Abstract
Fundo
O cancro do cólon sempre foi diagnosticado numa fase tardia, que está associada com mau prognóstico. O soro marcadores tumorais CEA e CA19-9 usado atualmente exibir baixa sensibilidade e especificidade e pode não ter valor diagnóstico no câncer de cólon estágio inicial. Assim, existe uma necessidade urgente de identificar novos marcadores biológicos para uso na detecção precoce do câncer de cólon.
Métodos
Neste estudo, a expressão de DC-SIGN e DC-SIGNR em soro foi detectado pelo ensaio de imunoabsorção ligado a enzima (ELISA). DC-SIGN e expressão DC-SIGNR foi detectado em tecidos de câncer por imuno-histoquímica (IHQ).
Resultados
O nível de SDC-SIGN foi menor nos pacientes do que nos controles saudáveis, enquanto o nível de SDC-SIGNR dos pacientes é maior do que nos controles saudáveis. Ambos SDC-SIGN e SDC-SIGNR teve significados de diagnóstico para pacientes com câncer, eo diagnóstico combinada destes dois marcadores foi maior do que os dois sozinhos. Além disso, houve diferenças significativas entre ambas SDC-SIGN e SDC-SIGNR em fase I /II os pacientes e os controles saudáveis. Além disso, de alto nível SDC-SIGN foi acompanhado com o tempo de sobrevida longa. Além disso, DC-SIGNR foi negativo nos focos de câncer e combinados tecidos do cólon normal, mas foi fracamente positiva entre os focos câncer. coloração DC-SIGN foi fraco nos tecidos do cólon normais pareados, forte no estroma tumoral e margem invasiva de tecidos de câncer de cólon, e negativamente correlacionada com o nível de SDC-SIGN no soro do mesmo paciente. Curiosamente, a percentagem de sobrevivência de pacientes com um DC-SIGN densidade de . 0.001219 (o intervalo de confiança de 95% superior dos tecidos do cólon normais pareados) foi maior do que para todos os outros pacientes
Conclusão
DC-SIGN e DC-SIGNR são marcadores moleculares baseados no sangue que podem potencialmente ser usados para o diagnóstico de pacientes em fase inicial. Além disso, a expressão de DC-SIGN no soro e tecidos de câncer pode afetar o tempo de sobrevivência de pacientes com câncer de cólon
Citation:. Jiang Y, Zhang C, Chen K, Chen Z, Sun Z, Zhang Z, et al . (2014) o significado clínico da DC-SIGN e DC-SIGNR, que são marcadores Novel Expresso em cancro do cólon humano. PLoS ONE 9 (12): e114748. doi: 10.1371 /journal.pone.0114748
editor: Xin-Yuan Guan, The University of Hong Kong, China
Recebido: 23 de julho de 2014; Aceito: 13 de novembro de 2014; Publicação: 12 de dezembro de 2014
Direitos de autor: © 2014 Jiang et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados
Data Availability:. O autores confirmam que todos os dados subjacentes às conclusões estão totalmente disponíveis sem restrições. Todos os dados relevantes estão dentro do papel e seus arquivos de suporte de informação
Financiamento:. Este trabalho foi apoiado por Projetos chineses National Science Foundation (81372669, 31270867), o programa Key Estado chinês em pesquisa básica (2012CB822103), o ciência e Tecnologia Projeto de Planejamento da província de Liao Ning, China (2012225020), e do Projeto de Ministério de Saúde chinês (W2012RQ23). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito
CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes
Introdução
Havia uma estimativa de 3,45 milhões de novos casos de cancro (excluindo o câncer de pele não-melanoma) e 1,75 milhão de mortes por cancro na Europa em 2012 [1], o que resultou no segundo maiores taxas de incidência e mortalidade em todo o mundo. O câncer colorretal (CRC) é o câncer gastrointestinal mais comum em todo o mundo, com a incidência de câncer de cólon aumentando na maioria dos países durante os últimos 20 [2] anos. O cancro do cólon é muitas vezes diagnosticada em um estágio avançado, levando a um mau prognóstico [3] – [6]. Como os procedimentos clínicos actuais utilizados para o diagnóstico de doenças são invasivos, desagradável, e inconveniente, o desenvolvimento de testes de sangue simples que pode ser utilizado para a detecção precoce seria benéfico para, em última análise controlar e prevenir CRC [3], [5] – [6] . marcadores tumorais de soro, tais como o antigénio carcinoembrionário (CEA) e antigénio de carbohidrato 199 (CA19-9), melhorar significativamente diagnóstico. No entanto, a sua aplicação é limitada a vigilância após a cirurgia, e eles não são adequados para a detecção precoce do cancro do cólon, como a sua sensibilidade e especificidade são muito baixos [7] – [9]. Por conseguinte, existe uma necessidade de novos marcadores tumorais de cólon iniciais.
