Abstract

específicos do cérebro angiogênese inibidor 1 (BAI1) proteína -associated 2-like 1 (BAIAP2L1) , também conhecido como substrato de tirosina quinase do receptor de insulina (IRTKS), está envolvida na saliência membrana plasmática e formação de actina durante a morfogénese e a migração celular. BAIAP2L1 foi recentemente relatado para promover a proliferação celular através da activação da via de ERK-EGFR em carcinoma hepatocelular. Neste estudo, relatamos o primeiro estudo abrangente de BAIAP2L1 regulação positiva no cancro do ovário humano. Regulação positiva de BAIAP2L1 em ​​tumores ovarianos foi encontrado pela primeira vez durante a triagem RNA e confirmada por estudos de imuno-histoquímica em cancros do ovário e outros tipos de câncer. regulação positiva significativa de BAIAP2L1 no câncer de ovário foi validado através da análise de vários grupos independentes, em conjuntos de dados disponíveis publicamente. Além disso, a expressão de proteínas em lesões metastáticas BAIAP2L1 foi maior do que os tumores primários correspondentes. Os ensaios funcionais em células de cancro do ovário revelou que BAIAP2L1 está envolvido na promoção da proliferação celular e evitar a apoptose. Em conclusão, os resultados deste estudo indicam que não só BAIAP2L1 pode ser utilizada como um biomarcador para o cancro do ovário humano, mas também revelam o seu papel na biologia do cancro. Maior elucidação do papel da BAIAP2L1 no contexto do receptor de insulina vias de células cancerosas sinalização está garantido para o desenvolvimento de cancro terapêutica, visando o metabolismo específico do cancro

Citation:. Chao A, Tsai CL, Jung SM, Chuang WC , Kao C, Hsu A, et al. (2015) Associado-BAI1 Proteína 2-Como a 1 (BAIAP2L1) é um potencial biomarcador no cancro do ovário. PLoS ONE 10 (7): e0133081. doi: 10.1371 /journal.pone.0133081

Autor: David Wai Chan, da Universidade de Hong Kong, Hong Kong

Recebido: 27 Março, 2015; Aceito: 22 de junho de 2015; Publicação: 29 de julho de 2015

Direitos de autor: © 2015 Chao et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Disponibilidade de dados: Todos os dados relevantes estão dentro do papel e seus arquivos de suporte de informação

Financiamento:. Este trabalho foi financiado por Chang Gung Medical Foundation: CMRPG3E0391 (Chao a), CMRPG3C1621-2 (Tsai CL), CMRPG3C0281-3, CMRPG3C0941-2 e CRRPG3D0031 (Wang TH). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

Competir interesses:. Os autores deste manuscrito ter a seguinte interesses concorrentes: Yi-Chao Lee é um dos inventores da patente dos EUA nº: 7192709B2, datada de 20 de março de 2007, cessionário de Digigenomics Co, Ltd. os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

epitelial de ovário. é a principal causa de morte em malignidades ginecológicas [1]. Trata-se, juntamente com o carcinoma peritoneal e carcinoma das trompas de Falópio, o nono morte mais comum em mulheres em Taiwan [2]. A sobrevida global de câncer de ovário continua pobre apesar das melhorias no tratamento de câncer de ovário [3,4]. O diagnóstico tardio típico de câncer de ovário, quando a doença já se espalhou para além da pélvis, no momento da apresentação clínica, é parte da razão para a sua má evolução [5]. A detecção imunológica do antigénio do cancro do soro CA125 [6] foi integrado em prática padrão para o diagnóstico de tumores ovarianos [7]. CA125 também é útil para o monitoramento da resposta e facilitar a vigilância para pacientes com câncer de ovário [8]. No entanto, o nível de CA125, com uma sensibilidade de 80%, não é elevada em todos os tumores do ovário, e a especificidade pode ser afectada por outras doenças malignas, condições fisiológicas, e a endometriose [9]. Por isso, é urgentemente necessária a identificação de marcadores adicionais para complementar CA125 para a detecção precoce, a avaliação do tratamento e avaliar o prognóstico de pacientes com câncer de ovário.

