Abstract
Recentemente, vários estudos de associação do genoma (GWAS) identificaram diversos polimorfismos suscetíveis de nucleotídeo único (SNPs) para a doença pulmonar obstrutiva crónica (DPOC) e cancro do pulmão que são duas doenças intimamente relacionadas. Entre estes SNPs, alguns deles são partilhados por ambas as doenças, reflectindo existe possível semelhança genética entre as doenças. Aqui nós testamos a hipótese de que se esses SNPs compartilhados são preditor comum para riscos ou prognóstico da DPOC e câncer de pulmão. Dois SNPs (rs6495309 e rs1051730) localizadas em acetilcolina nicotínico alfa do receptor 3 (
CHRNA3)
gene foram genotipados em 1511 pacientes com DPOC, 1559 casos de cancro do pulmão e 1677 controles em populações chinesas sul e leste. Descobrimos que o rs6495309CC e rs6495309CT /CC genótipos variantes foram associados com risco aumentado de DPOC (OR = 1,32, 95% C.I. = 1,14-1,54) e câncer de pulmão (OR = 1,57; 95% CI = 1.31-1.87), respectivamente. O genótipo rs6495309CC contribuíram para declínio mais rápido do volume expiratório forçado anual no primeiro segundo (FEV1) em ambos os casos de DPOC e controles (
P Art 0,05), e foi associado com estágios avançados da DPOC (
P
= 0,033); os genótipos rs6495309CT /CC conferido um pobre sobrevivência para o câncer de pulmão (CI HR = 1,41, 95% = 1,13-1,75). Os ensaios de luciferase mostrou ainda que a nicotina e outros produtos químicos do tabaco teve diversos efeitos sobre a actividade da luciferase do rs6495309C ou alelos T. No entanto, nenhum destes efeitos foram encontrados para outro SNP, rs1051730G A. Os dados mostram uma associação estatística e sugerir plausibilidade biológica que a rs6495309T polimorfismo C contribuiu para o aumento dos riscos e mau prognóstico de ambos câncer de DPOC e pulmão
Citation:. Yang L, Qiu F, Lu X, Huang D, Ma G, Guo Y, et al. (2012) Polimorfismos funcionais de
CHRNA3
previsão de riscos de doença pulmonar obstrutiva crônica e câncer de pulmão em chinês. PLoS ONE 7 (10): e46071. doi: 10.1371 /journal.pone.0046071
editor: Raju Reddy, da Universidade Emory, Estados Unidos da América
Recebido: 19 Abril, 2012; Aceito: 27 de agosto de 2012; Publicação: 03 de outubro de 2012
Direitos de autor: © Yang et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados
Financiamento:. Este estudo foi apoiada pela Fundação Nacional Natural Científico da China concede 30671813, 30872178, 81072366 (JCL), e em parte por 81.170.043 (PXR), 81.001.278 (Y. Zhou), 30.872.142 (WDJ); Guangdong Provincial de Alto Nível Especialistas Grants 2010-79 (JCL); Changjiang Estudiosos e Equipe de Pesquisa Inovativa em IRT0961 concessão University e Guangdong ciência fundamento natural concessão equipa 10351012003000000 (NSZ). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito
CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes
Introdução
DPOC e câncer de pulmão são as doenças pulmonares mais impressionante crescentes com fileiras da quarta causa de morte e a primeira morte relacionada ao câncer em todo o mundo, respectivamente [1], [2]. O tabagismo é o principal fator de risco para ambas as doenças, cerca de 20-30% dos fumantes desenvolvem a DPOC e 10-15% dos fumantes desenvolvem câncer de pulmão [3], [4]. Vários mecanismos patológicos que envolvem comuns em ambas as doenças têm sido propostas, especialmente no processo inflamatório longo prazo [5], [6] e o epithelial- mesenquimal (EMT), que se pensa causar carcinogénese do pulmão durante o período de DPOC [7] , refletindo DPOC um fator de risco de câncer de pulmão [8]. Porque tanto DPOC e câncer de pulmão podem ser herdadas, as características genéticas que conferem esta dupla susceptibilidade pode sobrepor [9].