Recentemente, tornou-se evidente que as lectinas de tipo C desempenham um papel importante no prognóstico de tumores. Caligaris-Cappio e colegas relataram que a expressão de CD23 e sCD23 plasma foi maior probabilidade de ter o significado de diagnóstico e prognóstico em células B da leucemia linfocítica crónica (LLC-B) [10] – [11]. Ferroni e seus colegas descobriram que, para pacientes com CCR pré-cirúrgicos, os níveis séricos de SE-selectina foram correlacionadas com prognóstico geral e poderia orientar o tratamento [12]. Além disso, já relatado anteriormente que LSECtin (fígado e nó de linfa de células endoteliais sinusoidais-lectina de tipo C) desempenhou um papel importante na metástase de carcinoma colorrectal e do fígado pode ser um novo alvo promissor para a intervenção na formação de metástases [13]. Importante, a dendrítica específico de células a ICAM-3 agarrando nonintegrin (DC-SIGN) interacção dependente de células imaturas dendríticas (DC), com algumas células de carcinoma colo-rectais podem suprimir DC maturação funcional, induzir a falha do hospedeiro para iniciar uma resposta antitumoral potente [ ,,,0],14] – [15].
As lectinas de tipo C ligados à membrana, DC-SIGN e seu homólogo DC-SIGNR (proteína relacionada com o DC-SIGN, também conhecida como L-SIGN, CD209L) estão localizados no 19p13.3 e cromossoma humano pertencem a uma subfamília no agrupamento de genes de lectina, juntamente com o CD23 e LSECtin acima mencionado [16] – [17]. DC-SIGN apresenta na superfície de DCs maduras no nódulo linfático, bem como derivados de monócitos e intersticiais DC imaturas na placenta, mucosa cervical, do útero e do cólon [18] – [20]. Em contraste, DC-SIGNR é encontrado em células endoteliais na placenta, fígado e nódulos linfáticos [21]. Embora DC-SIGNR é 77% idêntica a DC-SIGN de acordo com a sequência de amino-ácido [22], a relação entre o cancro de cólon DC-SIGNR e não foi relatada. No entanto, a nossa equipa relatado anteriormente que o nível de expressão DC-SIGNR no soro foi baixa em Linfoma não-Hodgkin (NHL) e pode ter uso potencial no ambiente clínico [23].
No presente estudo, identificamos solúvel DC-SIGN (SDC-SIGN) e DC-SIGNR (SDC-SIGNR) no soro de pacientes com câncer de cólon. SDC-SIGN e SDC-SIGNR mostrou significativo potencial como novos marcadores para o diagnóstico de câncer de cólon em pacientes em fase inicial. Além disso, o nível de SDC-SIGN pode ter significados de prognóstico para pacientes com câncer. Além disso, a expressão de DC-SIGN e DC-SIGNR foi detectado em tecidos de câncer de cólon, e o nível de expressão DC-SIGN em tecidos de câncer pode ser usado como um indicador do prognóstico da doença.
Materiais e Métodos
Reagentes e anticorpos
proteína de fusão recombinante DC-SIGN humana IgG-Fc (rhDC-SIGN-Fc), DC-SIGNR IgG-Fc (rhDC-SIGNR-Fc) e anti-DC- SIGNR rato (anticorpo de detecção) de anticorpo monoclonal foram adquiridos a partir de R D Systems (Minneapolis, MN, USA). DC-SIGN anti-humano monoclonal (anticorpo de captura) produzido em ratinho foi adquirido de Sigma-Aldrich, Inc., EUA. Um anticorpo policlonal de coelho contra DC-SIGN (anticorpo de detecção) e um anticorpo monoclonal CC-SIGNR (anticorpo de captura) foram adquiridos a Abcam, INC, Hong Kong, China. Outro anticorpo monoclonal de coelho para DC-SIGNR foi comprado de Epitomics, Hong Kong, China. Peroxidase de rábano (HRP) conjugado com anticorpos de cabra anti-coelho e anti-murganho, reagente de bloqueio de soro de cabra e tetracloridrato de 3,3′-diaminobenzidina (DAB) foram obtidos a partir de ZSGB BIO-(Pequim, China), e 3,3 ‘, 5,5’-tetrametilbenzidina (TMB) foi comprado de TIANGEN BIOTECH CO, LTD, Beijing, China.
