Abstract

Tocotrienols foram mostrados muitas funções biológicas, como antioxidante, anti -Câncer, mantendo a fertilidade e a regulação do sistema imune e assim por diante. Neste estudo, depois de se alimentar com fracção rica em tocotrienol a partir de óleo de palma (TRF) durante 2 semanas, os ratinhos nus Balb /c foram inoculadas células de cancro do cólon humano SW620 e, em seguida, continuou a alimentar TRF durante 4 semanas. No término dos experimentos, xenoenxertos foram removidos e determinou-se a expressão de Wnt-proteína vias relacionadas por imuno-histoquímica ou transferência de Western. tecidos do fígado foram homogeneizou para determinar os níveis de atividade de enzimas antioxidantes ou malondialdeído (MDA). Os resultados mostraram que TRF inibiu significativamente o crescimento de xenoenxertos em ratinhos nus. TRF também afectou a actividade de enzimas antioxidantes no tecido do fígado de ratos. Estas mudanças foram, em parte, contribui para a activação das vias de Wnt ou afectando a sua proteína relacionada. Assim, estes achado sugere que o efeito anticancerígeno potente do TRF está associada com a regulação de vias de sinalização Wnt

Citation:. Zhang JS, Zhang SJ, Li Q, Liu YH, Ele N, Zhang J, et al . (2015) tocotrienol-Rich Fraction (TRF) suprime o crescimento de xenoenxertos do cancro do cólon humano em ratinhos Balb /C Ratos nu pelo Wnt Pathway. PLoS ONE 10 (3): e0122175. doi: 10.1371 /journal.pone.0122175

Editor do Academic: Terence Lee, da Universidade de Hong Kong, Hong Kong

Recebido: 12 de novembro de 2014; Aceito: 07 de fevereiro de 2015; Publicação: 25 de março de 2015

Direitos de autor: © 2015 Zhang et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Dados Disponibilidade: Todos os dados são dentro do papel

Financiamento: Este projecto foi apoiado pela National Science Foundation Natural da China (No. 30771801; 81472968).. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:. A fração rica em tocotrienol a partir de óleo de palma (TRF) foi obtido como um presente amável do Dr. Yu BingYun de Palm nutracêuticos Sdn. Bhd, da Malásia. Isto não altera a adesão dos autores para as políticas PLoS ONE em dados e materiais de compartilhamento.

Introdução

O cancro do cólon é uma das neoplasias mais comuns e ameaça a saúde humana no mundo. De acordo com referências disponíveis, a grande maioria de cancro do cólon é acompanhada pela activação da via de sinalização Wnt [1-3]. via de sinalização Wnt é uma rede complicada interacção proteína, que tem encontrado no progresso do desenvolvimento embrionário e o cancro. Simultaneamente, tem participante nos processos fisiológicos normais de adultos [3]. Quaisquer alterações na composição da via de sinalização Wnt conduzirá à anormal de transdução de sinal, por sua vez, para a transformação maligna de células, e, finalmente, o que provocou a ocorrência de tumores malignos. via de sinalização Wnt consiste principalmente de uma série de proteínas tais como o factor extracelular (Wnt), receptores de transmembrana Frizzled (Frz), β-catenina e factor de células T (TCF), etc. [4]. Activado interacções de sinal de Wnt com a proteína citoplasmática, β-catenina pode ficar a estabilidade e a acumulação no citoplasma. A β-catenina acumulado depois entra no núcleo cooperationg com o TCF para activar a transcrição de genes alvo, tais como ciclina Dl e c-myc, etc [4]. Assim, é de salientar que diferentes estágios nas vias de sinalização Wnt têm diferentes fatores regulatórios [1, 5].