BAIAP2L1 /IRTKS (ID Gene 55971) está localizado no cromossomo 7q21.3 -q22.1. BAIAP2L1 codifica uma proteína de 511 aminoácidos com um peso molecular de aproximadamente 57 kD [10,11]. BAIAP2L1, juntamente com BAIAP2 (IRSp53), BAIAP2L2 (FLJ22582), pertencem à família IRSp53, e todos eles compartilham o IMD (IRSp53 e falta-in domínio metástase) e o domínio SH3 [12]. O domínio IMD pertence à grande família do domínio Bin-Amphipsin-Rev167 (BAR) [12], e o domínio BAR forma uma membrana dimmer em forma de crescente que se pode ligar curvo, com carga negativa [13]. Além disso, o IMD tem capacidade de ligação a actina filamento [12]. O domínio SH3 é conhecida por múltiplas interacções proteína-proteína [14]. Portanto, os membros da família IRSp53 são vistas como proteínas de andaime ou placas que ajudam a montagem de complexos de proteínas para o filamento de actina ou para a membrana com uma curvatura específica.

BAIAP2L1 pode modular agrupamentos de feixes de actina durante curtos a movimentação das células [15]. Em enterohemorrhagic

Escherichia coli

, muitos dos relatórios sobre BAIAP2L1 pertencem a sua semelhança com BAIAP2 em saliências de membrana ricas em actina, chamados pedestais [16,17,18,19]. Em células de mamíferos, BAIAP2L1 também tem sido associado com a migração de Src dependentes de células-[14,19,20] ubiquitinação e p53 mediada por MDM2 [21]. Na tumorigénese, BAIAP2L1 foi reportado para promover a proliferação celular através da activação da via EGFR-ERK no carcinoma hepatocelular [22]. receptor FGF oncogênico gene 3 (FGFR3) -BAIAP2L1 fusão foi identificado em cancros da bexiga [23] e cancros do pulmão [24], e sua identificação pode auxiliar na seleção de pacientes para terapia alvo-FGFR. Até à data, o papel de BAIAP2L1 no câncer de ovário não foi definido.

Nós relatamos aqui o primeiro estudo abrangente de BAIAP2L1 regulação positiva em cancros do ovário. Regulação positiva de BAIAP2L1 em ​​tumores ovarianos foi revelado pela primeira vez em Clontech Cancer Profiling matriz e confirmado com estudos de imuno-histoquímica. Públicos de domínio conjuntos de dados foram utilizados para validar que a expressão de BAIAP2L1 é significativamente mais elevada em cancro do ovário do que os tecidos normais e outros tipos de cancro. Os ensaios funcionais em células de cancro do ovário indicam que BAIAP2L1 está envolvido na promoção da proliferação celular e evitar a apoptose. Estes resultados sugerem que a regulação positiva de BAIAP2L1 pode ser usado como um potencial biomarcador no câncer de ovário.

Material e Métodos

análise de Microarray para genes diferencialmente expressos

microarrays oligonucleotídeos contendo 18861 sondas (Compugen Inc., Tel Aviv, Israel) foram utilizados para analisar genes diferencialmente expressos entre o RNA de ovário normal humana (número de catálogo CR0856, Clontech, CA, EUA) e tumor de ovário humano (número de catálogo 64011-1, Clontech, Palo Alto, CA). Procedimentos de rotulagem CyDye e digitalização foram semelhantes aos que foram anteriormente relatados [25]. Entre os genes diferencialmente expressos entre o tumor dos ovários e do ovário normal, BAIAP2L1 foi seleccionado para ser posteriormente validada. Cancer Profiling membranas de matriz II (catálogo # 7847-1, Clontech, Palo Alto, CA) foram hibridizados com a sonda de cDNA radiomarcado para BAIAP2L1. A matriz contém 154 amostras de diferentes tipos de cancro da mama, do ovário, do recto, do estômago, do pulmão, do rim, da bexiga, da vulva, da próstata, útero, cérvix, tiróide, testículo, pele, intestino delgado, pâncreas, traqueia, e do fígado ( S1 Fig).

