Abstract

Manutenção dinamarquesa de um equilíbrio entre as bactérias comensais e da mucosa imunológico sistema é crucial e intestinal disbiose pode ser um evento chave na patogênese do câncer colorretal (CRC). O receptor semelhante a Toll 4 (RST4) é um importante receptor de reconhecimento de padrões que regula a função de barreira e a inflamação no intestino por um mecanismo que envolve a activação do factor de transcrição nuclear factor de-kB (NF-kB). fatores de estilo alimentares e de vida pode afetar essas funções. Nós, portanto, utilizado um estudo de caso-coorte prospectivo dinamarquesa de 1010 casos CRC e 1829 participantes selecionados aleatoriamente a partir da dieta dinamarquesa, Câncer e coorte de Saúde para investigar três polimorfismos no

NFKB1

e

TLR4 Comprar e sua possíveis interações com fatores de dieta e estilo de vida em relação ao risco de CRC. transporte homozigotos do alelo variante do

polimorfismo TLR4

/rs5030728 foi associado com aumento do risco de CRC (razão da taxa de incidência (IRR) = 1,30; 95% intervalo de confiança (IC): 1,05-1,60; P = 0,02 (modelo de dose gene); IRR = 1,24; IC 95%: 1,01-1,51; P = 0,04 (modelo recessivo)). Del-portadores do

NFKB1

/rs28362491 polimorfismo teve um 17% (IC 95%: 1,03-1,34; P = 0,02) maior risco de CRC em comparação com portadores homozigotos do ins-alelo. No entanto, nenhuma destas estimativas de risco resistiu ajuste para múltiplas comparações. Nós não encontrou fortes interações gene-ambiente entre o polimorfismo examinado e fatores de dieta e estilo de vida em relação ao risco CRC

Citação:. Kopp TI, Andersen V, Tjonneland A, Vogel U (2015) Polimorfismos em

NFKB1

e

TLR4 Comprar e interação com fatores dietéticos e estilo de vida em relação ao câncer colorretal em um estudo prospectivo de caso-coorte dinamarquês. PLoS ONE 10 (2): e0116394. doi: 10.1371 /journal.pone.0116394

Editor do Academic: Jeffrey S. Chang, Institutos Nacionais de Pesquisa em Saúde, TAIWAN

Recebido: 21 de agosto de 2014; Aceito: 09 de dezembro de 2014; Publicação: 23 de fevereiro de 2015

Direitos de autor: © 2015 Kopp et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Disponibilidade de dados: Todos os dados relevantes estão dentro do papel e seus arquivos de suporte de informação

Financiamento:. o projeto foi apoiado por uma bolsa de doutoramento dos Conselhos de pesquisa dinamarquês em uma abordagem integrada para a avaliação risco-benefício dos efeitos na saúde humana dos alimentos do programa “e contaminantes alimentares “(Forskeruddannelse 2009-10), e por uma bolsa de doutoramento da Mobilidade (6/9 7572) do Conselho Dinamarquês de Investigação Independente (www.ufm.dk) e como parte do projeto:” carne contra o consumo de carne suína no etiologia dos casos de câncer no cólon e reto: investigações realizadas dentro da coorte Diet, Câncer e Saúde “, também do Conselho Dinamarquês para Pesquisa Independente; Ciências Médicas (Grant não 09-073597.) (Www.ufm.dk). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

Conflito de interesses:. Os autores leram a política da revista e ter os seguintes interesses concorrentes: VA recebe uma compensação como consultor para Merck Co., Inc. (MSD) e Janssen. Isto não altera a adesão dos autores para PLOS ONE políticas em dados e materiais de compartilhamento.