Os ingredientes ativos de plantas naturais, sendo a primeira escolha possuem a característica de matar células cancerosas e nenhum dano na as células normais. Os tocotrienóis, como um ingrediente activo extraído de árvores e de grãos de palma, têm uma potência potencial para inibir o crescimento de células de tumor [1, 2, 6-9]. Na fração rica em tocotrienol a partir de óleo de palma (TRF), 23,5% deles são totais tocotrienóis, que é de 10,7% para γ-tocotrienol. Em um estudo anterior, TRF poderia induzir uma via de morte independente de p53 em células RKO câncer de cólon humanos [10]. Eitsuka et ai, relataram que a vitamina E, que contém elevadas concentrações de tocotrienol (δ-tocotrienol) pode inibir o crescimento de células de adenocarcinoma do cólon humano por sub-regulação da actividade da telomerase [11]. Xu W et al. observados a função de γ-tocotrienol em células HT-29 do cancro do cólon humano para encontrar que γ-tocotrienol suprimido um componente importante nas vias de sinal de Wnt-a β-catenina /Tcf em células HT-29 [12]. Além disso, tocotrienóis ou TRF foram relatados vários tipos de células de carcinoma malignas

in vitro

e

in vivo

[1, 8, 9, 13-15]. y-tocotrienol poderia inibir o crescimento de células de cancro gástrico humano e que a capecitabina chemosensitize num modelo de murganho de xenoenxerto de através da modulação da via de NF-kB [15]. TRF suprimiu o crescimento de células de tumor, reduzindo revascularização [13] e a expressão do gene do tumor de cancro da mama MCF-7 de células de inoculação para os ratinhos nus [14]. Quando comparado com os ratinhos de controlo, a expressão da proteína transmembranar-1 gene de interferão-indutível e o gene precursor da glicoproteína CD59 foi obviamente regulado para cima nos ratinhos tratados com TRF.

Os nossos estudos anteriores demonstraram que δ -tocotrienol poderia induzir uma morte paraptosis-como em células SW620 câncer de cólon, e têm efeitos de vias de Wnt sinalização [2]. Assim, a hipótese de que a função inibitória semelhante de tocotrienol pode ser existentes em um estudo animal. Neste estudo, foram para determinar se TRF inibiu o crescimento de células de cancro do cólon humano em ratinhos nus Balb /c e como TRF afectadas as vias de sinalização Wnt. Estes resultados nos ajudam a entender o mecanismo de tocotrienóis na propriedade anticâncer.

Materiais e Métodos

Ética Declaração

O protocolo experimental animal foi aprovado pela Comissão do ética de Experimentação animal de Tianjin Centro de Controle e Prevenção de Doenças (autorização de número: TJCDC0111). Este estudo foi realizado em estrita conformidade com a República Popular do Regulamento de Animais de Laboratório China.

produtos químicos e reagentes

Os reagentes para a determinação da hemoglobina, glóbulos vermelhos, reagentes células brancas do sangue, linfático, monócitos , neutrófilos, eosinófilos e basofílico foram adquiridos a partir de Sysmex. Os kits de detecção de índice de oxidação foram de Nanjing Jiancheng Bioengenharia Institute (Nanjing, China). A solução PRO-PREP extração de proteínas foi de Pequim SBS Genetech Co., Ltd (Pequim, China).

cultura celular

células SW620 de carcinoma do cólon humano foram comprados a partir do Instituto do Câncer da Academia Chinesa de Ciências Médicas (Pequim, China). As células foram cultivadas em meio L-15 contendo 2 mmol /L de L-glutamina e 2 g /L de bicarbonato de sódio (Gibco), suplementado com 10% de soro fetal bovino (FBS, Gibco), antibióticos (100 U /mL de penicilina e 100 ug /mL de estreptomicina) a 37 ° C numa atmosfera humidificada com 95% de ar e 5% de CO

2. Antes de 90% de confluência, as células foram passadas utilizando tripsina a 0,25% contendo 0,02% de EDTA.

Animal tratamento

Fifty masculino (17-22g) e cinquenta mulheres (14-19g) BALB /c nu ratinhos (6-8 semanas de idade) foram comprados de Vital River Laboratory animal Technology Co., Ltd (Pequim, China). Os ratinhos foram mantidos a adaptar-se às condições durante 5 dias antes de começar a experiência. temperatura ambiente animal é cerca de 20-25 ° C, umidade relativa do ar é de cerca de 40-70%. Os ratos que bebem água, roupa de cama e alimentação gaiolas foram autoclavados antes dada aos ratos

