Abstract

Vários fatores de risco foram identificados como potenciais contribuintes para o desenvolvimento do câncer de pâncreas, incluindo fatores ambientais e de estilo de vida, tais como fumar, beber e dieta, e condições médicas tais como a diabetes e pancreatite, os quais geram o stress oxidativo e danos no ADN. estresse oxidativo pode ser modificado por factores ambientais e também pelo material genético único de um indivíduo. Aqui nós examinamos a contribuição de ambiente e genética para o nível de um indivíduo de estresse oxidativo, dano ao DNA e susceptibilidade ao câncer de pâncreas em um estudo piloto utilizando três grupos de indivíduos: um grupo de câncer pancreático diagnosticado recentemente, um grupo de controle geneticamente relacionado saudável vivendo com o caso assunto, e um grupo de controle saudável relacionada com a geneticamente que não residem com o assunto. estresse oxidativo e dano ao DNA foi avaliada pela medição da capacidade antioxidante total, danos no DNA direta e oxidativa pelo Ensaio Cometa, e os níveis de malondialdeído. danos no ADN directa foi significativamente elevados em doentes com cancro pancreático (idade e sexo, ajustadas ± erro padrão da média: 1,00 ± 0,05) em comparação com ambos os controlos não relacionados e afins saudáveis ​​(0,70 ± 0,06, p 0,001 e 0,82 ± 0,07, p = 0,046, respectivamente) . Análise de 22 SNPs seleccionados em genes de estresse e dano oxidativo ao DNA revelaram que

CYP2A6

L160H foi associada com câncer pancreático. Além disso, o dano de ADN foi encontrado para ser associado com

TNFA

-308G A e polimorfismos ERCC4 R415Q. Estes resultados sugerem que a medição de danos no DNA, bem como selecionar SNPs, pode proporcionar uma importante ferramenta de triagem para identificar os indivíduos em risco de desenvolvimento de câncer de pâncreas

Citation:. Hocevar BA, Kamendulis LM, Pu X, Perkins SM, Wang ZY, Johnston EL, et ai. (2014) Contribuição do Meio Ambiente e genética para o cancro do pâncreas Susceptibilidade. PLoS ONE 9 (3): e90052. doi: 10.1371 /journal.pone.0090052

editor: Klaus Roemer, Universidade de Saarland Medical School, Alemanha |

Recebido: 22 de novembro de 2013; Aceito: 27 de janeiro de 2014; Publicação: 20 de março de 2014

Direitos de autor: © 2014 Hocevar et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este estudo foi financiado em parte pela Universidade de Indiana Cancer Simon Centro de Pesquisa translacional Aceleração Collaboration (EGC), o professor Robert B. Forney (JEK), R01 CA100908 (JEK) e CA82709 P30 (SMP). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

o câncer de pâncreas, a quarta principal causa de mortes por câncer nos Estados Unidos, é caracterizada por metástase rápida e profunda resistência à quimioterapia e radioterapia. opções de detecção de tarde no curso da doença e tratamento limitado contribuir para o seu mau prognóstico [1], com taxas de sobrevida de 5 anos médios de 6% [2]. Como factores ambientais desempenham um papel importante na etiologia de cancro pancreático esporádica [3], a identificação de interacções gene-ambiente que contribuem para a oncogénese do cancro do pâncreas é essencial para a prevenção de doenças. Além disso, o desenvolvimento de testes de diagnóstico que podem identificar indivíduos sensíveis ou monitorar a progressão da doença pode ajudar na prevenção ou orientar o tratamento do câncer de pâncreas.