análise imuno-histoquímica de tecidos tumorais clínicos

tecidos FFPE) tumorais embebidos em parafina (fixadas em formalina de câncer de ovário foram obtidos a partir de Chang Gung Memorial Hospital. As informações clínicas dos pacientes foi arquivado no banco de dados do Cancer Research Center ginecológica, Chang Gung Memorial Hospital, Taiwan. O estudo foi aprovado pelo Institutional Review Board do Chang Gung Memorial Hospital (IRB No.95-1328B). consentimento informado por escrito do doador ou o parente mais próximo foi obtido para o uso desta amostra em investigação. matrizes de tecidos comercialmente disponíveis incluem: FDA805-1and 805-2 (Tabelas S1) (US Biomax Inc., Rockville, MD, EUA.), BC 111109, 111110 BC, e OV8011-2-BX (Tabelas S2) (US Biomax Inc. , Rockville, MD, EUA).

lâminas de tecido FFPE (cancro do ovário e ovário normal, cada um de 4 mm de espessura) foram desparafinados em xileno e re-hidratadas em concentrações decrescentes de etanol. As secções foram imunocoradas com um anticorpo anti-BAIAP2L1 diluição de 1: 1000 utilizando o Bond-Max Stainer automático de imunoistoquímica (Leica, Alemanha). A pontuação imuno-histoquímica global (histoscore) no presente estudo foi a percentagem de células positivas multiplicada pela sua intensidade de coloração (0 = negativo, 1 = fraco, 2 = moderada, 3 = forte), e variou de 0 a 300 (100% multiplicado pela 3) [26,27].

Cultura e tratamento de linhas celulares

linhas celulares de cancro do ovário humano (TOV112D, TOV-21G, SKOV3, MDAH2774), células de fibroblastos de pulmão (HFL1), e células do músculo liso da aorta normal (T /G HA-VSMC) foram obtidas a partir da American Type Culture Collection (Manassas, VA, EUA). TOV112D, TOV-21G, SKOV3, MDAH2774, e HFL1 foram cultivadas em DMEM /F12 com soro de bovino fetal a 10% e quantidades apropriadas de penicilina e estreptomicina a 37 ° C com 5% de CO2. T /G células HA-VSMC foram cultivadas em DMEM /F12 com 10% de soro fetal de bovino, 0,05% de ácido ascórbico ml /mg, 0,01 mg /ml de insulina, 0,01 mg /ml de transferrina, 10 ng /ml de selenito de sódio, e 0,03 mg /de suplemento de crescimento de células endoteliais ml. Para a análise da apoptose, as células transfectadas com ARNsi BAIAP2L1 ou foram irradiados com UV (100 J /M

2) ou tratadas com cisplatina 10 uM (A Fresenius Kabi, NC, EUA) durante 24 horas antes da análise.

a transfecção de pequeno interferente (Si) ARN

MDAH2774 e SKOV3 (8000 e 4000 células, respectivamente, em placas de 96 poços) foram transfectadas com um picomole de pequeno interferente-BAIAP2L1 (CCCGAATTCACAAAGGGTAAATAAT, Invitrogen, Carlsbad, CA) em RNAimax Lipofectamina (Invitrogen, Carlsbad, CA) de acordo com o protocolo do fabricante. Após 48 h de transfeco, a supressão de genes alvo foi confirmada por análises de Western blot.