Os ratos foram divididos aleatoriamente em 5 grupos (20 por grupo) por peso do corpo, igualmente em homens e mulheres, como seguindo grupos:. Controle negativo grupo, grupo modelo de tumor, e três doses da fracção rica em tocotrienol (TRF, palm nutracêuticos Sdn. Bhd., Malásia) a partir de grupos de óleo de palma. Os ingredientes em TRF são mostrados na Tabela 1. TRF foi dissolvido em óleo de soja. Três doses de 5, 10 e 20 mg /kg de peso corporal (p.c.) de TRF que foram equivalentes a y-tocotrienol foi dada a ratinhos por gavagem. Ao mesmo tempo, a administração por sonda grupo de controlo negativo e o grupo modelo de tumor com o óleo de soja solvente igual. Duas semanas mais tarde, os ratinhos, incluindo o grupo modelo de tumor foram injectados 0,1 ml da fase logarítmica de células SW620 (1,0 x 10

7 /mL) na axila de cada ratinho. Todos os animais foram observados diariamente e ainda receberam óleo TRF /soja durante 4 semanas. Durante o experimento, os animais livre tem comida e água. Depois de sangue total foi recolhido a partir do canto do olho olho em cada animal sob anestesia geral, todos os animais foram sacrificados por deslocamento cervical. O peso dos órgãos, incluindo fígado, baço e rim, e de tecido de tumor foram medidos. Peças de tecidos de tumores foram fixadas em formalina a 4%, subsequentemente desidratados e embebidos em parafina para a coloração imuno-histoquímica. Os tecidos tumorais de descanso foram congeladas em -80 ° C para a transferência de western.

Determinação do índice de oxidação nos tecidos do fígado

Os tecidos do fígado foram homogeneizou sob o banho de gelo. índices de oxidação incluindo superóxido dismutase (SOD), glutationa-Px (GSH-Px), o malondialdeído (MDA) e catalase (CAT) foram medidos no homogenato de fígado, tal como descrito num estudo anterior [16] ou de instruções de fabrico seguido.

imunohistoquímica

As lâminas de tecidos tumorais foram desparafinados em xileno e reidratadas através álcool graduado seguinte por coloração immunohistochemistrical como descrito um estudo anterior [17]. Resumidamente, os cortes foram aquecidos durante 10 minutos a 95-100 ° C, em 10 mmol /L de tampão citrato de sódio (pH 6,0). Três por cento de peróxido de hidrogénio foi adicionado para as secções para inactivar peroxidases endógenas e, em seguida, soro de cabra normal a 10% foram adicionados para bloquear a ligação não específica. Os cortes foram subsequentemente incubadas a 4 ° C durante a noite com anticorpos anti-b-catenina (Santa Cruz Biotechnology, Inc. Santa Cruz, CA) anti-Wnt-1, ou anti-c-myc, ou. As secções foram então incubadas com IgG biotinilada anti-rato ou anti-IgG de coelho (BIO-ZSGB Co., Ltd. Pequim, China) durante 30 min, seguido por estreptavidina conjugada com peroxidase (BIO-ZSGB Co., Ltd.) para 30 minutos. As secções foram coradas com 3, 3′-diaminobenzidina (DAB) durante 3 min e contrastadas com hematoxilina. O controlo negativo, com a omissão do anticorpo primário também seguido o mesmo protocolo. O número de células positivas foram contadas sob microscópio (200 ×). A proporção de células positivas foi calculada em cada grupo.