Recentemente, onze estudos de associação do genoma (GWAS) relataram vários susceptibilidade loci para câncer de DPOC e pulmão [ ,,,0],10] – [20]. Entre eles, cinco estudos foram realizados para a DPOC em brancos como norueguês, europeus americanos, não-hispânica americanos [10] – [14] e seis estudos foram realizados para câncer de pulmão em várias populações, incluindo japonês, coreano, chinês, americanos de ascendência europeia e britânicos [15] – [20]. Notavelmente, todos esses estudos têm revelado que os polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) foram localizados em genes de receptores nicotínicos de acetilcolina (
CHRNA3
,
CHRNB4
,
CHRNA5
) que foram mapeadas no cromossomo 15 q25 são partilhados pelas duas doenças [10], [11], [14] – [18]. Por exemplo, um GWAS conduzido em norueguês usando genotipagem HumanHap550 da Illumina Bead Chip informou que os rs1051730 SNP de
CHRNA3
foi significativamente associada com o risco de DPOC (
P
= 5,74 × 10
– 10) [11], e outro estudo realizado em americana informou que os rs8042374 SNP em 15 q25 foi loci susceptibilidade para câncer de pulmão (
P
= 7,75 × 10
-12) [16]. No entanto, esta etiologia partilhada genética pode ser simplesmente devido a dependência de nicotina porque estes SNPs também estão associados com o comportamento tabágico, [21], [22]. No entanto, os resultados controversos foram relatados em pessoas que nunca fumaram. Estudos em populações americanas e britânicas mostraram que estes SNPs não foram associados com risco de câncer de pulmão em não fumantes, mas estudos em algumas outras populações europeias, japonesas e chinesas relataram uma associação significativa em nunca fumantes [17], [23] – [25 ]. É provável que porque havia fumantes passivos incluídos como nunca fumaram nestes estudos, como erro de classificação pode ter influenciado as associações.
Efeitos genéticos de algumas SNPs sensíveis podem variar entre diferentes etnias. Um recente estudo chinês informou que os dois SNPs causais mais significativos (isto é, rs1051730, rs8034191) compartilhados por câncer de pulmão e DPOC em populações europeias não foram associados com o risco de câncer de pulmão em população chinesa [25]. Eles descobriram um SNP funcional (rs6495309) no
CHRNA3
gene que exerceu um efeito sobre a expressão do gene que regula, levando a um aumento do risco de cancro do pulmão. Curiosamente, este SNP também foi associado com o risco de DPOC em noruegueses [11]. No entanto, nenhum estudo investigou esses SNPs na DPOC na população chinesa.
DPOC e câncer de pulmão estão intimamente relacionados, para estudar simultaneamente esses SNPs suscetíveis em ambas as doenças que revelam os mecanismos genéticos compartilhados por estas doenças, o que pode explicar por que a incidência de câncer de pulmão é elevada em pacientes com DPOC. Além disso, o tabagismo é sempre associada com mau prognóstico da DPOC e câncer de pulmão [26], [27], esses SNPs de genes relacionados com a nicotina pode ter alguns efeitos sobre o prognóstico de pacientes com DPOC ou câncer de pulmão. Portanto, no presente estudo, que investigou as associações entre dois SNPs (rs1051730 e rs6495309) no
CHRNA3
gene e risco, bem como o prognóstico de câncer de DPOC e de pulmão em populações chinesas sul e leste. Analisamos ainda mais a funcionalidade desses polimorfismos com ensaios biológicos.