extracção de ARN e em tempo real

O ARN total foi isolado com o reagente TRIzol PCR-Q (Invitrogen, Carlsbad, CA). Para RT-QPCR, primeira cadeia de cDNA foi sintetizada com um iniciador oligo-T utilizando sobrescrito III primeiro kit de síntese de cadeia (Invitrogen, Carlsbad, CA). O nível de expressão de BAIAP2L1 (iniciador directo: CACCCGACTACTTGGAATGCT, iniciador inverso: CGTTGGCATCGTTAGGAGC) foram quantificados utilizando SYBR Verde ensaio (Applied Biosystems). desidrogenase (GAPDH) expressão gliceraldeído-3-fosfato (iniciador directo: 5′-GGTATCGTGGAAGGACTCATGAC-3 ‘, iniciador inverso: 5′-ATGCCAGTGAGCTTCCCGT-3’) foi utilizada como controlo interno. Os ciclos térmicos foram as seguintes: desnaturação inicial a 95 ° C durante 10 min, seguido de 45 ciclos de 95 ° C durante 15 s e 60 ° C durante 1 min. As reacções foram realizadas no instrumento Prism 7900 HT ABI (Applied Biosystems). Os cálculos foram feitos com o ciclo médio de valor de limiar (Ct) para cada medições em duplicado.

análise Western blot

As células foram lisadas em tampão de ensaio de radioimunoprecipitação de lise arrefecido com gelo [1% de Triton X- 100, 1% de NP-40, 0,1% de SDS, 0,5% de DOC, Tris-hidroximetil-aminometano 20 (Tris-HCl, pH 7,4), NaCl a 150 mM, os inibidores da protease (Sigma, St. Louis, MO, EUA), e inibidores de fosfatase (Sigma, St Louis, MO, EUA)] durante 30 minutos. A seguir à separação electroforética em 13% de gel de sulfato de poliacrilamida dodecil de sódio, as proteínas em gel foram transferidas para membranas de nitrocelulose (Amersham Pharmacia Biotech, Uppsala, Suécia). As amostras de proteína foram analisadas utilizando anti-BAIAP2L1 (Abnova, Taipei, Taiwan), anti-caspase 3 (Cell Signaling Technology, Danvers, MA, EUA), anti-PARP (Cell Signaling Technology, Danvers, MA, EUA) e anti- actina (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) como anticorpos primários e anticorpos secundários conjugados com peroxidase de rábano (correspondente Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA). proteínas marcadas foram subsequentemente detectados por quimioluminescência aumentada (ECL, Millipore, e Bradford, MA, EUA). Para cada amostra, as intensidades de banda foram normalizados para a p-actina.

A viabilidade celular ensaio

Após knockdown da expressão endógena BAIAP2L1 com ARNsi durante 48 h, a actividade de proliferação celular foi medida com 3- (4 , 5-dimetiltiazol-2-il) -2,5- difeniltetrazólio (MTT) método (Sigma, M5655-1G). MDAH2774 células SKOV3 e foram plaqueadas a 8000 e 4000 células /poço, respectivamente, em placas de 96 poços. concentração de trabalho de uma solução de MTT foi de 1 mg /ml. A densidade óptica foi medida utilizando Victor2 Digitalização espectrofotómetro multi-poços, com a absorvância a 570 nm. Para o ensaio de BrdU, as células de cancro do ovário BAIAP2L1 knockdown foram incubadas com BrdU durante 6 h. actividade de síntese de ADN foi testada usando kit de ELISA de BrdU (Roche Applied Science), como descrito anteriormente [26].

A detecção da fusão do gene FGFR e entre BAIAP2L1

O ARN total foi extraído a partir de 8 recém-congelado tecidos de cancro do ovário com protocolos que foram relatados anteriormente [28]. Detecção do gene de fusão FGFR3-BAIAP2L1 foi realizada com kits PCR rápido KAPA2G (Kapabiosystem, Wilmington, MA) nas seguintes condições: 95 ° C durante 3 min, seguido de 35 ciclos de 95 ° C durante 30 seg, 53 ° C durante 30 seg e 72 ° C durante 30 seg, e terminou a 72 ° C durante 10 min. Os iniciadores de PCR foram relatados anteriormente [24]. O ARN de células SW780 de cancro da bexiga foi utilizado como um controlo positivo para detectar o gene de fusão de FGFR3-BAIAP2L1 [23].