blotting

extracção de proteína total a partir de tecidos tumorais Ocidental usando tampão RIPA (Cell Signaling Technology, Inc. Danvers, MA) e transferência de Western foram realizadas como descrito anteriormente estudos [18, 19]. Foram utilizados os seguintes anticorpos primários: anticorpo anti-Wnt-1, anti-β-catenina, anti-c-myc, anti-ciclina D1, anti-MMP-7, anti-axina-2, anti-APC, anti-c- junho, ou anticorpos anti-p-actina (Santa Cruz Biotechnology, Inc.). Os anticorpos secundários foram correspondente ao tipo de anticorpo primário, utilizando anti-ratinho ou anti-IgG de coelho com peroxidase de rábano (HRP) -conjugate (diluição de 1: 1000, Cell Signaling Technology, Inc.). As bandas de proteína foram visualizadas por o kit de quimioluminescência aumentada. A quantificação das bandas de proteínas foram medidos por Imaging Systems FluorChem (Alpha InnoTech). Os dados foram padronizados pela β-actina.

A análise estatística

Todos os dados são expressos como média ± desvio padrão (DP). As diferenças entre o controlo e os grupos tratados foram avaliadas por ANOVA de uma via seguida pelo teste de Student-Newman-Keuls (SNK). Foram consideradas significativas as diferenças

P

. 0,05

Resultados

Efeitos do TFR sobre o peso corporal dos camundongos

Como mostrado na Fig. 1, TRF não afectou o peso corporal (masculino e feminino), em peso do meio e do terminal quando comparado com o grupo de controlo (

P

0,05). O índice de massa corporal também não apresentaram diferenças na terminação experimental entre os tratamentos TRF e grupos de controle (Tabela A em arquivo S1)

* p . 0,05, ** p 0,01, em comparação com o grupo controle positivo .

Efeitos do TRF sobre índices de hematologia e classificação dos leucócitos de ratos

Os índices de hematologia, incluindo glóbulos brancos, glóbulos vermelhos do sangue, hemoglobina, hematócrito, plaquetas sanguíneas e cogulation tempo foram determinadas neste estudo (Tabela B no Arquivo S1). Os resultados mostraram que à excepção de 20 mg /kg p.c. do grupo de TRF, TRF não afetou os índices de hematologia nos ratos do sexo masculino. TRF a 20 mg /kg p.c. grupo diminuiu significativamente o número de células brancas do sangue e aumento do tempo de cogulation em comparação com o grupo de controlo (

P

0,05). Além disso, o número de plaquetas no sangue em grupos TRF e modelo mostrou uma tendência para a diminuição quando comparado com o grupo de controlo negativo. Em camundongos fêmeas, TRF não encontraram quaisquer diferenças nos índices de hematologia entre os tratamentos TRF e grupos de controlo negativo. A classificação dos leucócitos foi também determinada neste estudo. Como mostrado na Tabela C no arquivo S1, não foram encontradas diferenças na classificação de leucócitos em ratos do sexo masculino entre os tratamentos TRF e grupos de controlo (

p Art 0,05). Em ratinhos fêmea, TRF, em doses de 5, 10 ou 20 mg /kg p.c. aumentou significativamente granulócitos neutrófilos ou linfócitos ou eosnophils quando em comparação com os ratinhos de controlo (

P

0,05).

Efeitos de TRF sobre o índice de oxidação no fígado de ratinhos

Após dada TRF durante 4 semanas, o índice de anti-oxidação ou oxidação tais como SOD, GSH-P, CAT e MDA no fígado foi determinado neste estudo. Como mostrado na Tabela 2, os níveis de SOD e GSH-Px não houve diferença entre os grupos positivos e negativos. No entanto, o nível de CAT no grupo positivo foi significativamente diminuída em comparação com o grupo negativo (

P

0,01 ou

P

0,05). As enzimas antioxidantes fígado (SOD, GSH-Px e CAT) foi aumentada em grupos TRF quando comparado com o grupo de controlo positivo. Nível de SOD, também aumentou significativamente a 20 mg /kg p.c. grupo de TRF em ratinhos nus do sexo masculino e 5 e 10 mg /kg p.c. de grupos TRF em camundongos nus femininos. conteúdo de GSH-Px significativa aumentou a 5 mg /kg p.c. do grupo de TRF em ratinhos nus femininos. nível de CAT foi significativamente aumentado a 5, 10 e 20 mg /kg p.c. grupo de TRF em ratinhos nus do sexo masculino e 5 e 20 mg /kg p.c. de grupos TRF em camundongos nus femininos. Nível de peróxidos de lípidos (MAD) foi significativamente aumentada às 10 e 20 mg /kg p.c. grupo de TRF em ratinhos nus do sexo masculino e 5 mg /kg p.c. de grupos TRF em camundongos nus femininos.