Introdução

O câncer colorretal (CRC) é o terceiro tipo de câncer mais comum em homens ea segunda em mulheres em todo o mundo [1]. factores hereditários são estimados para contribuir para apenas 35% do risco [2] sublinhar a importância dos factores ambientais na etiologia da CRC. De fato, fatores dietéticos e de estilo de vida têm sido intensamente estudada pelo seu papel na carcinogênese colorretal; e de álcool, tabagismo, obesidade e ingestão elevada de carne são agora estabelecido fatores de risco para CRC [3-5]. A ingestão de carne vermelha e processada tem o potencial de indução de cancro por carcinogénios químicos formados durante a cozedura da carne em altas temperaturas [6], a produção de compostos tóxicos por fermentação [7-9] ou através da indução de inflamação devido a mudanças na composição bacteriana [10] . Por outro lado, fibras, frutas e vegetais fornecem os ácidos gordos de cadeia curta (SCFA) para o epitélio do cólon por fermentação de fibra dietética e amido não absorvida [11-15]. O butirato de AGCC é importante para a integridade do cólon [14], inibe o crescimento de células cancerosas in

in vitro

[16,17] e tem propriedades anti-inflamatórias principalmente pela inibição de factor nuclear-kB (NF-kB) ativação [18].

receptores Toll-like (TLR) são importantes receptores de reconhecimento de padrões que regulam a inflamação e função de barreira no intestino mantendo assim um equilíbrio entre bactérias comensais e o sistema imunológico da mucosa [19,20] . O receptor para o lipopolissacarídeo bacteriano gram-negativas (LPS), RST4, regula a proliferação celular em resposta a lesão celular através da indução da ciclo-oxigenase 2 Expressão [21] em uma cascata que envolve a activação de NF-kB e o factor de crescimento epidérmico [22] sugerindo que TLR4 é um elemento importante na transição da inflamação neoplasia [19]. Com efeito, o aumento da expressão de TLR4 tem sido associada ao desenvolvimento da neoplasia associada a inflamação [23-26]. Além disso, temos anteriormente encontraram evidências de que a inflamação pode contribuir para CRC carcinogênese. Assim níveis, determinada geneticamente alta IL-1 e COX-2 foram associados com risco aumentado de CRC [27].

Disbiose no intestino pode ser um evento chave na patogénese de ambas as doenças inflamatórias do intestino (IBD) e CRC. Usando polimorfismos funcionais de nucleotídeo único (SNPs) e sua interação com dieta e estilo de vida pode revelar vias importantes para a carcinogênese colorretal [28]. Desde

TLR

polimorfismos têm sido associados com IBD [29], que teve como objetivo analisar um possível mecanismo mútuo para IBD e CRC.

Temos demonstrado anteriormente que o transporte da variante del-alelo as ins funcionais /del

NFKB1

/rs28362491 polimorfismo é associado com aumento do risco de CRC e interagiram com a ingestão de carne em um subconjunto do grupo de estudo [30] de acordo com os resultados de dois outros estudos também relatando risco aumentado da CRC entre os portadores da variante do polimorfismo entre um malaio [31] e uma população sueca [32], mas não um grupo de estudo chinês [32]. Um SNP funcional em

TLR4

(rs4986790) tem sido extensivamente estudada e tem sido associada com a progressão neoplásica

in vitro

[33], agressivo câncer de cólon humano [33], IBD [34-37 ] e CRC [38-40]. No entanto outros não foram capazes de encontrar uma associação entre CRC e do SNP [41-43]. Em um estudo canadense [44], a ingestão de ácidos graxos saturados na dieta foi inversamente relacionada com níveis sanguíneos de colesterol HDL em indivíduos homozigotos para o

TLR4

/rs5030728 G-alelo.

TLR4

/rs5030728 pode, portanto, interagir com componentes da dieta no intestino.