Métodos
Os sujeitos do estudo
Nós realizados dois estudos de caso-controle de base hospitalar em populações chinesas sul e leste. Resumidamente, a população do sul da China incluiu 1025 pacientes com DPOC, 1056 pacientes com cancro do pulmão e 1061 controles normais foi utilizado como um conjunto descoberta e da população oriental chinesa incluídos 486 pacientes com DPOC, 503 casos de câncer de pulmão e 616 controles foi usado como um conjunto de validação. Os pacientes com câncer de pulmão foram previamente descritos [28] – [31]; Definição de DPOC foi de acordo com a Iniciativa Global para a Doença Pulmonar Obstrutiva Crônica [2], os controles eram função pulmonar normal e foram idade (± 5 anos) e sexo com casos de DPOC pareados por freqüência. Além disso, havia 510 pacientes com câncer de pulmão do sul da China e 296 casos do leste da China, que tiveram resultados completos de sobrevivência dados de morte causada diretamente por câncer de pulmão ou sobrevivência, e 116 pacientes com DPOC e 357 controles tinha pelo menos quatro anos de acompanhamento, entre 2002 e 2010 com detecções de espirometria anuais [26], [32], [33]. Todos os participantes eram chineses Han étnicas e eles compartilharam nenhum parentesco com o outro, e nenhum tinha transfusão de sangue nos últimos 6 meses. O participante foi convidado a fornecer dados sobre tabagismo, DPOC pré-existente e outros fatores e para doar sangue 5 ml periférico após um consentimento informado foi obtido de todos os participantes em forma escrita. Detalhes adicionais sobre o recrutamento amostras ea definição de tabagismo e outros fatores foram fornecidos no Apêndice S1 e em outros lugares [28] – [30], [34]. Os estudos foram aprovados pelos conselhos de revisão institucionais da Universidade de Medicina Guangzhou (Comitê de Ética de Guangzhou Medical University: GZMC2007-07-0676) e da Universidade Soochow (Comitê de Ética da Universidade de Soochow: SZUM2008031233).
SNP Seleção e Genotipagem análise
com base nos dados de GWAS publicado em DPOC ou cancro do pulmão, montamos uma base de dados contendo SNPs relatados e
valores P
de cada associação para as doenças, e procurou o loci compartilhada por ambas as doenças com um arquivo excel self-made (File S1). Sete SNPs foram identificados (isto é, rs1051730, rs1394371, rs1996371, rs4887077, rs6495309, rs8034191 e rs667282; Figura S1). Todos estes SNPs foram localizados no cromossoma 15 Q25, e cinco SNPs (rs1051730, rs1394371, rs1996371, rs4887077 e rs8034191) estavam em desequilíbrio altamente de ligação (LD) uns com os outros (D ‘= 1,00, r
2 0,80), e os outros dois SNPs rs6495309, rs667282 foram também altamente LD (D ‘= 0,90, r
2 = 0,71) (Figura S2). Portanto, foram selecionados dois SNPs (rs1051730G A: Y215Y; rs6495309T C: -2109 pb para a transcrição local inicial ATG). Como SNPs representativos que cobrem a informação genética de, acima de tudo relataram GWAS SNPs
genotipagem SNP foi realizada pelo método de PCR-RFLP. Resumidamente, primers [5′-GCC ATC ATC AAA GCC CCA GGC TT-3 ‘(para a frente) e 5′-GGC AGG TAG AAG ACG AGC AC-3’ (reverso)] e a enzima
Dra
I (New England Biolabs, Ipswich, MA, EUA) foram utilizados para identificar a rs1051730G a genótipos. Primers [5′-CTC CTG GCA TTC AGC AAA-3 ‘(para a frente) e 5′-AGG CGG CAG ATC ACC TAA-3’ (reverso)] e a enzima
Nla
III (New England BioLabs) foram utilizados para identificar a rs6495309T genótipos C. 10% das amostras foram seleccionados aleatoriamente para realizar ensaios repetidos para cada SNP, e os resultados foram de 100% concordante. Nós também selecionou aleatoriamente 100 amostras de sequenciamento direto para confirmar os resultados de genotipagem, e os resultados também foram 100% concordantes (Figura S3).
luciferase Ensaios
Dois plasmídeos repórter luciferase continha o
CHRNA3 e região promotora quer com rs6495309T ou alelo C foram dotados de Dr. Cheng Wu e Zhibin Hu [25]. Detectamos efeitos dos SNPs sobre a actividade do promotor em células hospedeiras sob o tratamento do extracto de tabaco ou agentes cancerígenos químicos do tabaco [isto é, a nicotina, a nicotina derivada de nitrosamina cetona (NNK) ou benzo [a] pireno (B (a) P) ]. extracto de tabaco foi auto preparado como descrito por Nakamura et ai. [35]. Resumidamente, a fumaça de dois cigarros acesos foi recolhida por uma bomba de seringa e foi enviado para 50 ml DMEM-F12. Após a selagem e a mistura completa, NaOH 1 M foi usada para ajustar o seu pH para 7,4 e filtro de membrana (tamanho dos poros: 0,22 mm) foi utilizada para remover as bactérias. Nós semeadas 5 × 10
5 linhas de células de pulmão humanas, incluindo 16HBE (uma linha brônquica humana imortal de células epiteliais), A549 (linha de células de adenocarcinoma do pulmão humano) e H460 (um pulmão linha celular humana grande carcinoma de células) em 24 poços placas e transfectou-los com uma construção de pGL3-basic com rs6495309C ou alelo T. As três linhas celulares foram adquiridos de celular Bank of Type Culture Collection da Academia Chinesa de Ciências, Xangai Instituto de Biologia Celular, da Academia Chinesa de Ciências. pRL-TK plasmídeo (Promega) foi co-transfectado como um controlo normalizado. Todas as transfecções foram efectuadas em triplicado. Depois que as células foram cultivadas durante 14 horas, uma concentração final de 10 uM de nicotina, 100 nM ou 1 uM de NNK B (a) P foram adicionados às culturas, respectivamente [36]. As actividades da
CHRNA3-
repórter de luciferase de pirilampo pGL3 com o repórter e do padrão interno, com a luciferase da Renilla foi quantificada por um-Luciferase Reporter Assay dupla Sistema (Promega, Madison, WI, EUA) após tratamento de 1 hora.