Efeitos do TRF sobre o peso do tumor de ratos

Ao término do experimento, xenoenxertos de cancro do cólon humano em camundongos BALB /c nus foram removidos e medido o peso neste estudo. Os resultados são mostrados na figura. 1. TRF diminuiu significativamente o peso de xenoenxertos quando comparado com o grupo de controlo positivo (

P

0,01). No entanto, TRF a 20 mg /kg grupo fêmea mostrou uma diminuição de peso xenoenxertos. Não foi encontrada diferença entre a alta dose de TRF e grupos positivos.

proteína Efeitos do TRF na expressão das vias Wnt relacionados em tecidos tumorais

A fim de determinar o possível mecanismo de TRF na inibição da xenoenxertos de crescimento, a expressão da proteína relacionada com Wnt via foi examinado neste estudo. A expressão de β-catenina, Wnt e c-myc em xenoenxertos foi explorada por imuno-histoquímica. Os resultados são mostrados nas Figs. 2-4. TRF diminuíram significativamente a expressão de β-catenina de uma forma dependente da dose (

P

0,05) (Fig. 2). TRF também diminuiu significativamente a expressão da proteína Wnt em xenoenxertos quando comparado com o grupo de controlo positivo (

P

0,05) (Fig. 3). Além disso, TRF também diminuiu a expressão da proteína de c-myc em xenoenxertos em Comparion com o grupo de controlo positice (

P

0,01) (Fig. 4). Curiosamente, exceto para fêmeas de camundongo, a expressão de c-myc em ratos do sexo masculino mostraram uma tendência crescente que acompanha com doses crescentes de TRF

A, grupo controle positivo.; B, 5mg /kg b.w .; C, 10 mg /kg p.c. D 20 mg /kg p.c. * P . 0,05, em comparação com o grupo controle positivo

A, grupo controle positivo; B, 5mg /kg b.w .; C, 10 mg /kg p.c. D 20 mg /kg p.c. * P . 0,05, em comparação com o grupo controle positivo

A, grupo controle positivo; B, 5mg /kg b.w .; C, 10 mg /kg p.c. D 20 mg /kg p.c. * P 0,05, ** p . 0,01, em comparação com o grupo de controlo positivo

De modo a confirmar os resultados de imuno-histoquímica de β-catenina, Wnt e c-myc em xenoenxertos, β-catenina, Wnt e a expressão da proteína de c-myc foi também examinada em xenoenxertos por western blotting. Os resultados são mostrados na figura. 5. TRF também diminuiu significativamente a expressão de -catenina β, Wnt e a proteína de c-myc em xenoenxertos quando comparado com o grupo de controlo positivo (

P

0,05). Estes resultados têm a mesma tendência que os achados com imuno-histoquímica. Para determinar ainda mais os possíveis mecanismos de TRF na inibição do crescimento do xenoenxerto, as vias de Wnt proteínas relacionadas, tais como ciclina D1, MMP-7, axina-2, c-jun, APC, sobrevivendo, a GSK-3β foi determinado neste estudo. Como mostrado nas Figs. 5 e 6, TRF diminuíram significativamente a expressão de ciclina D1 e survivina em xenoenxertos. TRF aumentou significativamente a expressão de Axin-2 e GSK-3β em xenoenxertos. No entanto, TRF mostraram uma tendência diferente da expressão da MMP-7 e C-jun em xenoenxertos entre macho e ratinhos fêmea em comparação com o grupo de controlo positivo

* p . 0,05, em comparação com o grupo de controlo positivo.