Assim, espera-se que a inflamação é um fator importante na carcinogênese colorretal e, assim, examinar se os fatores de dieta e estilo de vida (não esteróides anti-inflamatórias (NSAID) e tabagismo) modificar o risco de CRC, alterando a resposta imune da mucosa no intestino através de interagir com RST4 e NF-kB. Nós, portanto, avaliadas três polimorfismos no

NFKB1

e

TLR4 Comprar e sua possível interação com fatores de dieta e estilo de vida em uma coorte prospectiva de 1010 casos CRC e 1829 participantes selecionados aleatoriamente a partir da dieta dinamarquesa, Câncer e estudo de Saúde.

material e Métodos

indivíduos estudados

o estudo Diet, Câncer e Saúde é um estudo em curso coorte dinamarquesa projetado para investigar a relação entre a dieta, estilo de vida e o risco de câncer [45]. A coorte consiste de 57,053 pessoas, recrutados entre Dezembro de 1993 e Maio de 1997. Todos os indivíduos nasceram na Dinamarca, e os indivíduos eram 50 a 64 anos de idade e não tinha cancros anteriores no início do estudo. Amostras de sangue e dados do questionário sobre dieta e estilo de vida foram coletadas no início do estudo.

Acompanhamento e endpoints

O acompanhamento foi baseado em registros de câncer de base populacional. Entre 1994 e 31 de dezembro de 2009, 1010 casos foram diagnosticados CRC. A sub-coorte de 1829 pessoas foi escolhido aleatoriamente dentro do grupo. 28 pessoas foram ambos os casos e sub-coorte devido ao desenho do estudo utilizado [46]. 245 com os dados de genótipos desaparecidas e 16 com dados em falta sobre fatores de risco foram excluídos. Todas as informações sobre os genótipos e fatores de dieta e estilo de vida estava disponível para 915 casos CRC e 1719 membros sub-coorte.

dietéticos e estilo de vida questionário

As informações sobre dieta, estilo de vida, peso, altura, tratamento médico , exposições ambientais e outros fatores sócio-econômicos foram coletadas no momento da inscrição por meio de questionários e entrevistas e tem sido descrita em detalhes em outros lugares [27,47-49]. Em suma, o questionário de freqüência alimentar, o consumo de dieta foi avaliada em 12 categorias de respostas pré-definidas, classificando de “nunca” a “oito vezes ou mais por dia”. A ingestão diária foi então calculada pela FoodCalc [45]. tabagismo foi classificado como nunca, no passado ou atual. Pessoas de fumar pelo menos um cigarro por dia durante o último ano foram classificados como fumantes. uso de AINE ( ​​”aspirina”, “Paracetamol”, “Ibuprofeno”, ou “Outros analgésicos) foi avaliada como ≥ 2 comprimidos por mês, durante um ano no início do estudo.

A genotipagem

casaco de Buffy as preparações foram armazenadas a menos de 150 ° C até à sua utilização. O DNA foi extraído como descrito [50]. O DNA foi genotipados por LGC KBioscience (LGC KBioscience, Hoddesdon, Reino Unido) por ensaio Kasp genotipagem baseada em PCR (Erro! Referência de hiperlink não é válida. Www.lgcgenomics.com/).

NFKB1

/rs28362491 foi analisado e relatado para um subconjunto do grupo de estudo [30]. Dois dos polimorfismos (

NFKB1

/rs28362491 e

TLR4

/rs4986790) foram escolhidos com base na funcionalidade conhecida e sua associação com o CRC [30-33] e IBD [34-37] a partir de um procura literária. O

polimorfismo TLR4

/rs5030728, por outro lado, não tem funcionalidade conhecida. No entanto,

TLR4

/rs4986790 está intimamente ligado com o

TLR4

/rs5030728 (D ‘: 1,0; r

2: 0,017) usando Haploview versão 4.2 (Instituto Broad do MIT e Harvard, Cambridge) [51] com HapMap3 Genoma libertação browser # 2 (fase 3) [52]; e desde

TLR4

/rs5030728 tem uma freqüência do alelo maior menor em caucasianos do que

TLR4

/rs4986790 (0,305 vs 0,035), o polimorfismo é mais adequado para análises de interação gene-ambiente. Para confirmar a reprodutibilidade, genotipagem foi repetido por 10% das amostras produzindo 100% de identidade.

