Abstract
Purpose
Caspase 8 (CASP8) desempenha um papel crítico na via apoptótica e regulação aberrante desta via provoca muitas doenças, incluindo câncer. rs3834129 variantes genéticas (CTTACT /-) e rs3769821 (T /C) na região promotora do gene da
CASP8
foram documentadas para ser associado a vários cancros sólidos e linfoma não-Hodgkin (NHL), respectivamente, apesar de algumas controvérsias. Nosso objetivo discernir o potencial associação dessas duas variantes e rs113686495 (CTGTCATT /-)., Bem como os níveis de
CASP8
mRNA e expressão de proteínas com câncer colorretal (CRC) em chinês Han
Métodos
Foram genotipados
CASP8
variantes genéticas em 305 pacientes com CCR e 342 indivíduos saudáveis de Kunming, sudoeste da China. Os níveis de expressão de
CASP8
ARNm e proteína foram quantificados em tecidos normais e cancerosos paracancerous emparelhados utilizando PCR em tempo real quantitativa e western blot, respectivamente. Foram comparadas as frequências de alelos, genótipos e haplótipos entre os casos e controles. Correlação de
CASP8
níveis de mRNA e expressão de proteínas em tecidos normais e cancerosos paracancerous pares de pacientes com diferentes genótipos e expressão clínica também foram avaliadas.
Resultados
Não houve associação do
CASP8
variantes genéticas com CRC em nosso estudo de caso-controle. O
CASP8
níveis de expressão de mRNA do gene em tecidos normais e cancerosos paracancerous foram semelhantes e não houve diferença significativa entre indivíduos com diferentes genótipos e características clínicas. No entanto, verificou-se que o nível de proteína CASP8 foi significativamente menor em tecidos cancerosos do que em tecidos normais paracancerous emparelhados.
Conclusões
Nossos resultados sugerem que os três
CASP8
variantes genéticas pode não estar associado com o risco de CRC no chineses han do sudoeste da China. a expressão da proteína CASP8 aberrante pode desempenhar um papel na patogênese da CRC
Citation:. Xiao M-S, Chang L, Li W-L, Du Y-S, Pan Y, Zhang D-F, et al. (2013) polimorfismos genéticos da
CASP8
Gene Promotor não pode ser associado com câncer colorretal em Han chinesa de Southwest China. PLoS ONE 8 (7): e67577. doi: 10.1371 /journal.pone.0067577
editor: Jirong Longo, da Universidade Vanderbilt, Estados Unidos da América
Recebido: 27 Março, 2013; Aceito: 20 de maio de 2013; Publicação: 02 de julho de 2013
Direitos de autor: © 2013 Xiao et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados
Financiamento:. Este estudo foi apoiado pelo Programa maiores talentos da província de Yunnan (2009CI119), National Natural Science Foundation da China (30.925.021) e da Academia chinesa de Ciências. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito
CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes
Introdução
o câncer colorretal (CRC) é um dos cânceres mais prevalentes em todo o mundo, com uma taxa de sobrevida em 5 anos de 30-65% [1]. Embora a maioria dos CRC (quase 80%) é esporádica [2], [3], cerca de 35% de pacientes de CRC pode ser atribuída às características genéticas, de acordo com o estudo de gémeos monozigóticos [3], o que implica que ambos os factores genéticos e ambientais tem um papel central na patogênese da CRC. Muitas pessoas foram expostas a fatores de risco ambientais, como tabagismo [4], beber [4], insalubre dieta e estilos de vida [5], [6], mas apenas alguns deles sofria de CRC, sugerindo que as variações genéticas determinam parcialmente a susceptibilidade para CRC.
