma matriz de laser assistida dessorção /ionização de tempo-de-voo espectrómetro de massa (MALDI-TOF). ensaios SNP multiplex foram projetados usando software SPECTRODESIGNER. As reacções de PCR, as condições dos ciclos e reacções de extensão de pós-PCR foram realizadas como o protocolo do fabricante. Os produtos de reacção Iplex foram tratados com a resina SpectroCLEAN (Sequenom) para remover os sais e manchada sobre uma SpectroChip 384, e, em seguida, processadas e analisadas pelo espectrómetro de massa MALDI-TOF. Genótipos foram chamados usando software MassARRAY Typer 4.0 [51]. Para cada placa de 384 poços, 20 amostras foram duplicadas e 4 poços foram arquivados com H
2O (em branco) à contaminação e confiabilidade do sistema de verificação cruzada. Uma placa inteira foi considerado como tendo falhado se: (i) não há SNPs tinha passado taxa de chamada de 80%; e /ou (ii) se a taxa de sucesso dos controlos duplicados foi 99,5% e que a peça em bruto de 90%; e /ou (iii) a taxa de sucesso do cheque em branco sozinho tinha sido 75%. SNPs foram removidos a partir da análise, quando: (i) que não foram chamar em, pelo menos, 80% dos pacientes e controles; e /ou (ii) que eram monomorphic, como estes são uninformative; e /ou (iii) suas freqüências genotípicas desviou de Hardy-Weinberg (HWE) expectativa, provavelmente devido a erros de genotipagem [52].
Na segunda etapa, os polimorfismos foram avaliados usando o 5′-nuclease ( Taqman) ensaio (Applied Biosystems, Foster City, CA, EUA). Primers e sondas foram desenhadas por Primer Express 3.0 (Applied Biosystems). As reacções foram terminadas e lidas de um sistema de detector de sequência TaqMan 7900 HT (Applied Biosystems). mistura de amplificação (12,5 ul) da reacção em cadeia da polimerase continha 50 ng de ADN, 900 nM de cada um para a frente e reverso do iniciador, 300 nM de cada sonda específica, e 6,25 uL de Taqman Universal PCR Master Mix (Applied Biosystems, Foster City, CA) . A amplificação foi realizada sob as seguintes condições: 95 ° C durante 10 min, seguido por 45 ciclo de 94 ° C durante 30 s e 62 ° C durante 1 min. Os dados foram analisados usando Allelic Programa de Discriminação (Applied Biosystems). A taxa de chamada foi de 99,2%. Um total de 10% das amostras foram genotipados em duplicado e mostrou concordância de 100%.
A análise estatística
χ de Pearson
2 teste foi utilizado para comparar as diferenças na distribuição das variáveis categóricas (sexo