Além de pancreatite crônica e diabetes, vários fatores de risco de vida têm sido associados ao desenvolvimento de cancro do pâncreas, incluindo o tabagismo, o consumo excessivo de álcool e obesidade [3], [4]. Uma característica comum desses fatores de risco é a sua capacidade para induzir danos estresse oxidativo e DNA [5]. O estresse oxidativo é definido como um desequilíbrio entre a produção de espécies reactivas de oxigénio (ROS) e sua eliminação e reparação pelos mecanismos de defesa celular. Por causar danos aos lípidos, proteínas e ADN, ROS contribuem para a patologia observada em condições inflamatórias crónicas, envelhecimento e cancro, [6] – [9]. mecanismos de defesa celular existem para ambos reparo de DNA danificado e desintoxicar ROS. bases oxidativamente modificados e quebras de ADN de cadeia simples são reparadas principalmente pelo reparo de DNA por excisão de bases (BER) caminho, enquanto adutos volumosos são reparados pela reparação por excisão de nucleotídeos (NER) via [10]. antioxidantes enzimáticos tais como superóxido dismutase (SOD), óxido nítrico sintase (NOS), catalase (CAT) e os antioxidantes não enzimáticos, tais como a glutationa, a vitamina C e a vitamina D servir para neutralizar ROS [6]. marcadores biológicos que quantificam o estresse oxidativo incluem medições de capacidade antioxidante total (TAC), produtos de peroxidação lipídica, tais como malondialdeído (MDA), e danos no DNA, que é comumente avaliado pelo Ensaio Cometa [11]. No que circulam células mononucleares do sangue periférico (PBMC), aumento do dano ao DNA foi observado em fumantes de cigarro [12], e em pacientes diabéticos tipo 2 que se correlacionou com hiperglicemia [13], [14]. Aumento dos níveis de peroxidação lipídica, concomitantes com a diminuição da TAC, também foram observados em pacientes com diabetes tipo 2 e pancreatite crônica [14], [15]. No que diz respeito a doenças malignas do pâncreas, a activação da via de resposta a danos no ADN tem sido documentada em neoplasia pré-cancerígenas pancreáticas intraepiteliais [16], e a desregulação de vias relacionadas com o stress oxidativo, tais como Nrf2 /Keap1 têm sido observados em linhas de células de cancro do pâncreas e humana tumores [17].

nível de estresse oxidativo de um indivíduo depende de determinantes do estilo de vida, tais como fumar, beber e dieta, e também é influenciada pela genética. Vários estudos de caso-controle investigou a correlação de polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) em genes relacionados ao metabolismo carcinogênico, estresse oxidativo e de reparação do ADN, com câncer no pâncreas. Enquanto SNPs na fase I e genes do metabolismo II

CYP1A1

,

GSTM1

,

GSTT1

e

GSTP1

por si só não se correlacionou com risco de câncer pancreático, uma interação significativa entre o fumo eo

GSTT1

genótipo nulo foi relatada em pacientes com cancro pancreático caucasianos [18]. Investigação da via NER revelou uma associação de SNPs no

MMS19L

gene com risco de câncer pancreático [19]. A diminuição do risco de câncer pancreático foi observado para portadores de

ERCC4

R415Q e

LIG3

G-39A menores alelos, enquanto foi observado um aumento do risco para o

ATM

alelo D1853N [ ,,,0],20], [21]. Os polimorfismos em genes de reparação de ADN também têm sido associadas ao risco de cancro do pâncreas, no contexto da exposição ao fumo ou história individual de diabetes [20], [22]. No entanto, outros estudos não conseguiram identificar correlações diretas de SNPs nos genes do metabolismo e reparo do DNA com o risco do câncer de pâncreas [23], [24]. O presente estudo piloto examina o papel de fatores ambientais e genética na carcinogênese pancreática avaliando medições biológicas de estresse oxidativo, dano ao DNA, e os fatores de estilo de vida específicos e polimorfismos genéticos entre os grupos de pacientes com câncer pancreático e controles geneticamente relacionados e não relacionados saudáveis.

Materiais e Métodos

Ética Declaração

Este estudo foi aprovado pela Universidade de Indiana Institutional Review Board. consentimento informado por escrito foi obtido dos participantes.