a apoptose, também denominada morte celular programada, está envolvido na manutenção da homeostase dos tecidos, o desenvolvimento e eliminar células indesejáveis em organismos multicelulares [7]. Disfunção de este processo iria resultar na tumorigénese [8]. A morte celular apoptótica é mediada por uma família de caspases (proteases altamente conservadas específicas aspartato-cisteína-dependentes), os quais podem ser divididos em caspases “iniciadoras” e “caspases efectoras” [9]. Existem basicamente dois mecanismos normais de apoptose em humanos:. O extrínseco ou via mediada pelo receptor e da via intrínseca ou mitocondrial, tanto empregam caspases cascata [10], [11], [12]
Caspase 8, codificado por
CASP8
gene (que está localizado no cromossoma 2q33-q34 e possui 14 exões), funciona como um iniciador da caspase na via apoptótica e uma barreira defensiva contra a proliferação maligna fundamental e tumorigénese [7], [8] [11], [13]. O polimorfismo indel, rs3834129 (CTTACT /-, escrito como 6 pb /del no texto que se segue), na região promotora de
CASP8
gene foi relatado para ser associado com a susceptibilidade a uma ampla gama de cancros incluindo CRC em populações chinês [14]. Embora esta variante foi posteriormente relatado para ser associado com o risco de os trabalhadores de carvão e cancros da bexiga em populações chinesas [15], [16], a associação positiva não foi replicado em estudos caso-controle subsequentes em grande escala nas populações europeias e americanas [17 ], [18]. Os genótipos CT e CC de um outro polimorfismo único nucleótido (SNP), rs3769821 (T /C), que também se localiza na região promotora do gene da
CASP8
, verificou-se influenciar a susceptibilidade genética para o linfoma não-Hodgkin (NHL) em uma análise combinada de três populações dos Estados Unidos da América e na Austrália [19]. No entanto, este resultado positivo não foi confirmado em nossa recente análise genética de chineses han com NHL e ensaio de luciferase [20].
Para discernir se rs3834129 e rs3769821 contribuir para a susceptibilidade genética para a CRC no Han chinesa de sudoeste da China, Foram genotipados essas duas variantes, em conjunto com rs113686495 (CTGTCATT /-, escrito como 8 pb /del no texto que se segue, a qual está localizada a 50 pb a jusante do rs3769821). Nós nível de expressão de mRNA ainda quantificada da
CASP8
gene em ambos os tecidos cancerosos e paracancerous normais de pacientes com CCR com diferentes genótipos para identificar potencial efeito de diferentes alelos na expressão do gene. Além disso, comparou-se os níveis de ARNm em pacientes de CRC com diferentes características clínicas. O nível de proteína CASP8 foi medido em tecidos normais e cancerosos paracancerous emparelhados a partir de um total de 39 pacientes, para comparar com o padrão de expressão de ARNm. Nossos resultados mostraram que
CASP8
variantes genéticas e nível de expressão de mRNA não eram susceptíveis de ser associada a CRC no chineses han. No entanto, verificou-se que os tecidos cancerosos têm um nível significativamente inferior de proteína CASP8 que os tecidos normais paracancerous, sugerindo que o potencial de regulação pós-transcricional deste gene desempenha um papel activo no desenvolvimento de CRC.
Materiais e Métodos
Ética Declaração
Este estudo foi aprovado pelo conselho de revisão institucional do Instituto Kunming de Zoologia. consentimentos informados por escrito em conformidade com os princípios da Declaração de Helsinki foram obtidas de cada participante antes do estudo.
Estudo População e Amostras de Tecido
tecidos cancerosos foram coletados de 305 chineses han com CRC. Estes pacientes foram submetidos a cirurgia no Primeiro Hospital Afiliado da Universidade Médica Kunming a partir de 2010 a 2011. Todos os pacientes foram histopathogically confirmado para ser CRC e não recebeu tratamento médico (exceto para 12 pacientes) antes da cirurgia para remover o tumor. O estágio do câncer foi classificada de acordo com a 7ª edição do cancro da AJCC Staging Manual [21]. As amostras de sangue foram obtidas a partir de 342 indivíduos saudáveis (incluindo 133 relatado no nosso estudo anterior [20]). As informações demográficas e características histopatológicas de pacientes com CCR e controles saudáveis foram apresentados na Tabela 1. Também recolhidos tecidos normais paracancerous para alguns pacientes; este tecido normal foi localizada em uma região de cinco centímetros de distância formam a fronteira do tecido canceroso e exame patológico desse tecido não mostrou nenhum sinal de células malignas.