Análise estatística
O teste do qui-quadrado foi utilizado para comparar entre os grupos de variáveis categóricas entre casos e controles, bem como teste de equilíbrio de Hardy-Weinberg nos controles. As associações entre os SNPs e DPOC, bem como os riscos de câncer de pulmão foram estimados usando um modelo de regressão logística incondicional com ajuste para idade, sexo, tabagismo, e estado de beber. O melhor modelo de efeito genético para cada SNP sobre o risco de doenças foi estimado com base no menor valor de critério de informação de Akaike (AIC) [37]. 10.000 testes de permutação foram utilizados para estimar exata
valores P
do associado
P valor Compra de risco da DPOC ou câncer de pulmão. análise de estratificação foi realizada para mostrar o efeito de possíveis fatores de confundimento sobre a associação entre genótipos CHRNA3 e risco de doenças pulmonares, e interações gene-ambiente na DPOC ou risco de câncer de pulmão, bem como a sobrevivência do cancro do pulmão foram analisados com uma interação multiplicativa como quando OR 11 OR 10 × ou 01, em que OR 11 = o ou quando ambos os fatores estavam presentes, ou 01 = o OR quando apenas o fator 1 estava presente, ou 10 = o ou quando único fator 2 estava presente [38]. Breslow-Day teste foi utilizado para analisar a homogeneidade entre o estrato-RUP em análise de estratificação. O software de tamanho e potência da amostra de cálculo (PS) (https://biostat.mc.vanderbilt.edu/twiki/bin/view/Main/PowerSampleSize) foi usada para calcular o poder estatístico. One-way ANOVA e teste do modelo de regressão linear com ajuste para idade, sexo, tabagismo, e estado de beber foram utilizados para analisar o declínio anual de FEV1 pré-broncodilatador pelo
CHRNA3
genótipos e circundantes fatores como idade , sexo, tabagismo, pack-ano fumados, estado beber, cozinhar com carvão, biomassa usando e estágios DPOC. O método de Kaplan-Meier, teste log-rank e modelo de regressão de riscos proporcionais de Cox com ajuste para idade, sexo, tabagismo, histologia, estágios, cirurgia, quimioterapia e radioterapia foram utilizados para avaliar os efeitos do
CHRNA3
genótipos, bem como os fatores acima circundantes e tratamentos clínicos sobre a sobrevida global dos pacientes com câncer de pulmão. A diferença de actividade de luciferase foi analisada por
t
teste de Student. A bicaudal
P Art 0,05 foi considerado estatisticamente significativo, e o software SAS (versão 9.1; SAS Institute, Cary, NC, EUA) foi utilizado para todas as análises
CHRNA3 genótipos e riscos da DPOC ou câncer pulmonar
População, variáveis selecionadas e informações clínicas dos pacientes com DPOC e câncer de pulmão, bem como controles saudáveis são apresentados na Tabela S1. Como mostrado, tabagismo, pack-ano fumados, cozinhar com carvão, biomassa usando são fatores de risco comuns para ambas as doenças (
P Art 0,05 para todos)
A distribuição de frequência. genótipos dos dois SNPs em indivíduos foram apresentados na Tabela 1. no conjunto de descoberta, verificou-se associações significativas entre rs6495309T genótipos C, bem como alelos e ambos os riscos de doenças (
P
0,05 para todos). De acordo com o menor valor de AIC, o genótipo rs6495309CC exerceu um risco significativamente aumentado de DPOC sob o modelo recessivo genética (OR = 1,33; IC95% = 1,10-1,60;
P
= 0,003), enquanto o rs6495309CT /CC genótipos foram associados com o risco de câncer de pulmão sob modelo genético dominante (OR = 1,51; IC95% = 1,21-1,87;
P
= 2,2 × 10
-4). No entanto, não houve associação significativa entre ambas as doenças e os genótipos nem alelos foram encontrados para o SNP rs1051730G A (
P Art 0,05 para todos).