Estudo da População

Um total de 31 pacientes (casos) com câncer de pâncreas patologicamente confirmada (fases I-IV) e 40 controles saudáveis ​​(20 geneticamente relacionados e 20 não relacionada) foram inscritos. Os casos foram excluídos se tivessem uma história de outras doenças malignas, ou já tinham recebido tratamento com quimioterapia ou radioterapia. Os casos foram pareados com controles tanto geneticamente relacionados e /ou controles geneticamente não relacionados. Estes grupos de controlo distintos foram recrutados para discernir a contribuição de fatores ambientais e genéticos no risco de câncer pancreático. Geneticamente controles relacionados foram incluídos desde que não vivia com o seu caso pareados enquanto os controles geneticamente não relacionados tiveram que ser que coabita com o caso. Todos os participantes inscritos eram caucasianos, ≥18 anos no momento da autorização, e capaz de compreender e assinar um consentimento informado por escrito. As informações relativas a demografia sujeitos, fatores comportamentais (dieta, tabagismo, álcool, exposição ocupacional), e da história clínica pessoal e familiar foram obtidas por auto-relato através de um questionário no momento da inscrição. foi calculado fumar cumulativo como maços-anos [(pacotes /dia) x (anos fumado)]. O consumo de álcool foi relatado como dias de consumo no ano passado. índice de massa corporal (IMC, kg /m

2) foi calculado a partir da altura auto-reportados e peso ou gráficos do paciente. Amostras de sangue foram obtidas dos participantes no momento da inscrição.

Medição da Total Antioxidante Capacidade

capacidade antioxidante total (TAC) foi medido no soro, tal como descrito [25]. Uma curva padrão foi gerado utilizando Trolox (Sigma, St. Louis, MO) e TAC quantificados a partir da curva padrão

Avaliação de danos no DNA direta e oxidativo:. Ensaio Cometa

O sangue total (10 ul) foi misturado com 0,5 ml de RPMI 1640 contendo 10% de FBS, 10% de DMSO, 1 mM de deferoxamina, passo-congelado e armazenado a -80 ° C até à análise. O ensaio do cometa foi realizada como descrito anteriormente [26]. Resumidamente, 6 ul de sangue foi misturada com 70 ul de 1% de agarose de baixo ponto de fusão e aplicado sobre Trevigen CometSlides®. As células foram lisadas, colocado em tampão alcalino, e, em seguida, a electroforese. As lâminas foram coradas com brometo de etídio e 100 núcleos seleccionados aleatoriamente /amostra foram avaliadas (Komet 4,0; cinética Imagiologia Ltd., Liverpool, Reino Unido). lesões oxidativas do ADN foi avaliada por meio de digestão enzimática com formamidopirimidina ADN-glicosilase (FPG) antes da electroforese. dano ao DNA foi expressa como Comet (Olive) momento de cauda [(cauda dizer – cabeça média) * DNA cauda% /100]

Medição da Malondialdeído (MDA)

MDA foi medido no soro. utilizando cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) com detecção UV, tal como descrito anteriormente [27].

Isolamento de DNA e genotipagem

O ADN genómico foi extraído a partir de PBMCs em sangue total utilizando o kit de sangue QIAamp ADN Midi ( Qiagen). Determinação de SNPs por discriminação alélica foi realizada utilizando sondas TaqMan validado (Applied Biosystems) em um instrumento ABI 7900HT de acordo com as instruções do fabricante. Os SNPs foram selecionados com base em suas previamente relatados associações com estatuto de estresse oxidativo, dano ao DNA, eo risco de câncer.

