Sumário

Os níveis de enzimas que determinam o catabolismo da testosterona, como CYP3A4 foram associados com câncer de próstata de risco (PCA). Embora alguns estudos tenham relacionado

CYP3A4 * 1B

alelo, um polimorfismo do gene que modifica nível de expressão CYP3A4, com o risco de CaP, outros falharam, o que sugere que variantes genéticas adicionais podem estar envolvidos. Expressão de CYP3A4 é em grande parte devido à ativação de Pregnane X Receptor (PXR). Particularmente, rs2472677 e rs7643645

PXR

polimorfismos modificar os níveis de expressão de CYP3A4. Para avaliar se

PXR-HNF3β

/T (rs2472677),

PXR-HNF4 /G

(rs7643645), e

CYP3A4 * 1B

(rs2740574) polimorfismos estão associados com CaP um caso controle-estudo foi realizado. A análise múltiplos testes mostraram que o

PXR-HNF4 /G

polimorfismo foi associado com níveis mais elevados de antígeno específico da próstata (PSA) em pacientes com PCA (OR = 3,99, p = 0,03). Esta associação foi mais forte em pacientes diagnosticados com a idade de 65 anos ou mais (OR = 10,8, p = 0,006). Embora o

CYP3A4 * 1B /* 1B

genótipo foi sobre-representados em pacientes APC, não foram observadas diferenças na freqüência deste e

alelos PXR-HNF3β

/T entre os controles e casos. Além disso, nenhuma associação significativa foi encontrada entre esses polimorfismos e PSA, grau de Gleason, ou linfa tumor metástase

Citation:. Reyes-Hernández OD, Vega L, Jiménez-Ríos MA, Martínez-Cervera PF, Lugo Garcia JA, Hernandez-Cadeia G, et al. (2014) As rs7643645 PXR polimorfismo é associado ao risco de níveis mais altos de Antígeno Prostático Específico na próstata pacientes com câncer. PLoS ONE 9 (6): e99974. doi: 10.1371 /journal.pone.0099974

editor: Daotai Nie, Faculdade de Medicina da Universidade de Southern Illinois, Estados Unidos da América

Recebido: 08 de janeiro de 2014; Aceito: 20 de maio de 2014; Publicação: 12 de junho de 2014

Direitos de autor: © 2014 Reyes-Hernandez et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este trabalho foi apoiado pelo número CONACyT (www.conacyt.gob.mx) concessão 13756. os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

Competir interesses.: os autores declararam que não existem interesses conflitantes.

Introdução

o câncer de próstata (PCA) é o segundo câncer mais comum em todo o mundo no sexo masculino e uma das causas mais comuns de morte nos homens (IARC , 2008). A etiologia da doença envolve vários fatores, incluindo etnia, idade avançada, história familiar e fatores genéticos e ambientais [1], [2]. Foi estabelecido que os níveis de hormonas esteróides, em particular, andrógenos, afectar o risco de desenvolvimento de CaP [3], [4]. A testosterona e di-hidrotestosterona predominantemente seu metabolito interagir com o receptor de androgénio, o que leva à expressão de genes envolvidos no crescimento da próstata e a proliferação de células de cancro da próstata [5]. Vários citocromos P450 (CYPs) estão envolvidas na síntese e catabolismo de hormonas, tais como a testosterona [6]. A biodisponibilidade da di-hidrotestosterona é reduzida pelo CYP3A4, que medeia a 2

β

-, 6β-, e 15β- hidroxilação de testosterona no fígado e da próstata [7] – [9]. Portanto, tem-se a hipótese de que os níveis baixos e /ou diminuição da actividade do CYP3A4 pode resultar numa menor capacidade para inactivar testosterona favorecendo a sua conversão em di-hidrotestosterona e aumentando o risco de desenvolvimento de CaP. Na verdade, a diminuição da expressão de CYP3A4 foi encontrado em tecidos prostáticos de doentes com CaP em comparação com 93% para o epitélio benigno, e apenas 75% dos tumores da próstata expressa CYP3A4 [10].

variação interindividual dos níveis de CYP3A4 até a 60-vezes têm sido relatada [11], [12], e tem sido sugerido que a maior parte da variabilidade pode ser explicada por factores genéticos [13]. O

CYP3A4

gene é altamente polimórficos, e até agora, 43 diferentes

CYP3A4

polimorfismos foram relatados (https://www.cypalleles.ki.se/), dos quais

CYP3A4 * 1B

é um dos mais comuns.

