Abstract

O câncer de esôfago continua a ser a sexta maior causa de câncer associado a morte e oitavo câncer mais comum em todo o mundo. Fatores genéticos, tais como polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs), pode contribuir para a carcinogênese de câncer de esôfago. Aqui, realizamos um estudo de caso-controle de base hospitalar para avaliar a susceptibilidade genética de SNPs funcionais no desenvolvimento de câncer de esôfago. Um total de 629 casos de esôfago carcinoma de células escamosas (CCEE) e 686 controles foram recrutados para este estudo. O

OPG

rs3102735 T C, G rs2073618 C,

RANK

rs1805034 T C,

RANKL

rs9533156 T C e rs2277438 A G foram determinados por ligação método de reacção de detecção. Nossos achados sugerem que

RANK

rs1805034 T C está associada com a susceptibilidade de ESCC, que é mais evidente em (≥63) pacientes do sexo masculino e idosos. Nosso estudo fornece a primeira evidência de que os polimorfismos funcionais

RANK

rs1805034 T C pode ser um indicador de susceptibilidade individual a ESCC. No entanto, os estudos ainda maiores entre as diferentes populações étnicas são necessários para verificar a nossa conclusão

Citation:. Yin J, Wang L, Tang W, Wang X, Lv L, Shao A, et al. (2014)

RANK

rs1805034 T C polimorfismo é associado à suscetibilidade de câncer de esôfago na população chinesa. PLoS ONE 9 (7): e101705. doi: 10.1371 /journal.pone.0101705

editor: Xin-Yuan Guan, The University of Hong Kong, China

Recebido: 15 Janeiro, 2014; Aceito: 11 de junho de 2014; Publicação: 14 de julho de 2014

Direitos de autor: © 2014 Yin et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este estudo foi apoiado em parte pelo National Science Foundation Natural da China (81370001, 81101889, 81000028, 81300037), província de Jiangsu Natural Science Foundation (BK2010333, BK2011481), o “333” Programa de Formação Elitista de Jiangsu (BRA2013135). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

Apesar dos recentes consideráveis ​​avanços médicos, câncer de esôfago continua a ser uma doença refratária com alta morbidade e mortalidade. Essencialmente, câncer de esôfago é o 6

th principal causa de mortalidade relacionada ao câncer ea 8

th câncer mais comum em todo o mundo [1]. Existem mais de 450.000 pacientes diagnosticados como câncer de esôfago no mundo inteiro e a incidência continua a aumentar rapidamente. Enquanto isso, a sua taxa global surpreendente sobrevivência de 5 anos varia de 15~25% [2]. Na China, mais notavelmente, câncer de esôfago classifica a 5

th câncer diagnosticado mais comum e 4

th principal causa de mortalidade relacionada com o cancro [3]. carcinoma epidermóide de esôfago (CEE) é o tipo histológico predominante de câncer de esôfago [1]. Embora estratégia terapêutica multidisciplinar tem sido recomendada, o prognóstico ainda é pobre. Tobacco use [4], [5], o consumo de álcool [4], [6], baixo nível socioeconômico, má higiene oral e deficiências nutricionais [2], [7] – [9], foram identificados como fatores de risco para câncer de esôfago . No entanto, apenas um subconjunto de indivíduos expostos a esses fatores de risco, eventualmente, desenvolver câncer de esôfago, indicando um papel fundamental de fatores genéticos, tais como polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs), na carcinogênese esofágica.