A análise estatística

Desvio de Hardy-Weinberg foi avaliada através de um teste qui-quadrado.

rácios taxa de incidência (IRR) e 95% Intervalo de confiança (IC) foram calculados de acordo com os princípios de análise de estudos de caso-coorte, usando uma abordagem não ponderada [46]. A idade foi utilizado como o intervalo de tempo em os modelos de regressão de Cox. Testes e intervalos de confiança foram baseadas em testes de Wald usando a estimativa robusta da matriz de variância-covariância para os parâmetros da regressão nos modelos de regressão de Cox [53], como descrito anteriormente [27,46,48,54-61].

Todos os modelos foram ajustados para valores basais de fatores de risco para o cancro colo-rectal, tais como índice de massa corporal (IMC) (kg /m

2, contínua), uso de terapia de reposição hormonal (TRH) (nunca /passado /corrente, entre as mulheres), a ingestão de fibra alimentar (g /dia, contínua), e carne vermelha e carne processada (g /dia, contínua) e, além de suspeitas de fatores de risco como o uso de AINE (sim /não) e tabagismo (nunca /passado /corrente). Cereais, fibras, frutas e vegetais também foram inseridos de forma linear. Todas as análises foram estratificadas por sexo, para que os (subjacentes) perigos básicos eram específicos de gênero. Para todos os polimorfismos, TIR foi calculada separadamente para portadores do alelo variante heterozigotos e homozigotos. Para

TLR4

/rs4986790 e

NFKB1

/rs28362491, portadores do alelo variante foram posteriormente agrupadas para a interação analisa uma vez não foram observados efeitos recessivos.

RST4 /Tablet rs5030728 foi inferida tanto em um gene-dose e a um modo recessivo nas análises subsequentes.

Além disso, avaliou-se a utilização de NSAID semanalmente com base nos resultados de um estudo do cancro colorectal dentro da coorte Diet, Câncer e Saúde [62] relatando que parece ser necessário a longo prazo o uso consistente de aspirina ou não-aspirina AINE para conseguir um efeito protetor. No entanto, não houve diferenças nas estimativas de risco entre o uso mensal ou semanal, por conseguinte, para manter o poder estatístico nos estratos; usamos o uso de AINE mensal nas análises.

O teste da razão de verossimilhança foi utilizado para interação análises entre os polimorfismos estudados e ingestão de carne vermelha e processada, fibra alimentar, cereais, peixe, frutas, legumes, ingestão de álcool, tabagismo e uso de AINE. Em interação analisa onde os fatores dietéticos foram inseridos como variáveis ​​categóricas, pontos de corte tercil foram baseadas na distribuição empírica entre os casos masculinos e femininos, respectivamente. As possíveis interacções foram investigados utilizando o teste da razão de verossimilhança.

Todas as análises foram realizadas utilizando o software SAS versão 9.3 (SAS Institute Inc., Cary, NC). Um p 0,05 foi considerado significativo. Além disso, para testar para comparações múltiplas, foi utilizada a correção de Bonferroni.

Ética declaração

Todos os participantes deram verbal e consentimento informado por escrito. O estudo Diet, Câncer e Saúde foi aprovado pela Comissão Nacional de Saúde Ética em Pesquisa (revista nr. (KF) 01-345 /93) e pela Agência de Protecção de Dados dinamarquesa.

Resultados

as características basais da população do estudo são apresentados na Tabela 1. Entre os membros sub-coorte, a distribuição dos genótipos do SNPs não se afastou da Hardy-Weinberg (resultados não mostrados).

as associações entre polimorfismos e CRC

portadores de variantes homozigotos do

polimorfismo TLR4

/rs5030728 estavam em 1,30 vezes (IC 95%: 1,05-1,60) maior risco de CRC em um modelo dose-gene e em 1,24 fold (95% CI: 1,01-1,51) aumento do risco de CRC em comparação com o tipo selvagem e portadores heterozigóticos num modelo recessivo (Tabela 2). Além disso, os portadores do

NFKB1

del-alelo teve um 17% (IC 95%: 1,03-1,34) maior risco de CRC em comparação com portadores homozigotos do ins-alelo (Tabela 2). Estas estimativas de risco não, no entanto, atingiu significância estatística após a correção de Bonferroni. Não houve interação entre os dois genótipos de risco

TLR4

/rs5030728 e

NFKB1

/rs28362491 mas, por outro lado, não houve efeito aditivo de ser portador de homozigotos de ambos os alelos variantes (Tabela S1 ).