amostras clínicas
Nós obtido o consentimento informado via oral pelos participantes ou na próxima dos pacientes falecidos para os seus registos clínicos para ser utilizado neste estudo. E os pacientes ou de parentes próximos também forneceu seu consentimento oral para o uso de suas amostras de tecido e soro neste estudo. Estas amostras foram obtidas falecidos de forma anónimos. Registramos o consentimento participantes pela lista de seus nomes, e os pacientes ou próximo dos pacientes falecidos concordou com ele. Enquanto isso, o comitê de ética em pesquisa Dalian Medical University aprovou este processo de aprovação. Os protocolos e procedimentos foram aprovados pelo comitê de ética em pesquisa Dalian Medical University e foram baseados na orientação política e mecanismo, e o consentimento informado foi obtido de todos os participantes. As amostras de soro foram coletadas de 182 pacientes que tinham sido diagnosticados com cancro do cólon através de exames patológicos, quer durante as operações cirúrgicas ou colonoscopia, durante o período de 2011 a 2013, a primeira ou segunda Hospital Afiliado da Universidade de Medicina de Dalian e foram armazenadas a -80 ° C até serem analisadas. Nenhum dos pacientes estavam directamente relacionadas. O grupo de pacientes consistiu de 101 homens e 81 mulheres, com idades variando de 23 a 86 anos (média: 61). O estágio da doença para os pacientes foi confirmada de acordo com critérios de estadiamento do câncer da 7ª edição encenar Comité Misto Americana do Câncer (AJCC) [24]. detalhes dos pacientes incluíram sexo, idade, estágio, a diferenciação do tumor, e CEA no soro, CA19-9 e tempo de sobrevivência são apresentados na Tabela S1 e S2 Table. O grupo controle foi composto de 101 voluntários saudáveis dadores de sangue (45 machos e 56 fêmeas). Eles foram escolhidos a partir de exames de saúde de rotina baseados nos seguintes critérios de selecção: todos os indicadores físicos estavam na gama normal e os voluntários estavam livres de cancro, hepatite, ou infecção, entre outros. As idades variaram de 21 a 62 anos.
Além disso, 98 amostras de tecido de câncer de cólon embebidos em parafina fixadas em formalina (dos quais 49 eram de pacientes com câncer de cólon que morreram no pós-operatório nos últimos onze anos ), 4 linfonodos e 30 combinados tecidos de cólon normais de pacientes no período de 2002 a 2013 foram obtidos a partir do primeiro Hospital Afiliado da Universidade de Medicina de Dalian. linfonodos normais foram usados como controles positivos ou negativos, e combinou tecidos normais do cólon foi usado como um grupo de controle. Os dados clínicos destes pacientes com câncer de cólon é mostrada na Tabela S3 Mesa e S4.
SDC-SIGN e SDC-SIGNR no soro humano foram detectados por sanduíche padrão ELISA
Noventa e seis poços as microplacas foram revestidas com 100? l de anticorpo de captura a uma concentração final de 1 ug /ml de na
2CO
tampão 3 (pH 9,6), e a placa foi coberta com um adesivo plástico e incubada durante a noite a 4 ° C e, subsequentemente, lavada três vezes com uma solução tamponada com fosfato (PBS) contendo 0,05% de Tween-20 (PBST, pH 7,4). Em seguida, os poços foram bloqueados pela adição de 200 ul de tampão de bloqueio (5% de leite seco sem gordura /PBS) por poço e incubando a 37 ° C durante 90 min. Depois as placas foram lavadas, 100 ul de diluído padrões rhDC-SIGN-Fc ou rhDC-SIGNR-Fc (concentrações específicas são mostrados na S1 Figura) foram adicionados aos poços, em duplicado, juntamente com amostras de soro de doentes e indivíduos saudáveis, e as placas foram incubadas a 37 ° C durante 90 min. Cem microlitros de PBS foi utilizado como controlo negativo. Subsequentemente, as placas foram lavadas três vezes com PBST e 100 ul de um anticorpo de detecção diluída até uma concentração de foi adicionado 1 ug /ml, seguido de incubação a 37 ° C durante 90 min. Após a lavagem, adicionaram-se 100 ul de um anticorpo de cabra anti-coelho conjugado com peroxidase de rábano, e as placas foram incubadas durante 60 min a 37 ° C, seguido de lavagem três vezes. Finalmente, 100 ul de TMB (3,3 ‘, 5,5’-tetrametilbenzidina) foi adicionado a cada poço, seguido de uma incubação a 37 ° C durante 30 min. A reacção foi parada por adição de 2 mol /L H
2SO o valor de densidade óptica (DO)
4, e foi medida a 450 nm. de ajuste de curva padrão foi feita utilizando CurveExpert 1.3 a partir de diluições em série, com o rhDC-SIGN-Fc ou concentração rhDC-SIGNR-Fc no eixo Y contra o valor de DO no eixo X. A equação e os dados são mostrados na S1A e S1B Figura, R
2 = 0,9987 e R
2 = 0,9971. SDC-SIGN e SDC-SIGNR níveis em pacientes (e os controles saudáveis) foram lidas a partir da curva padrão e são apresentados na Tabela S1 e S2 Table. Para analisar o valor diagnóstico da SDC-SIGN e SDC-SIGNR, as curvas ROC de SDC-SIGN e SDC-SIGNR foram desenhadas usando GraphPad Prism 5.