A análise dos dados de microarrays em bancos de dados publicamente disponíveis

de dados com o número de série GSE14407 [29], GSE2109 e GSE36133 [30] foram recuperados de Gene Expression Omnibus (GEO, https://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/geo/). A análise da expressão foi realizada utilizando Affymetrix expressão Console (Affymetrix, Santa Clara, CA).

Análise de dados

Os resultados do

in vitro

estudos são derivados de, pelo menos, três independentes experiências e analisados ​​com testes t de duas caudas. As diferenças nos histoscores entre dois grupos foram comparados utilizando o teste t de Student. Os valores de p 0,05 foram considerados significativos. As análises estatísticas foram realizadas com o software estatístico SPSS, versão 17.0 (SPSS Inc, Chicago, IL, EUA).

Resultados

cânceres de ovário expressam níveis mais elevados de BAIAP2L1 do que outros tipos de câncer

Os 10 tumores ovarianos espécimes estudados composta por 6 cancros malignos, 2 cystadenoma seroso limítrofe (coordenadas #E e N), e 2 leiomioma (coordenadas #F e J) (Fig 1A). Também foram determinados outro câncer ginecológico e tecidos normais do útero e do colo do útero origens. Em todos os três tipos de tecido, os níveis de expressão BAIAP2L1 em ​​tecidos tumorais foram significativamente maiores do que os tecidos normais. Do mesmo modo, o ARNm de expressão BAIAP2L1 em ​​linhas celulares de cancro do ovário foi maior do que linhas de células normais (Fig 1B). Em concordância com os resultados de expressão de ARN, a expressão de proteínas é mais elevada em BAIAP2L1 cancro do ovário do que em tecidos normais, como mostrado na FDA805-1and 805-2 matrizes de tecidos (Figura 2).

(A) A matriz de perfil Câncer II (BD Clontech) de ADNc derivado a partir de tecidos normais (N) e tecidos de tumor (T) do ovário, útero, e colo do útero. A quantificação do ARNm de tumor e tecidos normais de diferentes sítios são mostrados no painel da direita. BAIAP2L1 expressão em tumores foi significativamente mais elevada do que nos tecidos normais (** P 0,01). (B) a expressão de ARN BAIAP2L1 em ​​linhas celulares de cancro do ovário foi maior do que linhas de células normais. linhas de cancro do ovário incluído tipo serosa (SKOV3), tipo endometrioid (TOV112D, MDAH2774), e tipo de células claras (TOV21G). HFL1 é de células de fibroblastos de pulmão humano normal, e T /G-HA é VSMC células do músculo liso da aorta humana normal.

abreviações

: T, tumor; N, normal.

Os resultados foram obtidos a partir de tecido matrizes comercialmente disponíveis FDA805-1and 805-2, contendo órgãos normais e tumores correspondentes (Tabelas S2). Número entre parênteses indica o número de casos nos arranjos de tecido. A pontuação imuno-histoquímica global (histoscore) era a percentagem de células positivas multiplicada pela sua intensidade de coloração (0 = negativo, 1 = fraco, 2 = moderada, 3 = forte), e variou de 0 a 300 (100% multiplicado por 3).

metástase tecidos de cancro do ovário expressar BAIAP2L1 mais elevados do que câncer primário

foram analisados ​​os níveis de proteína de BAIAP2L1 em ​​193 tecidos de cancro do ovário, contendo serosa, endometrioid, de células claras, e tipos de células mucinoso ( Fig 3). Os níveis de expressão de BAIAP2L1 não foram diferentes entre os vários tipos de células de cancro do ovário, estágio e grau de cada subtipo histológico, mas cada tipo de câncer de ovário expressa BAIAP2L1 significativamente maiores do que os tecidos ovarianos normais (Fig 3). Expressão de BAIAP2L1 foi ainda analisada em 14 amostras pareadas de cancros do ovário primários e suas metástases correspondentes (Tabelas S3). Os sítios metastáticos incluem omento (n = 7), do sistema linfático (n = 3), paramétrios (n = 1), intestino delgado (n = 1), ceco (n = 1), e cérebro (n = 1). Doze dos 14 pares tinha expressões mais elevadas BAIAP2L1 nas metástases do que em tumores primários (P 0,05). (Figura 4)

Estudos imuno-histoquímicos foram realizados em tecidos de cancro do ovário (n = 193) e os controlos normais (n = 20). painel superior indica a intensidade da coloração imuno-histoquímica (0 = negativo, 1 = fraco, 2 = moderado, 3 = forte). A pontuação imunohistoquímica geral (histoscore) foi a percentagem de células positivas multiplicado pela sua intensidade de coloração, e variou de 0 a 300 (100% multiplicado por 3).