Análise Estatística

modelos mistos generalizados e lineares que representaram as correlações entre pacientes e controles foram usados ​​para comparar, fatores demográficos ambientais e pancreatite crônica e outras condições inflamatórias entre os três braços. medidas de estresse e dano oxidativo ao DNA foram comparadas entre os pacientes com câncer pancreático e controles relacionados independentes ou saudável e correlacionados com fatores ambientais e SNPs (, recessivos e modelos de dose gene dominante), utilizando modelos lineares de ajuste para idade e sexo, devido a diferenças entre os grupos nestes dados demográficos. médias ajustadas ± erros padrão são relatados a partir desses modelos. teste de equilíbrio de Hardy Weinberg foi realizado para verificar o QC genótipo. risco genético de câncer de pâncreas foi avaliada comparando frequências SNP entre pacientes e controles saudáveis ​​não relacionados com os testes exato de Fisher (para modelos genéticos dominantes e recessivos) ou Mantel-Haenszel teste exato de qui-quadrado (para os modelos de dose gene). Todas as análises foram realizadas utilizando SAS Versão 9.3 (Cary, NC). Os valores de p 0,05 foram considerados estatisticamente significativos. O objectivo deste estudo piloto foi a gerar hipóteses, especialmente sinais genéticos. Portanto, o erro tipo I não foi rigorosamente controlado em comparações múltiplas.

Resultados

Estudo Assunto Características

As características demográficas dos casos e controles são apresentados na Tabela 1 . os casos eram significativamente mais velhos do que o grupo controle relacionado saudável; No entanto, a idade do grupo de controlo não relacionada saudável foi semelhante ao dos casos. Casos eram mais propensos a ser do sexo masculino em comparação com ambos os grupos de controle, enquanto o IMC foi semelhante entre todos os grupos. Ambos os controles independentes e coligados saudáveis ​​eram mais propensos a ser nunca fumaram em comparação com casos de cancro do pâncreas (53% e 67% versus 38%, respectivamente), embora as diferenças eram marginalmente significante (p = 0,07). Fumar ≥20 anos-maço foi semelhante nos casos e controles não relacionados saudáveis ​​em comparação com controles relacionados saudáveis. O consumo de álcool no ano passado não foi estatisticamente diferente entre os grupos. pancreatite crônica e outras condições inflamatórias, que incluem pancreatite crônica, diabetes e doença inflamatória do intestino, foram significativamente aumentados em pacientes com câncer pancreático.

Associação de cancro do pâncreas e biomarcadores de estresse oxidativo

Um perfil de tensão /danos oxidativos foi gerada a partir de amostras de sangue de todos os participantes inscritos (Tabela 2). capacidade antioxidante total (TAC), medido pelo ensaio de antioxidante Trolox-equivalente, foi similar entre os casos de cancro do pâncreas e controlos saudáveis ​​não relacionados. Em contraste, os casos apresentaram níveis de TAC mais elevados em comparação com controles relacionados saudáveis; no entanto, esta diferença não foi significativa. Níveis do produto peroxidação lipídica MDA foram semelhantes nos casos de câncer de pâncreas em comparação com os controles não relacionados saudáveis ​​e foram maiores nos casos em comparação com controles relacionados saudáveis, mas não atingiu significância.

O ensaio cometa alcalino, que medidas simples e duplas rupturas dos filamentos de DNA, foi utilizado para avaliar o dano ao DNA direta em PBMC de casos e controles. lesões oxidativas do ADN foi determinada por um ensaio de cometa modificado que inclui incubação da amostra com ADN-glicosilase formamidopirimidina (FPG) antes da electroforese. Fpg reconhece purinas oxidativamente modificados e introduz rupturas dos filamentos de DNA adicionais, portanto, a diferença entre as medidas Comet un-modified-FPG modifed e corresponde a danificadas oxidativamente DNA. Como mostrado na Tabela 2, lesões oxidativas do ADN foi maior nos casos de cancro do pâncreas em comparação com ambos os controlos não relacionados e não relacionados saudável; No entanto, as diferenças não foram estatisticamente significativas. Os níveis de danos de ADN directa foram significativamente elevados em casos (1,00 ± 0,05) em comparação com ambos os controlos não relacionados e afins saudáveis ​​(0,70 ± 0,06, p 0,001 e 0,82 ± 0,07, p = 0,046, respectivamente)