Recentemente, a osteoprotegerina ( OPG), a sua proteína-o activador de receptor de ligação de NF-kB (RANK) e o ligando de RANK (RANKL) têm sido implicados com a patogénese do cancro da mama [10]. OPG foi inicialmente identificados a partir de um intestino de rato fetal biblioteca de ADNc [11], que é única para ele existe apenas como uma molécula segregada em contraste com os outros membros da superfície celular ligadas à membrana do receptor do factor de necrose tumoral (TNF-R) da família. RANKL é a proteína de ligação a OPG (OPG ligando também chamado, OPGL) [12], [13], enquanto POSTO constitui o receptor da superfície celular que respostas para OPGL. Em muitos modelos de roedores de tumor, sinal RANKL é aumentada por meio de mecanismos diferentes [14]. OPG neutraliza RANKL, o que leva a uma interacção RANKL-RANK reduzida [12]. RANKL expressão foi verificada em vários tipos de tumores e as células inflamatórias associadas com tumores [15] – [17]. Elevação em RANKL estroma foi detectada em sítios locais de metástases ósseas ou mieloma múltiplo [18], [19], fazendo com que a actividade dos osteoclastos e destruição óssea aumentada. Nos modelos experimentais, inibidores de RANKL reduzida osteólise induzida por tumor em diversos tipos de cancro [14], destruição óssea reduzida, progressão tumoral esquelético, bem como a carga tumoral [17], [20], [21]. Além disso, a via de RANKL-RANK pode contribuir para a tumorogénese primário e metástases independente dos seus efeitos na osteólise relacionado com o tumor. Regulada por factores incluindo a prolactina e progesterona, RANKL pode conduzir a resposta mitogénica primária de epitélio mamário e a expansão de células estaminais mamárias através da activação POSTO [22] – [24], o que pode, assim, induzir o cancro mamário, oferecendo um alvo mais transformação-susceptíveis piscina. RANKL podem regular a formação de tumor mamário espontâneo e metástase impulsionado pelo oncogene potente

Neu

(

ERBB2

). RANKL bloqueio eficaz atenuou a formação de tumores mamários e metástase pulmonar no modelo de ratinho transgénico MMTV-Neu [25], [26]. Curiosamente, a OPG pode servir como um regulador positivo de formação de microvasos e podem promover a neovascularização [27] que é importante para a progressão do tumor. superexpressão OPG por células de cancro da mama aumenta o crescimento do tumor ortotópico e óssea [28]. À luz de todos estes resultados, via de sinalização RANKL /RANK /OPG emergiu como um alvo terapêutico promissor de câncer. Denosumabe, um anticorpo monoclonal contra RANKL, foi aprovado para o tratamento da osteoporose pós-menopausa e metástases ósseas no cancro da mama [29].

variações genéticas nos genes que codificam RANK, RANKL e OPG foram encontrados para afectar a artrite reumatóide [30], doença de Paget do osso [31], quadril por osteoporose fratura [32]. Mais importante ainda, na população caucasiana, uma associação significativa dos rs3102735 SNP (

OPG

) com a susceptibilidade para desenvolver o cancro da mama tem sido relatada [10]. O significado funcional de RANK /RANKL /OPG via e estudo piloto no cancro da mama sinalização levaram-nos a investigar a associação entre o câncer de esôfago e SNPs nos genes de

RANK

,

RANKL Comprar e

OPG

. Em um estudo de caso-controle de base hospitalar, realizamos análises de genotipagem dos cinco miRNA SNPs em 629 casos CICAc e 686 controles na população chinesa.

Métodos

Declaração de Ética

Este estudo de caso-controle de base hospitalar foi aprovado pelo Conselho de Administração da Universidade de Jiangsu (Zhenjiang, China) Review. Todos os indivíduos forneceram consentimento informado por escrito para ser incluídos no estudo. Nós cumpriram com a Declaração da Associação Médica Mundial de Helsinki em relação à conduta ética da pesquisa envolvendo seres e /ou animais humanos.

populações de estudo

Um total de 1.315 participantes que consistem em 629 pacientes com câncer de esôfago e 686 non-cancer controles de frequência correspondente aos casos em relação à idade (± 5 anos) e sexo foram incluídos neste estudo (Tabela 1). Todos os pacientes e controles foram recrutados consecutivamente do Hospital Popular afiliada da Universidade de Jiangsu e Affiliated Hospital da Universidade de Jiangsu (Zhenjiang, China) entre outubro de 2008 e dezembro de 2010. Todos os casos de câncer de esôfago foram diagnosticados como CICAc histologicamente. Pacientes que tinham história de câncer /metástase de câncer ou tinham recebido quimioterapia /radioterapia foram excluídos para o estudo atual.

Cada sujeito foi pessoalmente questionada por entrevistadores experientes utilizando um questionário para obter informações sobre dados demográficos (por exemplo, idade, sexo) e fatores de risco relacionados (incluindo o tabagismo e consumo de álcool). Depois da entrevista, de 2 ml de amostras de sangue venoso foram recolhidas de cada sujeito. “Os fumantes” subgrupo incluiu indivíduos que fumaram um cigarro por dia para 1 ano. Os indivíduos que consumiram ≥3 bebidas alcoólicas por semana durante . 6 meses foram subdivididas em “consumidores de álcool” categoria

extração de DNA genômico, a seleção SNP e Genotipagem

O DNA genômico foi isolado de sangue periférico usando QIAamp Blood DNA Mini Kit (Qiagen, Berlim, Alemanha) como relatado anteriormente [33]. A amostra de ADN foram amplificadas por PCR de acordo com o protocolo do fabricante. As amostras foram genotipados usando o método de reacção de detecção de ligação (LDR) [34] (o apoio técnico do Biowing Applied Biotechnology ™, Xangai, China). As análises foram repetidas em 160 amostras aleatórias (12,17%) com alta qualidade DNA para controle de qualidade.

Análises Estatísticas

Variações de características demográficas, variáveis ​​selecionadas e genótipos do

OPG

rs3102735 T C, rs2073618 G C,

RANK

rs1805034 T C,

RANKL

rs9533156 T C e rs2277438 a G variantes entre os casos e controles foram avaliados usando o

χ

2 de teste. As associações entre os cinco SNPs e risco de ESCC foram avaliados calculando as RUP e as suas análises de ICs de 95% por meio de regressão logística para as RUP bruto e OR ajustadas quando o ajuste para idade, sexo, tabagismo e estado de consumo de álcool. O equilíbrio de Hardy-Weinberg (HWE) foi testado por um goodness-of-fit

χ

2 teste para comparar as freqüências genotípicas observadas aos esperados entre os indivíduos do grupo controle. Todas as análises estatísticas foram realizadas com o SAS 9.1.3 (SAS Institute, Cary, NC).

Resultados

características da população de estudo

Características de casos e controles incluídos no o estudo estão resumidos na Tabela 1. os casos e controles são adequadamente combinados por idade e sexo como avaliado pelos

χ

2 testes. Notavelmente, existe diferença significativa em ambos estatuto beber fumar tabaco e álcool entre os pacientes CICAc e os controles (

p Art 0,001)

A informação primária para cinco genotipados SNPs foi mostrado na Tabela. 2. Em todas as 1315 amostras, a taxa de sucesso de genotipagem foi 95,13%, 96,35%, 96,43%, 96,43% e 96,81% para o

OPG

rs3102735 C T,

OPG

rs2073618 G C,

RANK

rs1805034 T C,

RANKL

rs9533156 T C e

RANKL

rs2277438 A G, respectivamente. As taxas de concordância de análises repetidas atingiu 100%. Quanto à frequência Minor Alelo (MAF), não houve diferença significativa entre os nossos controles e banco de dados de assuntos chineses para todos os cinco SNPs. As freqüências genotípicas observadas para

OPG

rs3102735 C T,

OPG

rs2073618 G C,

RANK

rs1805034 T C,

RANKL

rs9533156 T C e

RANKL

rs2277438 a . polimorfismos G nos controles estavam em HWE (

p

= 0,191, 0,371, 0,531, 0,488 e 0,700, respectivamente) (Tabela 2)

Associações entre

OPG

rs3102735 C T,

OPG

rs2073618 G C,

RANK

rs1805034 T C,

RANKL

rs9533156 T C,

RANKL

rs2277438 a polimorfismos G e risco de ESCC

a Tabela 3 resume a distribuição do genótipo de todos os cinco polimorfismos SNP em casos e controles. No único locus análises, as freqüências genotípicas de

RANK

rs1805034 T C foram 45,9% (TT), 42,9% (TC) e 11,2% (CC) nos pacientes casos e 50,5% (TT), 41,8% (TC) e 7,7% (CC) nos sujeitos de controlo. No modelo recessivo, quando o

POSTO

rs1805034 TT /TC genótipos foram utilizados como grupo de referência, o genótipo homozigoto CC foi associado com um aumento significativo do risco para CICAc (CC vs TT /TC: OR ajustado = CI 1,52, 95% = 1,03-2,24,

p

= 0,036). Quando o

RANK

rs1805034 TT genótipo homozigoto foi usado como grupo de referência, o genótipo TC não foi associado com o risco de ESCC (TC vs. TT: OR ajustado = 1,16 CI, 95% = 1,03-2,24,

p

= 0,231), mas o genótipo CC foi associado com o risco de ECSS (CC vs. TT: OR ajustado = 1,62; IC95% = 1,08-2,44,

p = 0,019

). No modelo dominante, a

RANK

variante rs1805034 CC foi associado com o risco de ESCC, em comparação com o genótipo TT (OR ajustado = 1,62, 95% CI = 1,08-2,44,

p

. = 0,019)

Nenhuma associação foi detectada entre

OPG

rs3102735 C T,

OPG

rs2073618 G C,

RANKL

rs9533156 T C,

RANKL

rs2277438 a . polimorfismos G eo risco de ECSS (Tabela 3)

Estratificação análises de

RANK

rs1805034 T C genótipo e do risco de ESCC

para avaliar os efeitos do

RANK

rs1805034 T C genótipo sobre o risco de ESCC de acordo com diferentes idades, sexo, tabagismo e consumo de álcool; foi realizada a análise de estratificação (Tabela 4). Um aumento significativo do risco de ESCC associada ao

RANK

rs1805034 T polimorfismo C era evidente entre os pacientes do sexo masculino (CC vs. TT: OR ajustado = 1,89, 95% CI = 1,16-3,08,

p

= 0,011) (TC /CC vs. TT, ajustado OR = 1,38, 95% CI = 1,05-1,81,

p

= 0,022) (CC vs. TT /TC, ajustado OR = 1,68, 95 CI% = 1,05-2,69,

p

= 0,031). Da mesma forma, nos pacientes idosos (≥63 anos de idade),

RANK

rs1805034 T polimorfismo C também foi associado com um risco significativamente aumentado de ESCC (CC vs. TT, ajustado OR = 1,84, 95% CI = 1,02 -3,31,

p

= 0,041) (Tabela 4).

Discussão

neste estudo caso-controle de base hospitalar de ESCC, foi investigada a associação de

OPG

rs3102735 C T,

OPG

rs2073618 G C,

RANK

rs1805034 T C,

RANKL

rs9533156 T C e

RANKL

rs2277438 a polimorfismos G com risco de ESCC na população chinesa. Nossas análises logística multivariada demonstrou que

RANK

rs1805034 T C genótipo tem um risco aumentado de ESCC. associação significativa com o aumento do risco de ESCC foi observado entre os pacientes do sexo masculino e pacientes idosos (≥63 anos de idade). Para nosso conhecimento, este é o primeiro estudo que demonstra uma associação significativa entre a RANK

rs1805034 T genótipo C com a susceptibilidade de ESCC

OPG foi inicialmente derivada de uma marca de sequência expressa de um. intestino de rato fetal da biblioteca de ADNc que codifica um polipéptido de 401-amino-ácido [11]. Subsequentemente, um papel fisiológico de OPG na manutenção da massa óssea normal foi sublinhado por vários estudos [11], [35], [36]. A descoberta mais tarde na linha de células mielomonocítica murino 32D levou à identificação da proteína de ligação a OPG ou de OPGL, o qual tem a sequência idêntica como RANKL e foi adicionalmente implicada com o desenvolvimento de osteoclastos [12]. A sequenciação directa de uma biblioteca de ADNc de células dendríticas mielóides POSTO osso humano derivadas da medula identificado como um novo homólogo da proteína de fusão TNFR [13]. Subsequentemente, foi identificado a partir de RANKL de murino linha celular de timoma EL40.5 [13], bem como em células T [37]. RANKL existe como um homotrímero e induz agrupamento receptor de engate em cima de RANK na superfície da célula, consequentemente, faz com que o agrupamento de receptores. eventos de ativação dentro da célula são iniciadas através de fatores associados a TNFR seguintes agrupamento POSTO suficiente. Variantes genéticas no locus de OPG foram previamente implicado com fractura osteoporótica [38], remodelação óssea, [39], a densidade mineral óssea [40], osteonecrose [41], neuroartropatia diabética [42], bem como a espondilite anquilosante [43]. Alterações no

RANK

lócus e /ou genes funcionalmente relacionados, tais como

RANKL

, também foram relatados a ser associada com a artrite reumatóide [30], a calcificação da aorta [44], mineral óssea densidade [39] e doença de Paget do osso [31]. Recentemente, novas evidências indicou uma associação entre

OPG

/

RANK

/

RANKL

polimorfismos do gene com a carcinogênese. Vários estudos demonstraram loci adicional a ser associado com câncer de mama, incluindo a região cromossómica 8q24 para

OPG

gene [45], [46]. rs3102735 SNP da

OPG

gene tem sido relatado para ser associado com a susceptibilidade de cancro da mama na população caucasiana [10]. Do mesmo modo, uma variante genética perto da extremidade 5 ‘

POSTO

(rs7226991) foi associada a um risco de cancro da mama [47]. O mecanismo subjacente a associação permanece obscura até agora. No entanto, grande maioria da associação no cromossoma 8q24 encontra-se a cerca de 128 Mb e está relacionado com diversas entidades tumorais, além de câncer de mama, incluindo próstata [48] e câncer de cólon [49].

Entre os diferentes grupos étnicos , as freqüências de polimorfismos genéticos variar drasticamente. Nosso estudo demonstrou que a frequência de

RANK

rs1805034 C foi 0,286 entre os 686 indivíduos de controle na população chinesa, que é menor do que a europeia (0,438) e Africano americano (0,478), mas semelhante com a população japonesa ( 0,311). No entanto, curiosamente, outro estudo relataram a frequência de

RANK

rs1805034 C foi 0,476 na população Han do norte da China, que difere nosso achado na coorte de East China, sugerindo o impacto étnica também pode ser interferido com fatores ambientais regionais (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/SNP/snp_ref.cgi? rs = 1.805.034). Usando Poder e Tamanho da Amostra Cálculo (PS, versão 3.0.43, 2009, https://biostat.mc.vanderbilt.edu/twiki/bin/view/Main/PowerSampleSize), considerando

RANK

rs1805034 T C alelos mutantes, o poder da nossa análise (α = 0,05) foi 0,946 em 629 casos CICAc e 686 indivíduos controle com OR ajustado de 1,52. No subgrupo masculino, o poder da nossa análise foi 0,995 entre os 434 casos e 438 indivíduos controle, com o OR ajustado 1,89. Na coorte mais velha (≥63), o poder de análise (α = 0,05) foi 0,962 entre os 314 casos e 312 controles com OR ajustado de 1,84. O estudo revelou a associação com risco aumentado de ESCC entre os pacientes do sexo masculino e pacientes idosos (≥63 anos de idade), que estava em consonância com o relatório anterior. Em um estudo retrospectivo envolvendo 74,854 pacientes CICAc do norte da China, a prevalência entre os homens foi maior do que entre as mulheres, similar aos nossos achados. Além disso, este estudo demonstrou que embora a prevalência diminuiu significativamente, a idade-de-início mediana de ESCC adiado [50], verificando a noção de que a população idosa tem um risco mais elevado.

Em conclusão, nosso estudo fornece com o evidência de que o polimorfismo funcional de

POSTO

rs1805034 T C está associada com a susceptibilidade de CICAc. Nós reconhecemos há várias limitações neste estudo que precisam ser abordadas. Em primeiro lugar, os sujeitos do estudo foram todos recrutados a partir de vários centros locais médicos dentro mesma área, que não podem representar completamente a população chinesa em geral, especialmente quando existem diversos fatores ambientais regionais. Em segundo lugar, as informações detalhadas sobre metástases e sobrevivência de câncer não foram fornecidos como o estudo de seguimento ainda está em curso, o que dificulta ainda mais análises do impacto desses polimorfismos SNP na progressão CICAc e prognóstico. Por último, como as complexidades epidemiológicos de câncer de esôfago são enormes, tornando o rastreio e prevenção limitado na melhor das hipóteses. A associação entre fatores nutricionais, exposição a toxinas fúngicas ou N-nitroso-compound em alimentos e risco de ESCC não é estudada. Mais estudos entre diferentes regiões ou populações étnicas com diversas condições de nutrição, e complementado com análises funcionais, são necessários para verificar os nossos achados.

Reconhecimentos

Queremos agradecer Dr. Yiqun Chen (Shanghai Biowing Applied Biotechnology Company, https://www.biowing.com.cn) para suporte técnico.