detecção de DC-SIGN
imuno-histoquímica (IHQ) (como um exemplo )
Antes de ser desparafinados em xileno e re-hidratadas numa série de etanol graduada, secções de blocos embebidos em parafina foram incubadas a 60 ° C durante 30 minutos. A actividade da peroxidase endógena foi extinta por incubação durante 10 minutos em peróxido de hidrogénio a 3%. A recuperação de antígenos foi realizada por microondas durante 15 minutos numa solução de 0,01 M tamponado com citrato, pH 6,0. Os tecidos foram lavados com PBS antes da incubação com soro de cabra para o bloqueio. As secções foram incubadas com um anticorpo de coelho anti-DC-SIGN pAb durante a noite a 4 ° C, (1:50). No dia seguinte, depois de terem sido lavadas com PBS, as secções foram incubadas com imunoglobulina anti-coelho de peroxidase de rábano-rotulado (1:100) e foram, em seguida, lavou-se novamente. Finalmente, as secções foram desenvolvidas utilizando DAB para a detecção e, em seguida, foram contrastadas com hematoxilina antes da observação sob um microscópio de luz. Morfometria: imunocoloração DC-SIGN em câncer de cólon foi avaliada por (soma IOD) /Área usando o sistema de software de análise de imagem Pro Plus Imagem. IOD (densidade óptica integrada) soma representa o teor de proteína DC-SIGN na área de interesse (AOI), quando a área é igual à área da AOI. (Soma IOD) /área significa “densidade média”. Resumidamente, as imagens foram capturadas em 200x de ampliação de 3 AOIs /case, que foram selecionados com base em áreas com coloração DC-SIGN máxima. Na sequência de captura de imagem, DC-SIGN-manchando áreas positivas foram selecionados de acordo com a imagem Histograma Based (H: 0-29; S: 0-255; I: 0-230) dentro da AOI, eo valor “IOD sum” foi determinada . Além disso, a AOI foi analisada com base em outro parâmetro (H: 0-255; S: 0-255; I: 0-230), eo valor “área” foi determinada. Os valores de densidade média são mostrados na Tabela S3 e S4 Tabela. Esta quantificação foi positivamente correlacionada com a expressão DC-SIGN no tecido.
A análise estatística
Todos os dados são expressos como a média ± SD. A significância estatística entre mais do que dois grupos foi determinada utilizando o teste não paramétrico de Kruskal-Wallis. A correlação dos valores de DC-SIGNR com parâmetros clínicos DC-SIGN e foi testada pelo teste Spearman Rank coeficiente de correlação não-paramétrica. Em todos os testes, foram considerados significativos os valores de dois lados de p inferiores a 0,05. Todas as análises estatísticas e figuras foram realizadas utilizando GraphPad Prism5 (Graphpad Software, Inc., San Diego, CA).
Resultados
Os níveis e valores de diagnóstico de SDC-SIGN e SDC-SIGNR em pacientes com câncer de cólon
de acordo com nosso relatório anterior, LSECtin solúvel soro foi detectado no nível significativamente mais elevado em pacientes com câncer de cólon, em comparação com os controles saudáveis [13], enquanto o nível de SDC-DIGNR na NHL foi menor do que nos controlos normais [23]. Nós, portanto, analisaram os níveis de SDC-SIGN e SDC-SIGNR por ELISA. O nível SDC-SIGN no soro de pacientes com câncer de cólon (1.282 ± 0,838 mg /ml) foi significativamente menor do que nos controles saudáveis (2.687 ± 1.178 ng /ml), P 0,05 (Fig. 1A). O nível SDC-SIGNR foi 594,90 ± 595.54 ng /ml em doentes com cancro do cólon e 98,44 ± 60,26 ng /ml nos controles saudáveis. Em contraste com o nível de SDC-SIGN, o nível SDC-SIGNR nos pacientes com cancro do cólon foi maior do que em controlos saudáveis, P 0,05 (Fig. 1B). DC-SIGN e DC-SIGNR, como as lectinas do tipo C, foram duas proteínas relacionadas, e os níveis de eles podem ser correlacionados. Assim, analisamos a correlação entre SDC-SIGN e SDC-SIGNR do mesmo paciente. Curiosamente, o nível de SDC-SIGN foi significativamente correlacionada com a de SDC-SIGNR (r = 0,8173, P 0,0001) (Figura 1C).