Em seguida,. examinamos possíveis correlações entre os fatores de risco de câncer pancreático conhecidos e biomarcadores de estresse oxidativo (Tabela 3). Todas as correlações foram ajustados para idade e sexo. Correlações entre o tabagismo e marcadores de estresse oxidativo não atingiu significância estatística com exceção de danos no DNA direta, onde uma correlação negativa significativa foi observada (r

s = -.29, p = 0,02). Não foram observadas associações significativas entre os dias bebendo e TAC, direta ou dano oxidativo ao DNA. Nenhuma correlação entre os marcadores de estresse oxidativo e pancreatite crônica foram observados; no entanto, em geral, condições inflamatórias foram associados com níveis elevados de MDA (p = 0,048).

Associação de cancro do pâncreas e danos DNA direto com SNP Expressão

O genótipo de 22 SNPs em 17 genes envolvidos no estresse oxidativo, inflamação, danos no DNA, metionina /metabolismo do folato e metabolismo carcinogênico foi determinada em casos de câncer de pâncreas e grupos de controlo (Tabela S1). Análise da contribuição de SNPs individuais para câncer de pâncreas foi determinada pela comparação SNP genótipo em casos quando comparados aos controles não relacionados saudáveis ​​(Tabela 4). O

CYP2A6

L160H alelo principal foi associada com câncer pancreático global (p = 0,03), bem como exibindo importância para a dominância, efeitos de doses recessivas e de genes.

Uma vez que o dano ao DNA direta foi significativamente elevado nos casos de câncer de pâncreas em comparação com ambos os grupos de controlo, a correlação entre o genótipo SNP e este biomarcador foram analisados ​​(Tabelas 5 e 6). A variante de AA

TNF

-308 G A SNP exibiu um efeito recessivo significativa (p = 0,003). O

ERCC4

polimorfismo R415Q demonstraram efeitos significativos de doses dominante e gene (p = 0,009). Para ambos os genes, o alelo menor resultou num aumento significativo em danos no ADN directa (Tabela 6). A variante AA do

TNFA

-308 G A SNP foi observada em apenas 2 indivíduos com um desvio larga padrão em níveis de danos no DNA diretos; no entanto, uma diferença estatística foi ainda alcançado entre danos ao DNA na AA (1,44 ± 0,19) versus o AG (0,81 ± 0,06) e GG (0,88 ± 0,04) alelos. Enquanto não há homozigotos QQ estavam presentes neste estudo, heterozigotos

ERCC4

assuntos R415Q exibiram danos no DNA elevada contra indivíduos RR (1,12 ± 0,10 e 0,84 ± 0,04, respectivamente).

Discussão

A etiologia do câncer de pâncreas esporádica permanece em grande parte desconhecido; No entanto, estudos epidemiológicos identificaram factores de risco que contribuem para o desenvolvimento dos carcinomas pancreáticos. Esses fatores incluem fatores ambientais e de estilo de vida, tais como fumar, beber e dieta, e condições inflamatórias, como diabetes e pancreatite, os quais partilham a capacidade de gerar estresse oxidativo e dano ao DNA. O presente estudo piloto foi projetado para examinar a contribuição do ambiente e genética para o nível de um indivíduo de estresse oxidativo e danos ao DNA e subsequente risco para o desenvolvimento de câncer pancreático. Para alcançar este objetivo, utilizamos três grupos de indivíduos; uma coorte do câncer de pâncreas, um grupo de controlo não relacionado vida saudável com o caso assunto, e um grupo de controle saudável geneticamente relacionados que não residem com o caso. Encontramos evidências que sugerem que tanto o ambiente e genética contribuem para o dano estresse oxidativo e DNA observada em casos e controles em nosso estudo