genotipagem do Promotor Variantes genéticas do gene CASP8
O ADN genómico foi extraído de tecidos cancerosos de pacientes de CRC e amostras de sangue de controlos saudáveis usando o método de fenol /clorofórmio padrão. Seguimos a mesma abordagem e condição descrita em nosso estudo anterior ao genótipo as três variantes genéticas no
CASP8 e região promotor [20]. Em resumo, a 6 pb /del e 8 pb /del polimorfismos foram determinadas por reacção em cadeia da polimerase (PCR) e electroforese em gel de poliacrilamida (PAGE). rs3769821 SNP foi genotipados por ensaio de PCR-RFLP.
RT-PCR quantitativo para o ARNm CASP8 Expressão
O ARN total foi isolado a partir de tecidos normais emparelhadas cancerosas e paracancerous de 99 pacientes de CRC que não receberam radioterapia e /ou tratamento de quimioterapia antes da cirurgia, utilizando TRIZOL (Invitrogen, Carlsbad, CA) de acordo com as instruções do fabricante. Um micrograma de ARN total foi utilizado para sintetizar ADNc de cadeia simples usando uma coluna de oligo (dT) 18-mero como iniciador e de Transcriptase Reversa de MMLV (Promega, Madison, WI) num volume de reacção final de 25 ul. Os iniciadores CASP8-F (5′-GCAGAGGGAACCTGGTACAT-3 ‘) e CASP8-R (5′-TCATCCTTGTTGCTTACTTCATAG-3’) foram usados para detectar
CASP8
ARNm transcritos A (número de acesso GenBank NM_001228.4), B (NM_033355.3), C (NM_033356.3), F (NM_001080124.1) e G (NM_001080125.1). PCR em tempo real foi realizada em Tempo Real-IQ2 sistema de PCR (Bio-Rad, Hercules, CA) com o SYBR
Premix Ex Taq
II (Tli ARNaseH Além disso; TaKaRa, Otsu, Shiga) e a sequência condição de amplificação: uma desnaturação inicial a 94 ° C durante 3 min, seguido de 35 ciclos de 94 ° C durante 15 s, 50 ° C durante 15 s, e 72 ° C durante 20 s, e um ciclo de extensão final a 72 ° C durante 5 min. O gene de
GAPDH (gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase) foi amplificado para normalização. Utilizou-se par de iniciadores 5′-CAACTACATGGTTTACATGTTC -3 ‘/5′-GCCAGTGGACTCCACGAC-3’ e os mesmos parâmetros de ciclos térmicos (excepto para uma mudança de temperatura de recozimento de 55 ° C) que o da
CASP8
gene amplificar o
gene GAPDH
. Cada amostra foi realizada em dois duplicados.
Análise Western Blot para CASP8 Proteína
Os tecidos foram lavados com tampão ACK fria para eliminar as células vermelhas do sangue e foram trituradas em tampão de lise fornecido com inibidores da protease usando a pelota pilão (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO). As concentrações de proteína foram determinadas pelo ensaio BCA de acordo com as instruções do fabricante (Beyotime, Haimen, Jiangsu), utilizando albumina de soro bovino como padrão. Vinte e cinco microgramas de proteína total foram separadas em 15% SDS-PAGE e transferidos para uma membrana de PVDF (Roche Diagnóstico, Indianapolis, IN). Após o bloqueio com leite magro a 5% durante 2 h a temperatura ambiente, a membrana foi colocados a hibridar com anti-rato de caspase-8 de anticorpos (1:4000, Cell Signaling Technology, Danvers, MA) a 4 ° C durante a noite. Membrana foi lavada três vezes com TBST, durante 10 min cada, seguido por incubação com anticorpo de cabra anti-IgG de ratinho secundário (1:10000, KPL, Gaithersburg, MD) durante 1 h à temperatura ambiente. Membrana foi lavada com TBST tal como descrito acima e desenvolvidos usando o substrato quimioluminescente Immobilon Ocidental HRP (Millipore, Billerica, MA). A β-actina foi quantificada em cada amostra seguindo mesmo procedimento usando o rato-anti-β actina anticorpo (1:100000, Zhongshan Goden Ponte Biotechnology Co., Ltd, Beijing) para a normalização. A densidade de cada banda de proteína foi calculada usando o programa Image J (NIH, Bethesda, MD).