A-B:. Houve significância estatística na sDC- nível SIGN e SDC-SIGNR entre os controles saudáveis e pacientes com câncer de cólon, P 0,001. O nível SDC-SIGN (A) foi menor nos pacientes com câncer de cólon do que controles saudáveis; No entanto, o nível de SDC-SIGNR (B) foi maior em doentes com cancro do cólon do que controles saudáveis. C: O nível de SDC-SIGN no soro foi significativamente correlacionada com a de SDC-SIGNR no mesmo paciente, P 0,001, r = 0,8137. D-E: De acordo com a análise do índice de Youden, as concentrações de corte para SDC-SIGN e SDC-SIGNR são inferiores a 2.226 ng /ml e mais de 227.2 ng /ml, respectivamente, e a sensibilidade correspondente e Especificidade da SDC -sign e SDC-SIGNR são 87,56%, 55,56% e 61,90%, 97,50%, respectivamente. Além disso, a área sob a curva (AUC) para SDC-SIGN é 0,7538, enquanto que a AUC da SDC-SIGNR é 0,8031. F-G: A AUC do CEA e CA19-9 em pacientes foram 0,7477 e 0,6126, respectivamente. Com base nos níveis decisivos clínicos (0-5 ug /l para o CEA, 0-27 U /ml, durante CA19-9), foram obtidos os valores de corte de CEA e CA19-9. E a sensibilidade e a especificidade correspondente de CEA e CA19-9 foram 29,22 e 92,38, 14,67 e 94,55, respectivamente. H: O diagnóstico combinado destes dois marcadores, SDC-SIGN e SDC-SIGNR, foi analisada através da regressão logística binária e curva ROC. A AUC do SDC-SIGN /SDC-SIGNR foi 0,9885, a especificidade e sensibilidade foram 94,8% e 98,7%, respectivamente.
Para avaliar o valor diagnóstico da SDC-SIGN e os níveis séricos SDC-SIGNR em pacientes com câncer, geramos curvas ROC para estes pacientes utilizando GraphPad Prism5. Com base na análise do índice de Youden, a sensibilidade e especificidade para a melhor concentração de diagnóstico de SDC-SIGN (SDC-SIGN 2.226 ng /ml), o que pode diferenciar o cancro do cólon de indivíduos livres de tumor, foram 87,56% e 55,56% , respectivamente (Fig. 1D). Além disso, a concentração óptima de SDC-SIGNR era mais de 227,7 ng /ml, e a sensibilidade e a especificidade correspondente de 61,90% e 97,50%, respectivamente (Fig. 1E). A AUC (área sob a curva) de SDC-SIGN e SDC-SIGNR em pacientes foi 0,7538 e 0,8031, respectivamente. Além disso, o diagnóstico de câncer de cólon tanto com SDC-SIGN e SDC-SIGNR foi altamente significativa (P 0,0001). Enquanto isso, a CEA e CA19-9 são muito importantes marcadores tumorais observacionais utilizados para o diagnóstico clínico ea determinação da eficácia terapêutica no cancro do cólon. Nós também gerou as curvas ROC do CEA e CA19-9. De acordo com o nível decisivo clínica (0-5 ug /l para CEA, 0-27 U /ml para CA19-9), temos a sensibilidade e especificidade para CEA e CA19-9 (Fig. 1F-1G). Em comparação com a AUC da SDC-SIGN (0,7538), SDC-SIGNR (0,8031) e CEA (0,7477), CA19-9 (0,6126) nos pacientes foi menor. Além do mais, a sensibilidade do SDC-SIGN e SDC-SIGNR foi 87,56 e 61,90, respectivamente, o que é muito maior do que a CEA (29,22) e CA19-9 (14.67). Além disso, quando estes dois marcadores foram combinados para diagnosticar doentes com cancro, a especificidade e sensibilidade foram 94,8% e 98,7%, respectivamente, e a AUC de DC-SIGN /DC-SIGNR foi 0,9885 (Fig. 1H).