danos causados ​​pelo estresse oxidativo e DNA foram avaliados utilizando quatro medições:. TAC, direto do DNA e oxidativa danos medida em PBMC circulantes e os níveis de MDA. Estes parâmetros foram investigados anteriormente em indivíduos diabéticos humanos e em modelos animais de diabetes [13], [14], [28], [29]; no entanto, até à data este é o primeiro relato desses parâmetros em pacientes com câncer pancreático. Em pacientes diabéticos tipo 2, diminuição do TAC e observou-se aumento plasma MDA, em comparação com indivíduos com tolerância normal à glicose [14]. Descobrimos que ambos os casos e controles independentes apresentaram níveis médios semelhantes de TAC, MDA e dano oxidativo ao DNA, embora houvesse maior, embora não significativas, diferenças médias em indivíduos com câncer de pâncreas em comparação aos controles relacionados saudáveis ​​(Tabela 2). É possível que a regulação positiva de TAC visto nos casos de cancro do pâncreas podem ser devido ao fumo, uma vez que a percentagem de fumadores actuais e anteriores em comparação com nunca fumaram foi maior nos casos em comparação com controlos saudáveis ​​relacionados (Tabela 1). Além disso, observou-se uma correlação positiva de TAC com anos Pack (Tabela 3). Fumar foi mostrado em alguns estudos para aumentar a actividade de enzimas antioxidantes [30], [31], o que levaria a um aumento da TAC.

Uma das observações mais importantes neste estudo foi um aumento do nível de direta danos ao DNA no grupo de câncer de pâncreas em comparação com ambos os grupos de controle (Tabela 2). Esta observação pode ser relacionado com o aumento da incidência de condições inflamatórias observadas entre os casos (Tabela 1). Os nossos resultados são consistentes com o aumento do dano directo do ADN previamente relatados em pacientes com diabetes, que é uma condição inflamatória [13], [14], [28]. O dano oxidativo a bases pode ser determinada utilizando ensaios de cometa modificados, que usam enzimas de reparação de avaliar tipos específicos de danos. Um aumento da endonuclease de sítios III-sensíveis, indicativo de bases de pirimidina oxidados, foi observada na diabetes tipo 2, enquanto que um aumento em locais sensíveis à FPG, indicativo de purinas oxidados, foi encontrado em alguns, mas não todos os estudos [13], [28 ], [29]. Em nosso estudo, enquanto o dano oxidativo ao DNA modificado com FPG foi maior em pacientes com câncer pancreático em comparação com ambos os grupos de controle, o aumento não foi estatisticamente significativa. Juntos, nossos resultados indicam que um componente de estresse oxidativo e dano ao DNA podem estar relacionados com o ambiente, como ambos os casos e controles saudáveis ​​não relacionados apresentam níveis semelhantes de TAC, MDA e dano oxidativo ao DNA. No entanto, o ambiente por si só não pode explicar a diferença observada em dano direto do DNA, uma vez que estas foram significativamente elevados em casos de câncer de pâncreas em comparação com ambos os grupos de controle.

A seguir, olhou para a contribuição da genética como um modificador de câncer pancreático risco. Nós concentramos nossa análise sobre vias relacionadas a fatores conhecidos de câncer pancreático risco: metabolismo carcinogênico, inflamação e danos no DNA e reparação. O fumo do cigarro pode gerar radicais livres e oxidantes que pode levar a aumento do estresse oxidativo ao mesmo tempo que também contém compostos pró-carcinógenos que podem ser metabolizados a agentes cancerígenos potentes. Enquanto correlações entre tabagismo e biomarcadores de estresse oxidativo não foram observadas, foi verificada uma associação entre o câncer de pâncreas e