Nós só validou as associações de rs6495309T C no leste da China e os resultados foram consistentes. Os portadores de rs6495309CC genótipo teve um vezes 1,32 aumento do risco de DPOC (OR = 1,32, 95% CI = 1,02-1,71;
P
= 0,036) e os genótipos /CC rs6495309CT teve um vezes 1,66 aumentado de câncer de pulmão risco (OR = 1,66, 95% CI = 1,21-2,26;
P
= 0,002). As associações foram homogêneos em dois conjuntos de dados (DPOC,
P
= 0,907; cancro do pulmão,
P
= 0,549), os genótipos rs6495309CC e rs6495309CT /CC conferidos a riscos acrescidos de DPOC (OR = 1,32, 95% CI = 1,14-1,54,
P
= 1,3 × 10
-4) e cancro do pulmão (OR = 1,57; IC95% = 1,31-1,87,
P
= 2,2 × 10
-7), respectivamente (Figura S4). Enquanto isso, o teste de permutação ainda confirmada acima associações após correcção para 10.000 testes de reamostragem (corrigido
P
= 0,001 para a DPOC;
P
= 5,9 × 10
-6 para câncer de pulmão, respectivamente ).
DPOC contribui para um aumento do risco de cancro do pulmão, assim, os genótipos adversas podem ter um efeito aditivo sobre o aumento do risco de câncer de pulmão com DPOC pré-existente. Naqueles pacientes com DPOC pré-existente, genótipos rs6495309C tiveram um risco intuitivamente mais elevado de câncer de pulmão (OR = 1,83, 95% CI = 1,04-3,21,
P
= 0,024) em comparação com os indivíduos sem pré-existente DPOC (OR = 1,50, 95% CI = 1,24-1,81,
P
= 1,47 × 10
-5), mas estas RUP não foram estatisticamente diferentes de teste (Breslow-Day:
P
= 0,364, dados não mostrados).
análise estratificação
Nós fundiu as duas populações em análise de estratificação para aumentar o poder do estudo. Apenas os dados para o rs6495309T polimorfismo C foram apresentados, porque o rs1051730G A teve resultados não mais positivos. Como mostrado na Figura S4, houve diferenças significativas das associações entre as
genótipos e o aumento do risco de DPOC, bem como câncer de pulmão em estado de tabagismo (teste de Breslow-Day CHRNA3
:
P
= 0,043 para a DPOC;
P
= 0,002 para câncer de pulmão), como as associações foram todas significativas em fumantes (
P Art 0,05 para todos), mas não em nunca fumantes (
P
0,05 para todos); e eles também foram significativos para o risco de cancro do pulmão (
P
= 0,028) e para o risco de DPOC com uma fronteira significativa (
P
= 0,098) em fumantes passivos. Além disso, havia o risco de câncer de pulmão significativamente mais elevada naqueles com rs6495309CT genótipos /CC e tabagismo passivo dos pais (OR = 3,53; IC95% = 1,73-7,20;
P
= 0,001) em comparação com aqueles com tabagismo passivo não dos pais (teste de Breslow-Day: all
P
= 0,008) no entanto, não houve diferença significativa no efeito da rs6495309T C por idade, sexo, estado beber, cozinhar com carvão, biomassa usando ou estágios clínicos em ambas as doenças
uma vez que foi observada uma interação intuitiva significativa entre o
CHRNA3
genótipos adversos eo risco de câncer de pulmão (Figura S4), que mostrou ainda interações entre o SNP rs6495309T . C e tabagismo com três condições (nunca fumante, fumante passivo, avoider fumar) em ambos os riscos DPOC e câncer de pulmão na Figura 1. Como mostrado, interações significativas entre nunca fumantes e genótipos rs6495309C foram observados para o risco de ambas as doenças (
P =
0,048 para a DPOC;
P = 0,003
para câncer de pulmão), e entre fumadores e rs6495309C genótipos passivas para o aumento do risco de câncer de pulmão (
P =
0,010). Além disso, como mostrado na Figura S4, o tabagismo passivo dos pais também interagiu com os genótipos rs6495309CT /CC em aumentar o risco de câncer de pulmão (
P
= 0,005) eo risco de DPOC com marginalmente significante (
P
= 0,051).