o nível SDC-SIGNR SDC-SIGN e em doentes com cancro do cólon não foram significativamente correlacionada com os níveis de CEA ou CA19-9, o grau de diferenciação celular do tumor, sexo ou idade
Para determinar se os níveis de sDC- SIGN e SDC-SIGNR são diferentes do que a CEA e CA19-9, foi analisada a correlação entre os níveis de SDC-SIGN ou SDC-SIGNR em pacientes com câncer de cólon com CEA e CA19-9, respectivamente. Os resultados mostraram que o nível de SDC-SIGN exibidos nenhuma correlação significativa com a de qualquer CEA (29,271 ± 83,517 ug /l, N = 171, r = -0,04) ou CA19-9 (± 92.886 256.547 U /ml, n = 163, r = 0,103) nem houve correlação significativa entre os níveis de SDC-SIGNR e CEA (r = -0,204, P 0,05) ou CA19-9 (r = -0,004, P 0,05) (S2A-S2D Figura) . Isso pode indicar que esses novos marcadores podem funcionar como marcadores séricos independentes
Em seguida, foi analisada a correlação entre os níveis de SDC-SIGN ou SDC-SIGNR e os seguintes dados clínicos:. Sexo e idade. Os níveis de SDC-SIGN e SDC-SIGNR em pacientes com câncer de cólon não apresentou correlação significativa com a idade (r = 0,019 er = 0,029, S2E-S2F Figura), e não houve diferenças significativas com base no sexo dos pacientes (P 0,05, S2G-S2H Figura). Isto também indica que estes são indicadores bioquímicos independentes para o cancro do cólon.
Para além disso, o grau de diferenciação das células tumorais está relacionado com a velocidade de crescimento tumoral, o grau de malignidade, a sensibilidade ao tratamento e o prognóstico . As amostras foram divididos nas seguintes cinco grupos com base no grau de diferenciação de células tumorais nos resultados patológicos: bem diferenciados, moderadamente diferenciados, pouco diferenciado, bem a moderadamente diferenciados, e moderadamente a pouco diferenciado. Não houve diferença significativa entre dois grupos (S2I-S2J Figura), o que implicou que os níveis de SDC-SIGN e SDC-SIGNR não são correlacionados com o grau de diferenciação das células cancerígenas do cólon.
O valor de SDC-SIGN e SDC-SIGNR no diagnóstico precoce da fase I /II pacientes com câncer de cólon
de acordo com um relatório recente, regenerando proteína derivada do ilhéu 4 (REG4), um membro da lectina do tipo C superfamília, pode ser um marcador de soro bom para o diagnóstico precoce do cancro gástrico [25]. Nós, portanto, analisou os valores de diagnóstico de SDC-SIGN e SDC-SIGNR na fase I /II de câncer de cólon. Importante, descobrimos que os níveis de SDC-SIGN e SDC-SIGNR em fase I /II pacientes com câncer foram 1.452 ± 0,867 mg /ml e 505,5 ± 645.1 ng /ml, respectivamente. Estes níveis foram significativamente diferentes do que aqueles nos controles saudáveis, P 0,05 (Fig. 2A-2B). Em contraste com o mais elevado nível de SDC-SIGNR em pacientes com câncer de cólon estágio iniciais relativos aos controles saudáveis, o nível de SDC-SIGN no câncer de cólon foi menor do que em pessoas sem câncer
A-B:. Ambos níveis SDC-SIGN e SDC-SIGNR de pacientes com câncer precoce cólon. Palco pacientes I /II foram significativamente diferentes das pessoas saudáveis, P 0,01. SDC-SIGN é menor do que no controle saudável, enquanto SDC-SIGNR é maior. C-D: Na fase I /II pacientes, SDC-SIGN e SDC-SIGNR tinha um valor de diagnóstico significativo (P 0,01). As concentrações de corte de DC-SIGN e DC-SIGNR eram menos do que 2.211 ug /ml e mais de 189,3 ng /ml, respectivamente. A sensibilidade e especificidade correspondente das duas moléculas foram 81,33% e 55,56%, 48,65% e 92,50%, respectivamente. E-F: A AUC do CEA e CA19-9 no câncer precoce foram 0,6904 e 0,6917. Ao nível decisiva clínico acima, a sensibilidade de ambos CEA (18,64) e CA19-9 (10,00) foram muito baixos, enquanto que, a especificidade de ambos CEA (92,33) e CA19-9 (94,55) era alta. G: A comparação entre as curvas ROC de quatro marcadores, DC-SIGN, DC-SIGNR, CEA e CA19-9. Houve diferenças significativas entre as AUC de SDC-SIGN e tanto SDC-SIGNR e CA19-9. De acordo com os valores de corte para SDC-SIGN e SDC-SIGNR obtido a partir do ROC curvas, CEA e CA19-9 a partir do nível decisiva clínica, a sensibilidade (valores de diagnóstico) de ambos SDC-SIGN (81%) e sDC- SIGNR (49%) foram superiores CEA (19%) e CA19-9 (10%).