Análise Estatística
A análise estatística foi realizada utilizando o programa R (versão 2.11.1, Viena , Áustria) e um
P valor
inferior a 0,05 foi considerado estatisticamente significativo. Os cálculos de energia foram realizadas utilizando o software Quanto [22]. Desvio do equilíbrio de Hardy-Weinberg (HWE) foi avaliada para cada variante usando o
χ
2-teste (df = 1). freqüências alélicas das três variantes entre casos e controles foram também comparados usando o
χ
2-teste. O valor D pares “através variantes rs3834129, rs3769821 e rs113686495 em casos e controles foram determinados por Haploview v4.2 [23]. Haplótipos e as suas frequências foram estimados com base no método Bayesian usando Fase 2.1 [24]. A análise de regressão logística não condicional foi utilizada para calcular o odds ratio (OR) e intervalos de confiança de 95% (IC), para estimar a potencial associação de diferentes genótipos de rs3834129, rs3769821, e rs113686495 com CRC. Genótipos 6 pb /6 pb do rs3834129, TT de rs3769821, e del /del da rs113686495 eo haplótipo principal foram utilizados como referência ajustado para idade (≤50 e 50 anos) e sexo. Emparelhado
t
-test foi utilizado para determinar a diferença de
CASP8
níveis de expressão de gene entre dois grupos. ANOVA foi utilizado para comparar o nível médio do
CASP8
expressão genética entre os grupos mais do que dois.
Resultados
A falta de associação entre três variantes genéticas do CASP8 Promotor e CRC
o tamanho da amostra (305 pacientes versus 342 controles) sob o projeto caso-controle pareado com um modo de herança log-aditivo possuía um poder suficiente para o estudo de associação. Entre as três variantes analisadas na população controle, menor freqüência do alelo (MAF) variou de 21,1% para 26,7%. Considerando MAF de 0,211, o poder estatístico para detectar uma razão de chances (OR) valor de 1,5 para o alelo de risco era esperado para ser de 85%, ao passo que o poder para MAF de 0,267 era esperado para ser de 90%.
A freqüências alélicas de rs3834129, rs3769821, e rs113686495 do
CASP8
promotor do gene em grupos de estudo e controle foram listadas na Tabela 2. a distribuição genotípica de todas essas variantes não foi desviado HWE. Não houve diferença significativa entre os casos e controles para cada alelo rs3834129, rs3769821, e rs113686495. Note-se que houve algumas pequenas diferenças entre as freqüências alélicas de rs3834129 em nossas amostras e as amostras de CRC de Sun et al. [14] (Tabela 2), o que pode refletir diferença regional. Não houve associação de determinado genótipo das três variantes com CRC (Tabela 3).
Desde rs3769821 variantes e rs113686495 estavam em forte desequilíbrio de ligação em ambos os casos e controles populações (Figura 1) , nós inferir haplótipos baseada em variantes rs3834129 e rs3769821 apenas e avaliou o potencial associação entre haplótipos e risco de CRC. Da mesma forma, não observamos associação de haplótipos com CRC (Tabela 4). Tomados em conjunto, os nossos resultados sugerem que as variantes genéticas no
CASP8
região promotora do gene não susceptível de conferir grande risco para a CRC no Han chinesa de sudoeste China.