O painel superior mostra a expressão BAIAP2L1 em ​​um par representante de câncer de ovário primário e seu local metastático.

vários conjuntos de dados independentes validam-regulação de BAIAP2L1 no cancro do ovário

Os dados nos dados GSE14407 ajuste [29] indicaram que a expressão de ARNm BAIAP2L1 foi significativamente maior em células epiteliais de cancro do ovário (CEPI, 11,8 ± 0,28 apresentados como média ± erro padrão) do que em epitélios superfície do ovário normal (OSE, 10,8 ± 0,22) (p = 0,004) (Figura 5A). No nível de expressão de tecido, GSE36133 conjunto de dados mostrou que BAIAP2L1 foi significativamente maior em 182 cânceres primários de ovário e de falópio tubária (10,4 ± 0,09) em comparação com 1680 cânceres primários principalmente de mama, cólon, reto, endométrio, pulmão e rim (9,8 ± 0,04) (p = 4,5 x 10

-7) (Fig 5B). dados GSE2109 definir [30] revelou ainda que BAIAP2L1 foi significativamente maior em 49 linhas de células do cancro do ovário (9,4 ± 0,17) do que linhas de células 972 de cancro derivadas de outros tecidos (8,6 ± 0,07) (p = 0,004) (Figura 5C).

(A) Os níveis de expressão de mRNA de BAIAP2L1 em ​​células epiteliais de cancro do ovário (CEPI) isoladas from12 adenocarcinoma seroso do ovário e no epitélio de superfície do ovário (OSE) a partir de 12 ovários humanos normais. Os dados são obtidos a partir GSE14407. (B) Os níveis de expressão de BAIAP2L1 em ​​tecidos de cancro do ovário (OV, n = 182) e cancro de outros sítios primários (n = 1680). Os dados são obtidos a partir GSE36133. (C) Os níveis de expressão de BAIAP2L1 em ​​linhas celulares de cancro do ovário (OV, n = 49) e outras origens (n ​​= 972). Os dados são obtidos a partir GSE2109.

Ausência de fusão de genes entre FGFR e BAIAP2L1 no cancro do ovário

Nenhum dos oito testados RNA câncer de ovário continha a transcrição do gene de fusão entre FGFR e BAIAP2L1, enquanto que o RNA de células SW780 de cancro da bexiga transcrições do gene de fusão (Fig S2). expressos

BAIAP2L1 não só promove a proliferação celular, mas também previne a apoptose em células de cancro do ovário

Uma vez que tem sido demonstrado BAIAP2L1 para promover a proliferação celular em carcinoma hepatocelular (HCC) [22], também testado o papel de BAIAP2L1 no crescimento celular de células de cancro do ovário. Knockdown de BAIAP2L1 com o crescimento (Fig 6A) tecnologia siRNA inibida célula em várias linhas celulares de cancro do ovário, mostrado nos resultados de ensaios de incorporação de BrdU (Fig 6b) e ensaios MTT (Fig 6c).

BAIAP2L1 em ​​dois cancro do ovário linhas celulares (MDAH2774 e SKOV3) foram knockdowned com SI-ARN (A) e analisados ​​com (B) ensaio BrdU incorportation e ensaio de MTT (C). (D) BAIAP2L1 knockdown em células SKOV3 aumento da clivagem de caspase 3 e PARP, que eram indicadores da apoptose. As células foram irradiadas com UV (100 J /M

2) ou tratadas com cisplatina 10 uM durante 24 h para induzir a apoptose. Para visualizar claramente as intensidades de bandas diferenciais PARP clivada dois tempos de exposição foram usadas durante quimioluminescência: tempo (60 seg) e curto (10 seg). O nível de actina foi utilizada para normalizar a quantidade de proteína de entrada. (E) As análises quantitativas de caspase clivada 3 e PARP. Os resultados apresentados são a média ± erro padrão de três experiências independentes. Os asteriscos indicam significância estatística (P 0,05).

Em vias de apoptose, pró-caspase 3 clivada e é activada em 12-kDa fragmentos de 17 kDa e, em seguida, enzima proteolítica digere proteínas a jusante, tais como poli (ADP-ribose) polimerase (PARP) [31]. Sem insultos ADN (UV) ou de cisplatina, knockdown de BAIAP2L1 só ligeiramente maiores níveis de PARP clivada (Figura 6D e 6E). Após a irradiação UV ou o tratamento com cisplatina durante 24 h, knockdown de BAIAP2L1 aumento do nível de proteína de caspase 3 clivada e PARP clivada. Estes resultados sugerem que BAIAP2L1 pode proteger as células da apoptose.

Discussão

BAIAP2L1 expressão tem sido demonstrado que o aumento no carcinoma hepatocelular [22]. Neste estudo, a base de dados integrada análises de BAIAP2L1 em ​​GSE14407 e tecidos de câncer GSE36133, bem como linhas de células GSE2109 validar os nossos resultados imunohistoquímica da expressão alta BAIAP2L1 em ​​cancros do ovário. Estes resultados indicam, pela primeira vez, que BAIAP2L1 é regulada positivamente em cancros do ovário humano, representando o aumento da proliferação das células e resistência à apoptose de cancro do ovário.

Nossas descobertas que histoscores BAIAP2L1 de sítios metastáticos são mais elevados do que ovárica primária cancros BAIAP2L1 sugerem que pode contribuir para a invasão pelo tumor e metástases. Estes resultados estão de acordo com as conclusões que BAIAP2L1 está envolvido na deformação da membrana plasmática e remodelação citoesqueleto de actina, que são importantes para a migração celular [20]. Embora gene de fusão receptor de FGF oncogénica 3 (FGFR3) -BAIAP2L1 foi identificado em cancros da bexiga cancros [23] e do pulmão [24], não foi possível detectar a transcrição de genes de fusão de BAIAP2L1 neste estudo de um número limitado de amostras. A presença da fusão do gene FGFR-BAIAP2L1 foi mostrado para traduzir uma proteína maior em outros cancros [24], mas foi identificada BAIP2L1 apenas como uma única banda de 57 kD na análise de transferência de Western de células de cancro do ovário, o que exclui a presença de FGFR -BAIAP2L1 fusão de genes.

BAIAP2L1 também foi mostrado na progressão da doença de artrite reumatóide, em que a expressão BAIAP2L1 em ​​células sinoviais semelhantes a fibroblastos foi positivamente correlacionada com a proteína C-reactiva (CRP), um marcador clínico comum para inflamação [32]. Os níveis de PCR foram mostrados para prever a sobrevida em pacientes com carcinoma de células renais, cânceres de bexiga e câncer de próstata, ea incorporação de CRP em modelos prognósticos para aqueles cancros melhora a precisão da previsão dos modelos [33]. Estes resultados suportam coletivamente que BAIAP2L1 está envolvida na inflamação e tumorigênese em geral [34].

As funções mais conclusivos de BAIAP2L1 em ​​mamíferos foram recentemente revelados pelo grupo de Han usando uma abordagem rato knockout [35]. BAIAP2L1 actua como um adaptador do receptor de insulina (IR), que activa o (substrato receptor da insulina 02/01) IV-IRS1 /2 -Akt via de sinalização por meio de estimular a fosforilação da tirosina do IR. BAIAP2L1 ratinhos deficientes em exibida a resistência à insulina e homeostase da glicose anormal [35]. Além disso, a expressão hepática de BAIAP2L1 foi diminuída em ratos e seres humanos com diabetes do tipo 2, sugerindo uma associação entre BAIAP2L1 regulação baixa e o desenvolvimento de diabetes. Curiosamente, a diminuição hepática de BAIAP2L1 em ​​pacientes diabéticos parecia ter uma discrepância macho-fêmea, que os autores postularam ser causada por tamanhos de amostra insuficientes [35]. À luz de um estudo de associação do genoma onde BAIAP2L1 é altamente associada com níveis circulantes de globulina de ligação do hormônio [36], um regulamento dependentes de sexo de funções BAIAP2L1 permanece digno de estudar.

Além de actina relacionada- funções de BAIAP2L1, que são elucidadas principalmente a partir de estudos bacterianas [16,17,18,19], a descoberta de BAIAP2L1 nas vias IR-IRS-AKT pode lançar luz para o seu papel no metabolismo específico do cancro. Para proporcionar blocos de construção para o crescimento do tumor, as células cancerosas aumentar a síntese de ácidos gordos e o metabolismo de glutamina, à custa da utilização de glicólise aeróbica ineficiente [37]. As concentrações de glicose em tumores sólidos são geralmente mais baixos do que os tecidos normais [38], assim as células de cancro muitas vezes anseiam glicose e glutamina [39]. Estudos futuros podem provar que BAIAP2L1 está envolvida na obtenção de mais entrada de glucose para as células cancerosas, talvez, através do aumento da eficiência dos transportadores Glut. Além disso, vários efectores a jusante de IR incluem (i) MAPKs que são conhecidos para promover a proliferação de células [22] e (ii) de PI-3K que aumenta a síntese de proteínas e ácidos gordos e evitar que as células de cancro da apoptose [40].

Conclusões

Os resultados deste estudo não só indicam que BAIAP2L1 pode ser usado como um biomarcador para o câncer de ovário humano, mas também revelar o seu papel na biologia do câncer. Estudos clínicos com um grande número de amostras e ensaios quantitativos será necessário para validar a utilidade de BAIAP2L1 na prática clínica. Maior elucidação do papel da BAIAP2L1 no contexto das efetoras IR-IRS-jusante vias de células cancerosas se justifica para o desenvolvimento de cancro terapêutica visando o metabolismo específico do cancro.

Informações de Apoio

S1 Fig. Os perfis de mRNA de BAIAP2L1 em ​​tecidos e linhas celulares

doi: 10.1371. /Journal.pone.0133081.s001

(DOCX)

S2 Fig. Ausência de gene de fusão entre FGFR3 e BAIAP2L1

doi:. 10.1371 /journal.pone.0133081.s002

(DOCX)

Tabelas S1. matrizes FDA tecido (805-1 e 2) e histoscores de BAIAP2L1

DOI: 10.1371. /journal.pone.0133081.s003

(DOC)

Tabelas S2. matrizes de tecido (BC 111.109, BC 111110, e OV8011-2-BX) e histoscores de BAIAP2L1

DOI: 10.1371 /. journal.pone.0133081.s004

(DOCX)

S3 tabelas. As informações clínicas dos 14 casos de cancros e histoscores de BAIAP2L1 em ​​câncer primário de ovário e locais de metástase

doi:. 10.1371 /journal.pone.0133081.s005

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Reconhecimentos

os autores agradecem o Banco de Tumores, Chang Gung Memorial Hospital e Jung-Erh Yang pelo seu excelente assistência técnica. Agradecemos ao Dr. Su-Fang Lin of National Health Research Institutes (Miaoli, Taiwan) para a prestação de RNA total de células SW780 e Dr. Shihtien T. Wang (Departamento de Nefrologia Pediátrica do Hospital Infantil da Universidade de Illinois Medical School em Chicago) para edição Inglês. Este estudo foi apoiado por Chang Gung Medical Foundation:. CMRPG3E0391 (Chao A), CMRPG3C1621-2 (Tsai CL), CMRPG3C0281-3, CMRPG3C0941-2 e CRRPG3D0031 (Wang TH)