a seguir, as curvas ROC de SDC-SIGN e SDC-SIGNR foram gerados para avaliar o seu diagnóstico valores em pacientes com câncer de cólon estágio inicial (Fig. 2C-2D). Como no câncer de cólon em todas as fases, os valores de diagnóstico de SDC-SIGN e SDC-SIGNR foram significativamente eficaz no diagnóstico de fase I cancro do cólon /II (P 0,01). Além disso, as concentrações óptimas de SDC-SIGN e SDC-SIGNR eram menos do que 2.211 ug /ml e mais de 189,3 ng /ml, respectivamente. Além disso, nós também analisados os valores de diagnóstico da CEA e CA19-9 no diagnóstico de pacientes com câncer em fase inicial (Fig. 2E-2F), a AUC, sensibilidade e especificidade destes quatro marcadores foram mostrou na Fig. 2G. A sensibilidade do SDC-SIGN foram maiores do que os outros marcadores mais (P 0,05), e a AUC do SDC-SIGN foram significativamente diferente da de CA19-9 e SDC-SIGNR (P 0,05). Para a proporção de expressão anormal destes quatro marcadores em pacientes com câncer de cólon estágio inicial, a SDC-SIGN (81,3%) e SDC-SIGNR (40,5%) foram maiores do que para CEA (21,3%) ou CA19-9 (4,5%) ( Tabela 1). Em geral, os níveis de SDC-SIGN e SDC-SIGNR tem potencial diagnóstico precoce para pacientes com câncer de cólon.
Os valores de prognóstico do SDC-SIGN e SDC-SIGNR em pacientes com câncer de cólon
a fim de descobrir se os níveis de expressão de SDC-SIGN e SDC-SIGNR no soro foi correlacionada com a sobrevida dos pacientes, foram geradas as curvas de sobrevivência de SDC-SIGN e SDC-SIGNR através de testes de log-rank. De acordo com a análise prévia do índice de Youden, temos os valores de corte de SDC-SIGN (2.226 ng /ml) e SDC-SIGNR (227,7 ng /ml), que diferenciar os pacientes com câncer de indivíduos livres de tumor. Surpreendentemente, o tempo de sobrevivência era significativamente maior nos pacientes com níveis mais elevados de DDC-SIGN em comparação com os pacientes com menores níveis de SDC-SIGN (P 0,05, Fig. 3A). No entanto, não houve diferenças significativas entre os pacientes com níveis elevados de expressão de SDC-SIGNR e aqueles com baixos níveis de SDC-SIGNR (P . 0,05, Fig 3B).
Os valores de corte destes marcadores foram obtidos a partir da análise acima do índice de Youden. A: Houve diferenças significativas no tempo de sobrevivência entre os pacientes (o nível de SDC-SIGN 2.226 ng /ml) e os outros pacientes (o nível de SDC-SIGN 2.226 ng /ml) (P 0,05). B: o tempo de sobrevivência dos pacientes (SDC-SIGNR 227.7) não foi significativamente diferente com a dos demais pacientes (SDC-SIGNR 227,7) (P 0,05)
IHC para a DC. expressão -sign e DC-SIGNR em tecidos de câncer de cólon e em correspondência mucosa do cólon normal dos pacientes com câncer de cólon
Nós determinamos o nível de ambos os DC-SIGN e DC-SIGNR no soro expressão. Além disso, tem sido relatado que células dendríticas imaturas DC-SIGN + estão presentes nos tecidos de cancro colorrectal primário [14], [26]. Nossa equipe já havia descoberto que as DC-SIGNR é expresso em ambos os tecidos cancerosos e soro de pacientes com NHL [23]. Nós portanto especulado que a DC-SIGN e DC-SIGNR pode ser expresso em tecidos de cancro do cólon. IHC para DC-SIGN e DC-SIGNR foi realizada utilizando 98 tecidos de câncer de cólon para DC-SIGN e 20 tecidos de câncer de DC-SIGNR, com a intensidade de coloração determinada por um patologista que desconhecia a informação clínica relevante. coloração DC-SIGN na mucosa do cólon normal, combinado era fraca (Fig. 4E e 4F), enquanto intensa coloração DC-SIGN foi observada no estroma tumoral e as margens invasivas de tecidos de câncer de cólon (Fig. 4A e 4B). Os controlos negativos são mostrados na Fig. 4C e 4D. coloração DC-SIGN nos gânglios linfáticos, usado como um controle positivo, são mostrados na Fig. 4G e 4H.
