Abstract

Fundo

Muitos processos biológicos importantes são controlados através de interações célula-célula, incluindo a colonização das células tumorais metastáticas eo controle da diferenciação de células-tronco dentro do seu nicho. Apesar da importância crucial do ambiente celular na regulação da sinalização celular,

in vitro

métodos para o estudo de tais interações são difíceis e /ou indireta.

Metodologia /Principais Achados

Nós relatório sobre o desenvolvimento de um método baseado em imagem para distinguir dois tipos de células cultivadas em co-cultura. Além disso, as células de um tipo que estão em contacto directo com as células de um segundo tipo (células adjacentes) podem ser analisados ​​separadamente a partir de células que não estão dentro de um único poço. As alterações são avaliados utilizando as estatísticas de populações, que são úteis na detecção de mudanças subtis entre duas populações. Nós temos utilizado para caracterizar este sistema de mudanças na linha de células de carcinoma da próstata LNCaP quando cultivada em contacto com as células endoteliais vasculares humanas (HUVEC). Descobrimos que a expressão e fosforilação de WWOX é reduzido em células LNCaP, quando cultivada em contacto directo com células HUVEC. sinalização WWOX reduzida tem sido associada com a activação reduzida ou expressão de JNK e p73. Descobrimos que os níveis de p73 também são reduzidos em células LNCaP cultivados em contato com HUVECs, mas não observamos tal alteração nos níveis de JNK.

Conclusões /Significado

Nós achamos que o método descrito é estatisticamente robusto e pode ser adaptado a uma ampla variedade de estudos em que a função da célula ou a sinalização são afectados pelo contacto célula-célula heterotípica. Ironicamente, um potencial desafio para o método é o seu elevado nível de sensibilidade é capaz de classificar eventos como estatisticamente significativo (devido às células de elevado número de avaliadas individualmente), quando o efeito biológico pode ser menos clara. A metodologia poderia ser melhor utilizado em conjunto com métodos adicionais para avaliar o papel biológico de diferenças potencialmente subtis entre populações. No entanto, muitos eventos importantes, tais como o estabelecimento de um tumor metastático, ocorrer através de alterações raras, mas importantes, e métodos tal como aqui descrita pode ser utilizada para identificar e caracterizar a contribuição do ambiente para estas alterações.

Citação: Lapan P, Zhang J, Encosta A, Zhang Y, Martinez R, S Haney (2009) imagem-Based avaliação do crescimento e sinalização Alterações nas células cancerosas mediado por direto célula-célula Contact. PLoS ONE 4 (8): e6822. doi: 10.1371 /journal.pone.0006822

editor: Andreas Bergmann, da Universidade do Texas MD Anderson Cancer Center, Estados Unidos da América

Recebido: 20 Abril de 2009; Aceito: 13 de julho de 2009; Publicado: August 31, 2009