Os números dentro dos quadrados exibido para o D ‘e r
2 escores (x100) para desequilíbrio de ligação em pares (LD) com um gradiente de vermelho para branco refletindo maior para menor pontuação LD.
CASP8 mRNA Expression níveis no CRC tecidos e os correspondentes tecidos normais são semelhantes
para examinar se
CASP8
níveis de expressão difere entre pacientes e dentro combinado normal e amostras de tumores e, em seguida, para resolver se existe alguma correlação com o genótipo , analisamos o
CASP8
nível de expressão de mRNA em tecidos normais e cancerosos paracancerous emparelhados de 99 pacientes que não receberam tratamento antes da cirurgia. Semelhante ao resultado de genotipagem, não houve diferença estatisticamente significativa da
CASP8
nível de mRNA tanto em tecidos normais ou cancerosas paracancerous em pacientes com diferentes genótipos (Figura 2). Note-se que a expressão de ARNm em tecidos com genótipos del /del de rs3834129, cc de rs3769821, e 8 pb /8 pb de rs113686495 mostraram um valor relativamente mais baixo do que aqueles dos outros genótipos (Figura 2), e isto pode ser atribuído ao número menor de pacientes com esses genótipos se não foram causados pelo cis-regulação uma vez que esses SNPs estão na região promotora do
gene CASP8
.
Entre 99 pacientes não tratados medidos para o
CASP8
expressão de mRNA, um paciente não conseguiu ser genotipados e foi excluído.
para detectar efeito potencial da
gene CASP8
sobre a patogênese e características clínicas da CRC, comparamos
CASP8
níveis de expressão de mRNA em tecidos cancerosos e tecidos normais paracancerous em todos os pacientes, mas não houve diferença significativa (
P
= 0,102; Figura 3a). Da mesma forma, o
CASP8
expressão de mRNA em tecidos cancerosos de pacientes com diferentes características clínicas não apresentaram diferença significativa (Figuras 3b, c, d, e, f). tecidos cancerosos e paracancerous normais de pacientes em diferentes estágios de desenvolvimento e progressão do câncer tinham um nível semelhante de
CASP8
expressão de mRNA (Figura 4), embora tecidos cancerosos de pacientes em estágio T4 apresentaram maior expressão marginalmente significante mRNA de emparelhados tecidos normais paracancerous (
P
= 0,045; Figura 4c). Aparentemente, o
CASP8
nível de expressão de mRNA do gene não foi fortemente associado com CRC em nossos pacientes.
O estadiamento TNM foi classificada de acordo com a 7ª edição do cancro da AJCC Staging Manual [21], e a localização e a diferenciação de tecidos cancerosos foram determinados por exame histopatológico e cirúrgico, respectivamente. Não houve diferença significativa do
CASP8
expressão de ARNm em tecidos normais e cancerosos paracancerous de todos os 99 pacientes (um). O
CASP8
expressão de mRNA em tecidos cancerosos de pacientes com diferentes características clínicas não apresentaram diferença significativa (b-f). A-do cólon, T-e-vírgula, D-cólon e reto representam cólon ascendente, cólon transverso, cólon descendente e reto, respectivamente.
O estadiamento TNM foi classificada de acordo com a 7ª edição do cancro da AJCC Staging Manual [21].
Nível CASP8 proteína foi significativamente diminuída em cancerosos tecidos Comparando com emparelhados Paracancerous tecidos normais
Muitos genes foram regulados através de um mecanismo pós-transcricional, por exemplo, supra-regulação do factor de crescimento placentário por factor de crescimento endotelial vascular em células endoteliais [25]. Para investigar se o
CASP8
gene tem um papel no desenvolvimento CRC através de uma regulação pós-transcricional, selecionamos emparelhado tecidos normais e cancerosos paracancerous de 39 pacientes com
CASP8
genótipos promotor, a expressão do mRNA diferente e quantificado nível de expressão da proteína (Tabela S1). Observou-se um nível significativamente mais baixo de proteína CASP8 em tecidos cancerosos que os tecidos paracancerous (
P
= 0,005), embora o
CASP8
níveis de mRNA nestas amostras foram semelhantes (
P
= 0,464, Figura 5).