CYP2A6

polimorfismo L160H. Entre as suas diversas substratos, CYP2A6 catalisa o metabolismo da nicotina e pró-carcinogéneos específicos do tabaco, tais como 4- (methylnitrosamine) -a- (3-piridil) -1-butanona ou NNK [32]. expressão CYP2A6 e os níveis de atividade são altamente variáveis ​​em indivíduos, em grande parte devido a polimorfismos genéticos. alta actividade enzimática de CYP2A6 foi associada com pulmão, esófago e cancro colorrectal [32], [33]. O polimorfismo L160H no resultado de CYP2A6 na expressão de uma proteína com nenhuma actividade enzimática [34]. Indivíduos que possuem o

CYP2A6

Sua variante seria incapaz de activar o pró-carcinógenos na fumaça do cigarro e, portanto, seriam protegidos contra o desenvolvimento do câncer, uma descoberta que tem sido demonstrado em câncer de pulmão [35]. Em nosso estudo, descobrimos que a maioria (97%) dos casos de cancro do pâncreas possuem o homozigoto AA enzimaticamente activa

alelo em comparação com 75% e 89% dos controles independentes e coligados saudáveis, respectivamente CYP2A6 (Tabela S1 ). Estes resultados estão de acordo com um estudo recente, que encontraram um risco aumentado de 80% para o desenvolvimento de câncer de pâncreas em indivíduos que apresentaram o maior quartil de atividade CYP2A6 [36].

A superexpressão do fator de necrose tumoral alfa (TNFa) , uma citocina pró-inflamatória, tem sido implicada em doenças auto-imunes e cancros associados com um componente inflamatório [37], [38]. Neste estudo, pancreatite crónica e outras condições inflamatórias foram mais prevalentes nos casos de cancro do pâncreas (Tabela 1). Além disso, níveis elevados de MDA foram significativamente associados com condições inflamatórias e danos no DNA direta aproximou significância estatística em indivíduos com condições inflamatórias (Tabela 3). O alelo A na posição -308 no promotor do gene TNFA foi mostrado para correlacionar com a expressão de TNFa elevada [38]. Em um estudo anterior de pacientes com câncer pancreático, pancreatite foi associada com -308

TNFA

alelos AA GA +; no entanto, nenhuma associação global com câncer pancreático foi visto [39]. Além disso, o alelo -308A conferido um risco de 2 vezes para o desenvolvimento de diabetes de tipo 2 [40]. No presente estudo, encontramos uma associação entre o genótipo -308 A

TNFA

alelo e danos no DNA direta (Tabela 5 e 6); No entanto, de acordo com estudos anteriores [39], não observamos uma associação com o câncer de pâncreas (Tabela 4). Estes resultados sugerem que os indivíduos portadores do -308 A

TNFA

alelo pode ser propenso a desenvolver condições inflamatórias crônicas, que podem levar a danos no DNA e câncer pancreático.

Em nosso estudo, DNA danos em PBMCs foi significativamente elevados em doentes com cancro pancreático (Tabela 3). Reparação de DNA danificado é fundamental para a prevenção de pareado incorretamente DNA, instabilidade genômica e Costa do ADN breaks. As reparações via BER oxidativamente danificados bases do ADN e modificações que não distorçam a estrutura geral de ADN, enquanto o repara danos pathway NER resultante de adutos volumosos e aqueles que distorcem a hélice do ADN, tais como as causadas por carcinogéneos relacionados com o tabaco. Vários estudos suportam um papel para SNPs, tanto no NER e BER vias em câncer pancreático [18], [19], [21], [22]. ERCC4 faz parte do complexo de endonuclease de ERCC1-ERCC4 envolvida na via de NER [41], [42]. Enquanto homozigoto R415Q

ERCC4

alelos menores (AA) têm sido associados com um risco aumentado de câncer de mama em vários estudos [43], [44], portadores de um ou dois alelos menores foram encontrados para ter um risco diminuído para câncer pancreático [21]. O efeito do R415Q