Gene-ambiente analisa

Nós não encontramos nenhuma interação entre qualquer um dos fatores da dieta e os polimorfismos estudados em relação ao risco de CRC nas análises lineares (S2 tabela). Nas análises tertile, houve fraca interação entre

TLR4

/rs5030728 e ingestão de vegetais (modelo de dose Gene: P-valor para a interação (P

int) = 0,05; recessiva modelo: P

int = 0,03) (Tabela 3). Além disso, uma interação limítrofe estatisticamente significativa entre a ingestão de carne e o

NFKB1

/rs28362491 polimorfismo (P

int = 0,06) foi encontrado (Tabela 3). Para ins-portadores, as estimativas de risco foram comparáveis ​​entre os tercis de ingestão de carne. Por outro lado, entre del-portadores, a ingestão de carne na segunda (IRR = 1,46; IC 95%: 1,17-1,83) e do terceiro tercil (IRR = 1,24; 95% CI: 0,99-1,56) foi associado com risco de CRC, enquanto portadores del-alelo não estavam em risco no primeiro tercil com a ingestão de carne de baixa (IRR = 0,98; IC 95%: 0,78-1,23). No que diz respeito ao álcool, portadores variantes de

NFKB1

/rs28362491 e transportadores A-alelo homozigotos de

TLR4

/rs5030728 foram associados com o risco de CRC em comparação com os portadores do tipo selvagem homozigotos entre os participantes com um baixo ingestão de álcool. Além disso, para portadores da variante de todos os três polimorfismos, uma baixa ingestão (primeiro tercil) de álcool foi associado com maior risco CRC comparação com moderada (segunda tertile)-entrada que foi associado com o menor risco e alta ingestão de álcool (terceiro tercil ) (Tabela 3).

não houve interação entre o uso de NSAID ou o status de fumar e os genótipos estudados (Tabelas S3 e S4). Entre os não-fumantes (S4 tabela), no entanto, o

TLR4

/rs5030728 polimorfismo demonstrou efeito dose-gene que é comparável com os resultados observados entre os participantes com baixa ingestão de álcool (Tabela 3). Em um modelo em que o risco de CRC foi inferido por 25 g de consumo de carne por dia subdividido por uso de NSAID, o risco de CRC por ingestão de carne aumentou de uma forma dependente da dose entre os portadores de alelos variantes de

RST4 /rs5030728 na ausência de uso de AINE, mas não entre os AINE utilizadores (S5 tabela). Assim, o consumo de carne não foi associada a risco entre os portadores homozigóticos do alelo selvagem, ao passo que o consumo de carne foi associado com um risco aumentado de 4% por 25 g de carne /dia (95% CI: 1,00-1,09) entre os heterozigotos e 11% de aumento risco entre os portadores do alelo variante homozigoto (IC 95%: 1,02-1,22). No entanto, não houve interações significativas (S5 tabela).

Discussão

No presente estudo, verificou-se que o transporte variante homozigoto de

TLR4

/rs5030728 e variante de transporte do

NFKB1

/rs28362491 polimorfismo foram associados com risco aumentado de CRC, mas não após a correção para testes múltiplos. Temos apenas a interações fracas com alguns fatores dietéticos e, por isso, não foram capazes de reproduzir a interação anteriormente encontrada entre o

NFKB1

/rs28362491 ingestão de polimorfismo e carne. A falta de associação entre a

TLR4

/rs4986790 e CRC encontrados no presente estudo poderia ser devido à frequência muito baixa alelo variante da população dinamarquesa. Apenas uma pessoa foi homozigoto transportadora alelo variante. Nós, portanto, não se pode excluir que o efeito funcional deste SNP afeta carcinogênese colorretal.