* p 0,05, em comparação com o grupo controle positivo

Discussão

o óleo de palma contém principalmente dois tipos de ácidos graxos comuns, ácido palmítico. (C16) e ácido oleico (C18), que têm sido usados ​​como um alimento natural ao longo de cinco mil anos. O óleo de palma não só pode ser fácil de digerir e de absorver, mas também é beneficiar ao corpo humano devido a alta glicerina sólido que se evitar que os alimentos de hidrogenação e mantê-lo estável para ser apropriado para o clima quente como um bom tempero para a massa e pão. Oleína de palma refinado tem rico em tocoferóis e tocotrienóis, os quais são isómeros de vitamina E. A vitamina E, uma vitamina solúvel em gordura, é extraído a partir de óleo de palma, contendo principalmente α-, β-, γ-, δ-tocotrienol, ou α- tocoferol. Assim, o óleo de palma é considerada como uma mistura de vitamina E, que é conhecido como fracções de petróleo ricas em tocotrienol palma (TRF). TRF tem muitas actividades biológicas, especialmente os tocotrienóis aterosclerose de coelhos reduzidas, que podem ser relacionadas com a actividade antioxidante do TRF [20], melhoria da inflamação pancreática e fibrose em ratos CP-induzidas DBTC [21], a prevenção ou tratamento de doenças em cães [22], os efeitos neuroprotectores [23], e actividades anti-câncer [2]. No nosso grupo de pesquisa, foi utilizado uma dose elevada de 20 mg /kg de TRF que foram equivalentes a 1,09 mg de vitamina E /ratinhos por dia. É mais baixa do que na ingestão diária de tocotrienóis (1,9-2,1 mg /dia /pessoa) para japonês [24] e Concluir dieta (10.3mg α-tocotrienol /dia /pessoa) [25]. Em nossos estudos anteriores, tocotrienóis mostrou um inibidor do crescimento de cancro do cólon SW620 e células HT29 [1, 2]. Embora uma relação dose-dependente do peso do tumor em ratinhos fêmea não se veja no presente estudo, foi observada inibição do crescimento do tumor em cada grupo. Pode ser baixa absorção no grupo de dose elevada de TRF durante algumas semanas de alimentação. Assim, neste estudo, os resultados mostraram que TRF tinha potencial inibição de células SW620 câncer de cólon humano inoculadas para ratos nus, incluindo efeitos sobre o crescimento do tumor, os níveis de antioxidantes no fígado, e os possíveis mecanismos.

actividades TRF aprimorados de antioxidação no

fígado

fatores prejudiciais ao ambiente, como a radiação ultravioleta, radiação ionizante, expostas a agentes cancerígenos químicos, etc. são expostos a organismos para produzir radicais livres, tais como os radicais reativas de oxigênio (ROS), espécies reativas de nitrogênio (RNS). Em condições patológicas, se radicais livres exceder as capacidades de defesa do sistema de defesa antioxidante, os radicais livres podem ser acumulado nos organismos para causar o stress oxidativo. resíduos de ácidos gordos poli-insaturados de fosfolípidos de biofilme são extremamente sensíveis aos radicais livres, o qual é o alvo mais importante para o ataque dos radicais de ocorrer a peroxidação lipídica [26, 27]. metabolitos de peroxidação lipídica pode atacar as bases de ADN, o que causou uma variedade de danos oxidativos de ADN para aumentar a instabilidade do genoma. Este é um comum de que os distúrbios de agregação de radicais livres e função antioxidante sempre acontecer em cancros [28]. Os tocotrienóis eliminado radicais livres para contra a peroxidação de lípidos. Os tocotrienóis exibiu uma forte capacidade antioxidante do que tocoferóis [29]. Quando tocotrienol e tocoferol foi dado a ratos ou pessoas, tocotrienol mostrou um efeito protector de oxidação, mas nenhum efeito sobre tocoferol [30]. No nosso estudo, a pequena quantidade de tocotrienóis e α-tocoferol é encontrada no TRF. No entanto, TRF mostraram diminuição xenoenxertos de cancro do cólon humano em ratinhos nus. a actividade antioxidante de tocotrienóis é conseguido através da indução de enzimas antioxidantes, tais como superóxido dismutase (SOD) e catalase (CAT) [31], coenzima reduzido II (NADPH), glutationa peroxidase (GSH-Px) [32]. Estas enzimas eliminar os radicais livres incluindo super oxigênio radical livre [33], proteger e manter a saúde do organismo. Neste estudo, TRF poderia aumentar a actividade de CAT em ratinhos. Ele sugeriu que as células SW620 poderia afetar o sistema de defesa antioxidante, fazendo os ratos do estresse oxidativo. TRF poderia aumentar as actividades de SOD e GSH-Px para extinguir os radicais livres, a fim de proteger as condições de saúde. Mas nós não explicar porque TRF também aumentou o nível de MDA que se reflete nos níveis de oxidação lipídica.

TRF inibida xenoenxertos em ratos por um regulamento de Wnt vias

vias Wnt desempenhar um papel importante em vários processos complexa de reacções bioquímicas nas células. Em células não proliferantes normais, tais como células epiteliais do cólon, os sinais de Wnt são fracos e apenas uma quantidade muito pequena de proteína β-catenina intracelular [34]. A activação de sinais de Wnt em células intestinais podem induzir a proliferação através da partícula cripta intestinal e, eventualmente, levar à ocorrência de cancro do cólon [35, 36]. β-catenina controla a via canonical e é regulado pelo complexo de destruição, que consiste em duas Ser /Tre quinases, a GSK-3β (glicogénio sintase quinase-3β) e CKI, duas proteínas de andaime, Axin e APC (adenomatous polyposis coli) [37 ]. Quando o ligando /WG Wnt está ausente, Axin complexo no citoplasma em estado estável, CK1α, GSK3β no complexo sequencialmente fosforilada β-catenina, fosforilado β-catenina em locais específicos pode ser reconhecido pela enzima ligase de ubiquitina E3 β-TRCP , e, em seguida, ser de-graduada pelo proteassoma, para garantir o concentrado da β-catenina mantida a um nível relativamente baixo [38]. Uma vez sinalizações Wnt são activados, a proteína Wnt ligado com receptores Frizzled (Fz), a Fz activado recrutados Dsh à membrana, e combinado com Axin no complexo para a despolimerização do complexo que concluindo APC, Axin e GSK-3β [39]. A despolimerização complexo e β-catenina no citoplasma são acumulados, em seguida, tranlocation para nuclear e combinada com a (factor de células T) TCF para activar o gene Wnt, que pode induzir os genes a jusante, tais como c-myc, ciclina D1, transcrição survivina associada à malignidade [40]. Proteína PP1 fosfatase e PP2A também estão envolvidos neste processo. Estes factores podem ser combinados com Axin, e APC para desfosforilar Axin e β-catenina e inibem a formação de complexos e a degradação β-catenina [5]. Secretadas proteínas frizzled-relacionados (SFRPs), os antagonistas de Wnt, como uma família de novos genes supressores de tumores candidatos colorrectais, poderia inibir a sinalização de Wnt e a expressão de genes alvo β-catenina ciclina D1 e c-myc no cólon β-activado-catenina cancro SW480 e HCT-116 células, que levam à inibição do crescimento do tumor [41, 42].

fotoquímicos, como esculetina [43], luteolina [44], dioscina [45] e o resveratrol [46] têm foi relatado que o câncer anti-cólon através de um regulamento de Wnt via /β-catenina. via de sinalização Wnt está em causa ser um potencial alvo para terapias de câncer de cólon novos. Além disso, os tocotrienóis têm um efeito anti-tumoral forte e a regulação da via de sinalização Wnt, que pode desempenhar um papel no mecanismo de anti-tumoral. γ-tocotrienol pode inibir a angiogénese de HUVEC induzida por SGC-7901 CM, que é de importância fundamental no crescimento do tumor, e o efeito inibidor está relacionada com a diminuição da actividade D1 β-catenina e ciclina [47]. Tocotrienol também regulada a expressão de β-catenina em células-tronco do câncer [48]. No nosso estudo anterior, δ-, γ-tocotrienol demonstraram o inibidor do crescimento de células cancerígenas do cólon humano SW620 e HCT-8 por meio de supressão da actividade de sinalização Wnt vias [1, 2]. A fim de explorar se tocotrienóis também mostram efeitos anti-tumorais

in vivo

, xenoenxertos de cancro do cólon humano em ratinhos nus Balb /c foram usados ​​para estudar ainda mais o efeito de inibição semelhante de crescimento tumoral mediado por TRF. TRF é extraído do óleo de palma e enriquecido em tocotrienóis. TRF mostrou a função biológica anti-cancro e também encontrada para diminuir os níveis de IL-6, IL-8, e VEGF relacionados com angiogénicos em células de cancro mamário de ratinho 4T1 HUVEC e [49]. Após suplemento TRF, a expressão de ARNm de IL-24, uma citocina relatado para ter efeitos anti-tumorais, aumento de 2 vezes nos tecidos tumorais de murganhos BALB /c [50]. Os nossos resultados mostraram que TRF diminuiu significativamente o peso de xenoenxertos, aumentou a expressão das vias de Wnt relacionados com factores Axin-2, GSK-3β, APC e diminuiu a expressão da proteína de Wnt-1, os genes β-catenina e alvo β-catenina ciclina D1 , c-myc, sobrevivendo em xenoenxertos de ratinhos nus. Estes dados indicaram que TRF inibiu o crescimento de xenoenxertos de cancro de cólon humano em ratinhos nus por a supressão de vias de Wnt. Estudos anteriores também demonstraram que a supressão da via de sinalização Wnt foi relacionada com a inibição da proliferação de células de cancro do cólon e a diferenciação, a apoptose de indução, a supressão do desenvolvimento do tumor do cólon [51, 52].

Embora α-tocoferol e os tocotrienóis são conhecida como um antioxidante potente e agentes anti-tumor potenciais, a relação entre a capacidade do anti-oxidante e anti-tumor não é clara. É interessante que a via de sinalização Wnt não está associado apenas com o desenvolvimento do tumor, mas também envolvidos no estresse oxidativo [53, 54]. No entanto, a suplementação de urucum-tocotrienol apoptose induzida e parada proliferação de terminais senescentes, como em células tumorais e em HER-2 ratinhos transgénicos /neu, e aumento da produção de ROS nas células tumorais [55]. Isto indicou que a actividade anti-tumoral de tocotrienol pode estar relacionado com a indução do stress oxidativo. No nosso estudo, TRF aumentou as actividades de GSH-Px e CAT no fígado de ratos. No entanto, os mecanismos exatos da TRF no crescimento do tumor inibitória e regular índice antioxidante necessária para ser mais bem estudadas.

Em resumo, fracção rica em tocotrienol a partir de óleo de palma (TRF) inibiu o crescimento de xenoenxertos de cancro do cólon humano em Balb /ratinhos nus c. Esta inibição, em parte, contribui para aumentar o sistema de enzimas antioxidantes e afectar a expressão de vias relacionadas com proteína Wnt. Assim, TRF tem uma potente inibiu o crescimento de tumor

in vivo

.

Informações de Apoio

S1 Arquivo. Contém Tabelas A, B, C.

quadro A do ficheiro S1, a influência do TRF no coeficiente de órgãos de ratinhos BALB /c nus. Tabela B no Arquivo S1, os efeitos do TRF sobre índices de hematologia nos ratos nus. Tabela C no arquivo S1, efeitos de TRF em matéria de classificação de leucócitos em camundongos nus

doi:. 10.1371 /journal.pone.0122175.s001

(DOCX)

Reconhecimentos

Os autores agradecem ao Dr. Yu BingYun que vem de palm nutracêuticos Sdn.Bhd, Malásia por gentilmente fornecimento fracção rica em tocotrienol a partir de óleo de palma (TRF).