O fumante avoiders com rs6495309TT genótipo são definidos como referência. O genótipo (s) variante rs6495309C interagiu com o tabagismo sobre os riscos de ambas as doenças, mas apenas interagiu com o tabagismo passivo no risco de câncer de pulmão.
CHRNA3 genótipos e Função Pulmonar
Conforme mostrado na Figura 2, as transportadoras genótipo rs6495309CC tiveram uma maior diminuição média anual significativo de pré-FEV1 do que a CT genótipos /CC em 116 pacientes com DPOC (CC: n = 36, -0,115 ± 0,086 L, CT /TT: n = 80, – 0,080 ± 0,059 L,
t
teste de Student:
teste de regressão linear P = 0,028
,
P
= 0,023; Figura 2A). Resultado semelhante também foi observado em 357 indivíduos do grupo controle (CC: n = 115, -0,076 ± 0,077 L, CT /TT: n = 242, -0,095 ± 0,098 L,
t
teste de Student:
P
= 0,047, teste de regressão linear
P
= 0,045; Figura 2B). Além disso, o rs6495309T polimorfismo C foi significativamente correlacionada com a progressão da DPOC exibiram por etapas ouro DPOC (
P
= 0,033)
A, A diminuição média anual de FEV1 pré-broncodilatador por rs6495309T genótipos C em pacientes com DPOC. B, A diminuição média anual de FEV1 pré-broncodilatador por rs6495309T genótipos C em controles saudáveis. C, curva de sobrevivência de Kaplan-Meier para pacientes com câncer de pulmão por rs6495309T genótipos C no conjunto Discovery. D, curva de sobrevivência de Kaplan-Meier para pacientes com câncer de pulmão por rs6495309T genótipos C no conjunto de validação. O genótipo variante rs6495309CC foi associado com declínio mais rápido da pré-broncodilatador FEV1 em ambos os casos e controles de DPOC, e os genótipos rs6495309C conferiu uma pior sobrevida para câncer de pulmão.
Além disso, o status e pacote de fumar ano fumado foram associados com o declínio anual de pré-broncodilatador FEV1 em ambos os casos de DPOC e controles (
P Art 0,05), enquanto a biomassa usando, estágios DPOC possuíam mesmo efeito em casos e sexo tinha mesmos efeitos em controles (
P =
0,032, Tabela S2).
CHRNA3 genótipos e sobrevivência de pacientes com câncer pulmonar
A análise de sobrevivência mostrou que a idade, tabagismo, estágios clínicos, cirúrgicos operação, quimioterapia, radioterapia e rádio foram significativamente associados com os resultados de sobrevivência de pacientes com câncer de pulmão (
P Art 0,05 para todos; Tabela S3)
Como mostrado na Tabela 2, a pior. sobrevivência com um tempo médio de sobrevivência (MST) de 12 meses foi observada nos genótipos /CC transportadoras rs6495309CT do que a de 15 meses em rs6495309TT portadores do genótipo no sul da China (
P
= 0,026, Figura 2c). A análise do modelo de Cox mostrou que a razão de risco (HR) de genótipos rs6495309C na morte por câncer foi estatisticamente significativa (HR = 1,34, 95% CI = 1,03-1,74,
P
= 0,028). Os resultados na oriental chinesa confirmou esses achados, em que rs6495309 CT portadores genótipos /CC teve uma MST muito inferior (13 meses) do que portadores do genótipo rs6495309TT com um 18 MST (teste-rank de log:
P = 0,025
; modelo de COX: HR = 1,55, 95% CI = 1,04-2,30,
P
= 0,028; Figura 2D). A análise conjunta de duas populações mostraram que os genótipos rs6495309CT /CC conferiu um 1,41 vezes maior risco de morte (95% CI = 1,13-1,75,
P
= 0,002) do que rs6495309TT genótipo para pacientes com câncer de pulmão.