O

NFKB1

/rs28362491 polimorfismo tem bastante consistentemente sido associado com CRC risco [30-32], e, de certa forma também IBD [29,63,64]. Tal como descrito anteriormente [65,66],

NFKB1

codifica as subunidades p50 /P105 do factor de transcrição NF-kB. NF-kB é constituído por homo ou heterodimeros de um número de diferentes subunidades p65, p50, p105, C-Rel e relB [67,68] e a combinação determina a especificidade do gene alvo. Como um heterodímero p65 /p50, o complexo é pró-inflamatório [68], enquanto que o homodímero de p50 tem propriedades anti-inflamatórias [65,67,69,70]. A abundância relativa de p50 /p65 heterodímeros e homodímeros de p50 irá, por conseguinte, determinar a magnitude da inflamação, equilibrando a resposta pró-inflamatória e anti-inflamatório [67]. O

NFKB1

/rs28362491 polimorfismo gera uma deleção de quatro nucleotídeos na região promotora causando níveis de transcrição abaixadas e esgotamento consequentemente parcial de p50 [63]. De acordo com isto, verificou-se que os níveis de ARNm de

NFKB1

foram menores no cólon biópsias de tecido saudável da homozigóticos del-transportadores em comparação com os heterozigotos [71]. Este não favoreça a resposta anti-inflamatório desde a formação do p65 pró-inflamatória heterodímero /p50 depende da concentração de p50, enquanto que a formação do homodímero de p50 anti-inflamatória depende da concentração de p50 quadrado [65].

O

polimorfismo TLR4

/rs5030728 ainda não foi ligada a CRC [20] e sua função é desconhecida [72].

TLR4

/rs4986790, que tem sido associado com DII e CRC, está intimamente ligado com o

TLR4

/rs5030728. Por conseguinte, não é claro qual dos dois polimorfismos é aquele biologicamente relevante. No entanto, nossos resultados indicam que o transporte de

TLR4

/rs4986790 não foi associada a risco de CRC, enquanto transporte de

TLR4

/rs5030728 foi associado com o risco. Isto sugere que o risco conferido pelo

transporte TLR4

/rs5030728 não foi causado por ligação com

TLR4

/rs4986790. Curiosamente, o transporte variante do

RST4 /rs5030728 A-alelo tem sido associada com uma resposta benéfica ao tratamento com anti-TNF em pacientes com DII [73], o que implica que estes pacientes podem ter uma actividade de linha de base mais elevado ou de expressão TLR4.

os dois

TLR4

SNP estão presentes em várias matrizes GWAS comumente utilizados (https://www.broadinstitute.org/mpg/snap/ldsearch.php), enquanto que a ins /del ligação

polimorfismo NFKB1

/rs28362491 não é monitorada em GWAS [65]. Nenhum dos dois RST4 SNPs foram associados com CRC em GWAS. No entanto, nosso principal foco foi a busca de interações gene-ambiente, em vez de identificar loci com fortes associações para CRC. interações gene-ambiente raramente são avaliados em GWAS.

Nós não encontrou quaisquer indícios fortes de interações gene-ambiente. Para as transportadoras variantes de

NFKB1

/rs28362491 e transportadores A-alelo homozigotos de

TLR4

/rs5030728, risco de CRC entre os consumidores de baixa carne foi menor em relação aos consumidores de alta carne médio e, que tinham risco estimativas entre 1,24 e 1,70, indicando um papel mais forte de carne na carcinogênese colorretal entre os indivíduos com resposta inflamatória elevada determinada geneticamente. Alternativamente, covaries consumo de carne com outros fatores de estilo de vida que

per se

induzir uma resposta inflamatória que não temos sido capazes de ajustar.

A interação encontrada com legumes e

TLR4

/rs5030728 no presente estudo não é diretamente interpretável e pode ser devido a pequenos grupos nos tercis. No entanto, vegetais parecia aumentar ligeiramente o risco de CRC no presente estudo, que deve ser abordada em outros estudos prospectivos.