O genótipo e da informação clínica destes doentes foram listadas na Tabela S1.
Discussão
Caspase 8 (
CASP8
) é um procurador bem conhecido do sinal de morte na via apoptótica que estava envolvido na estimulação de receptor de morte, permeabilização da membrana mitocondrial externa e libertação de proteínas pró-apoptóticas para o citosol a partir de mitocôndrias [26]. Ele atua como uma barreira importante de defesa contra a proliferação maligna e tumorigênese [7], [10], [27]. Estudos anteriores apresentaram resultados conflitantes sobre o papel potencial de variantes genéticas na região promotora do gene
CASP8
na tumorigênese [14], [15], [16], [17], [18], [20] [28], [29], [30]. Em um estudo pioneiro, variante genética (rs3834129)
CASP8
região promotora foi associada com uma vasta gama de cancros sólidos incluindo o pulmão, esófago, estômago, colo-rectal, cervical, e cancros da mama em populações chinesas afectando a local de ligação do factor de transcrição Sp1 e
CASP8
expressão genética [14]. Este achado inicial foi verificado em estudos de associação de caso-controle subsequentes em amostras chineses independentes com cancro da bexiga [16] e Antracose [15]. No entanto, vários outros relatórios não conseguiu replicar a associação entre este 6 pb /del polimorfismo e vários tipos de câncer em diferentes populações [18], [30], [31], [32]. Estes resultados inconsistentes pode ser explicada por diferentes origens genéticas de populações em diferentes estudos [33], como a frequência de 6 pb del alelo foi significativamente diferente entre as populações asiáticas e caucasianos (22,4% vs. 49,1%) [32], [34 ]. Em um estudo recente, Lan e colaboradores [19] forneceram evidências de que outra rs3769821 SNP no
CASP8 e região promotor foi significativamente associada com risco genético de NHL. No entanto, não conseguimos replicar este resultado na chineses han com NHL e ensaio de luciferase celular não mostrou diferença da região promotora contendo alelos diferentes [20]. Até agora, se o
CASP8
expressão genética pode afetar a patogênese da CRC ainda é controverso [35], [36], [37]. Há uma necessidade de reavaliar o potencial efeito de variantes do promotor e expressão do gene
CASP8
no CRC.
Neste estudo, ao analisar pacientes com CCR a partir de Kunming, província de Yunnan, pretendemos responder se gene da
CASP8
estava ativamente envolvido no desenvolvimento de CRC. Nós primeira triagem três variantes genéticas no
CASP8
região promotora do gene, em que duas foram relatados para ser associados com tumores sólidos (rs3834129; [14]) e NHL (rs3769821; [19]). Em seguida, quantificou o
CASP8
nível de ARNm em tecidos normais e cancerosos paracancerous emparelhados para discernir ainda correlação potencial entre o
CASP8
genótipos e expressão de mRNA. Não houve associação do
CASP8
promotor variantes com CRC nas amostras de estudo e controle (Tabelas 2 e 3). Além disso, não havia nenhuma diferença estatisticamente significativa da
CASP8
nível de mRNA em pacientes com diferentes genótipos (Figura 2). Estes resultados negativos foram consistentes com nosso ensaio anterior luciferase [20], em que se observou nenhuma diferença de vetores com diferentes alelos no
CASP8
promotor.
Os dados clínicos disponíveis para os pacientes nos ofereceu uma oportunidade para avaliar a correlação entre o
CASP8
expressão do gene e desenvolvimento da CRC. Ao agrupar os pacientes de acordo estágio do tumor, estado de metástase, e diferenciação, não encontramos nenhuma diferença significativa do
CASP8
níveis de expressão de mRNA entre tecidos normais e cancerosos paracancerous e entre pacientes com diferentes características clínicas (Figuras 3 e 4), sugerindo que o
CASP8
expressão de mRNA pode não desempenhar um papel crucial no CRC. Semelhante a nossa descoberta, Pan et al. [36] também não identificou nenhuma diferença significativa do
CASP8
níveis de mRNA em mucosa normal, pólipos, e CRC. No entanto, ao contrário de dois estudos previamente relatados que o
CASP8
expressão foi regulado positivamente durante a carcinogénese colorrectal [35], [37], que mostrou que o nível de proteína CASP8 em tecidos cancerosos foi significativamente menor do que a de paracancerous emparelhado tecidos normais (Figura 5). O padrão incoerente dos níveis de
CASP8
de ARNm e expressão de proteína neste estudo sugerem que uma regulação pós-transcricional, tal como ubiquitina excessiva de proteína CASP8 em tecido de tumor e /ou regulação de miARN, pode desempenhar um papel crucial na o desenvolvimento de CRC. Caracterização adicional deve ser realizado no futuro para solidificar essa especulação.
Nosso estudo teve várias limitações. Em primeiro lugar, o tamanho da amostra (305 casos e 342 controles) para a análise de associação foi relativamente pequeno e apenas três variantes na região promotora do
CASP8
gene foram genotipados, que pode não ter energia suficiente para detectar os efeitos supondo uma proporção relativamente baixa probabilidades. Novos estudos, com maior número de amostras e mais variantes genéticas será essencial para verificar a nossa conclusão. Em segundo lugar, analisamos apenas
CASP8
expressão de mRNA e proteína em um subgrupo de pacientes com CCR. Como mencionado acima, observou-se uma expressão reduzida dentro de certos genótipos (Figura 2). Mais pacientes devem ser analisados para excluir definitivamente o potencial de polarização causada por um pequeno número de doentes nestes grupos. Em terceiro lugar, nós não pegar todos
CASP8
transcrições /precursores neste estudo. A nossa medição para
CASP8
ARNm transcritos A, B, C, G e G em um ensaio não pode distinguir quais transcrição desempenha um papel importante no tecido de interesse. Finalmente, não fez mutação tela na região de codificação do gene da
CASP8
. Não se sabe se mutante CASP8 específica iria afetar o desenvolvimento CRC. Kim e colaboradores [38] relataram que a presença de mutações na
CASP8
gene da região de codificação poderia causar disfunção da via apoptótica, o que pode finalmente contribuir para o desenvolvimento de CRC.
Colectivamente, nós especulamos que o gene da
CASP8
pode iniciar o desenvolvimento CRC e progressão, se houver, pela regulação do nível de proteína e /ou região codificadora mutação funcional (s), em vez da expressão de mRNA.
Conclusões
Nós descobrimos que rs3834129 variantes genéticas, rs3769821, e rs113686495 no
CASP8 e região promotora não foram associados com a susceptibilidade genética para a CRC no Han chinesa do sudoeste da China. Outras análises de expressão gênica
CASP8
em tecidos cancerosos e paracancerous não mostrou correlação do nível de expressão de mRNA com diferentes genótipos e progresso da CRC. No entanto, verificou-se que a proteína CASP8 foi significativamente menor em tecidos cancerosos do que em tecidos normais paracancerous emparelhadas, apesar de ambas as amostras tinham níveis semelhantes de expressão do ARNm. Estes resultados sugerem que a expressão aberrante e /ou mau funcionamento da proteína CASP8 iria desempenhar um papel activo no desenvolvimento e progressão CRC. população independente com tamanho de amostra maior e ensaios funcionais são necessários para confirmar ainda mais as nossas descobertas.
Informações de Apoio
Tabela S1.
Genótipo e informações patológico para 39 pacientes que foram analisadas para a expressão da proteína CASP8
doi:. 10.1371 /journal.pone.0067577.s001
(DOC)
Reconhecimentos
Agradecemos pacientes para a doação de tecidos. Agradecemos também aos dois pareceristas anônimos por seus comentários construtivos.