ERCC4

polimorfismo na actividade da enzima não foi firmemente estabelecida; No entanto, os programas de modelização previram que a mudança R415Q teria um impacto negativo a função da proteína e a capacidade de reparação [21]. Em nosso estudo, o alelo RQ415 foi associada com o aumento de danos ao DNA direta. Dos 8 indivíduos que possuíam os alelos heterozigotos e exibidos danos no DNA elevada, 6 eram casos de câncer de pâncreas e 2 eram indivíduos saudáveis ​​relacionados controle (Tabela 6), sugerindo que o dano ao DNA aumentou observado em

ERCC4

heterozigotos R415Q contribui para o desenvolvimento de câncer pancreático. Isto está de acordo com um estudo recente mostrando que heterozigotos R415Q

ERCC4

foi associada à doença benigna da mama, um precursor do cancro da mama conhecido [45].

Embora estes resultados mostram associações de danos ao DNA com câncer de pâncreas e uma associação de danos ao DNA com SNPs seletivos, existem várias limitações em nosso estudo. A baixa frequência de alelos raros para alguns SNPs podem levar a resultados falsos pelo qual o recrutamento de indivíduos adicionais serão necessários para validar esses achados. viés de memória pode ter levado a erros de classificação de indivíduos em grupos de estilo de vida ambientais, como muitos dos fatores de risco de câncer de pâncreas identificados (ou seja, fumar, beber) foram auto-relatados. A idade foi significativamente menor no grupo de controlo associados saudável em comparação com indivíduos com cancro pancreático. Desde a mais de dano de DNA tem sido observado com o envelhecimento [12], temos ajustado para idade em nossas análises. No entanto, as diferenças de idade não podem explicar a associação observada entre o dano direto do DNA e cancro do pâncreas, como faixa etária dos casos e controles não relacionados saudáveis ​​foi semelhante. Todos os nossos pacientes eram caucasianos, de tal forma que estes resultados não podem estender-se a outros grupos étnicos. Nosso estudo investigou o envolvimento de polimorfismos em apenas um pequeno subconjunto de genes; assim, muitos potenciais interações gene-gene e interações gene-ambiente continuam a ser estudado

O uso de dois grupos de controle neste estudo possibilitaram a investigação da contribuição de ambiente para o cancro do pâncreas de uma forma única.; indivíduos do grupo controle que residem com os casos são mais propensos a compartilhar as mesmas exposições de estilo de vida, ao contrário de controles que são combinados para casos por dados do questionário sozinho. Além disso, estas exposições potenciais são susceptíveis de ter sido partilhada para uma quantidade considerável de tempo que permite uma avaliação mais precisa da contribuição de fatores individuais para o desenvolvimento do câncer de pâncreas. No geral, os resultados deste estudo apoiam piloto um papel de ambos genética e fatores ambientais /de estilo de vida para o desenvolvimento de câncer de pâncreas. Nós relatamos uma associação de cancro do pâncreas com danos no DNA e associações com polimorfismos específicas em genes envolvidos no metabolismo (

CYP2A6

), inflamação (

TNFA

), e danos e reparação do ADN (

ERCC4

). Avaliando danos no DNA de PBMC circulantes, bem como selecionar estratégias de genotipagem pode assim proporcionar uma importante ferramenta de triagem para identificar indivíduos com um risco aumentado de desenvolver cancro do pâncreas. Devido ao pequeno tamanho da amostra deste estudo piloto, é necessária avaliação desses desfechos em câncer e controles pancreáticas adicionais. Além disso, estudos sobre os mecanismos de SNPs individuais em

CYP2A6

,

TNFA

e

ERCC4

genes seria útil para avaliar a sua contribuição para o desenvolvimento de câncer pancreático.

Informações de Suporte

Tabela S1.

genotípicas em SNPs seleccionados

doi:. 10.1371 /journal.pone.0090052.s001

(DOCX)