O efeito genético negativo sobre a sobrevivência do cancro do pulmão foi então investigada em análise de estratificação. Como mostrado na Figura S5, a associação entre rs6495309CT genótipos /CC e baixa sobrevida de câncer de pulmão foi mais evidente no sexo masculino, em fumantes, em subgrupos de mais pack-ano fumados, em pacientes com estágio I clínica ou II, e em pacientes com escamosas tipo de carcinoma de células. Além disso, não houve interação significativa entre rs6495309T genótipos C e os fatores ambientais na sobrevivência do cancro do pulmão (
P Art 0,05 para todos).
Atividade de Gene Reporter
como mostrado na Figura 3, foi confirmada a actividade do gene repórter maior impulsionado pelo alelo rs6495309C comparada com a impulsionado pelo alelo rs6495309T [25], e tabaco extrair, bem como a nicotina pode induzir uma actividade promotora maior para os dois genes repórter do rs6495309T ou C alelo (
P
0,05 para todas as linhas celulares). Enquanto isso, extracto de tabaco e nicotina pode induzir uma significativamente maior aumento da actividade de luciferase conduzido pelo alelo rs6495309C do que accionado pelo alelo T (de Student
t
teste:
P
0,05 para todos) . Além disso, também descobrimos que NNK também registar um aumento moderado da actividade de transcrição do rs6495309C construir do que o do construto rs6495309T (
P
0,05 para todos). No entanto, não foi observado esse efeito no âmbito do tratamento de B (a) P.
A, 16HBE. B, A549. C, NCI-520. Colunas, média de três experiências independentes; bares, SD; ea diferença de actividade luciferase entre alelo C /T e os níveis de atividade luciferase por tratamento químico (actividade de luciferase com tratamento químico – atividade luciferase sem tratamento) foram analisados por Student
t
teste Tobacco extrato, nicotina e NNK poderia induzir uma significativamente maior aumento da atividade luciferase conduzida pelo alelo rs6495309C do que impulsionado pelo alelo T
Discussão
o nosso estudo revelou que o SNP rs6495309T . C no
gene CHRNA3
foi associada a um aumento dos riscos e mau prognóstico, tanto DPOC e pulmão Caner em populações chinesas. Os genótipos variantes rs6495309C (CC ou CT /CC) interagiram com o tabagismo no aumento dos riscos de ambas as doenças e, potencialmente, ao tabagismo passivo sobre o risco de câncer de pulmão e DPOC. Os ensaios de repórter mostraram que a nicotina e NNK, mas não B (a) P pode induzir uma actividade promotora maior do alelo rs6495309C do alelo T. No entanto, para o SNP rs1051730G A, não foi observada associação significativa nem para a DPOC, nem cancro do pulmão. Para nosso conhecimento, este é o primeiro estudo a revelar o SNP no
CHRNA3
gene foi associado a ambos os riscos DPOC e câncer de pulmão e prognóstico.