CYP3A4 * 1B

é um único polimorfismo de nucleótido (SNP) (rs2740574) que introduz um A para substituição G na posição -290, que está localizado no elemento de resposta específica nifenipine do promotor da

CYP3A4

gene. Enquanto alguns estudos têm relatado associações entre o

CYP3A4 * 1B

alelo e maior grau clínico do CaP [14], [15], outros não conseguiram observar uma associação entre a presença do

CYP3A4 * 1B

polimorfismo e suscetibilidade ao câncer de próstata [16], [17]. dados controversos sobre a associação de

CYP3A4 * 1B Comprar e actividade do CYP3A4 também foram relatados [18], [19], sugerindo que outras variantes genéticas podem estar envolvidos, como fatores de transcrição que medeiam a expressão CYP3A4.

receptor de Pregnane X (PXR, NR1I2) é um membro da família de receptores nucleares esteróides de factores de transcrição activados de ligandos. Activado-PXR forma um heterodímero com o 9-cis-retinóico receptor de ácido X (RXR) e liga-se a um elemento de resposta do receptor nuclear na região flanqueante 5 ‘dos ​​seus genes-alvo. A indução de CYP3A4 é em grande parte devido à activação de PXR [20]. Portanto, variantes genéticas de

PXR

que alteram os níveis de proteína PXR ou seu potencial de transativação pode ter um impacto importante sobre a expressão CYP3A4. Vários

PXR

polimorfismos têm sido descritos até à data, mas apenas alguns têm um efeito sobre a função CYP3A4. Entre eles, encontramos rs2472677 e rs7643645. O SNP rs7643645 está localizado no local de ligação HNF4 do promotor da

PXR

gene e tem sido associada com uma diminuição dos níveis de ARNm de CYP3A4 e PXR, bem como a actividade do CYP3A4. A variante rs2472677 está localizado no local de ligação de HNF3β do mesmo promotor e resulta em níveis aumentados de ARNm de PXR, bem como a actividade do CYP3A4 basal [21]. Para fins práticos, no presente estudo a variante rs7643645 será chamado

PXR-HNF4

/G ou

PXR-HNF4 /WT

ea variante rs2472677 será chamado

PXR-HNF3β Twitter /T ou

PXR-HNF3β

/WT.

até agora, não houve relatos na literatura explorando a possível associação entre a

polimorfismos PXR

e PCA . Por isso, foi realizado um estudo de caso-controle para investigar se

CYP3A4 * 1B

,

PXR-HNF4 /G

, e

variantes alélicas PXR-HNF3β

/T estão associados com um risco de desenvolver CaP em homens mexicanos.

Materiais e Métodos

população do estudo

O presente estudo utilizou um desenho de caso-controle de base hospitalar. O grupo caso foi recrutado do Instituto Nacional de Câncer e incluiu 99 pacientes com diagnóstico histológico de diagnóstico de CaP. As características clínicas, tais como Gleason grau, antígeno específico da próstata (PSA) níveis no momento do diagnóstico, o exame de toque retal (DRE; de acordo com as recomendações da American Urological Association), metástases em linfonodos tumor (TNM) [22], e idade no momento do diagnóstico foram obtidos a partir de registros médicos. Categorias de características clínicas foram definidos da seguinte forma: PSA dois grupos, (ponto de corte, 10 ng /mL); grau Gleason dois grupos (ponto de corte, 7); e TNM dois grupos (TNM≤2 e TNM≥3) [15]. O grupo controle consistiu de 144 pacientes sem história de qualquer tipo de câncer, incluindo câncer de próstata, com um PSA 4,0 ng /mL, DRE normal, e foi recrutado do Hospital Juárez. Todos os pacientes eram homens independentes (auto-relato) entre 60 e 76 anos de idade. O Instituto Nacional de Câncer e os Comitês de Ética Juárez Hospital aprovou o estudo e consentimento informado por escrito foi obtido de todos os assuntos. Os dados clínicos e genéticas completas por paciente pode ser encontrada na informação de suporte (Tabela S1 e S2).

ADN extracção

O ADN genómico foi isolado a partir de 5 ml de sangue total usando uma sódio perclorato /clorofórmio método de extracção. Resumidamente, o ADN foi preparado através da combinação de cada amostra de sangue com 35 mL de tampão de lise [sacarose 320 mM, MgCl 5 mM de

2, 1% (v /v) de Triton X-100, Tris-HCl a 10, pH 8] . O sedimento nuclear foi recolhido por centrifugação a 2000 × g durante 10 min e, em seguida, ressuspensas em 2 ml de solução B [NaCl 150 mM, EDTA 60 mM, 1% (w /v) de dodecilsulfato de sódio, 400 mM de Tris-HCl, pH 8]. A suspensão foi misturada com 0,5 mL de 5 M de perclorato de sódio e em seguida incubadas a 65 ° C durante 30 min. Após a incubação, foi adicionado 2 ml de clorofórmio, e a mistura foi centrifugada a 1400 × g durante 10 min. A fase aquosa superior contendo o ADN foi precipitado por adição de 2 volumes de etanol a 100% e lavou-se com etanol a 70%. O DNA foi então ressuspenso em 200 ul de Tris-HCl a 10, 1 mM de EDTA, pH 7,4, e quantificado medindo a absorvância a um comprimento de onda de 260 nm.

A genotipagem

A genotipagem de

CYP3A4 * 1B

,

PXR-HNF3β

, e

PXR-HNF4

foi realizado por PCR em tempo real usando um sistema de PCR StepOne real-Time com TaqMan Universal PCR master Mix (Applied Biosystems, EUA). A PCR foi realizada utilizando 5 mL de TaqMan Universal PCR Master Mix, 0,25 ul de mistura de iniciador-sonda (que contém 36