Áreas nas caixas negras do A, C, E, G, I e A, C, E, G, I foram ampliadas abaixo. A-B: expressão de DC-SIGN foi detectado na borda interna, uma parte central e periférica de carcinoma do cólon. C-D: seções humanos primários de controle em branco do cancro do cólon (sem anti-DC-SIGN PAB). E-F: Expressão DC-SIGN na mucosa do cólon normal, combinando. G-H: expressão DC-SIGN foi detectada principalmente no seio linfóide humano. I-J: controlo em branco seções nódulos linfáticos humanos (sem anti-DC-SIGN PAB); A-B: expressão DC-SIGNR foi fracamente detectada na margem invasiva de tumores. C-D: seções cancerígenas do cólon humano primários de controle em branco. E-F: expressão de DC-SIGN foi negativa em mucosa de cólon normal correspondente, enquanto que a G e H eram controlos positivos no nódulo linfático humano. I-J: controlo em branco cortes linfonodais humano. Ampliação: 100 x em A, C, E, A, C, E, G, I; 200 × em G, I; 400 × em B, D, F, H, J, B, D, F, H, J.
Os resultados da coloração DC-SIGNR (Fig. 4A-J) mostraram que as DC -SIGNR foi negativo em tecidos do cólon combinados (Fig. 4E e 4F) e no estroma do tumor e foi apenas fracamente positiva entre os focos do cancro do cólon (Fig. 4A e 4B). Portanto, a expressão DC-SIGNR nos tecidos de cancro do cólon não foi analisado ainda mais.
análise de imagem semi-quantitativa da expressão de DC-SIGN nos tecidos e na análise de sua correlação com SDC-SIGN e CEA no soro do mesmo paciente
Como a expressão de DC-SIGN foi evidente nos tecidos de cancro do cólon, analisamos imunocoloração DC-SIGN em ambos os tecidos de câncer e tecidos normais do cólon acompanhada por análise de imagem semi-quantitativa. Informações gerais para os 49 pacientes falecidos e 49 pacientes vivo são mostrados na Tabela 2. A densidade média em tecidos do cólon combinados foi de 0,0009391 ± 0,0007490, e o nível de confiança de 95% superior à média (valor de cut-off) foi 0,001219. A densidade média em tecidos de cancro do cólon (0,01009 ± 0.02380) foi maior do que em tecidos combinados (P 0,01, Fig 5A.)
A:. Houve significância estatística na IHC para a expressão DC-SIGN entre dois pontos tecidos de câncer de cólon e tecidos normais correspondentes, P 0,001. expressão DC-SIGN em pacientes com câncer de cólon foi maior do que em tecidos normais do cólon; B: A correlação entre DC-SIGN intensidade de coloração no tecido do cancro do cólon e do nível SDC-SIGN no soro do mesmo paciente. A densidade média (eixo Y) foi negativamente correlacionado com SDC-SIGN (eixo X), R = -0,4643, P 0,01; C: A correlação entre a densidade média de DC-SIGN em câncer de cólon e CEA no soro. Não foi observada correlação significativa entre a densidade média (eixo Y) e CEA (eixo X), com um coeficiente de correlação de Spearman de -0,036, P . 0,05
A partir dos resultados acima, descobrimos que o alto nível de expressão DC-SIGN em tecido de câncer de cólon foi revertida no soro, que exibiu um baixo nível de SDC-SIGN. Foram coletadas 30 amostras de soro de pacientes com câncer de cólon pré-operatórios e analisada a correlação entre a DC-SIGN intensidade de coloração no tecido do cancro do cólon e do nível de SDC-SIGN no soro do mesmo paciente. Como mostrado na Fig. 5B, expressão DC-SIGN no tecido do cancro do cólon teve uma correlação significativamente negativa com o nível SDC-SIGN no soro (r = -0,4643, P 0,01).
Como DC-SIGN foi relatado para mostrar um alto afinidade para Le glicanos no CEA [14] – [15], nós também analisada a correlação entre a expressão de DC-SIGN no tecido do cancro do cólon e do nível de CEA no soro do mesmo paciente. Os resultados não mostraram nenhuma correlação significativa (r = -0,036, P . 0,05, Fig 5C)
correlação entre a expressão aberrante DC-SIGN em tecidos de cancro do cólon e sobrevida do paciente
A interação específica. entre Le glicanos e DC-SIGN [15], a nova função de DC-SIGN em estabelecer o contacto inicial entre DCs e descansando células T [27] (Nonaka et al., 2008) – [28], e a infiltração de DCs