A função biológica da variante rs6495309C genótipos sobre o aumento do risco de câncer de pulmão tinha sido descrito anteriormente [25]. Aqui, mostramos que a rs6495309T C variação contribuiu para uma redução nos fenótipos espirometria. O rápido declínio do FEV1 é um marcador para a obstrução do fluxo de ar e usado para avaliar a gravidade da obstrução ao fluxo aéreo [39], isto é consistente com a nossa conclusão de que o genótipo rs6495309CC foi correlacionada com os estágios DPOC piores. Estudos têm mostrado que CHRNA3 associado com o vício de fumar através da expressão elevada de CHRNA3 nas principais regiões do cérebro [40], os portadores do genótipo rs6495309CC pode consumir mais cigarros, conduzindo assim a mais danos da função pulmonar [26], [41] . Consistentemente, os pacientes de câncer de pulmão com os genótipos rs6495309C teve sobrevivência pobre, porque o tabagismo está sempre associada a uma diminuição da sobrevida de câncer de pulmão [27], e funções CHRNA3 para promover a resistência à quimioterapia através da proliferação dependente de Akt ea sobrevivência NF-kappaB-dependentes vias sob a estimulação de NNK [36], [42] – [44]. Tomados em conjunto, que suportada que o rs6495309T polimorfismo C é um indicador disponível de prognóstico de ambos cancro da DPOC e pulmão
experimentalmente expondo as células transfectadas com os plasmídeos para os componentes químicos relacionados com o tabaco, verificou-se que a nicotina. induziu um maior nível de actividade do promotor de
CHRNA3
sob o controlo do promotor com o alelo rs6495309C do que com o alelo T. Portanto, esses portadores do alelo rs6495309C são mais suscetíveis a ser a dependência de nicotina. Curiosamente, também descobrimos que NNK conferido um aumento da atividade de transcrição particularmente para o
CHRNA3
promotor com o alelo rs6495309C. Porque
CHRNA3
é também um receptor de NNK, poderíamos supor que NNK modula o efeito genético negativo de genótipos rs6495309C no aumento do risco de doenças pulmonares, porque NNK pode causar mutação genética, danos no DNA, ativação de oncogenes e tumor-relacionada vias de sinalização [45], [46]
na análise estratificada, as associações entre os genótipos variantes rs6495309C e DPOC, bem como o risco de câncer de pulmão foram todas significativas em fumantes, mas não em pessoas que nunca fumaram.; eles também foram significativos para o risco de câncer de pulmão, e marginalmente significante para o risco de DPOC em fumantes passivos, que foi novos achados. O CHRNA3 SNPs estão associados com o comportamento de fumar [21], [22]; é concebível que os genótipos variantes rs6495309C interagiu com cada vez fumar no aumento da DPOC e câncer de pulmão de risco, e entre os genótipos variantes e tabagismo passivo sobre o aumento do risco de câncer de pulmão, devido à modulação de tabaco em CHRNA3. Além disso, os indivíduos que são fumantes passivos na infância (tabagismo passivo dos pais) com genótipos rs6495309C enfrentariam um alto risco mais visíveis de câncer de pulmão, bem como a DPOC, o que reflecte um risco de perigo do tabagismo dos pais sobre os filhos de saudável. Estudos anteriores tiveram resultados controversos da associação entre
CHRNA3
SNPs e doenças pulmonares arriscar em nunca fumantes [16], [17], [25], principalmente devido ao viés de diferentes status de tabagismo passivo. Aqui, nós mostramos que a associação foi significativa em fumante passivo, mas não em avoider fumaça, sugerindo que o CHRNA3 SNPs só pode exercer o seu efeito genético na população relacionada ao tabagismo.
Como sabemos, DPOC e câncer de pulmão são as doenças relacionadas com o tabagismo mais marcantes, e DPOC é considerada um importante fator de risco de câncer de pulmão [8]. Aqui, este funcional causal SNP rs6495309T C compartilhada por DPOC e câncer de pulmão, com o apoio de uma ligação intrínseca do efeito do fumo sobre estas doenças. Além disso, casos de DPOC com genótipos rs6495309C sofreria um risco intuitivamente mais elevado de câncer de pulmão, indicando uma possível predisposição de pacientes com DPOC para o desenvolvimento de câncer de pulmão naqueles portadores de genótipos. No entanto, estudos profundamente em investigação e controlo desses marcadores genéticos indicados para prever o risco de câncer de pulmão em pacientes com DPOC são essenciais.
O presente estudo tem vários pontos fortes. Em estudos de caso-controle de câncer de pulmão anteriores, os controles eram indivíduos sem câncer sem excluir os pacientes com DPOC [15], [16], [18], [19], [25], [33] e, portanto, esses estudos poderiam não evitar um possível viés de confusão na avaliação da associação entre as variantes genéticas e risco de câncer de pulmão. Aqui, em nosso estudo de caso-controle projetado, os controles eram todos de função pulmonar normal e com livre do câncer, o que nos permitiu comparar simultaneamente os grupos DPOC e câncer de pulmão com o mesmo grupo de controle. Tal desenho do estudo nos ajudou a desvendar a ligação intrínseca entre DPOC e câncer de pulmão. Além disso, nosso estudo teve alta potência estatística tanto para DPOC e análise de associação do cancro do pulmão (98,3% para câncer de pulmão, 94,5% para a DPOC). No entanto, houve também algumas limitações porque este era um estudo de caso-controle de base hospitalar, deve haver viés de seleção ou viés de informação.