Nós tinha limitado poder estatístico para detectar interações gene-ambiente. No entanto, o desenho do estudo prospectivo utilizado neste estudo é bem adequado para a interação gene-ambiente analisa devido ao conjunto de fatores alimentares e estilo de vida antes do diagnóstico, eliminando o risco de viés de memória. Mudando de hábitos de estilo alimentares e de vida durante o follow-up é, no entanto, possível, mas não se espera que resulte em erros de classificação diferencial entre casos e o grupo de comparação. Além disso, o presente grupo de estudo é homogênea composta por dinamarqueses e dois dos polimorfismos estudados têm altas freqüências alélicas. Utilizando o presente grupo de estudo, temos anteriormente encontrados interações gene-ambiente entre dieta e

IL10

rs3024505 (P

int; carne = 0,04, peixes = 0,007, fibra = 0.0008, legumes = 0,0005),

IL1B

C-3737T (P

int; uso de AINE = 0,040),

PTGS2

G-765c (P

int; carne = 0,006, fibra = 0,0003, frutas 0,004) e

PTGS2

T8473C (P

int; fruto = 0,03) e

PTGS2

A-1195G (P

int; fibra de 0,020 e tabagismo atual = 0,046) [27] . Ajustamos as estimativas de risco para fatores de risco suspeitos e selecionados cuidadosamente os polimorfismos com base na função e /ou previamente descobertas em associação com fatores dietéticos, CRC ou IBD. No entanto, nenhuma das análises resistiu ajuste para múltiplos ensaios. Assim, não se pode descartar que os nossos resultados se devem ao acaso e não devem, portanto, ser considerado como associações significativas.

Em conclusão, este estudo não foi capaz de demonstrar associações entre os polimorfismos estudados nos genes de mediadores inflamatórios

NFKB1

e

TLR4

como nenhuma das associações encontradas resistiu ajuste para comparações múltiplas. Nós não encontrou fortes interações gene-ambiente entre os polimorfismos analisados ​​e dieta e fatores de estilo de vida em relação ao risco de CRC.

Informações de Apoio

Tabela S1. TIR para CRC em relação a combinações de

NFKB1

/rs2836249 e

genótipos TLR4

/rs5030728

doi:. 10.1371 /journal.pone.0116394.s001

(DOCX)

S2 Table. Interação entre fatores dietéticos e os polimorfismos estudados em relação ao risco de CRC

doi:. 10.1371 /journal.pone.0116394.s002

(DOCX)

S3 Tabela. Interação entre o uso de NSAID e os polimorfismos estudados em relação ao risco de CRC

doi:. 10.1371 /journal.pone.0116394.s003

(DOCX)

S4 Table. Interação entre tabagismo e os polimorfismos estudados em relação ao risco de CRC

doi:. 10.1371 /journal.pone.0116394.s004

(DOCX)

S5 Table. Interação entre o uso de NSAID e os polimorfismos estudados por 25 g vermelho e ingestão de carne processada por dia em relação ao risco de CRC

doi:. 10.1371 /journal.pone.0116394.s005

(DOCX)

Agradecimentos

Agradecemos a Nick Martinussen e Katja Boll de assistência técnica com os dados de gestão; e Jane Christensen de consultoria estatística. O projecto foi apoiado por uma bolsa de doutoramento dos Conselhos de Pesquisa Dinamarquês em ‘Uma abordagem integrada para a avaliação risco-benefício dos efeitos na saúde humana dos alimentos e contaminantes «o programa (Forskeruddannelse 2009-10), e por uma bolsa de doutoramento da Mobilidade (09 -06 7572) do Conselho Dinamarquês de Investigação Independente (www.ufm.dk) e como parte do projeto: “carne contra o consumo de carne suína na etiologia dos casos de câncer no cólon e reto: investigações realizadas dentro da Dieta, Câncer e Saúde coorte “, também do Conselho Dinamarquês para Pesquisa Independente; Ciências Médicas (Grant não 09-073597.) (Www.ufm.dk). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito.