Abstract

Fundo

Há ainda uma questão em aberto como para prever o risco de câncer colorretal antes de quaisquer alterações morfológicas aparecer no cólon.

objectivo

o objetivo foi investigar as aberrações nos cromossomos 1, 2 e 4 em linfócitos do sangue periférico analisadas por fluorescência

in situ

técnica de hibridização como uma ferramenta para avaliar a probabilidade de câncer colorretal.

Métodos

um caso-controle de base hospitalar estudo incluiu 20 pacientes com cancro do cólon e 18 controles baseados em hospitais . Informações sobre potenciais co-variáveis ​​foram coletados por meio de entrevista. A freqüência de aberrações cromossômicas estáveis ​​e instáveis ​​no cromossomo 1, 2 e 4 foi avaliada por fluorescência

in situ

técnica de hibridização.

Resultados

pacientes com câncer colorretal, em comparação com controlos, tinha uma frequência relativamente mais alta do cromossoma 1 translocações (mediana: 3,5 versus 1,0 /1000 células, p = 0,006), as aberrações estáveis ​​(3,8 versus 1,0 /1000 células, p = 0,007) e aberrações total (p = 0,009). Não houve diferenças observadas para os cromossomas 2 e 4. Nossos resultados mostraram um aumento nas chances de ter câncer de cólon em cerca de 50-80% associada com um aumento de 1/1000 células no número de cromossomo 1 aberrações.

Conclusões

os resultados revelaram que a freqüência de aberrações cromossômicas, especialmente translocações no cromossomo 1, parece ser um método promissor para mostrar um risco de câncer de cólon. Além disso, nosso estudo sugere a razoabilidade da utilização de biomarcadores tais como o cromossomo 1 aberrações em linfócitos do sangue periférico na triagem de programas de prevenção para as pessoas em maior risco de câncer de cólon para identificar aqueles que estão em maior risco e exigem investigações mais frequentes, por exemplo, . Por sigmoidoscopia

Citation: Galas A, Miszczyk J (2016) Aberrações envolvendo o cromossomo 1 como um Predictor possível de Odds Ratio para o cancro do cólon – Resultados do Estudo de Casos e Controles Cracóvia. PLoS ONE 11 (1): e0147658. doi: 10.1371 /journal.pone.0147658

editor: Lanjing Zhang, Centro Médico da Universidade de Princeton /Rutgers Robert Wood Johnson Medical School, United States |

Recebido: 31 de agosto de 2015; Aceito: 06 de janeiro de 2016; Publicação: 29 de janeiro de 2016

Direitos de autor: © 2016 Galas, Miszczyk. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Data Availability:. Todos relevante os dados estão dentro do papel e seus arquivos de suporte de informação

Financiamento: Este projecto de investigação foi financiado pela National Science Centre, Polónia em 2010-2013 (No. NN404034039) – o principal investigador Aleksander Galas MD, PhD.. resultados apresentados foram parcialmente suportada pelos dados do Ministério da Ciência e do Projecto de Educação (No. 2P05D05329) -o principal pesquisador Prof. Wieslaw Jedrychowski, MD, PhD. Algumas destas investigações foram realizadas como parte de um exame prolongado dos raios-X de 250 kV da IFJ PAN por métodos de citogenética e molecular e foram parcialmente apoiada por Grant DEC-2013/09 /D /NZ7 /00324 do Centro Nacional de Ciência , Polónia, investigador principal Justyna Miszczyk, PhD

Conflito de interesses:. os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

o câncer colorretal (CRC) está entre as. três principais tipos de câncer mais freqüentes diagnosticados em países de alta renda e na maioria dos países de renda média. Contribui também para a quantidade elevada de mortes por cancro em todo o mundo. Há um grande corpo de conhecimento no que diz respeito a fatores de risco para CRC e maioria delas apontam para o papel de estilo de vida como determinante principal, apesar de vários estudos não conseguiram provar uma relação causal [1]. A predisposição genética tem sido estimada para contribuir para cerca de 35% dos casos de CRC [2]. A maioria dos estudos que tentaram avaliar as mudanças responsáveis ​​pelo desenvolvimento do cancro colorectal focada em características genéticas observadas no tecido canceroso. Mutações no gene polipose adenomatosa coli (APC), MLH1, MSH2, PMS2 e genes de reparo MSH6 e CpG fenótipo ilha methylator (CIMP) têm sido reconhecidas e bem [3] descrita. Além disso, o envolvimento de TP53, TGFB1, e a cinase de proteína activada por mitogénio (MAPK) vias de sinalização foram encontrados para levar à progressão da CRC devido a uma perda de controlo do crescimento celular e diferenciação, e a apoptose [3,4]. Genoma estudos de associação ampla (GWAS) realizadas desde 2007 não conseguiram encontrar uma variante genética comum responsável pelo desenvolvimento do câncer colorretal esporádico. Mesmo que alguns desses estudos têm encontrado alguns polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs), que não prova uma relação causal eo aumento associado observada em risco CRC foi apenas modesta (um aumento de 5% a 30%) [5]. Há uma evidência que mostra um risco aumentado para CRC hereditária entre parentes de primeiro [6], mas pouco se sabe sobre a prever o risco de desenvolver câncer colorretal esporádico entre os indivíduos saudáveis ​​que não têm história familiar de CRC.

CRC desenvolve como consequência de alterações locais do tecido [7], mas ainda é uma questão em aberto sobre a forma de predizer o risco de câncer antes de quaisquer alterações morfológicas aparecer no cólon. É por esta razão que temos investigado as chances de CRC associados a danos cromossômicos medido em linfócitos do sangue periférico (PBL).

Não há atualmente nenhum marcador de avaliação de risco cromossomo estabelecido para CRC. Um estudo recente, publicado em 2013 por Chen [8], demonstrou que a maioria dos genes hipermetilado são suspeitos de ser um evento epigenético que silencia os genes supressores de tumor em CRC. Estes genes são colocados no cromossoma 1. Os resultados de outro estudo de oitenta e três pacientes com CCR sugeriu 1q31.3-32.1 (EEF1AL12) a ser a região que pode abrigar pelo menos um gene supressor de tumor CRC [9]. Xiao et ai. investigou alterações cromossômicas comuns no CRC esporádica e descobriram cromossomos 1, 2 e 4 para ter ganhos cromossômicas [10]. Todos estes resultados, embora promissores, têm sido observados como uma diferença entre os tecidos saudáveis ​​e cancerosas, o que limita a sua utilidade como um biomarcador preditivo para avaliar o risco de desenvolver CRC. Considerando o câncer como a acumulação progressiva de danos no DNA durante a desregulamentação dos processos celulares, estes resultados são correlativos e não discriminam o relacionamento com base em mudanças genéticas observadas como causal ou causal, especialmente tendo em conta a heterogeneidade temporal e espacial das alterações genéticas presentes em CRC [11].

Purpose

O objetivo deste estudo caso-controle foi investigar se aberrações cromossómicas (CAs) nos cromossomos 1, 2 e 4 medida em células aparentemente saudáveis ​​(PBL) usando uma fluorescência

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fluorescente (FISH) técnica irá ajudar a prever as chances de desenvolver CRC. Como os hábitos alimentares são conhecidos por ser um dos principais determinantes da CRC esporádico, consumo de frutas e vegetais tem sido considerada como principal variável de confusão nesta relação.

Materiais e Métodos

Desenho do estudo e provar

Um hospital estudo caso-controle com base incluiu pacientes CRC admitido na I Cadeira de Cirurgia Geral e do Departamento de Cirurgia Gastroenterologia, Jagiellonian University-Medical College, Cracóvia, Polónia, e controles tratados devido a outras causas (não relacionada ao câncer) no Hospital Universitário, em Cracóvia. O desenho do estudo foi descrito em outros lugares [12,13]. Em resumo, os participantes foram recentemente casos de adenocarcinoma esporádica, quer do cólon ou do recto diagnosticada e foram confirmados histologicamente. Os critérios de inclusão foram: idade de até 75 anos, Europeu, sendo um nativo da Polónia, encaminhados para tratamento cirúrgico de CRC (casos de câncer) ou para um tratamento de uma condição não relacionada ao câncer (controles). Em seguida, os seguintes critérios de exclusão foram implementadas: radioterapia ou quimioterapia antes de tirar uma amostra de sangue, presença de comunicação (contato verbal) problemas e /ou limitações cognitivas, diagnóstico de cancro secundário localizada no cólon ou do recto (ou seja, metástases à distância no intestino grosso) , diagnóstico de câncer primário diferente de colorretal, câncer recorrente, passou por uma cirurgia (antes do recrutamento) do trato gastrointestinal, presente ou diagnóstico anterior de doença crônica do trato gastrointestinal (diverticulite, síndrome do intestino irritável, úlcera gástrica aguda ou crónica, pancreatite aguda /crônica) , diabetes (de qualquer tipo), insuficiência renal, insuficiência hepática e. Além disso, indivíduos que relataram ter sintomas gastrointestinais em um período de 5 anos antes de uma entrevista também foram excluídos.

O estudo de caso-controle primário foi planejado para ter 80 indivíduos no total para a investigação genética e foi planejado para utilizar uma estratégia de correspondência (casos e controles foram pareados por sexo e idade +/- 5 anos). Após a entrada no estudo, os indivíduos foram convidados a participar na parte genética do projeto. Após consentimento informado foi obtido, uma entrevista foi realizada e amostras de sangue foram tomadas. Fora dos 80 indivíduos 2 foram excluídos por critérios de exclusão que foram revelados após a amostra de sangue foi colhida (diagnóstico de câncer no passado, que vivem no exterior na infância). De acordo com o protocolo de cada paciente foi solicitado a fornecer duas amostras de sangue para avaliação de aberrações cromossómicas clássica, dois para permuta de cromatídeos irmãos (SCE) e, adicionalmente, quatro amostras para fluorescência

in situ

hibridação (dois para a avaliação da actual status, e dois para irradiação). Em aproximadamente metade dos doentes recolhidas amostras de sangue não foram suficientes (devido ao volume limitado) para todos os testes genéticos planeado. Resultados de aberrações cromossómicas avaliados pelo método de citogenética clássica foram publicados na monografia primário do estudo [14]. Os resultados da avaliação SCE a partir do próximo conjunto de 38 indivíduos, que incluiu um conjunto de amostras de mais 24 indivíduos provenientes de um projeto de pesquisa semelhante também foram publicadas [12]. Finalmente, um outro conjunto de 38 amostras de sangue (casos de câncer de cólon 20 e 18 controles) também estavam disponíveis para a técnica FISH para avaliar a presença e frequência do cromossomo 1, 2 e 4 aberrações. Embora os critérios de inclusão para o estudo preliminar coberta cólon e casos de câncer retal, a apenas dois pontos (ICD-X: C18) casos de câncer participou na parte FISH. estudo completo foi conduzido de acordo com os princípios éticos da Declaração de Helsinque e foi aprovado pelo Comitê de Bioética da Universidade Jagiellonian (número KBET /115 /B /2011).

Ferramentas e coleta de dados

os participantes do estudo foram entrevistados sobre seus hábitos alimentares, características demográficas e outras variáveis ​​potenciais. As informações clínicas foram coletados a partir dos prontuários hospitalares. Os hábitos alimentares foram avaliados por um questionário de freqüência alimentar semi-quantitativo (QSFA). No total, os itens 148-alimentares foram utilizados, incluindo perguntas sobre o consumo de frutas frescas (verão /inverno), saladas e legumes frescos e cozidos, e para cada item de comida ou bebida, um tamanho da porção consumida foi especificado por fotografias padronizadas. entrevistadores treinados recolheu informações sobre habitual de consumo (habitual) durante o período de 1 ano em estações de calendário. A fim de avaliar padrões alimentares habituais, CRC casos foram questionados sobre os seus hábitos alimentares num período de 5 anos antes do aparecimento de sintomas gastrointestinais (se presente) ou antes do início do processo de diagnóstico. A validade e reprodutibilidade do questionário foi avaliado e publicado em outros lugares [15].

A análise citogenética

coleta de sangue e preparação metáfase spread.

As amostras de sangue foram coletadas por flebotomia em VACUTAINERS heparinizado-lítio, codificado, e então rapidamente transportadas para o laboratório na H. Niewodniczanski Instituto de Física Nuclear Academia polonesa de Ciências, em Cracóvia, Polônia (IFJ PAN) antes de qualquer intervenção médica. Resumidamente, sangue total (1,6 ml) foi adicionado a 15 ml de meio de cultura RPMI 1640 suplementado com 20% de soro fetal de bovino, L-glutamina inactivado pelo calor (2 mM) e antibióticos (100 U /ml de penicilina e 100 g /ml de estreptomicina). Os linfócitos foram estimulados por fito-hemaglutinina (PHA) e foram cultivadas durante 72 horas, 37 ° C em 5% de CO

2 numa incubadora humidificada. Duas horas antes do final da cultura, a 200 ul de solução colcemida (para parar as células em divisão em metáfase) foi adicionado. Em seguida, as células foram tratadas com KCl hipotónica e fixada em 3: 1 de metanol /ácido acético. os spreads metáfase foram preparados por deixar cair as células fixas (1-2 gotas) em lâminas limpas. As lâminas foram então secas à temperatura ambiente (TA) e armazenado num congelador a -20 ° C.

Coloração.

Os detalhes do método de peixe são descritos noutro local [16]. Em resumo, a coloração foi realizada de acordo com o protocolo proporcionado por um representante do fabricante das sondas (Cytocell LPP124, Inteiro Combinação Cromossoma Tinta 1, 2, 4). As lâminas foram secas à temperatura ambiente por 15-20 minutos e verificado para cromossomo adequada espalhando para determinar a adequação do espécime para o

in situ

processo de hibridação. As lâminas foram embebidas em solução salina de citrato de sódio (SSC) durante 2 minutos a 37 ° C, incubadas com pepsina solução à TA durante 5 minutos e foram colocados em solução salina tamponada com fosfato (PBS) à temperatura ambiente durante 3 minutos. Os slides foram desidratados numa série de banhos de etanol (70%, 90%, 100%) à temperatura ambiente durante 1 minuto cada e secou-se durante 10-15 minutos à TA. Em seguida, 10 ml de sonda (aquecida à RT) foi colocado no slide e cubra-escorregou com um 22×22 mm lamela de vidro para garantir uma boa cobertura. As bordas da lamela foram seladas com cola. Para desnaturar as lâminas foram colocadas em 75 ° C durante 8 minutos. Em seguida, as lâminas foram colocadas em 37 ° C durante pelo menos 24 horas para hibridização. Pós-hibridação, as folhas de cola e de cobertura foram removidas e as lâminas foram lavadas no tampão de lavagem I a 72 ° C durante 2 minutos e, em seguida, rapidamente transferido para o tampão de lavagem II durante 1 minuto à temperatura ambiente. Os slides foram desidratados novamente em uma série de banhos de etanol (70%, 90%, 100%) à temperatura ambiente durante 1 minuto cada e secou-se à TA. Em seguida, 10 ul de 4,6-diamidino-2-fenilindole (DAPI) foi aplicado e lâminas foram armazenadas no escuro e à temperatura de 4 a 10 ° C até à sua análise deslizado-tampa. As lâminas foram visualizados sob microscopia de fluorescência. A mistura sonda líquido de todo cromossomo sondas de pintura 1, 2 e 4, 3 cores, 3 combinações de sonda, foi usado Cytocell Ltd.

Scoring.

espalha Metaphase foram preparados a partir de um total de 38 assuntos. Pelo menos 1000 metáfases foram marcados para cada um dos 22 dos participantes do estudo e para os restantes menos de 1000 (4 indivíduos têm abaixo de 500 metafases marcou), devido a um baixo índice de proliferação, resultando em um menor número dos spreads metáfase. os spreads metáfase foram marcados cegamente para os tipos de danos, que incluíram estáveis ​​(translocações, deleções e inserções) (Figuras 1 e 2) e instáveis ​​(fragmentos acêntricos) danos nos cromossomos 1, 2 e 4. A frequência de danos cromossômicos foi calculada e expressa para 1000 metáfases (células). As análises foram realizadas para mostrar as diferenças para cada tipo de dano e para o grupo de dano estável, bem como para o número total de aberrações.

pares de cromossomos 1 são pintados de vermelho, 2 (verde) e 4 (amarela ).

métodos estatísticos

considerações tamanho da amostra.

Esperávamos observar a frequência média de aberrações cromossómicas em cerca de 3/1000 células do câncer colorretal e em cerca de 1/1000 no grupo controle (com SD = 2/1000 células). Assumindo que o alfa = 0,05 ea meta de potência = 0,90 tivemos para investigar 23 indivíduos por grupo. Assumindo o objetivo de potência = 0,80 o tamanho da amostra foi de 17 por grupo. O número de amostras de sangue foi reduzida como tinha sido planejado, principalmente em nosso estudo, no entanto, ainda havia 20 e 18 amostras de sangue disponíveis para casos e controles, respectivamente, portanto, nós acreditamos que a amostra permitiria responder às nossas questões de pesquisa.

Estatísticas e análise.

Embora o estudo foi projetado para ter casos e controles pareados por idade e sexo, a disponibilidade de amostras de sangue fez com que o número de indivíduos diferiu entre os grupos. As estatísticas descritivas foram fornecidas por medianas e limites da gama interquartílico (IQR). À medida que o tamanho da amostra era relativamente pequeno e com a incapacidade para rejeição da hipótese nula em relação a equivalência de distribuição normal pode ser determinado pelo tamanho da amostra, as diferenças entre os pacientes e controles CRC foram testados pelo teste de U-Mann-Whitney não paramétrico para variáveis ​​contínuas . teste do qui-quadrado foi utilizado para categórica eo teste de Cochran-Armitage para variáveis ​​ordinais. odds ratio (OR), obtido por meio de regressão logística foi utilizada para avaliar as probabilidades (uma aproximação de um risco) do CRC associados à frequência de aberrações. Os seguintes modelos foram analisados: I) um modelo univariável; II) um modelo considerando o ferro da dieta (a medida de substituição do consumo de carne, contínua) como uma única covariável; III) um modelo com tabagismo como uma única covariável; IV) um modelo considerando consumo de frutas e vegetais (número de porções por semana, contínua) como uma única covariável; e V) um modelo considerando consumo de frutas e vegetais como categórica por tercis como uma única covariável. Um número limitado de co-variáveis ​​foram utilizadas devido ao pequeno tamanho da amostra, mas vale a pena mencionar que os grupos eram comparáveis ​​de acordo com as características básicas. As análises foram feitas pelo Stata /IC 13.1 for Windows (64-bit x86-64) software StataCorp LP. Não houve dados perdidos na amostra disponível. Foi utilizado o nível de significância de 0,05

Resultados

As características básicas dos participantes do estudo foram apresentados na Tabela 1. A idade média foi de 62 anos (primeiro quartil:. 54, terceiro quartil: 66 ), e 50% do grupo foi de machos. Os controles foram ligeiramente mais jovens, fumavam mais frequentemente, consumiu mais legumes e frutas, e teve uma menor quantidade de ferro em sua dieta. Ninguém diferença foi estatisticamente significativa. pacientes com CCR tinham significativamente maior frequência de translocações, aberrações estáveis ​​e aberrações totais no cromossomo 1. Não houve diferenças observadas para o cromossomo 2 e cromossomo 4 (Tabela 2).

Como o objetivo principal do estudo foi avaliar as chances de CRC associado a danos cromossômicos em PBL, decidimos realizar análises apenas para os cromossomos apresentam diferenças de CAs entre os grupos. Após alguns ajustes, incluindo também vegetais e frutas consumo, um aumento na probabilidade de CRC para translocações (OR = 1,71-1,82 através modelos), aberrações estáveis ​​(OR = 1,62-1,75) e aberrações totais (OR = 1,53-1,66) no cromossomo 1 foi observada. O risco CRC também foi aumentada se translocações, aberrações estáveis ​​e número total de aberrações de cromossomos 1, 2 e 4 foram analisados ​​em conjunto, mas o aumento do risco foi modesto (OR = 1,24-1,46) (Tabela 3). análises adicionais realizadas para avaliar o papel dos vegetais e frutas consumo revelou uma diminuição no risco CRC através tercis de consumo nos modelos considerando tanto o número de aberrações estáveis ​​para os cromossomos 1, 2 e 4 ou o número total de aberrações por estes três cromossomos (Tabela 3). O conjunto de dados subjacente aos resultados está disponível em arquivo S1.

Discussão

Nós decidimos usar a técnica FISH como ela é percebida como uma ferramenta poderosa para detectar anormalidades cromossômicas específicas devido a a sua elevada sensibilidade e a velocidade com que os ensaios podem ser realizados. A técnica serve como uma ferramenta de diagnóstico para muitos tipos de câncer [17]. O método FISH é utilizado para identificar biomarcadores instabilidade cromossoma de outra investigação do cancro [18,19]. Nós escolhemos cromossoma 1, 2 e 4 uma vez que representa 22,71% do sexo masculino e 22,34% do genoma do sexo feminino, tal como estimado a partir do cromossoma comprimentos físicos [16]. Existem genes como hMSH2 e hMLH1 localizados no cromossoma 2p e 3p [20], e o gene MYH no cromossoma 1, entre p32.1 e p34.3, que mutações foram ligados ao cancro colorrectal [21]. Embora maioria dos estudos peixes são executadas em materiais de biópsia para o diagnóstico e classificação de tumores, no estudo apresentado foi utilizado PBL para a análise de aberrações cromossômicas específicas envolvendo os cromossomos 1, 2 ou 4.

O nosso estudo mostrou um aumento na aberrações no cromossoma 1 como o número de translocações, o número de aberrações estáveis ​​incluindo translocações, deleções e inserções, e o número total de aberrações (estável e instável) em PBL possivelmente associadas com um aumento das probabilidades de cancro do cólon. Não foi observada qualquer associação de deleções ou inserções para este cromossomo ou eles foram considerados separadamente ou como o número de fragmentos acêntricos. Não houve diferenças observadas no nível de danos no cromossomo 2 e cromossomo 4 entre pacientes e controles CRC.

Há um consenso geral de que os cancros, incluindo CRC, desenvolver-se como uma consequência de uma acumulação de danos genéticos [ ,,,0],3,22,23], portanto, medir a freqüência de aberrações cromossômicas parece ser um bom meio para prever as chances de câncer por causa de polimorfismos genéticos, metabolismo de xenobióticos, a eficácia da reparação do DNA e o papel do estresse genotóxico. Assim, foram medidos o nível de danos num conjunto de cromossomas específicos em PBL. sangue periférico pode ser facilmente coletado de indivíduos por um phlebotomy simples e linfócitos que representam bom substituto para uma avaliação das alterações cromossômicas em tecidos [24] pode ser facilmente colhidas em circulação.

A freqüência de aberrações cromossómicas em PBL tem sido proposto como um biomarcador de genotoxicidade, especialmente em ambientes profissionais [25]. A relação entre a alta frequência de CAs e um aumento do risco de câncer foi observada no Estudo nórdica e na investigação italiana, ambos mostrando aumento de quase 2 vezes no risco de câncer no alto tercil de CAs e tendências significativas através tertiles [26]. Os resultados do estudo de colaboração de 11 diferentes coortes Europeias revelou um aumento do risco de cancro entre os tercis, e, adicionalmente, observou-se que a presença de cromossomas anel foi associado com um aumento de aproximadamente duas vezes no risco de cancro [27]. Deve ser notado, no entanto, que todos os estudos acima mencionados usados ​​CA medidos por microscopia óptica para avaliar um risco geral para todos os tipos de cancro. Outros estudos publicados nesse período sugeriu que o alto nível de CAs foi mais claramente associado com cancros digestivos gastrointestinais, especificamente estômago e CRC [28,29].

Nossos resultados sugerem um aumento de probabilidades de cancro do cólon associada a um aumento no estábulo independente CAs de nível de consumo de frutas e vegetais e tabagismo. Isto está de acordo com outras observações que indicaram uma associação entre CAs e câncer, que não foi apenas devido a alguns riscos ocupacionais ou tabagismo [30], o que sugere que a “qualidade” do genoma pode também desempenhar um papel. Há também algumas evidências mostrando o efeito de componentes da dieta na prevenção de danos ao DNA [12,31,32]. Como em alguns dos nossos modelos de ambos os CAs e de frutas e vegetais de consumo foram considerados, acreditamos que esse ajuste adicional é um dos pontos fortes em nossa investigação, e apoia a hipótese de que o aumento CAs pode ser associado com câncer de cólon.

em nosso estudo observamos uma diminuição na probabilidade de câncer de cólon em toda tercis de vegetais e consumo de frutas e um aumento associado com CAs, se eles foram analisados ​​em conjunto. Isto levou a uma pergunta sobre o efeito de modificação possível de vegetais e frutas consumo no CA e câncer de cólon probabilidades. O termo de interação entre CAs e consumo de legumes e frutas (o corte do terceiro tercil) não foi estatisticamente significativa tanto para o cromossoma 1 translocações (p = 0,080) ou para cromossomo 1 aberrações totais (p = 0,132) ou para todos os cromossomos 1, 2 e 4 translocações (p = 0,174) ou para todos cromossomo total de 1, 2 e 4 aberrações (p = 0,287). Assim, nosso estudo não demonstram claramente um efeito de modificação de vegetais e frutas consumo no CAs. Pensamos, no entanto, que isso pode ser devido a uma dimensão limitada da amostra, e, portanto, esta questão exige uma investigação mais aprofundada.

Nós testamos a freqüência de aberrações nos cromossomos 1, 2 e 4 como um preditor de odds ratio para câncer colorretal. Os nossos resultados indicam que as probabilidades de cancro está associada com o aumento no número de cromossoma 1 translocações, bem como com o número de aberrações estáveis ​​e, consequentemente, um número total de aberrações cromossómicas 1. Não foi observada qualquer associação com cromossomas 2 ou 4. Não há nenhuma evidência clara de um marcador de cromossoma para o risco de CRC. No entanto, para além do papel de um cromossoma em risco de CRC, também há provas que demonstram o cromossoma contém ‘a mais de genes hipermetilado’ que pode aumentar o risco de CRC [8]. Cromossomo 1 foi também sugeriu ter genes supressores de tumor CRC [9]. Alguns estudos recentes que investigam o papel das perdas cromossômicas e ganhos de tumores primários CRC e suas metástases síncronas mostraram alterações cromossômicas (perdas) de cromossomos 1, 17 e 18, e os ganhos nos cromossomos 7, 8, 13 e 20 [33]. Outro estudo mostrou ganhos para cromossomo 1, e também para cromossomas 2, 4, 7, 8, 11 [10]. Em nosso estudo procuramos avaliar a susceptibilidade geral que pode ser “visível” como um acúmulo de danos na circulação de linfócitos do sangue. provas considerando que cromossomo 1 contém genes importantes como o

MUTYH

gene (localizado em 1p34.1) responsável pela reparação do ADN e associado com o desenvolvimento de polipose adenomatosa familiar como também o

MTHFR

gene (pelo 1p36.3), nossos resultados suportam o papel da medição de CA na predição de probabilidades CRC.

o objetivo do nosso estudo foi investigar cromossomo 1, 2 e 4 aberrações associados com probabilidades de cancro do cólon. Outro ponto que requer discussão é a assinatura doença molecular. O objetivo do uso de assinaturas moleculares de doenças, como destacado pela epidemiologia molecular patológica, é “sub-classificar a doença para melhorar a previsão de ocorrência da doença e progressão para a medicina precisão e saúde pública” [34]. Em nosso estudo, não foram capazes de avaliar as variações genéticas do cancro do cólon como os tecidos cancerosos não estavam disponíveis para nós. O quadro clínico de doenças sugeriu o tipo FAP dos cancros do cólon recrutados para o estudo.

Em resumo, os nossos resultados mostram que a freqüência de aberrações cromossômicas, especialmente translocações no cromossomo 1, detectados em linfócitos do sangue periférico por fluorescência

in situ

hibridação pintura inteira do cromossoma, parece ser um método promissor para estimar odds ratio para CRC e pode superar as limitações com métodos convencionais de análise CA. Além disso, nosso estudo sugere a razoabilidade da utilização de biomarcadores tais como linfócitos CAs na triagem de programas de prevenção para as pessoas em maior risco de câncer de cólon para identificar aqueles que estão em maior risco e exigem investigações mais frequentes, por exemplo, por sigmoidoscopia.

Informações de Apoio

S1 Arquivo. O conjunto de dados subjacente aos resultados do estudo

doi:. 10.1371 /journal.pone.0147658.s001

(XLS)

Reconhecimentos

Os autores quero agradecer a Joseph Scrimali para a cópia de edição do manuscrito, e Prasanna Pat para a cópia de edição e comentários valiosos, e todos os membros da equipe do projeto por seus esforços na coleta de dados.